实验六细胞染色体的制备

染色体制备的注意事项染色体制备是一项非常重要的实验步骤，用于研究染色体的形态结构、核型等内容。

在染色体制备过程中，需要注意以下几个方面的事项。

首先，实验室安全是染色体制备过程中的首要考虑因素。

染色体制备通常需要使用到一些有害物质，如醋酸、酒精等，因此在实验过程中，需要严格遵守实验室的安全操作规程和流程，佩戴好个人防护设备，避免接触到有害物质对人体产生伤害。

其次，样品的选择非常重要。

染色体制备需要选择健康的细胞，并且要确保样品中染色体的完整性。

在制备前需要对样品进行预处理，如收集样品时尽量避免细胞质与胞核的破损，防止染色体断裂或碎片化。

除此之外，还需要注意样品的保存方式和时间，以确保染色体的完整性和实验结果的准确性。

第三，依赖于实验目的，选择合适的染色体制备方法。

目前常用的染色体制备方法有悬浮细胞法、组织学切片法、干湿法等。

不同的样品和实验目的可能需要不同的方法，因此在选择染色体制备方法时需要根据实际情况来确定。

第四，要掌握好制备过程中的时间和浓度控制。

染色体制备的时间和浓度影响着实验结果的准确性。

制备时间过短或浓度过高，可能使得染色体变形、聚集或受损；制备时间过长或浓度过低，可能导致染色体解聚、散射或染色效果不佳。

因此，在染色体制备过程中，要严格控制时间和浓度，遵循实验方法的步骤和要求。

第五，要注意实验环境的净化与维护。

染色体制备是一项精细的实验，在实验过程中，任何微小的颗粒物、尘埃或杂质都可能对实验结果产生影响。

因此，在实验过程中，应保持实验台面和仪器设备的清洁和整洁，确保实验环境的净化与维护。

第六，细心、耐心和专注是进行染色体制备的重要品质。

染色体制备是一项复杂的实验，在实验过程中可能会遇到各种问题和困难。

只有具备细心观察、耐心操作和专注实验的品质，才能保证实验的顺利进行和结果的准确性。

总之，染色体制备是一项严谨而复杂的实验步骤，需要在实验室安全、样品选择、方法选择、时间和浓度控制以及实验环境净化与维护等方面进行充分考虑和注意。

外周血细胞染色体培养操作实验六人类外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备实验目的1、了解人体外周血淋巴细胞短期培养的原理及方法。

2、初步掌握人外周血淋巴染色体的制备技术。

实验用品1.设备：超净工作台（或无菌接种箱）、光学显微镜（带照相装置）、分水恒温培养箱、干燥箱、卧式离心机、冰箱、恒温水浴箱、高压蒸汽灭菌器、真空泵（或电动吸引器）、10ml刻度离心管、，10ml培养瓶（可用环磷酰胺瓶代替）、2ml注射器、吸管、滴管试管架、三角瓶、染色瓶、酒精灯、各种试剂瓶、载玻片、镊子、吸水纸、洗耳球、搪瓷板、铝饭盒、酒精棉球、消毒用碘棉球等。

2、材料：人外周血3.试剂：rpmil 640培养基（含10~20%小牛血清）、碳酸氢钠（AR）、PHA、青霉素、链霉素、肝素、5%NaHCO 3溶液、1mol/lhcl、三重蒸馏水或二重蒸馏水、0.075mol/lkcl、甲醇、冰醋酸、吉姆萨储备液、pH 6 8磷酸盐缓冲液。

实验原理根据测量，健康成年人的淋巴细胞总数约为500×109，其中约2%在外周血中循环。

外周血淋巴细胞主要为小淋巴细胞（每毫升血液中的淋巴细胞含量可达1~3）×106）。

在正常情况下，它们处于间期的G0或G1期，因此很难看到分裂的淋巴细胞。

然而，Nowell （1960）发现，植物血凝素（PHA），一种从芸豆（菜豆）中提取的能够凝集红细胞的物质，可以刺激淋巴细胞有丝分裂。

在PHA的作用下，G0期淋巴细胞可转化为淋巴细胞，重新进入增殖周期进行有丝分裂。

体外培养约72小时后，大多数淋巴细胞处于第二个增殖周期。

此时，用有丝分裂阻断剂秋水仙碱治疗细胞，可以停止中间阶段的细胞分裂，然后进行低渗固定，其他治疗可以获得更多的中期染色体用于分析。

以外周血为材料制备淋巴细胞染色体标本具有取材方便，用血量少（0.3～1.0ml即可），培养简单等优点，故该方法在临床上已得到广泛的应用。

内容和方法一、器材的清洗1.清洁培养瓶；将培养瓶在肥皂水中煮沸30分钟，趁热刷洗，然后用自来水冲洗肥皂。

实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。

二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。

与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。

所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。

在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。

因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。

某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。

若停止供能荧光现象立即停止。

有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。

有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。

利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。

因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。

三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。

实验六染色体的标本制作及其组型实验在真核生物中染色体的数量和形态具有物种的特异性一直可以作为此物种分类的基本依据之一。

染色体作为遗传物质-DNA 的载体对生物的遗传、变异、进化和个体发生以及细胞的增殖和生理过程的平衡控制等都具有十分重要的意义。

每一个物种的细胞一般都有一定数目、形状和大小的染色体。

将体细胞核中全部染色体按照其大小、着丝粒位置以至带型有序地排列起来此模式图象排列即为核型karyotype或染色体组型。

核型分析均是以中期染色体为标准对制作出的染色体标本进行照相以获得染色体的显微图象并将其剪裁排列即成。

华裔学者庄有兴Joe Hin Tjio腿鸬溲д逜.Levan合作利用低渗法研究胎儿肺组织的染色体标本制做方法终于在1956年首次确定了人类的染色体数目是46条而不是前人所主张的48条这为后来的人类核型研究奠定了基础。

1.实验目的 1.1 初步掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程了解操作步骤的原理。

1.2了解常用实验动物染色体的数目及特点。

通过组型实验掌握染色体组型的基本方法2.实验原理凡细胞处于活跃增殖状态或者经过各种处理后细胞就可进入分裂的任何动物组织均可用于染色体分析。

在正常动物体内精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。

给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期然后采用常规空气干燥法制备染色体即可得到大量可分析的染色体标本。

本方法简便、可靠不需要经体外培养和无菌操作易于推广。

骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。

但在取材方面精巢又比骨髓要简易一些故本实验也选用小鼠的精巢为实验材料。

对于小鼠精巢染色体标本的制作一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成使细胞分裂停滞在中期使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀以至于在滴片时细胞被胀破使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。

实验六果蝇唾液腺染⾊体的观察及制备实验五果蝇唾液腺染⾊体的观察及制备⼀．⽬的1．了解果蝇唾液腺染⾊体的形态学及遗传学特征。

2．习分离果蝇幼⾍唾液腺的技术。

3．掌握唾液腺染⾊体制⽚⽅法。

⼆、原理蝇、摇蚊幼⾍唾液腺细胞中的巨⼤染⾊体。

双翅⽬昆⾍的唾液腺细胞发育到⼀定阶段之后就不再进⾏有丝分裂，⽽永久停留在分裂间期。

但随着幼⾍的⽣长，唾液腺染⾊体仍不断地进⾏⾃我复制⽽且不分开，经过许多次的复制形成约1 000—4 000拷贝的染⾊体丝，合起来直径达5µm，长度达400µm，⽐普通细胞中期染⾊体约⼤100～150倍，所以⼜称为多线染⾊体（polytene chromosome）或巨⼤染⾊体（giant chromosome）。

唾液腺染⾊体的另⼀特点是体细胞中同源染⾊体处于紧密配对状态，这种状态称为“体细胞联会”。

在以后不断的复制中仍不分开，由此成千上万条核蛋⽩纤维丝唾液腺染⾊体（salivary gland chromosome）是⼀类存在于双翅⽬昆⾍，如果结合在⼀起，紧密盘绕。

所以细胞中染⾊体只呈单倍数。

⿊腹果蝇的染⾊体数⽬2n=8其中第Ⅱ、第Ⅲ染⾊体为中部着丝粒染⾊体，第Ⅳ染⾊体和第IX染⾊体为端着丝粒染⾊体。

唾液腺染⾊体形成时，染⾊体着丝粒和近着丝粒的异染⾊质区聚于⼀起形成⼀个染⾊中⼼（chromo-center），所以在光学显微镜下可见从染⾊中⼼处伸出6条配对的染⾊体臂，其中5条为长臂，l条为紧靠染⾊中⼼的很短的臂。

唾液腺染⾊体经染⾊后，呈现深浅不同，疏密各异的横纹（band）。

这些横纹的数⽬，位置，宽窄及排列顺序都具有物种的特异性。

研究认为这些横纹与染⾊体的基因是有⼀定关系的。

通过⼀定的实验⽅法使果蝇唾液腺染⾊体各臂分散开，并且使带纹、膨突等特征不受杂质影响清晰地显⽰出来，是进⾏果蝇遗传学研究的很重要的⼀个环节．果蝇唾液腺染⾊体在不同种间的共同点是染⾊体的着丝点位于⼀个染⾊区域，但不同的种类往往其染⾊体臂数⽬不同．每条染⾊体臂上分布着染⾊深浅不同、粗细各异的磺纹(band)，这些横纹的宽窄疏密程度以及排列顺序和数⽬⼜都有种的特异性和种内的差异．由此，果蝇唾液腺染⾊体近⼏⼗年来，已⼴泛⽤于种内系统发⽣和种间亲缘关系的研究中，因为种间及种内不同品系和近缘种中的遗传差异经常反映在唾液腺染⾊体的不联会、形成泡(puff)、缢虞(constriction)和间带区的伸缩性以及顶体(telomere)的形态等多⽅⾯的差异，⽽特别重要的是研究它的基因序列的差异(观察是否产⽣了例位以及染⾊体的断裂、融合和重排)．因此，⽆论从细胞遗传学的⾓度研究基因与突变性状之间的联系，还是从进化遗传遗传学⽅⾯研究染⾊体的系统发⽣，探讨种间以及近缘种间的遗传差异和⽣殖隔离的机制等，唾液腺染⾊体的分析研究都是⼗分重要的．从其横纹分布特征可对物种的进化特征进⾏⽐较分析，⽽⼀旦染⾊体上发⽣了缺失，重复，倒位。

实验六动物染色体标本的制备与观察实验简介：染色体是细胞内遗传物质的载体。

骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度的分裂能力，可直接观察到细胞周期中的各个时相。

但通常情况下，中期染色体在镜下的数量较少，如经秋水仙素处理后，分裂的骨髓细胞大多被阻断在有丝分裂中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可得到理想的染色体标本,用以观察中期染色体形态和染色体组型分析等实验。

实验学时3个。

一、实验目的1.初步掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理。

2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。

二、实验原理染色体的分析往往是选择细胞处于活跃增殖状态，或者经过各种处理后细胞进入分裂的动物组织。

在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的组织之一。

给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。

在动物实验时，可在取材前经腹腔注射有丝分裂抑制剂，一般常用秋水仙素，这此方法对于动物的核型分析是非常有用的。

本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。

因此骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。

三、实验材料（一）材料昆明种小白鼠若干只。

（二）器材水平离心机、显微镜、刻度离心管(10m1)、注射器(1m1)、载玻片、烧杯(400m1、100m1)、试管架、镊子、剪刀、解剖刀、吸管、擦镜纸。

（三）试剂1. 2％柠檬酸钠溶液：称取28g柠檬酸钠(柠檬酸三钠，Trisodium citrate，AR)溶解于蒸馏水中。

2. 1％柠檬酸钠溶液。

3. 200μg ／ml 秋水仙素(cochicine)4. 姬姆萨 (Giemsa)原液(P H6.8)Giemsa 染料(Giemsa stain) 1g甘油(glycerine ，AR) 33ml甲醇(methyl alcohol ，AR) 45ml将染粉倾入乳钵，加几滴甘油，在乳钵内研磨直到无颗粒为止，此时再将全部剩余甘油使60～65℃保温箱中保温2h 后，加入甲醇搅拌均匀，保存于棕色瓶中备用。

实验六观察细胞的减数分裂
一.实验目的：
通过观察蝗虫精母细细胞减数分裂固定装片，识别减数分裂不同的阶段染色体的形态、位置和数目，加深对减数分裂过程的理解。

二.实验原理：
蝗虫的精母细胞进行减数分裂形成精细胞,再形成精子。

此过程要经过两次连续的细胞分裂:减数第一次分裂和减数第二次分裂。

在此过程中，细胞中的染色体形态、位置和数目都在不断地发生变化，因而可据此识别减数分裂的各个时期。

Ξ.方法步骤：
四.课后讨论题：
1 .减数第一次分裂会出现同源染色体联会、四分体形成、同源染色体在赤道板位置成对排列、
同源染色体分离、移向细胞两极的染色体分别由两条染色单体组成等现象。

减数第二次分裂的中期，非同源染色体成单排列在细胞赤道板位置，移向细胞两极的染色体不含染色单体
2 .减数第一次分裂的中期，两条同源染色体分别排列在细胞赤道板的两侧，末期在细胞两极的染色体由该细胞一整套非同源染色体组成，其数目是体细胞染色体数的一半，每条染色体均由两条染色单体构成。

减数第二次分裂的中期，所有染色体的着丝点排列在细胞的赤道板的位置。

末期细胞两极的染色体不含染色单体。

3 .同一生物的细胞，所含遗传物质相同；增殖的过程相同；不同细胞可能处于细胞周期的不同阶段。

因此，可以通过观察多个精原细胞的减数分裂，推测出一个精原细胞减数分裂过程中染色体的连续变化。

实验六洋葱根尖有丝分裂染色体标本制备及观察一、实验目的通过对植物根尖的制片和观察，要求学生初步学会对植物组织、细胞的固定、离析和压片方法，了解有丝分裂的全过程及其染色体的动态变化情况，掌握有丝分裂各时期的特征。

二、实验原理有丝分裂是细胞均等增殖的过程，是体细胞分裂的主要方式。

在有丝分裂过程中，细胞内每条染色体都能复制一份，然后分配到子细胞中，因此两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上均是相同的，在各种生长旺盛的植物组织中均存在着有丝分裂。

三、实验材料洋葱根尖四、实验用具显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，剪刀，镊子15%HCl（质量分数）和95％酒精（体积分数）的混合液（1：1）、0.01g／mL龙胆紫溶液五、实验内容1、洋葱根尖的培养在实验课前3～4天，取洋葱一个，放在广口瓶上。

瓶内装满清水，让洋葱的底部接触到瓶内的水面。

把这个装置放在温暖的地方，注意经常换水，使洋葱的底部总是接触到水。

待根长5 cm时，可取生长健壮的根尖制片观察。

2、装片的制作(1)解离下午2时是洋葱有丝分裂的高峰期，可在此时剪取洋葱的根尖2 mm～3 mm，立即放入含15%HCl和95％酒精的混合液（1：1）的玻璃皿中，在室温下解离3 min～5 min 后取出根尖。

(2)漂洗待根尖酥软后，用镊子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10 min.(3)染色把洋葱根尖放进盛有0.01g／mL龙胆紫溶液的玻璃皿中，染色3 min～5 min。

(4)制片用镊子将这段洋葱根取出来，放在载玻片上，加一滴清水，并且用镊子尖把洋葱根尖弄碎，盖上盖玻片，用拇指垂直轻压盖波片，以使细胞分散开。

3、洋葱根尖细胞有丝分裂的观察(1)低倍镜观察：把制作成的洋葱根尖装片先放在低倍镜下观察，慢慢移动装片，要求找到分生巨细胞，它的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂。

(2)高倍镜观察：找到分生区细胞后，把低倍镜移走，换上高倍镜，用微调螺旋和反光镜把视野调整清晰，直到看清细胞物像为止。