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【实验4】体验制备细胞膜的方法活动目标1.体验用哺乳动物红细胞制备细胞膜的基本方法。
2.使用高倍显微镜观察制备细胞膜过程中细胞的变化。
背景资料生物膜的研究发展迅速。
要研究生物膜的组成、结构及功能,首先必须分离出纯净的细胞膜。
分离得到的哺乳动物的红细胞膜,一般称为“血影”。
哺乳动物成熟的红细胞中没有一般真核细胞所具有的细胞核与细胞器,容易用它制备纯净的细胞膜。
此外,哺乳动物的血液也比较容易获得,因而就是研究细胞膜的理想材料。
从哺乳动物的红细胞中分离细胞膜,第一步就是将血液收集在加有抗凝剂的容器内,用低速离心的方法从血液中分离出红细胞,然后用等渗缓冲液反复洗涤,经多次离心,去除血浆。
第二步就是在红细胞中加入低渗缓冲液,由于低渗溶液的作用,大量水分进入细胞,使红细胞胀破而溶血。
第三步就是将溶血的红细胞反复而充分地高速离心、洗涤,去除血红蛋白与其她的细胞内含物,最终获得比较纯净的红细胞膜。
操作指南1.材料新鲜的哺乳动物血液2.用具离心机,离心管,滴管,显微镜,载玻片,盖玻片,吸水纸,小烧杯。
3.试剂柠檬酸钠或肝素(抗凝剂),生理盐水(质量分数为0.9%的NaCl溶液),蒸馏水或清水。
4.操作要点教师在实验前做以下准备工作。
准备一定量的新鲜的哺乳动物血液,如羊血或猪血,在冰箱中静置一昼夜。
用滴管将上清液吸去。
再吸取1 mL的沉淀物,放入离心管中,加入生理盐水2 mL,在2 000 r/min条件下离心5 min。
去除上清液,在沉淀中再加入生理盐水2 mL,再离心一次,去除上清液,留沉淀备用。
以上操作的目的就是洗去血浆成分,避免血浆对血细胞的缓冲作用,从而使红细胞的溶血现象更加明显。
学生的实验操作如下。
(1)取一个5 mL的小烧杯,加入生理盐水2～3 mL。
(2)用滴管在沉淀的下层吸取一小滴血细胞,滴入小烧杯的生理盐水中,以达到稀释红细胞的目的,以免观察时,由于细胞密度太大,影响观察效果。
(3)取另一个滴管,在小烧杯中轻轻搅拌,然后吸取少量的血细胞稀释液,在载玻片的中央滴很小的一滴,加盖玻片。
实验二体验制备细胞膜的方法一、实验目的要求1、体验用哺乳动物红细胞制备细胞膜的方法和过程2、熟悉并掌握显微镜的使用二、实验原理1、动物细胞没有细胞壁，不但省去了去除细胞壁的麻烦，而且没有细胞壁的支持和保护，细胞易吸水涨破。
2、哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和具有有膜的细胞器，可以避免细胞膜与其它膜结构混在一起。
3、红细胞放入清水中，细胞吸水膨胀直至胀破，细胞内的物质流出，从而得到细胞膜。
三、实验材料及用具1、实验材料：新鲜的鸡血（自己的血）2、实验试剂：肝素或柠檬酸钠，生理盐水，蒸馏水或清水3、实验用具：离心机，离心管，滴管，吸水纸，载玻片，盖玻片，显微镜四、教师实验准备准备一定量的新鲜鸡血，在冰箱中静置一昼夜。
用滴管将上清液吸去，再吸取1ml的沉淀物，放入离心管中，加入生理盐水2ml，在2000r/min条件下离心五分钟。
去除上清液，在沉淀物中加入生理盐水2ml，再离心一次，去除上清液，留沉淀物备用。
五、学生实验步骤1、取一个小烧杯，加入生理盐水1-2ml。
2、用滴管吸取沉淀下层的一小滴血细胞，滴入小烧杯的生理盐水中。
3、制片：用另一个滴管吸取少量红细胞稀释液，滴一小滴到载玻片上，盖上盖玻片，制成临时装片。
4、观察：先在低倍镜下找到红细胞，再转换成高倍镜，直至清晰地看到正常状态下的红细胞形态。
5、滴水：往载物台上盖玻片的一侧滴一滴蒸馏水，同时在另一侧用吸水纸小心吸引，边吸引边观察红细胞的形态变化。
当红细胞体积逐渐变大，变得非常膨胀，在视野中可以找到少量涨破的红细胞，它们已失去完整的边缘。
六、实验结果看到近水的部分红细胞发生变化：凹陷消失，细胞体积增大，很快细胞破裂，内容物流处。
（一）鸡的血细胞（正常情况）（二）鸡的血细胞（吸水涨破）（三）人的血细胞七、注意事项1、制作临时装片时，红细胞必须得稀释，而且取红细胞的量要少2、在高倍镜下观察，待观察物清晰时，在盖玻片的一侧滴加蒸馏水，同时在另一侧用吸水纸吸引。
