唾液淀粉酶最适pH值
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唾液淀粉酶最适pH的测定广西医科大学11级17班1组黄爱春黄燚燚程邦李定使摘要:本实验的目的是掌握测量pH对酶活力影响的基本原理和方法,了解pH 对酶活力的影响。
影响酶反应活力的因素很多,影响胞外酶的因素主要包括PH 值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子,以及酶浓度等因素。
在温度、酶浓度相同的条件下,酶的活力在最适pH处达到最大,远离则变小。
在底物过量的条件下,相同时间内,在温度、酶浓度相同的条件下,接近最适pH的反应体系中消耗淀粉的量最大,剩余淀粉与过量碘液生成的颜色越浅,吸光度越小,利用分光光度计测出各管的吸光度后,取处于升高与降低趋势之间的较小吸光度范围对应的pH值即为唾液淀粉酶的最适pH。
关键词:淀粉酶、活性、温度、吸光度前言:生物体内一切化学反应,几乎都是在酶催化下进行的,只要有生命的地方,就有酶在起作用,生命不能离开酶而存在。
酶量与酶活性的改变都会引起代谢的异常乃至生命活动的停止。
由于酶的独特的催化功能,使它在工、农业和医疗卫生等领域具有重大实用意义。
酶的高效性和专一性,及其不需要在高温、强酸、强碱条件下作用的特点是普遍化学催化反应所无法比拟的。
其研究成果给催化理论、催化剂的设计、药物的设计和作用原理的了解、疾病的诊断和治疗以及遗传和变异等方面提供了理论的依据和新的概念。
正文:一、材料与方法仪器:吸量管(5mL,1mL),试管,试管架,小烧杯,722型分光光度计,恒温箱,吸耳球试剂:0.01mol/L碘液,0.2mol/L磷酸氢二钠,0.2mol/L磷酸二氢钠,淀粉溶液,唾液,蒸馏水方法:相同时间内,在温度、酶浓度相同、pH不同的条件下,酶的活度不同,水解的淀粉量不同,剩余的淀粉与过量碘液生成的颜色不同,通过测量吸光度,得出酶的最适pH范围。
实验步骤:1、缓冲液的配制:2、唾液淀粉酶的获取:先喝口蒸馏水,将口中食物残渣漱净,然后口中含一口水,做咀嚼运动2分钟即可.3、淀粉用量确定:4、唾液淀粉酶稀释倍数确定:5、最适pH确定以A660为纵坐标,pH为横坐标作图二、结果与讨论用量(ml)讨论:本实验中,当唾液淀粉酶的活性最大时,淀粉被分解的最多,剩余的底物的量最少,A值最小,过酸或者过碱均会影响酶的活性,使之分解的底物减少,A值增大。
唾液淀粉酶最适pH的测定【摘要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受温度、pH值等因素影响。
温度一定时,酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的最适pH。
在不同pH值下,通过测定淀粉酶水解底物的程度,测定唾液淀粉酶的最适pH值。
在不同pH条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应,通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从而可以判断出唾液淀粉酶的最适pH。
Enzymes are highly efficient catalytic ability of biological macromolecular material, phase at the same time, initial concentration of enzyme catalytic activity was mainly affected by factors such as temperature, pH value. At a certain temperature, the highest enzyme activity of enzyme in the pH value of the temperature of the optimum pH.Under different pH, by measuring the degree of hydrolysis enzyme substrates, determination of salivary amylase optimum pH value. Under the condition of different pH, starch is saliva amylase hydrolysis, and iodine liquid reaction to colors, through the observation of the color and the size of the spectrophotometer absorbance value measurement products, shows the reaction degree of substrates, which can determine the optimal pH of salivary amylase.【关键词】唾液淀粉酶、最适pH、碘-淀粉比色法【引言】新陈代谢是生命活动的基础。
唾液淀粉酶最适ph值测定
唾液淀粉酶最适pH值测定通常是通过测定唾液淀粉酶在不同pH值下的反应速率来确定。
测定的方法一般是使用淀粉为底物,将唾液淀粉酶与淀粉混合,然后在不同pH值的缓冲溶液中进行反应,通过测定反应物的吸光度变化或淀粉的降解程度来测定酶的活性。
根据反应速率或反应物的变化,可以确定唾液淀粉酶在不同pH值下的最适活性。
唾液淀粉酶的最适pH值通常在中性到弱碱性范围内,一般在pH 6.7-7.0左右最为适宜。
根据不同实验条件和唾液淀粉酶的来源,最适pH值可能会有轻微差异。
因此,在具体实验中可以在pH值6.0-8.0的范围内进行测定,以确定唾液淀粉酶最适活性的pH值。
ph对酶活性的影响实验颜色变化实验目的1.观察不同底物、温度、pH、激活剂与抑制剂对淀粉酶活性的影响。
2.观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。
原理淀粉在唾液淀粉酶的作用下被逐步水解成不同大小分子的糊精、麦芽糖、葡萄糖,水解的中间产物遇碘呈现不同的颜色:淀粉溶液遇到碘呈蓝色,糊精遇到碘按照分子大小分别呈紫色、暗褐色或红色,麦芽糖、葡萄糖遇到碘不变色,呈碘液的淡黄色。
根据水解液和碘反应的颜色,可以判断淀粉酶水解淀粉是否已完全,因此可以通过这个方法定性观察不同底物、温度、pH及激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。
实验材料与器材新鲜唾液稀释液、2%蔗糖溶液、本尼迪克特(Benedict)试剂、0.5%淀粉、0.5%淀粉溶液(含0.3%Na Cl)、1%氯化钠溶液、0.1%硫酸铜溶液、碘液、0.2 mo l/L磷酸氢二钠溶液、0.1 mo l/L柠檬酸溶液实验者唾液;电磁炉,恒温水浴锅,冰盒,试管,试管架、锥形瓶,滴管,pH 试纸、移液器等。
本实验的操作流程1.取3支试管,各加2mL含0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液。
2.另取3支试管,各加1mL淀粉酶液。
3.将此6支试管分为3组,每组中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支。
4.三组试管分别置入0℃、37℃与100℃的水浴中。
5.等5min后,将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中,继续维持原温度条件5min后,0℃、37℃水浴管立即滴加2滴碘液,100℃的水浴管冷却后滴加2滴碘液,观察溶液颜色的变化。
结果:因为唾液淀粉酶最适p h为6.8,所以最后滴加碘液后三个分别为:蓝色,不变色,蓝色。
因为第二个中,在最适p h环境下,淀粉被酶分解为了葡萄糖,遇碘液不变色。
唾液淀粉酶最适pH值测定作者:谭继欢学号:201140143摘要:生物体内的酶是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核酸,前者是机体内催化各种代谢反应最重要的催化剂。
酶分子中的许多极性基团。
在不同的pH条件下解离状态不同,其所带电荷的种类和数量也各不相同,酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才最容易同底物结合或具有最大的催化活性。
许多具有可解离基团的底物和辅酶的荷电状态也受pH改变的影响,从而影响酶对它们的亲和力。
此外,PH还可以影响酶活性中心的空间构象,从而影响酶的活性。
因此,pH的改变对酶的催化作用影响很大。
酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶促反应的最适PH。
测定酶的最适pH值,是进一步了解酶生物学活性的基础。
关键词:淀粉酶最适ph 吸光度前言:酶无论在生活中还是在医学领域都有很大的研究意义,研究酶可以很好应用酶的各种特性,在各种领域广泛应用。
影响酶反应活力的因素很多,影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子,以及酶浓度等因素。
PH值对酶反应活力的影响:1、酸或碱可以使酶的空间结构破坏,引起酶的活力丧失,这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的,对可逆的来说,改变PH值后可使活力恢复。
2、酸或碱影响酶的活性部位催化基团的离解状态,使得底物不能分解成产物。
3、酸或碱影响酶的活性部位结合基团的离解状态,使得底物不能和它结合。
4、酸或碱影响底物的离解状态,或使底物不能和酶结合。
由于上述种种原因,各种酶的作用都有一个最适合的PH值范围。
实验原理:本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受PH影响的情况。
唾液中含有唾液淀粉酶。
淀粉在该酶的催化作用下会随着时间的延长而出现不同程度的水解,从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。
碘液与淀粉及其不同程度的水解产物反应呈现不同颜色,即:淀粉(蓝色)、紫色糊精(紫色)、红色糊精(红色)、麦芽糖及少量葡萄糖(黄色)。
用分光光度计测量出各溶液在660nm处的吸光度A,从而间接测出唾液淀粉酶的最适pH值。
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验小组成员: 孙天纬李敏媛唐芳娇蒋雅莉实验目的:1.掌握设计性实验的基本思路,并完成设计报告。
2.掌握唾液淀粉酶最适pH的测定原理和方法。
3.熟悉影响酶促反应速度的因素。
实验原理:1.酶促反应速度受到许多因素的影响,如温度、pH、激活剂和抑制剂等。
上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响,可用定性或定量的反应来观察。
利用碘与淀粉反应的颜色随产物的量的增加而加深的特点,来衡量酶促反应的速度的快慢。
蓝色—紫红色—黄色,颜色由蓝变黄,表示酶促反应速度由慢到快。
此为定性观察。
2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。
由于在被水解的程度也不一样。
当唾液淀粉酶不能将完全水解时,淀粉遇碘呈蓝色,经查阅文献,吸收波长位于660nm处。
不同pH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同,吸光度值也不同。
因此,通过测量660nm处的吸光度值,可以了解pH对酶促反应的影响,吸光度最小的溶液其pH 即为唾液淀粉酶的最适pH。
实验步骤:1.缓冲溶液的配制。
取7支试管进行编号1-7,分别按下表加入试剂,再加蒸馏水稀释到10mL。
2.淀粉用量的确定用量:mL*选择颜色最浅的一支试管3.唾液的采集。
先给备取者一杯纯净水让其漱口,将漱口液吐掉,让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口,并做咀嚼运动,这时,备取者的唾液会不停地流出来。
4.唾液的稀释。
取7支试管,进行编号1'-7',进行稀释。
5.唾液稀释倍数的选取。
另取7支试管,分别编上A-G号,各取上述稀释的唾液各0.1ml,分别加入相应编号的试管里,向7支试管内同时加入0.1ml的2.5g/L的淀粉溶液和0.9mL的7.0pH缓冲液,振荡混匀后放入37 ℃恒温水浴7.5分钟后取出,滴加2碘液,振荡混匀,观察颜色,选取颜色变化适中的一支,记录稀释倍数。
结论:使用稀释10倍的唾液的试管的颜色适中。
6.最适pH的测定。
另取9支试管,进行编号,按下表加入试剂。
一、实验目的1. 了解唾液淀粉酶的生理功能和作用机制;2. 掌握唾液淀粉酶活性测定的原理和方法;3. 通过实验探究温度、pH值等因素对唾液淀粉酶活性的影响。
二、实验原理唾液淀粉酶是一种消化酶,主要存在于唾液中,能够将淀粉分解成糊精、麦芽糖等小分子糖类。
本实验通过测定唾液淀粉酶催化淀粉水解的反应速率,来评估唾液淀粉酶的活性。
实验过程中,采用碘液作为指示剂,通过观察淀粉水解前后颜色变化来判断酶活性。
三、实验材料与试剂1. 实验材料:唾液、淀粉糊、碘液、蒸馏水、试管、移液器、恒温水浴锅、温度计、pH计等。
2. 试剂:淀粉酶、NaOH、HCl、NaCl等。
四、实验步骤1. 准备实验试剂:配制不同浓度和pH值的淀粉酶溶液;2. 分别将淀粉糊、唾液淀粉酶溶液、蒸馏水加入试管中,混合均匀;3. 将试管放入恒温水浴锅中,设定不同温度(如37℃、40℃、50℃等);4. 在一定时间后,取出试管,用pH计测定溶液的pH值;5. 向试管中加入适量碘液,观察溶液颜色变化;6. 记录不同温度、pH值条件下,淀粉酶催化淀粉水解的反应速率。
五、实验结果与分析1. 温度对唾液淀粉酶活性的影响:随着温度升高,唾液淀粉酶活性逐渐增强,在37℃时达到最大值,随后活性逐渐降低。
这表明唾液淀粉酶的最适温度为37℃。
2. pH值对唾液淀粉酶活性的影响:随着pH值的升高,唾液淀粉酶活性逐渐增强,在pH值为7时达到最大值,随后活性逐渐降低。
这表明唾液淀粉酶的最适pH值为7。
3. 淀粉酶催化淀粉水解的反应速率:在37℃、pH值为7的条件下,唾液淀粉酶催化淀粉水解的反应速率最快,表明此时酶活性最高。
六、实验结论1. 唾液淀粉酶具有消化淀粉的功能,可以将淀粉分解成小分子糖类;2. 温度和pH值是影响唾液淀粉酶活性的重要因素,最适温度为37℃,最适pH值为7;3. 通过本实验,掌握了唾液淀粉酶活性测定的原理和方法,为后续研究提供了实验依据。
七、实验注意事项1. 实验过程中,注意保持实验环境的清洁,避免污染;2. 实验操作要规范,确保实验结果的准确性;3. 注意实验安全,特别是使用化学试剂时,要遵守操作规程。
唾液淀粉酶酶活性的影响因素及测定方法综述摘要:唾液淀粉酶是唾液蛋白的重要组成部分,并且唾液淀粉酶的活性是反映自主神经系统最为灵敏的指标,有理想的应用研究价值。
本文总结介绍了影响唾液淀粉酶的常见因素,以及五种唾液淀粉酶活性的测定方法,对于临床实验以及后续研究提供一定参考。
关键词:唾液淀粉酶,酶活性影响因素,淀粉酶活性测定一、引言生物酶几乎参与了生物体内所有的生物化学反应,并且酶是生命运动、细胞活动中的不可缺少的一部分。
它是一种具有生物催化活性的生物大分子[1]。
唾液淀粉酶(salivary alpha-amylase,sAA)是唾液蛋白的重要组成部分,约占唾液总蛋白的40% ~ 50%[2],常用作唾液蛋白分泌的主要指标。
交感神经系统与副交感神经系统协调作用于唾液蛋白的分泌[3],而唾液淀粉酶活性是交感神经最灵敏的指标。
随着技术发展,唾液淀粉酶的活性测定的准确度及可靠性日渐增加,且常被运用于中医脾虚证的临床辩证、治疗等方面[4]。
而唾液淀粉酶作为一种生物催化剂,具有专一性和高效性的同时,它相较于常见的化学催化剂更易受外界环境影响,导致其活性下降,甚至失活,为临床研究造成困扰。
本文就对常见的影响唾液淀粉酶活性的因素与其活性测定方法的相关资料进行了收集与整理,便于进行实验验证与探究。
二、影响唾液淀粉酶活性的因素(1)温度大多数生物酶的化学本质都为蛋白质,其抗热性较差。
在0℃~40℃的温度范围内,酶催化作用速度随着温度的升高而加快。
温度超过60℃时,绝大多数的酶都会失去活性。
唾液淀粉酶的最适温度约为37℃。
(2)pH值酶对环境中的pH十分敏感,只有在一定的pH范围内才能表现出活性,超过这个范围,酶就失活了。
一般酶的最适pH在4~8之间。
唾液淀粉酶的最适pH值约为6.8。
(3)AMY1基因拷贝数及多态性唾液淀粉酶的编码基因AMY1位于染色体1p21上,不同个体之间该基因的拷贝数存在差异,变化范围为2至15倍,研究显示口腔中的唾液淀粉酶含量与AMY1基因拷贝数正相关[5]。
唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇An experimental report on salivary amylase activity唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文3篇小泰温馨提示:实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来,经过整理,写成的书面汇报。
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本文简要目录如下:【下载该文档后使用Word打开,按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】1、篇章1:唾液淀粉酶活性观察实验报告文档2、篇章2:唾液淀粉酶活性的测定文档3、篇章3:淀粉酶活性测定实验报告文档篇章1:唾液淀粉酶活性观察实验报告文档2 唾液淀粉酶活性观察实验报告一、实验目的1.了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性;2.掌握酶定性分析的方法和注意事项。
二、基本原理1.酶是生物催化剂,具有极高的催化效率,其催化效率比一般催化剂高106~1013.在生物体内过氧化氢酶能催化H2O2分解成H2O和O2,铁粉地H2O2分解也有催化作用,但其效率远低于酶。
2.酶的活性受温度的影响。
在一定的温度范围内,温度升高,酶的活性也会增大。
当到了最大值后,此时温度为酶的最适温度,由于温度过高,酶开始失活,导致酶的效率降低,最后完全失活。
3.酶的活性受PH值的影响。
酶在一定范围的PH值下才有活性,高于或低于最适PH,都会使酶的活性降低。
4.酶活性常受到某些物质的影响。
有些物质能使酶的活性增加,称为激活剂,有些物质能使酶的活性降低,称为抵制剂。
5.碘液指示淀粉水解程度的不同色变化:淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖+少量葡萄糖加碘后:蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色三、试剂与器材篇章2:唾液淀粉酶活性的测定文档【按住Ctrl键点此返回目录】影响唾液淀粉酶活性的研究摘要:讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异,实验结果表明,影响唾液淀粉酶活性的因素很多,必须在适宜的条件下,才能发挥最佳催化作用;淀粉酶具有高度专一性,其活性受温度、pH值、激活剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素的影响;每个人产生唾液淀粉酶的量不同,活性强弱也有差异。
唾液淀粉酶最适pH值的测定
陆绍龙
广西医科大学七年制临床医学10级4班
摘要:目的:1)掌握测定唾液淀粉酶最适pH值的测定方法以及原理;2)熟悉不同pH值缓冲溶液的配制和分光光度计的使用;方法:通过唾液淀粉酶在不同pH环境中水解淀粉,测出未被水解的淀粉与碘液结合成的蓝色复合物的分光光度值,根据实验数据判断酶的最适pH;结果:当pH=6.6时,唾液淀粉酶的活性最高。
关键词:唾液淀粉酶 pH 分光光度计
前言:酶学与医学的关系密切。
人体的许多疾病和酶都密切相关。
酶分子中的许多极性基团,在不同的pH条件下解离状态不同,其所带电荷的种类和数量也各不相同,酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才容易同底物结合或具有最大的催化活性。
此外,pH的改变还可以引起酶活性中心的构象改变,因此pH的改变对酶的催化作用影响很大。
人的唾液中99%是水,有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等,无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等。
唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质,可以催化淀粉水分解为麦芽糖。
唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内,唾液中的氯和硫氰酸盐对此酶有激活作用。
食物进入胃后,唾液淀粉酶还可继续使用一段时间,直至胃内容物变为pH值约为4.3~4.8的酸性反应为止。
正文:
1.材料与方法:
仪器:吸量管(5mL,1mL),试管若干,试管架,小烧杯,洗耳球,721G-722G分光光度计,恒温箱(含温度计),一次性纸杯,pH试纸。
试剂:2.5g/L淀粉,0.2mol/L Na2HPO4溶液,0.2mol/L NaH2PO4 溶液,蒸馏水,唾液,碘液。
2.操作步骤
1)1. 不同pH缓冲液配制
按下表加样,最后加蒸馏水稀释至10ml。
pH 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 0.2mol/L Na2HPO4溶液
0.615 0.925 1.325 1.875 2.450 3.050 3.600
(mL)
0.2mol/L NaH2PO4 溶液
4.385 4.075 3.675 3.125 2.550 1.950 1.400
(mL)
注:应用pH值试纸来确定所配溶液pH。
2)唾液的获取
先漱口1~2次,然后含一大口水约1min,期间做咀嚼运动,然后收集至杯子中。
3)淀粉用量的确定
1 2 3 空白
7.0pH缓冲液0.9 0.9 0.9 0.9
2.5g/L淀粉0.1 0.2 0.3 ——
唾液(稀释10倍)0.1 0.1 0.1 0.1 混匀,37℃水浴7.5min,然后向每管加2滴碘液
H2O 5.9 5.8 5.7 6
混匀,观察现象,并选择适中一支,记录其用量
4)酶稀释液的倍数确定
稀释倍数 5 10 15 20 25 30
酶液(mL) 1 0.5 0.4 0.25 0.2 0.2
H2O(mL) 4 4.5 5.6 4.75 4.8 5.8
稀释倍数 5 10 15 20 25 30 空白7.0pH缓冲
0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9
液(mL)
2.5g/L淀粉由第3步操作确定
唾液0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 ——混匀,37℃水浴7.5min,然后向每管加2滴碘液
H2O 6 6 6 6 6 6 6 混匀,观察现象,并选择适中一支,记录其稀释倍数
5)最适pH值的确定
pH 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 pH缓冲液0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9
某倍数唾液(由
由第3步操作确定
第四步确定)
混匀,37℃水浴7.5min,然后向每管加2滴碘液H2O 6 6 6 6 6 6 6
混匀,37℃水浴7.5min,然后向每管加2滴碘液A660 0.132 0.164 0.079 0.065 0.111 0.125 0.100 以蒸馏水调零,用分光光度计测出各试管中溶液的A值,记录好数据。
6)实验数据据处理
以A660为纵坐标,pH为横坐标作图。
3.结论:根据实验数据做出的平滑曲线图可知,最低点对应的pH 值即为唾液淀粉酶的最适pH值,所以由本次实验得出唾液淀粉酶的最适pH值为6.6。
4讨论:(1)此次实验是根据唾液淀粉酶催化底物水解量来测最适pH 值,因此在唾液淀粉酶活性最高时要保证底物过量,淀粉分解的越多,A值就小;(2)由实验可知:过酸过碱都会抑制酶的活性,使之淀粉的分解减少,A值增大;(3)本次实验要选取合适的底物浓度,如浓度过高火过低,可导致颜色过浓或过浅,难以判断;
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唾液淀粉酶最适pH值的测定
陆绍龙
广西医科大学七年制临床医学10级4班4组。