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碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站微信公众号生物素标记EMSA探针－β-Catenin/TCF (0.2μM)产品编号产品名称包装GS018B 生物素标记EMSA探针－β-Catenin/TCF (0.2µM) 200µl产品简介：生物素标记EMSA探针－β-Catenin/TCF是用于EMSA(也称gel shift)研究的生物素(Biotin)标记的β-Catenin/TCF consensus oligonucleotide。
这个生物素标记的双链寡核苷酸含有公认的β-Catenin/TCF结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。
β-Catenin/TCF consensus oligo的序列如下：5'-CCC TTT GAT CTT ACC-3'3'-GGG AAA CTA GAA TGG-5'本生物素标记EMSA探针已经过纯化，可以直接用于EMSA结合反应。
本生物素标记EMSA探针可以和碧云天的化学发光法EMSA试剂盒(GS009)配套使用。
一个包装的生物素标记探针可以进行约200-400个样品的EMSA检测。
包装清单：产品编号产品名称包装GS018B 生物素标记EMSA探针－β-Catenin/TCF (0.2µM) 200µl—说明书1份保存条件：-20ºC保存，一年有效。
注意事项：避免加热到40ºC以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。
而单链无法用于EMSA研究。
对于基于生物素标记的EMSA检测的详细操作可以参考碧云天的化学发光法EMSA试剂盒(GS009)的使用说明。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒产品编号 产品名称包装 D3308化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒1000cm 2产品简介：化学发光法生物素检测试剂盒(Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit)是一种通过Streptavidin-HRP 及后续的BeyoECL Moon 试剂来实现化学发光检测Biotin 标记核酸的检测试剂盒。
适用于Southern blot 、Northern blot 、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA 等实验中，采用生物素标记的DNA 或RNA 探针时的检测。
本试剂盒不适用于生物素标记蛋白的检测。
本试剂盒同时还提供了封闭液、洗涤液等检测时所需的配套试剂。
本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate ，HRP 和Streptavidin 共价交联的比例大于3，这样比采用Streptavidin 和Biotin-HRP conjugate 两种试剂进行检测要更方便，并且灵敏度更高。
采用了非特异性结合比avidin 更低的strepatavidin ，使检测结果背景更低灵敏度更高。
本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂，生物素标记的DNA 探针或EMSA 探针的制备可以相应地使用碧云天生产的生物素3'末端DNA 标记试剂盒(D3106)或EMSA 探针生物素标记试剂盒(GS008)。
本试剂盒可以用于检测至少10块10×10cm 有生物素标记EMSA 探针的膜，即共1000cm 2。
包装清单：产品编号 产品名称包装 D3308-1 BeyoECL Moon A 液 55ml D3308-2 BeyoECL Moon B 液 55ml D3308-3 Streptavidin-HRP Conjugate100µl D3308-4 封闭液 380ml D3308-5 洗涤液(5X)250ml D3308-6检测平衡液 250ml —说明书1份保存条件：D3308-3 Streptavidin-HRP Conjugate 在-20ºC 保存，其余可4ºC 保存。
超氧阴离子自由基化学发光探针
超氧阴离子（O2^-）是一种高活性的自由基，它在细胞内的产生和清除与多种生理和病理过程密切相关。
因此，开发超氧阴离子的化学发光探针具有重要的科学意义。
超氧阴离子自由基化学发光探针主要通过特定化合物的氧化反应来实现。
这些化合物通过与超氧阴离子反应产生氧化产物，同时伴随着发光现象。
这种发光现象可以通过荧光法或化学发光法来检测。
常用的超氧阴离子化学发光探针包括：氨基甲酸酯（DCFH-DA）、氧化铝（Al2O3）、镁离子（Mg2+）等。
这些探针都有良好的选择性和灵敏度，可以有效地检测超氧阴离子的存在和浓度变化。
超氧阴离子自由基化学发光探针的应用非常广泛，不仅可以在生物学研究中用于检测超氧阴离子的生物产生和代谢过程，还可以在医学诊断中用于检测超氧阴离子在疾病发展中的作用。
此外，超氧阴离子自由基化学发光探针还可以应用于环境监测、食品安全、材料科学等领域。
总而言之，超氧阴离子自由基化学发光探针是一种有效、灵敏和选择性的检测超氧阴离子的工具，对于研究超氧阴离子与生命科学和医学的关系起到重要作用。
鲁米诺—高碘酸钾化学发光法测定盐酸二甲双胍陈文娟;陈建福;陈健旋【摘要】在碱性条件下盐酸二甲双胍对鲁米诺一高碘酸钾化学发光体系有强烈的增敏作用，结合流动注射技术，建立了流动注射化学发光测定盐酸二甲双胍的新方法．在优化的实验条件下，测定盐酸二甲双胍的线性范围为1．0×10-9～7．0×10-5mol／L，检出限为3．4×10-9moL／L，对于浓度为1．0×10-7mol ／L的盐酸二甲双胍连续测定11次，测定值的相对标准偏差为0．8％，以片剂为基体，用标准加入法检验方法的回收率，测得结果在99．6％-101．0％之间．该方法用于盐酸二甲双胍片剂中盐酸二甲双胍的定量分析，结果满意．%A highly sensitive chemiluminesence（CL） method for the determination of metformin hydrochloride by flow injection analysis was developed, based on that the CL intensity of Luminol - KIO4 systems was en- hanced by metformin hydrochloride. The relationship between the CL intensity and the concentration of met- formin hydrochloride was in a linear range from 1.0 ×10-9 to 7.0×10-5 mol/L. The detection limit of met- formin hydrochloride was 3.4 ×10-9 mol/L, Precision of the method was tested at the content rati on level of 1. 0 ×10-7 mol/L of metformin hydrochloride for 11 determinations, and value of RSD was 0.8%. Test for re- covery was made by standard addition method using tablets samples as matrixes, results of recovery were in the range of 99.6% - 101.0%. The proposed method was applied satisfactorily to the determination of metformin hydrochloride in tablets.【期刊名称】《济宁学院学报》【年(卷),期】2012(000)003【总页数】4页(P39-42)【关键词】化学发光;盐酸二甲双胍;流动注射;高碘酸钾;鲁米诺【作者】陈文娟;陈建福;陈健旋【作者单位】漳州城市职业学院生物与环境工程系,福建漳州363000;漳州职业技术学院食品与生物工程系,福建漳州363000;漳州职业技术学院食品与生物工程系,福建漳州363000【正文语种】中文【中图分类】O657.3盐酸二甲双胍(Metformin hydrochloride)化学名称为1，1－二甲基双胍盐酸盐，是一种双胍类口服降糖药，适用于非胰岛素依赖型糖尿病的治疗，可使糖尿病患者血糖及糖化血红蛋白降低，增加机体对胰岛素的敏感性，减轻胰岛素抵抗及饭后高胰岛素血症，临床应用范围较广［1－2］.因此，简单、快速测定盐酸二甲双胍含量分析方法的建立对糖尿病治疗研究等方面有重要意义.目前测定盐酸二甲双胍的方法主要有光度法［1］、HPLC法［3］、电化学法［4］、荧光光谱法［5］、毛细管电泳法［6］，已有文献［7－10］报道化学发光法测定盐酸二甲双胍的方法，这些方法分别是基于利用盐酸二甲双胍对Cu(Ⅱ)－H2O2－罗丹明 B体系［7］、Cu(Ⅱ)－ Luminol－H2O2体系［8］、Cu(Ⅱ)－ Luminol体系［9］、N －溴代丁亚酰二胺－荧光素体系［10］等增敏作用或抑制作用.在实验中，我们发现在碱性介质中，盐酸二甲双胍对Luminol－KIO4发光体系也存在增敏作用，据此结合流动技术建立了流动注射技术测定盐酸二甲双胍的化学发光分析法［11］.该方法用于盐酸二甲双胍的测定，具有灵敏度高、装置简单、线性范围宽、分析速度快等优点，可用于相应片剂的分析.盐酸二甲双胍(上海瑞齐生物科技有限公司)标准储备液:准确称取1.6562g的盐酸二甲双胍，用蒸馏水溶解后定容于100 ml的棕色容量瓶中，得0.1 mol/L标准溶液，使用时用蒸馏水逐级稀释至所需浓度.鲁米诺(Luminol)(美国Sigma公司)标准储备液:准确称取1.7716g 的 Luminol，用0.01mol/L的NaOH溶液溶解，并用0.01 mol/L的NaOH溶液定容于100mL棕色容量瓶，配制成0.1 mol/L标准溶液，避光保存.使用时用 0.01mol/L 的NaOH溶液稀释至不同浓度.高碘酸钾(KIO4)(汕头西陇化工有限公司)溶液按常规配制，使用时用蒸馏水逐级稀释至所需浓度，实验中所用药品均为分析纯，蒸馏水为二次蒸馏水.分析系统按图1流路.IFFM－D流动注射化学发光分析仪，IFFS－A型多功能化学发光检测器(西安瑞迈电子科技有限公司).整个分析过程中采样、注样、实验数据采集及处理，均由WindowsXP系统下Remax软件完成的.如图1所示.将各输液管插入相应的溶液，经聚四氟乙烯管进入流通池进行发光反应.各流路的泵速均为5mL/min，采样时间为15s，开启IFFM－D型流动注射化学发光仪.以蒸馏水为空白进行测定，以峰高进行定量，记录化学发光强度信号.在室温下考察了Luminol－KIO4－盐酸二甲双胍体系化学发光反应的动力学性质.结果如图2所示，从图2中可以看出，进样0.2后开始发光，发光强度到达峰值时所需时间为2s，发光强度由峰值衰减至零时只需4s.由此可见此反应为快速化学发光反应.从而为盐酸二甲双胍的快速分析提供了依据.反应体系的pH值对发光强度有较大的影响，若碱性太强，背景急剧升高，信噪比反而下降.考察了pH值对Luminol－KIO4－盐酸二甲双胍发光体系的影响.其结果如图3，从图3中可以看出，在pH值为11的介质体系中，发光信号最强.故选择反应体系的pH=11为最佳.Luminol是化学发光试剂，其浓度的大小是影响盐酸二甲双胍测定的重要因素，考察了Luminol浓度对相对发光强度的影响.其结果如图4，从图4中可以看出，Luminol溶液浓度在2.0×10－4 mol/L时发光信号最大，故选择Luminol的浓度为2.0 ×10－4mol/L.KIO4是化学反应中是氧化剂，氧化Luminol产生发光，在反应过程中不仅影响测定的灵敏度，而且还影响测定的线性范围.考察了KIO4浓度对相对发光强度的影响.其结果如图5，从图5中可以看出，随KIO4浓度的增大，发光强度也增大，但当KIO4浓度为2×10－3mol/L时，盐酸二甲双胍对化学发光强度增敏最大，有较强的发光强度和较高的信噪比，在此浓度之外，增敏的化学发光强度均减小，故选择KIO4浓度为2×10－3mol/L.在选定的最佳实验条件下，盐酸二甲双胍溶液浓度在1.0×10－9mol/L ～7.0×10－5mol/L 范围内与发光强度呈良好的线性关系.为了提高测定的精密度和准确度，校准曲线按盐酸二甲双胍溶液浓度的数量级分段绘制.校准曲线的基本参数列于表1.对浓度为1.0×10－7mol/L的盐酸二甲双胍溶液进行平行测定11次，得相对标准偏差为0.8%.检出限为3.4 ×10－9mol/L.实验测试了盐酸二甲双胍溶液中可能存在的无机离子及有机物对本实验方法的干扰，以1×10－7mol/L的盐酸二甲双胍标准溶液做干扰实验，考察了10种常见离子和降糖药苯乙双胍的干扰情况，实验发现，当相对误差小于±5%时，200倍的淀粉、Na+、K+、NO3－、F－、CN－，50 倍的，环糊精、Ca2+、Mg2+、Br－、SCN－，10 倍的葡萄糖、蔗糖、柠檬酸均不干扰测定，Cu2+，盐酸苯乙双胍对本实验干扰严重.在盐酸二甲双胍片剂中，辅料主要为淀粉，溶解过滤后，对定量分析基本无影响.取盐酸二甲双胍片剂10片(广东华南药业集团有限公司)，准确称量求得每片的平均质量，研磨，取相当于一片的重量的药品溶解于水，定容，稀释到药片测试范围内.按实验方法测定样品含量，并做回收实验其结果见表2.盐酸二甲双胍分子中含有多个还原性强的基团，如胺基(－NH2)、亚胺基(=NH)等，在碱性条件下，能被KIO4氧化，产生电子跃迁，生成能量较高的中间产物自由基，生成的自由基在碱性介质中氧化 Luminol产生化学发光.反应机理如下［12］:盐酸二甲双胍+KIO4+OH－=中间产物自由基*中间产物自由基*+Luminol=化学发光在碱性条件下，盐酸二甲双胍对Luminol－KIO4化学反应发光体系具有增敏作用，对影响化学发光的各种因素进行了研究，建立了流动注射化学发光测定盐酸二甲双胍的新方法，该方法灵敏度高、装置简单、线性范围宽、分析速度快等优点，可用于相应片剂中的分析.【相关文献】［1］秦超，尹莉芳，王广基，等.盐酸二甲双胍缓释微丸的制备及体外释放度考察［J］.中国新药杂志，2011，20(21):2069－2072.［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［S］.2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:625－626.［3］李艺，王红，张良珂，等.HPLC法测定盐酸二甲双胍缓释片中盐酸二甲双胍的含量［J］.中国药房，2011，22(24):2296－2297.［4］Tian X J，Song J F.Catalytic action of copper(Ⅱ)ion on electro-chemical oxidation of metformine and voltammet ric determination of metformine in pharmaceuticals［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2007，44(5):1192 －1196.［5］Wang Z P，Zhang ZJ，Fu Z F，et al.Sensitive flow injection chemiluminescence determination of metformin based on N－bromosuccinimide fluoresce in system［J］.Analytical Letters，2003，36(12):2683－2697.［6］Yardimci C，Ozaltin N.Method development and validation for the simultaneous determination of rosiglitazone and metformin in pharmaceutical preparations by capillaryzone electrophoresis［J］.Analytica Chimica Acta，2005，549(122):88 －95.［7］He C，Zhang Z J，He D Y，et al.Chemiluminescence determination of metformin based on hydroxyl radical reaction and molecularly imprinted polymer on lineenrichment ［J］.Analytical and Bioanalytical Chemistry，2006，385(1):128 －133.［8］Marques K L，Santos J L M，Lima J L F C.A catalytic Multipumping flow system for the chemiluminometric determination of metformin［J］.Analytical and Bioanalytical Chemistry，2005，382(2):452－457.［9］李红，杜建修.鲁米诺－Cu(Ⅱ)－盐酸二甲双胍化学发光体系的研究［J］.陕西师范大学学报(自然科学版)，2010，38(1):54－56.［10］方卢秋.NBSM－荧光素体系流动注射化学发光法测定盐酸二甲双胍［J］.理化检验－化学分册，2003，39(9):512－514.［11］李世君，杨冉，屈凌波，等.鲁米诺－高碘酸钾化学发光法测定盐酸阿朴吗啡［J］.药物分析杂志，2011，31(7):1376－1378.［12］Lu C，Song G，Lin J M.Reactive oxygen species and their chemiluminescence detection methods［J］.Trends in Analytical Chemistry，2006，25(2):985 －995.。
化学发光常用的化学试剂及其原理化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。
任何一个化学发光反应都包括两个关键步骤，即化学激发和发光。
因此，一个化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件：第一：反应必须提供足够的能量（ 170 ～ 300KJ ／ mol ），第二，这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的荧光量子产率。
到目前为止，所研究的化学发光反应大多为氧化还原反应，且多为液相化学发光反应。
化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。
对于一般化学发光反应，值约为 10 － 6 ，较典型的发光剂，如鲁米诺，发光效率可达 0 . 01 ，发光效率大于 0 .01 的发光反应极少见。
现将几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。
1、鲁米诺及其衍生物鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、 4—氨基已基—N 一乙基异鲁诺及 AHEI 和 ABEI 等。
鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。
在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。
最常用催化剂是金属离子，在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏度。
其次是利用有机化合物对鲁米诺化学发光反应的抑制作用，测定对化学发光反应具有猝灭作用的有机化合物。
其三是通过偶合反应间接测定无机或有机化合物。
其四是将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺 (ABEI) 标记到羧酸和氨类化合物上，经过高效液相色谱 (HPLC) 或液相色谱 (LC) 分离后，再在碱性条件下与过氧化氢－铁氰化钾反应进行化学发光检测。
也可以采用其它分离方法，如将新合成的化学发光试剂异硫氰酸异鲁米诺标记到酵母 RNA 后，通过离心和透析分离，然后进行化学发光检测。
专利名称：化学发光底物液
专利类型：发明专利
发明人：彭夫望,李素停
申请号：CN201910288919.8申请日：20190411
公开号：CN110031453A
公开日：
20190719
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明是一种高稳定性化学发光底物液，用于免疫分析检测领域。
所述发光液中含有机溶剂二甲基甲酰胺（DMF）、鲁米诺（luminol）、过氧化氢（HO）、增强剂4‑（咪唑‑1‑基）苯酚（4‑IMP）、苯甲酸钠、Tris‑HCl缓冲液。
本发明的化学发光底物液稳定性好、线性范围长、发光持续时间长、灵敏度好、使用方便、成本便宜。
申请人：河南昂睿生物科技有限公司
地址：451162 河南省郑州市航空港区省道102与新港大道交汇处郑州台湾科技园C-2号楼
国籍：CN
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鲁米诺-H2O2流动注射化学发光法测定乐果第24卷,第5期2007年9月光谱实验室ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryV oI.24,NO.5September,2007鲁米诺一H2o2流动注射化学发光法测定乐果①吴晓苹②涂貌贞(福州大学化学4tin学院福州市鼓楼区工业路523号350002)摘要在碱性介质中,乐果能够有效增强鲁米诺-HzOz体系的化学发光,据此建立了测定乐果的流动注射化学发光分析方法,并对反应的机理进行了探讨.在最佳条件下,乐果-鲁米诺-H202体系化学发光强度在2s内达到了最大值,乐果在5.0X10一1.0X10g/mL范围内呈良好的线性关系,检出限(S/N一3)为1.5×10～g/mL.该体系应用于加标蔬菜样品测定,乐果测定回收率为108.O 一l19.3?测定偏差为2.7一4.6.化学发光的机理可能是由于乐果先被过氧化氢氧化生成过氧化磷酸盐.过氧化磷酸盐氧化鲁米诺生成激发态,从而产生发光.关键词流动注射化学发光法,乐果,鲁米诺.中图分类号:0657.39文献标识码:B文章编号:1004-8138(2007)05-0921—051前言乐果[Dimethoate,09o一二甲基一S一(Ⅳ～甲基氨基甲酰甲基)--硫代磷酸酯]为广谱内吸性杀虫,杀螨剂,广泛应用于防治蔬菜和粮食上的蚜虫,叶蝉及某些蚧类,螨类害虫.乐果能使DNA的鸟嘌呤发生甲基化,因此具有许多潜在危害口].加强对蔬菜食品中乐果残留的监测分析,对保障食品安全和人类健康具有实际意义.目前用于检测乐果残留的方法主要有气相色谱法/气质联用GC—MS[24],液质联用(IC—MS)t'],免疫分析法",酶抑制法.和化学发光技术等.质谱,免疫分析和酶分析检测较灵敏,适用对象广泛,但质谱仪器昂贵,成本高,而免疫分析和酶抑制法的操作技术要求高,时间长,不适合于快速检测.化学发光分析技术由于具有检测灵敏,简便,快速,成本低的特点,近年来在农药残留分析上的应用备受关注.Ayyagari等口妇利用有机磷抑制碱性磷酸酯酶催化发光,测定了乐果等有机磷农药残留,检出限为500ppbMoris等[1.利用有机磷农药和氨基甲酸酯抑制Ache酶活性的特征,结合酶催化发光技术检测了乐果等有机磷和氨基甲酸酯农药多残留.应用非酶试剂化学发光反应,如鲁米诺一Ce(Ⅳ)等化学发光体系,也可以直接测定敌敌畏[1引,甲基对硫磷[1,对硫磷[1等有机磷农药,在农残测定中显示了良好的应用前景.目前,鲁米诺一H.0.体系分析检测乐果的研究尚未见报道.本文基于碱性条件下乐果能增强鲁米诺一H.0.化学发光的特征,结合流动注射分析技术,研究建立了一种快速,简便,高灵敏的乐果催化化学发光分析的新方法,对反应的机理进行了探讨,并应用于蔬菜中乐果残留量的测定,结果令人满意.①国家自然科学基金项目(20575012),福建省科技厅重点项目(2005Y015)资助项目②联系人,电话:(0591)87893229;*********************.cn作者简介:昊晓苹(1972一),女,福建省漳州市人,副教授,博士,主要从事生物和环境分析.收稿日期{2007.06-19;接受日期{2007?06—30光谱实验室第24卷2实验部分2.1仪器和试剂IFFM—D型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈电子科技有限公司);pHS一3C型精密酸度计(上海大普仪器厂);鲁米诺溶液(1.0×10_mol/I):称取0.1772g鲁米诺(Sigma,USA),用 6.0ml0.01mot/I 的NaOH溶液溶解,用二次蒸馏水定容至100ml,低温避光保存;乐果标准液(6.8×10～g/ml):称取 3.4mg乐果(Sigma,USA),少量乙腈溶解,二次蒸馏水定容至50ml,使用时用二次蒸馏水逐级稀释;H0每次实验前重新配置;实验用水均为二次蒸馏水,所有试剂均为分析纯.2.2样品制备提取:称取5.0g白菜样品于50ml匀浆杯内,加入25ml乙酸乙酯,5g无水硫酸钠,匀浆2min,3000r/min离心3rain,过滤;在残渣中加入20ml乙酸乙酯匀浆lmin,合并滤液,用旋转蒸发仪浓缩至干,石油醚定容至2.0mI.净化:用10ml石油醚淋洗层析柱(脱脂棉;填料包括3.0g无水硫酸钠,5g5水灭活弗罗里硅土,3.0g无水硫酸钠),加入2ml石油醚提取液,用30ml乙酸乙酯淋洗,收集淋洗液,N.吹干,应用二次蒸馏水定容10m1.2.3实验方法流动注射化学发光反应装置如图1所示,采样体积为100/~I,阀池距为5.5cm.鲁米诺和过氧化氢经过泵先混合后由载液推动,通过六通进样阀注入T形阀混合后,快速送入发光池,以CI检测器进行检测,以相对峰高进行定量.鲁米诺H,0,找液样品图1流动注射化学发光分析流程图P——蠕动泵;——T型阀;PMT——光电倍增管.3结果与讨论3.1化学发光研究结合流动注射技术,考察乐果对鲁米诺一H.0化学发光的增强反应.图2表明,鲁米诺一H0体系化学发光在2s内达到峰值.未加入乐果时,实验中发光体系的发光强度较低;随着乐果的加入量,鲁米诺一HO体系化学发光得到明显的增强,当乐果浓度为6.8×10～g/ml时,鲁米诺一HO体系发光值即增强了9倍左右,表明体系可以用于测定微量乐果.3.2介质优化在碱性介质下,考察了pH在11.5—13.5范围的三种碱性缓冲介质NaHCO.一NaOH,NailzPO一NaOH,Na2BO一NaOH对鲁米诺一过氧化氢一乐果体系发光增强值(△,)的影响.图3表明,pH为12.8的NazBO一NaOH缓冲溶液对体系发光增强作用最大,以下实验选择pH12.8的NaBO一NaOH缓冲溶液作为载液.第5期吴晓苹等:鲁米诺一HzOz流动注射化学发光法测定乐果45O芝3502505O,':/O0002000n'ffuJt/O.O05s图2鲁米诺一HO一乐果体系流动注射发光谱图鲁米诺:1.o×lO一mol/L;H2Oz:0.07mol/L;缓冲液:NaHCO3一NaOH,pH11.5;乐果浓度(g/mL):j——0;——6.8×10一;争一6.8×10—6.图3介质及pH值对发光强度的影响乐果:6.8×10一g/mL;鲁米诺:1.0×10mol/L;H2O2l0.07mol/L;流速:2.5mL/min;卜一NaHCO3一NaOH——NaH2PO4一NaOH;3——Na2B4Or—NaOH.3.3H:o:浓度优化考察了在0.01—0.3mol/l范围内的不同浓度的H.O.对体系发光增强值的影响,以载液流速为2.5ml/rain,如图4所示,在0.01—0.07mol/l的H.0.浓度范围内,体系发光增强值随着HzOz的加入量增大而增强,当H.0.的浓度为0.07mol/l时,体系具有最大的化学发光增强值;随着H.0.的量继续增加,发光背景增强,发光增强值降低.实验选择H.O.浓度为0.07mol/I.3.4鲁米诺浓度优化在浓度为1.0×10一--5.0×10一mol/l范围,研究了鲁米诺对发光增强值的影响.以载液流速为2.5ml/min,如图5所示,当鲁米诺溶液浓度为1.0×10～mol/l时,发光增强值△,最大.因此,鲁米诺溶液最优化浓度选择1.0×10一mol/l.H2O2/mol?L.图4过氧化氢浓度对发光增强值的影响乐果:6,8×lOg/mL}鲁米诺:1.0X10一mol/L.鲁米诺/×10-Smol?L图5鲁米诺浓度对发光增强值的影响乐果:6.8×10一g/mL}H2O2;0.07mol/L.3.5流速优化考察了泵转速在30~99r/min范围内对发光增强值的影响.随着泵转速的增大,溶液混合程度和流动速度增大,有利于反应溶液在短时间内到达发光池,逐渐实现化学发光与溶液输送的同步性,减少因输送延迟而处在发光衰减阶段检测的不利情况;当主泵转速为70r/min,载液流速为2.5ml/mim,鲁米诺一H.0.体系发光增强值最大,随后,泵速继续增大,出现溶液尚未完全发光就被推出检测池,检测的发光强度降低.故而实验选择泵转速为70r/min,流速2.5ml/mim.光谱实验室第24卷3.6干扰测定考察共存物质的干扰情况,当样品中乐果为1.0×10g/mL时,在测定偏差小于5的情况下,1000倍的K,Ca抖,Na,Al件,Cl一,Br一,NO,col一,SO:一,PO:一,400倍的Zn 抖,NH4+,100倍的淀粉,葡萄糖等物质不干扰测定;Pb(10倍),Hg(10倍)和Fe.(0.2倍)具有干扰,Cu 抖,VC,VB存在干扰.Pb抖,Hg抖,Fe.和Cu可以通过添加1.0×10_.mol/IEDTA进行掩蔽,VC,VB可通过净化消除.3.7分析应用在最优条件下,乐果测定的线性浓度范围为5.0×10～一1.0×10一g/ml,线性方程为AI一8.632×10.C(g/mI)一12.547;(r一0.9963),最低检出限(/Ⅳ一3)为1.5×10～g/mI;对含有1.0×10_.g/ml乐果的标准溶液进行重现性测定,RSD=1.9(一11).测定白菜模拟样品,在乐果加标浓度在0.5—3.0g/ml时,回收率为108.0一119.3,见表1.测定偏差为2.7一4.6.表1白菜样品的乐果加标回收率4机理探讨根据文献,有机磷酸酯农药(如甲基对硫磷,对硫磷等)与鲁米诺一过氧化氢体系的化学发光反应机理可能为:过氧化氢先氧化对硫磷生成过氧化磷酸盐,过氧化磷酸盐氧化鲁米诺生成激发态的3一氨基邻苯二甲酸根离子,激发态的3一氨基邻苯二甲酸根离子回到基态,产生化学发光.乐果也属于有机磷酸酯农药,结构与功能基团与甲基对硫磷等相似,因此可以认为可能的反应机理如下式所示:.一HCH,0H一=;==CH.~o/,O4-0P一0O-4-H20 CH0H一;;,P—H,,-'一:NH,ONH,ONH2O:+CHOx,o一——N—cH.0一∞-+]'...一O'lCHJl-IH,一0C—C\,0'.CC—000CC第5期吴晓苹等:鲁米诺一HzO2流动注射化学发光法洲定乐果925参考文献r1]SharmaY.BashirS,IrshadMcta1.Dimethoate—InducedEffectsonAntioxidantStatusofLiverandBrainofRatsFollowing SubchronicExposure[J].Toxh'ology,2005,215(3)!l73—181.[2]HercegovaA.D..on"ot'orovaM,MatisovaEela1.FastGasChromatographywithSolidP haseExtractionClean—upfor 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CTdna) AbstractAsimpleandconvenientflow—injectionchemiluminescence(FIA—CI)methodforthe determinationofdimethoatewasdevelopedbasedontheobservationthatdimethoatecangre atlyenhancetheCIbetweenluminolandH2O2inanalkalinesolution.TheintensityofCIinthissys temreachesamaximumwithin2sundertheoptimumconditions.Thelinearrangefordimethoatei s5.0×10～.—— 1.0×10一g/mIwithadetectionlimitof1.5×10一g/mI(S/N=3).Thismethodwasapplied tothedeterminationofdimethoateinfortifiedvegetablesampleswithrecoveryof108.09/6—119.3,andtheRSDof2.79/6—4.69/6.TheCIreactionisprobablytriggeredbytheinteractionofH2O2一dimethoate,andthentheresultedperoxidephosphateinducestheoxidationofluminoltoform aexcitedstateintermediate,whichinstantlytransitstogroundstatewithanemissionofCI. KeywordsFlow—InjectionChemiluminescence,Dimethoate,Iumino1.。
