副溶血性弧菌检验-检验操作程序及要点-微课件

1范围本标准规定了食品中副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的检验方法。

本标准适用于食品中副溶血性弧菌的检验。

2设备和材料设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。

2.2冰箱：2 ℃～5 ℃、7 ℃～10 ℃。

2.3恒温水浴箱：36 ℃±1 ℃。

2.4均质器或无菌乳钵。

2.5天平：感量0.1 g。

2.6无菌试管：18 mm×180 mm、15 mm×100 mm。

2.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。

2.8无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL、1000 mL。

2.9无菌培养皿：直径90 mm。

2.10全自动微生物生化鉴定系统。

2.11无菌手术剪、镊子。

3培养基和试剂3.13％氯化钠碱性蛋白胨水：见附录A中A.1。

3.2硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（TCBS）琼脂：见附录A中A.2。

3.33％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂：见附录A中A.3。

3.43％氯化钠三糖铁琼脂：见附录A中A.4。

3.5嗜盐性试验培养基：见附录A中A.5。

3.63％氯化钠甘露醇试验培养基：见附录A中A.6。

3.73％氯化钠赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录A中A.7。

3.83％氯化钠MR-VP培养基：见附录A中A.8。

3.93％氯化钠溶液：见附录A中A.9。

3.10我妻氏血琼脂：见附录A中A.10。

3.11氧化酶试剂：见附录A中A.11。

3.12革兰氏染色液：见附录A中A.12。

3.13ONPG试剂：见附录A中A.13。

3.14Voges-Proskauer（V-P）试剂：见附录A中A.14。

3.15弧菌显色培养基。

3.16生化鉴定试剂盒。

4检验程序副溶血性弧菌检验程序见图1。

5操作步骤5.1样品制备5.1.1非冷冻样品采集后应立即置7℃～10℃冰箱保存，尽可能及早检验；冷冻样品应在45 ℃以下不超过15 min或在2℃～5℃不超过18 h解冻。

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是广泛分布于海水、海底泥沙、浮游生物和鱼贝类中的海洋性细菌，为海产食品引起急性胃肠炎的重要病原菌之一，尤其是在夏秋季节的沿海地区，经常由于食用带有大量副溶血性弧菌的海产食品，引起爆发性食物中毒。

在非沿海地区，因食用此菌污染的食品而引起中毒者亦时有发生。

为保障食品卫生质量和食用安全，根据副溶血性弧菌的特性，进行下列检验，以便鉴别诊断。

第一节副溶血性弧菌标准的检验方法一、检验方法（一）操作步骤1. 分离培养：首先称取样品25g，加225mL3.5％灭菌盐水，用均质器打碎或用乳钵磨碎，接种氯化钠琼脂平板和嗜盐性琼脂平板各一个，同时取10mL加入100mL增菌液中，放37℃8~16h培养后，涂上述平板进行分离，37℃培养18~24h取出观察，挑取可疑菌落，转种3.5％氯化钠三糖铁斜面，37℃、24h观察结果。

2. 涂片镜检：将三糖铁培养基上反应可疑者即底层变黄（葡萄糖产酸不产气）、上层斜面不变（乳糖、蔗糖不分解）、有动力、不产生硫化氢，进行革兰氏染色镜检形态。

3. 嗜盐性试验：将上述可疑培养物分别接种不同含量的盐胨水（0％，3％，7％，10％）于37℃24h培养后观察生长情况，在无盐和10％盐的胨水中不生长，在3％和7％盐的胨水中生长良好者，继续进行下列有关试验。

4. 生化试验：分别接种下列各类生化培养基，葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甲基红、靛基质、V-P，赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、硫化氢及溶血性试验，放37℃培养，除V-P、靛基质和甲基红试验培养48h后加试剂观察外，其他均在24h观察结果。

5. 动物试验：将上述符合各类反应的副溶血性弧菌，接种3.5％氯化钠胨水，经37℃、16~18h培养后，小鼠腹腔注射0.3mL，观察2~3d，将死亡小鼠进行解剖作分离培养。

（二）检验程序图6-1 副溶血性弧菌检验程序二、结果分析判定及注意事项（一）样品处理采样时应注意首选准备好灭菌用具及容器，以无菌手续取有代表性的样品，样品必须尽快送检，不宜存放时间过长，副溶血性弧菌在适宜温度下繁殖较快，但不适于低温生存，在寒冷的情况下容易死亡，防止待检材料冷冻，以免影响检验结果。