下载文档原格式
固相萃取2高效液相色谱法检测牛奶和猪肉中5种β2内酰胺类抗生素叶能胜,谷学新Ξ,张 琦(首都师范大学化学系,北京100048)摘 要:建立了牛奶和猪肉样品中氨苄西林、青霉素V、青霉素G、苯唑西林和氯唑西林等5种β2内酰胺类抗生素残留量的高效液相色谱(HP LC)测定方法。
实验采用固相萃取法(SPE)富集抗生素残留,考察了样品前处理方法;并对色谱分离条件加以优化,在C18色谱柱上以乙腈2011%氨水进行梯度洗脱,可在10min内实现5种抗生素的分离与检测,检测波长为210nm。
方法可用于动物性食品中上述抗生素残留的同时检测。
关键词:β2内酰胺类抗生素;高效液相色谱法;固相萃取;牛奶;猪肉中图分类号:O657.7 文献标识码:A 文章编号:100020720(2010)062073205 β2内酰胺类抗生素是含有β2内酰胺基母核结构的一类抗生素。
在动物饲养中,β2内酰胺类抗生素广泛用于治疗动物尿道、胃肠道和呼吸道感染等,如果使用不当或不遵守休药期规定,均可能造成此类抗生素在动物性食品中的显著残留,给人的健康带来危害。
因此,有必要建立动物性食品中的β2内酰胺类抗生素残留分析方法。
K antiani 及Samanidou分别就有关β2内酰胺类抗生素分析方法加以评述[1,2],本课题组也就这一领域的最新进展加以综述[3],还实现了毛细管电泳法快速分离并测定牛奶中4种β2内酰胺类抗生素[4]。
在近期文献报道中,高效液相色谱法(HP LC)及液质联用技术是分析β2内酰胺类抗生素的常用方法[5～8],包括使用衍生化方法来提高方法灵敏度和特异性[9,10]。
本文建立了固相萃取2高效液相色谱法(SPE2HP LC)同时测定猪肉和牛奶中5种β2内酰胺类抗生素残留量,方法无需衍生化,简便快捷。
1 实验部分1.1 仪器和试剂1200Series高效液相色谱仪(Agilent公司),配有真空脱气、四元泵、二极管阵列检测器和自动进样器。
高效液相色谱法测定不同类别食品中的叶黄素ZHANG Zhi-jun;ZHANG Fei;FU Qiang;YANG Xi;LIN Yi-yun;ZHONG Yong-hong;HUANG Xing-min【摘要】为了研究不同类别食品中不同形态叶黄素的分析方法,针对不同样品基质和叶黄素形态,分别选用超声波辅助提取法、酶解—超声波提取法和碱皂化—液液萃取法,建立并优化了测定叶黄素的高效液相色谱法.采用C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)进行检测,以甲醇—水为流动相进行等度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为446 nm,叶黄素在0.125～10.0 mg/L范围内呈良好线性,相关系数为0.99991.不同类别食品的加标回收率为90.0％～102.2％,方法检出限为0.10 mg/kg.采用该方法对各类食品样品中叶黄素的含量进行了测定,实验结果表明该方法适用范围广、针对性强、准确度高和重现性好,适用于各类食品中叶黄素的检测.【期刊名称】《广西大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2019(044)003【总页数】7页(P869-875)【关键词】叶黄素;叶黄素微囊粉;叶黄素酯;食品;高效液相色谱法【作者】ZHANG Zhi-jun;ZHANG Fei;FU Qiang;YANG Xi;LIN Yi-yun;ZHONG Yong-hong;HUANG Xing-min【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文【中图分类】O657.7叶黄素属于类胡萝卜素，是一种天然、营养和多功能的食品添加剂，素有“植物黄金”之称[1-3]。
人体自身不能合成叶黄素，只能从食物中摄取[4]。
我国卫生部已批准，叶黄素可添加到婴幼儿配方食品中，因此叶黄素一直都是功能食品领域研究的热点。
食品中添加的叶黄素有三种形态：叶黄素单体、叶黄素微囊粉或叶黄素酯。
叶黄素化学结构中含有多个共轭双键，容易被氧化失去原有的生物活性，因此叶黄素单体的应用范围受到限制[5-6]。
反相高效液相色谱法测定乳制品中土霉素、四环素和金霉素残
留量
蔡颖;韩奕奕;何志军
【期刊名称】《化学世界》
【年(卷),期】2006(47)7
【摘要】建立了反相高效液相色谱法测定乳制品中土霉素、四环素和金霉素残留量的方法。
乳制品中的蛋白经沉淀除去，所得清液采用C18柱分离测定，流动相为乙腈．磷酸二氢钠，流速0．5mL／min，梯度洗脱，紫外检测波长355nm。
当土霉素、四环素和金霉素的质量浓度不大于2．00μg／mL时，其峰面积与浓度之间存在良好线性关系。
方法检测限：土霉素为15．0μg／kg、四环素为20．0μg／kg、金霉素为18．0μg／kg。
回收率为86．0％～102．3％。
【总页数】3页(P398-400)
【关键词】反相高效液相色谱法;土霉素;四环素;金霉素;乳制品
【作者】蔡颖;韩奕奕;何志军
【作者单位】农业部食品质量监督检验测试中心;上海市粮油制品质量监督检验站【正文语种】中文
【中图分类】TQ460.7;O657.7
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定鸡肉中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素残留量的方法优化探讨 [J], 夏洁贞;区敏霞
2.高效液相色谱法测定四环素类抗生药物中土霉素、强力霉素、四环素和金霉素[J], 吕海涛;陈峰;姜悦
3.反相高效液相色谱法测定肝组织中土霉素、四环素残留量 [J], 王绍云;周光明;王莉
4.高效液相色谱法测定猪肉中土霉素、四环素和金霉素 [J], 范露;靖涵之
5.高效液相色谱法测定鸡肉中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素残留量的方法优化探讨 [J], 夏洁贞;区敏霞;;
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
第2期（总第522期）2021年2月农产品加工Farm Products ProcessingNo.2Feb.文章编号：1671-9646(2021) 02b-0029-04婴幼儿配方奶粉加工贮藏过程中叶黄素稳定性的变化魏哲文叫钱浩3,王丹1,张亚玲1, **房芳4收稿日期：2020-07-14作者简介：魏哲文（1992—），女，硕士，助理工程师，研究方向为食品质量与安全。
*通讯作者：房芳（1988—），女，硕士，工程师，研究方向为食品质量与安全。
(1.石河子海关，新疆石河子832000; 2.石河子大学食品学院，新疆石河子832000;3.新疆石河子花园乳液有限公司，新疆石河子832000；4.乌鲁木齐海关技术中心，新疆乌鲁木齐830000)摘要：通过高效液相色谱法检测分析了婴幼儿配方奶粉在加工和贮藏过程中叶黄素稳定性的变化。
研究发现，生产过程中叶黄素的损耗主要发生在高温灭菌阶段和喷雾干燥阶段，通过比较生产过程中不同阶段叶黄素含量的检测结果得出，喷雾干燥阶段叶黄素损耗>高温灭菌阶段>均质阶段>浓缩阶段。
货架期试验结果表明，温度越高，叶黄 素损失率越高。
马口铁罐中叶黄素的保留率>PE 铝箔软包装 > 纸袋包装。
关键词：婴幼儿配方奶粉；叶黄素；高效液相色谱法；加工贮藏中图分类号：TS252.51 文献标志码：A doi ： 10.16693/ki.1671-9646(X ).2021.02.038Changes of Lutein Stability of Infant Formula Milk Powder DuringProcessing and StorageWEI Zhewen 1'2, QIAN Hao 3, WANG Dan 1, ZHANG Yaling 1, "FANG Fang 4(1. Shihezi Customs of Xinjiang ， Shihezi ， Xinjiang 832000， China ； 2. College of Food Science ， Shihezi University ，Shihezi ， Xinjiang 832000， China ； 3. Xinjiang Shihezi Garden Dairy Co.， Ltd.， Shihezi ， Xinjiang 832000， China ；4. Urumqi Customs Technical Center ， Urumqi ， Xinjiang 830000， China)Abstract ： This study was to investigate the stability of lutein in infant formula milk powder during processing and storage byhigh performance liquid chromatography. The results showed that the loss of lutein in the production process mainly occurred in the high temperature sterilization stage and spray drying stage. Compared with the lutein content in different stages of the pro duction process ， the results showed that lutein loss during spray drying stage > high temperature sterilization stage > homoge neous stage > enrichment stage. The results of shelf life test showed that the higher the temperature lead to the higher the lutein loss rate. The higher retention rate of lutein in tinplate > PE aluminum foil soft packaging > paper bag packaging.Key words ： infant formula milk powder ； lutein ； high performance liquid chromatography ； processing and storage0引言叶黄素（Lutein ）是一种重要的眼睛抗氧化剂。
叶黄素及其顺式异构体的快速检测李大婧;刘春菊;肖亚冬;庞慧丽;刘春泉【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2016(037)004【摘要】为了建立分离度好、分离效率高的叶黄素顺、反异构体检测方法.通过对检测波长、流动相、流动相比例和流速等色谱条件的摸索和优化,确定最佳色谱条件,并采用光谱、高效液相色谱、质谱等方法对叶黄素顺、反异构体进行定性定量分析.结果表明:该方法流动相为二氯甲烷-乙腈-甲醇(20:30:50,V/V),流速为1.0 mL/min,叶黄素热异构化样品中各物质在12 min内达到有效分离,无拖尾现象,峰形较好;在叶黄素热异构化样品中鉴定出15-顺式、13/13'-顺式和9/9'-顺式叶黄素顺式异构体及全反式叶黄素,全反式叶黄素在4～260 ng范围内峰面积与进样量呈良好线形性关系,回收率在95％以上,精密度和稳定性相对标准偏差均小于2％.该方法分离度好、准确性高、重现性好.【总页数】6页(P206-211)【作者】李大婧;刘春菊;肖亚冬;庞慧丽;刘春泉【作者单位】江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京 210014;国家蔬菜加工技术研发专业分中心,江苏南京 210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京 210014;国家蔬菜加工技术研发专业分中心,江苏南京 210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京 210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京 210014;江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京 210014;国家蔬菜加工技术研发专业分中心,江苏南京 210014【正文语种】中文【中图分类】TS201.2【相关文献】1.玉米蛋白粉中反式叶黄素及主要顺式异构体的分离鉴定 [J], 李秀霞;韩鲁佳2.高效液相色谱法同时测定那格列奈中顺式异构体和L-异构体 [J], 董淑波;杨汉跃;陈学民;叶德举3.将取代的苄叉胺的顺式-反式混合物转化成纯顺式异构体的方法 [J],4.1,4-环己烷二甲醇(CHDM)顺式异构体、反式异构体的确定分析 [J], 王潇颖5.1,4-环己烷二甲醇(CHDM)顺式异构体、反式异构体的确定分析 [J], 王潇颖;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定保健食品中叶黄素含量的研究2.广州海关技术中心510623摘要：本文主要研究了高效液相色谱法测定保健食品中叶黄素含量的具体方法及流程，利用该方法合理科学地测定保健品中叶黄素的含量，以更方便准确了解其在保健食品中的含量情况，进而对食品的保健功能进行科学评估。
关键词：保健食品；叶黄素含量；高效液相色谱法；含量测定1 前言叶黄素属于一种天然物质，广泛存在于各类植物中，也是人体视网膜黄斑区的主要构成色素。
人体自身无法合成叶黄素，必须要通过外界摄入的方式进行补充。
对于保健食品来说，叶黄素是其中的重要组成部分，但对于具体的使用量尚未有明确规定。
当前用于测定叶黄素含量的方法有很多，常用的方法包括紫外分光光度计法、分光光度法、液相色谱法等，但不同检测方法能够达到的检测效果也不相同，如分光光度法容易受到外界干扰，导致测定结果的稳定性较差。
高效液相色谱法已经广泛食品中药残和营养元素等的检测，但目前尚未有应用此方法测定保健食品叶黄素含量的检测标准，此种方法的操作过程简单，且结果稳定可靠，应用于保健食品中的叶黄素含量的测定，具有较高的灵敏度，而且检测结果稳定，能够达到理想的检测效果。
因此，加强对该种检测方法的研究，科学规划检测步骤，可实现对保健食品中叶黄素含量进行更准确高效的测定。
2高效液相色谱法分析高效液相色谱法是色谱法的重要分支内容，其主要以液体作为流动相，并且应用高压输液系统，将混合溶剂或者缓冲液放置到色谱柱当中，在色谱柱内，各个成分被分离开来，然后放入到检测仪器中进行检测处理，以实现对样品的科学分析与处理[1]。
当前该种方法已经广泛应用到了医学、化学、工业、农业等学科领域当中。
此种检测方法具有非常显著的特点：第一，高压性。
这主要是由于流动相属于液体，在经过色谱柱时所遭受的压力较大，因此必须通过高压方式才能够保障其通过色谱柱。
第二，高速性。
该种方法的载液、分析速度都非常快，常规情况下对一个样品的分析时间为15-30min，快的可在更短时间内完成。
研究简报DOI :10.11895/j.issn.0253-3820.140931冷皂化-高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体陈万勤 刘柱 郑国钢* 茅佩卿 朱炳祺 丁宇琦 周赛静(浙江省食品药品检验研究院,杭州310004)摘 要 建立了冷皂化-高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体㊂将乳制品进行冷皂化处理后,经正己烷-石油醚-二氯甲烷(2：2：1,V /V )提取,使用YMC C30色谱柱分离,以甲醇和甲基叔丁基醚为流动相进行梯度洗脱,采用二极管阵列检测器于445nm 波长下检测,外标法定量;在0.127~5.082mg /L 范围内的线性关系良好,相关系数(R 2)为0.9999,回收率在96.7%~102.2%之间,RSD 在4.1%~5.4%之间(n =6),检出限为0.010μg /g(S /N =3),定量限为0.030μg /g(S /N =10)㊂本方法简单㊁准确㊁灵敏度高,适用于乳制品中叶黄素5种异构体的检测㊂关键词 高效液相色谱法;叶黄素;异构体;乳制品 2014-10-20收稿;2014-12-17接受*E-mail:zgg0617@ 1 引 言叶黄素(Lutein),又名黄体素,是存在于蔬菜㊁花卉㊁水果与某些藻类生物中的天然类胡萝卜素㊂叶黄素具有良好的预防人体衰老㊁动脉硬化[1]㊁抗氧化㊁抗癌功效[2]以及独特的护眼功能[3,4]等,在保健品㊁化妆品和动禽类饲料等多个领域广泛应用㊂美国FDA 于1995年批准了叶黄素作为食品补充剂用于食品中,我国2007年批准了叶黄素作为营养强化剂添加到婴幼儿或儿童配方食品中[5]㊂叶黄素分子结构中含多个共轭碳碳双键结构,由于烯键的存在,叶黄素可以存在多种几何异构体㊂叶黄素不同异构体在生物体内的生物活性也不同,其中全反式构象的生物活性较顺式构象要高很多[6,7]㊂目前市售的食品中很少有区分叶黄素不同异构体的含量㊂因此,建立高效的叶黄素顺反异构体的检测方法具有重要的意义㊂目前叶黄素的检测方法主要以高效液相色谱法[8~10]和液质联用法[11,12]为主㊂由于叶黄素在光和热的作用下容易发生顺反异构化[13,14],因此样品的所有处理过程需在较低温度和避光条件下进行,避免全反式叶黄素发生异构化㊂所以到目前为止,国际市场上也只有全反式叶黄素标准物质在售,尚未有叶黄素顺式异构体的标准物质,对顺式异构体进行定量仍然是一个难题㊂本研究采用全反式叶黄素作为标准物质,对5种叶黄素异构体进行定量分析,并且对样品的前处理方法进行了研究,采用冷皂化法进行样品的前处理,避免叶黄素在高温皂化时叶黄素发生异构化,采用液相色谱法结合YMC C30色谱柱对叶黄素异构体进行有效分离,准确定量㊂2 实验部分2.1 仪器与试剂Agilent1260高效液相色谱仪,配二极管阵列检测器(美国Agilent 公司);紫外/可见分光光度计;乙腈㊁甲醇(色谱纯,Merk 公司);甲基叔丁基醚㊁石油醚㊁二氯甲烷㊁正己烷㊁乙醇㊁四氢呋喃(色谱纯,Tedia 公司);2,6-二叔丁基对甲苯酚(BHT,纯度99.4%,Sigma-Aldrich 公司);KOH(纯度>80%,Sig-ma-Aldrich 公司);实验用水为Milli-Q 超纯水㊂全反式叶黄素标准品(纯度99.8%,ChromaDex 公司)㊂第43卷2015年3月 分析化学(FENXI HUAXUE) 研究简报Chinese Journal of Analytical Chemistry 第3期404~4082.2 全反式叶黄素标准溶液的配制准确称取5.0mg 全反式叶黄素标准品于100.0mL 容量瓶中,用含0.003%BHT 的乙醇溶解并定容㊂该溶液可在-40ħ下完好保存6个月㊂准确吸取叶黄素标准储备液用含0.003%BHT 乙醇配制成标准系列溶液Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ和Ⅴ㊂采用分光光度法[15]和高效液相色谱峰面积归一法校准标准系列溶液Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ的浓度分别为5.082,2.033,1.016,0.254和0.127mg /L㊂2.3 色谱条件液相色谱柱:YMC C30色谱柱(250mmˑ4.6mm,3.5μm,YMC 公司);柱温:25ħ;进样量:100μL;以甲醇(A)和甲基叔丁基醚(B)为流动相,梯度洗脱:0.0~14.0min,85%A,15%B;14.0~15.0min,90%A,10%B;15.0~18.0min,10%A,90%B;18.0~22min,85%A,15%B㊂流速1.0mL /min;检测波长:445nm,参考波长:550nm㊂2.4 样品前处理样品的前处理过程都要在避光或者在经对紫外光过滤的灯光下进行,以避免叶黄素发生异构化㊂称取粉末样品2g(精确到0.001g)或液态样品10g(精确到0.001g),置于50.0mL 离心管中,(粉末样品加入10mL 实验室用水,充分涡旋2min),加入四氢呋喃5mL,涡旋混匀,加入5%KOH 甲醇溶液10mL,漩涡振荡1min,于摇床上室温振荡反应30min,反应结束后加入含0.005%BHT 的石油醚-正己烷-二氯甲烷(2：2：1,V /V )提取液10mL,加盖漩涡混匀60s,6000r /min 离心10min,取上层有机相于玻璃试管中;再用10mL 提取液重复提取一次,合并有机相,有机相在35ħ下氮气吹干,用含0.003%BHT 的乙醇溶液完全溶解,并定容至5.0mL,用0.22μm 有机滤膜过滤,供HPLC 分析㊂3 结果与讨论3.1 方法定量原理叶黄素属于类胡萝卜素,其分子式为C 40H 56O 2,分子量为568.9,热处理时,全反式叶黄素异构化成为顺式叶黄素异构体,其中最常见的是13-顺式叶黄素㊁13＇-顺式叶黄素和9-顺式叶黄素㊁9＇-顺式叶黄素,叶黄素也易被氧化及光诱导异构化,因此,实验过程必须与氧气和白光隔绝,并且所有操作在 图1 叶黄素的构型异构体Fig.1 Structures of 5lutein stereoisomers 室温下进行,全反式叶黄素的结构如图1所示㊂由于叶黄素容易发生异构化,难以获得顺式叶黄素标准物质㊂有报道采用全反式叶黄素制备顺式叶黄素标准物质的方法,方法虽然可行,但是不适用于检测机构日常检测工作㊂顺式叶黄素与反式叶黄素在445nm 的吸光系数存在着差异,在定量顺式叶黄素异构体,以反式叶黄素为标准,使用修正系数0.7以修正顺式和反式异构体吸收峰和消光系数之间的差异,因此本实验通过在445nm 下得到的顺式叶黄素峰面积与全反式叶黄素标准品的峰面积相比,从而实现对全反式叶黄素的定量分析,也可以对4种顺式叶黄素和全反式叶黄素同时进行计算,最终计算总叶黄素含量㊂3.2 色谱条件的优化与叶黄素异构体的定性C 18色谱柱和C 30色谱柱都可以用来检测类胡萝卜素,但是C 18色谱一般用于分析类胡萝卜素的总量,而C 30色谱柱具有良好的峰形和较长的保留时间等优越的性能,通常用于类胡萝卜素的顺反异构体的分离㊂本研究参考了文献[16]的方法对全反式叶黄素进行异构化反应㊂将1mg 反式叶黄素用少量甲苯溶解后,加入2mg /L 碘-正己烷溶液,使碘的含量为叶黄素质量的2%,将混合液放在40W 日光灯下光照1h,然后用1mol /L 硫代硫酸钠溶液洗涤2次,除去多余的碘,有机相在30ħ下氮气吹干后,用504第3期陈万勤等:冷皂化-高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体含0.003%BHT 的乙醇溶液复溶,定容至10.0mL,得到顺式和反式叶黄素混合样品,用于叶黄素的定性分析㊂为了消除上一个色谱样品杂质对下一个色谱样品目标物的干扰,在目标物完全洗脱后,采用大比例的甲基叔丁基醚对色谱柱进行洗脱,保证可能存在杂质完全被洗脱出来后不干扰下一个样品的检测㊂在液相色谱系统中,对5种叶黄素异构体的紫外-可见光谱图进行全扫描,叶黄素5种异构体的表1 叶黄素5种异构体的紫外-可见光谱的吸收波长Table 1 UV-Vis absorption wavelength of the 5lutein stereoisomers 异构体Stereoisomer 吸收波长Absorption wavelength (nm)*13-顺式叶黄素13-cis lutein 330,438,46313＇-顺式叶黄素13＇-cis lutein 331,439,464全反式叶黄素All-trans lutein 332,444,4729-顺式叶黄素9-cis lutein 331,439,4679＇-顺式叶黄素9＇-cis lutein 328,439,468*:采用液相色谱法(以甲基叔丁醚/甲醇为流动相)二极管阵列检测器进行检测㊂*:Data was determined in the HPLC eluent (methyl tert-butyl ether /methanol)employing the photodiode array detector.紫外-可见光谱的吸收波长见表1,9-顺式和13-顺式结构与全反式结构的叶黄素的最大吸收波长相差约4nm,这是由于顺式结构叶黄素发生了紫移现象,与文献[8]报道一致㊂通过光谱对照并参照采用YMC C30色谱柱实现叶黄素5种顺反异构体完全分离的文献[8,17,18],对叶黄素5种异构体进行定性分析㊂全反式叶黄素标准样品如图2a 所示,经过异构化处理的叶黄素标准样品中叶黄素5种顺反异构体如图2b 所示,各种叶黄素异构体的分离效果良好㊂由于叶黄素标准对照品在运输和转移过程中,不可避免会受光和热影响,全反式叶黄素会发生微量的异构化,因此采用面积归一化法得到全反式叶黄素的含量,从而消除了微量顺式叶黄素对计算结果的影响㊂图2 叶黄素5种顺反异构体的高效液相色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of 5lutein stereoisomers (a)全反式叶黄素标准品(All trans leutin standard);(b)异构化处理后的全反式叶黄素标准品(A after isomeriza-tion)㊂1.13＇-顺式叶黄素(13-cis lutein);2.13＇-顺式叶黄素(13-cis lutein);3.全反式叶黄素(All-trans lutein);4.9-顺式叶黄素(9-cis lutein);5.9＇-顺式叶黄素(9＇-cis lutein)㊂3.3 样品制备方法的优化叶黄素对光和热都很敏感,操作过程要避光且防止高温,因此实验在常温下对样品进行皂化,使用甲醇-KOH 溶液作为皂化液的皂化效果优于KOH 水溶液,减少了水溶液的稀释作用,同时甲醇作为有机溶剂加入,有利于溶解叶黄素㊂为了防止提取过程中发生乳化,促进叶黄素的溶解,提高皂化效率,在皂化过程加入四氢呋喃㊂使用石油醚㊁正己烷㊁二氯甲烷作为提取溶剂,发现3种试剂混合提取时效果较好;考察了不同比例的混合溶液的提取效率发现,当石油醚-正己烷-二氯甲烷(2：2：1,V /V )时,提取效率高,并且提取溶剂在提取液上层,有利于提取操作,减少了样品基质的干扰作用㊂不同萃取溶剂的萃取效果见表2㊂本研究采用石油醚-正己烷-二氯甲烷(2：2：1,V /V )溶液作为提取液㊂3.4 线性范围、检出限和定量限 对全反式叶黄素标准液进行检测,以仪器响应的峰面积A 对全反式叶黄素的质量浓度C 进行线性回归,在0.127~5.082mg /L 范围内的线性关系良好,回归方程为A =1368.4C -9.7,相关系数(R 2)为604 分析化学第43卷表2 不同比例提取溶剂对全反式叶黄素提取回收率的影响(n =3)Table 2 Influence of solvent compositions on the recovery of all-trans lutein (n =3)石油醚/正己烷/二氯甲烷Petroleum ether /n-hexane /dichlormethane(V /V )添加量Spiked (μg /g)测得量Found (μg /g)回收率Recovery (%)1：0：00.5000.42184.20：1：00.5000.40581.00：0：10.5000.48797.41：1：10.5000.43887.62：1：10.5000.46893.61：2：10.5000.45591.01：1：20.5000.48897.62：2：10.5000.49799.42：1：20.5000.49398.61：2：20.5000.49999.80.9999㊂在空白样品中添加叶黄素标准品,以S /N =3确定方法的检出限,以S /N =10确定方法的定量限,得到叶黄素的检出限为0.010μg /g,定量限为0.030μg /g㊂3.5 回收率和精密度对不含叶黄素乳粉样品进行全反式叶黄素回收率实验,添加水平分别为0.200,0.500和1.000μg /g,采用优化后的前处理方法对样品进行处理,每个添加水平重复6次,平均回收率分别为97.5%,102.2%和96.7%,RSD 分别为5.4%,4.3%和4.1%㊂3.6 实际样品测定采用本方法对5批次标识含有叶黄素的乳粉进行检测,结果见表3㊂如1号样品的一个平行样品质量m 为1.661g,样品处理后定容体积V 为5.0mL,测得13-顺式㊁13＇-顺式㊁9-顺式㊁9＇-顺式和全反式叶黄素的峰面积,分别代入回归方程A =1368.4C-9.7,得到5种叶黄素异构体的浓度为C 13,C 13＇,C 9＇C 9＇和C trans ,将上述计算所得浓度代入以下公式计算:C Total=C trans +C 13+C 13＇+C 9+C 9＇0. 7ˑV m (1)式中,C Total 为产品中总叶黄素浓度(μg /g),0.7为采用全反式叶黄素校正顺式叶黄素时吸光系数修正值,表3 乳制品中叶黄素的含量(n =3)Table 3 Contents of all-trans lutein in dairy products (n =3)序号No.叶黄素Lutein (μg /g)13-顺式13-cis 13＇-顺式13＇-cis 9-顺式9-cis 9＇-顺式9＇-cis 全反式All-trans 总量Total 10.2870.2480.1700.193 1.868 2.76520.2680.1830.3100.268 1.806 2.83430.3010.2020.1230.127 1.555 2.30940.3150.212-- 1.828 2.35550.1940.124-- 1.362 1.680m 为样品质量,V 为样品定容体积㊂4 结 论建立了乳制品中叶黄素5种顺反异构体的高效液相色谱法㊂采用冷皂化前处理,保证样品在皂化过程中叶黄素能保持原有的构型,使用YMC C30色谱柱对叶黄素5种顺反异构体进行了有效分离,4种顺式异构体依据反式叶黄素标准物质进行准确定量分析㊂方法简单快速,准确度和精密度高,适用于乳制品中叶黄素5种顺反异构体的定量检测㊂References 1 Rao A V,Rao L G.Pharmacol.Res.,2007,55:207-2162 Druesne-Pecollo N,Latino-Martel P,Norat T,Barrandon E,Bertrais S,Galan P,Hercberg S.Int.J.Cancer ,2010,127(1):172-1843 Beatty S,Boulton M,Henson D,Kob H H,Murray I J.Br.J.Ophthalmol.,1999,83:867-8774 Berendschot T T,Goldbohm R A,Klöpping W A,van de-Kraats J,van Norel-J,van Norren-D.Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,2000,41(11):3322-33265 Ministry of Health 2007No.8Bulletin of the Ministry of Health of The People＇s Republic of /busi-ness /htmlfiles /mohwsjdj /pggtg /200804/17170.htm 中华人民共和国卫生部公告2007年第8号公告6 Bohm V,Puspitasari-Nienaber N L,Ferruzzi M G,Schwartz S J.J.Agric.Food Chem.,2002,50(1):221-2267 Khachik F,Bernstein P S,Garland D L.Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,1997,38(9):1802-1811704第3期陈万勤等:冷皂化-高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体804分析化学第43卷8 Aman R,Biehl J,Carle R,Conrad J,Beifuss U,Schieber A.Food Chem.,2005,92:753-7639 WANG Li-Na,HUANG Jun-Rong,ZHANG Li,FENG Feng,LING Yun,CHU Xiao-Gang,LI Hong-Liang.ChineseJournal of Chromatography,2013,31:1228-1231王丽娜,黄峻榕,张立,冯峰,凌云,储晓刚,李宏梁.色谱,2013,31(12):1228-123110 Hsu B Y,Pu Y S,Stephen Inbaraj B,Chen B H.J.Chromatogr.B,2012,899:36-4511 Dachtler M,Glaser T,Kohler K,Albert K.Anal.Chem.,2001,73:667-67412 Elena M O,Dámaso H M.Food Chem.,2012,135(3):1344-135213 Marx M,Stuparic M,Schieber A,Carle R.Food Chem.,2003,83:609-61714 Castenmiller J J M,West C E.Annu.Rev.Nutr.,1998,18:19-3815 Craft N E.J.Agric.Food Chem.,1992,40:431-43416 Emenhiser C,Englert G,Sander L C,Ludwig B,Schwartz S J.J.Chromatogr.A,1996,719:333-34317 Emenhiser C,SanderL C,Schwartz S J.J.Chromatogr.A,1995,707(2):205-21618 Hadden W L,Watkins R H,Levy L W,Regalado E,Rivadeneira D M,van Breemen R B,Schwartz S J.J.Agric.FoodChem.,1999,47:4189-4194Cold Saponification Method for Determination of5LuteinStereoisomers in Dairy Products byHigh Performance Liquid ChromatographyCHEN Wan-Qin,LIU Zhu,ZHENG Guo-Gang*,MAO Pei-Qing,ZHU Bing-Qi,DING Yu-Qi,ZHOU Sai-Jing(Zhejiang Institute for Food and Drug Control,Hangzhou310004,China)Abstract A cold saponification method for determination of5lutein stereoisomers in dairy products by high performance liquid chromatography(HPLC)was developed.Samples were cold-saponified at room temperature and extracted by n-hexane/petroleum/dichloromethane(2：2：1,V/V/V).Then5lutein stereoisomers were separated on a YMC C30column with gradient elution using methanol/methyl tert-butyl ether as the mobile phase,and data were acquired by a photodiode array detector at wavelength of445nm. The calibration curve was linear in the range of0.127-5.082mg/L with correlation coefficient of0.9999, and the recoveries were from96.7%to102.2%with the RSDs in the range of4.1%-5.4%(n=6).The limit of detection was0.010μg/g(S/N=3),and the limit of quantification was0.030μg/g(S/N=10). By presenting results of good accuracy,precision and sensitivity,this method validates its suitability for routine analysis of5lutein stereoisomers in dairy products.Keywords High performance liquid chromatography;Lutein;Stereoisomers;Dairy products(Received20October2014;accepted17December2014)冷皂化-高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体作者：陈万勤， 刘柱， 郑国钢， 茅佩卿， 朱炳祺， 丁宇琦， 周赛静， CHEN Wan-Qin，LIU Zhu， ZHENG Guo-Gang， MAO Pei-Qing， ZHU Bing-Qi， DING Yu-Qi， ZHOUSai-Jing作者单位：浙江省食品药品检验研究院,杭州,310004刊名：分析化学英文刊名：Chinese Journal of Analytical Chemistry年，卷(期)：2015(3)参考文献(18条)1.Rao A V;Rao L G查看详情 20072.Druesne-Pecollo N;Latino-Martel P;Norat T;Barrandon E,Bertrais S,Galan P,Hercberg S查看详情2010(1)3.Beatty S;Boulton M;Henson D;Kob H H,Murray I J查看详情 19994.Berendschot T T;Goldbohm R A;Kl?pping W A;van de-Kraats J,van Norel-J,van Norren-D查看详情2000(11)5.中华人民共和国卫生部公告2007年第8号公告6.Bohm V;Puspitasari-Nienaber N L;Ferruzzi M G;Schwartz S J查看详情 2002(1)7.Khachik F;Bernstein P S;Garland D L查看详情 1997(9)8.Aman R;Biehl J;Carle R;Conrad J,Beifuss U,Schieber A查看详情 20059.王丽娜,黄峻榕,张立,冯峰,凌云,储晓刚,李宏梁超高效液相色谱法测定婴幼儿配方奶粉中的叶黄素[期刊论文]-色谱 2013(12)10.Hsu B Y;Pu Y S;Stephen Inbaraj B;Chen B H查看详情 201211.Dachtler M;Glaser T;Kohler K;Albert K查看详情 200112.Elena M O;Dámaso H M查看详情 2012(3)13.Marx M;Stuparic M;Schieber A;Carle R查看详情 200314.Castenmiller J J M;West C E查看详情 199815.Craft N E查看详情 199216.Emenhiser C;Englert G;Sander L C;Ludwig B,Schwartz S J查看详情 199617.Emenhiser C;SanderL C;Schwartz S J查看详情 1995(2)18.Hadden W L;Watkins R H;Levy L W;Regalado E,Rivadeneira D M,van Breemen R B,Schwartz S J查看详情 1999引用本文格式：陈万勤.刘柱.郑国钢.茅佩卿.朱炳祺.丁宇琦.周赛静.CHEN Wan-Qin.LIU Zhu.ZHENG Guo-Gang .MAO Pei-Qing.ZHU Bing-Qi.DING Yu-Qi.ZHOU Sai-Jing冷皂化-高效液相色谱法测定乳制品中叶黄素的5种顺反式异构体[期刊论文]-分析化学 2015(3)。
