真菌临床检验技术

临床微生物实验室真菌检测能力建设基本要求【专家共识】近年来侵袭性真菌感染呈持续增多趋势，准确、早期诊断是治疗疾病的关键。

然而，目前我国临床实验室真菌检测能力离临床诊治需求尚有较大差距，亟待改进。

国家卫生计生委办公厅于2016年底发布了《关于提高二级以上综合医院细菌真菌感染诊疗能力的通知》（国卫办医函[2016]1281号），要求在2020年以前加强临床细菌真菌感染诊疗体系的建设，促进抗菌药物的合理应用，维护人民群众健康。

本共识的制定旨在建立临床微生物实验室真菌检测能力基本要求，推动真菌检测技术的普及和人员能力的提升，从而提高综合医院真菌感染诊疗能力。

一、术语和定义（一）酵母菌单细胞真菌呈圆形或卵圆形，以出芽方式繁殖，称为酵母菌（yeast）。

临床致病的酵母菌主要包括念珠菌、隐球菌、毛孢子菌等。

（二）丝状真菌多细胞真菌有菌丝和孢子，菌丝延长分枝，交织成团，称为丝状真菌（filamentous fungi）。

又称霉菌（mold）。

临床重要的丝状真菌包括曲霉菌、毛霉菌、镰刀菌等。

（三）双相型真菌有些真菌可因环境条件（如营养、温度、氧气等）改变，由一种形态转变为另一种形态，称为双相型真菌（dimorphic fungi），如球孢子菌、组织胞浆菌、芽生菌、孢子丝菌、马尔尼菲篮状菌等。

这些真菌在体内或在含动物蛋白的培养基上，37 ℃培养时呈酵母相；而在普通培养基，25 ℃培养时呈霉菌相。

二、环境和设施要求真菌实验室环境和设施的设计应确保实验的质量和生物安全。

（一）环境要求真菌实验室应与细菌、病毒等实验室区分，以防发生交叉污染。

其面积以满足工作和安全要求为宜，合理布局。

在建设实验室或开展实验活动之前，应进行生物危害评估。

（二）基本设施设置防飞虫纱窗和门禁，有充足的照明、应急灯、通风、供水、供电、紧急疏散标识及信息系统，工作区设有洗手池、应急淋浴和洗眼装置；门外有生物安全级别标识[1]。

配置生物安全柜和不同温度培养箱（至少包括25~30 ℃以及35~37 ℃）。

真菌是一种广泛存在于自然界中的生物，也是一类常见的病原体。

在研究真菌时，鉴定其特征和分类是非常重要的步骤。

对真菌的鉴定需要注意其不同的形态、生长环境和遗传特征等多方面的因素，因此准确地识别真菌是一个相对困难的任务。

本文将讨论目前常用的真菌鉴定方法，包括形态学鉴定、遗传学鉴定和分子生物学技术。

1.形态学鉴定在真菌初步分类时，形态学鉴定是基本的方法。

这一方法通常会涉及到真菌菌丝体和子实体的形态特征。

菌丝体通常呈细丝状或短棒状，并且有时会形成分支或团块。

对于子实体，其外观（包括色彩、形状、质地和大小）以及内部的菌柄、孢子和异型等部分的特征都是鉴定的关键要素。

除了以上主要的形态学鉴定方法之外，还可以通过对真菌产生的代谢产物进行鉴定。

有些真菌会产生一些特殊的化合物，如次生代谢物等，这些代谢产物对真菌鉴定也有一定的帮助。

例如，人们可以通过对真菌产生的次生代谢物进行分析来判断其属于哪一品种或属。

2.遗传学鉴定随着技术的进步，越来越多的人选择了通过遗传学鉴定真菌。

这一方法建立在基因序列比对的基础上，主要利用真菌DNA序列的不同构成来对其进行分类。

在这一技术中，人们可以对真菌线粒体DNA序列、大肠杆菌RNA多序列比较和嵌合子单链多态性等进行分析。

遗传鉴定提供了一种非常准确的真菌鉴定方法，由于其几乎可以排除因为环境影响而导致的误判。

3.分子生物学技术在分子生物学技术中，PCR（聚合酶链式反应）和DNA杂交技术是最广泛应用的技术之一。

通过PCR技术，可以从真菌样品中扩增出自RNA的DNA片段（例如其特征序列），以此来进行鉴定。

DNA杂交技术则是基于双链碱基对形成的互补性，将RNA或DNA探针与指定标记DNA 杂交，从而实现对真菌物种的准确识别。

这些技术未来将会得到更广泛的应用和发展。

真菌的鉴定是一个相对复杂的过程，需要经验丰富、技术优秀的人员协助完成，同时多种技术的结合也是一个比较可行的解决方案。

随着科学技术的进步，我们可以更加准确地对真菌进行鉴定，从而更好地了解和利用这些生物的各个方面。

临床微生物检验技术学习指导
1.掌握临床微生物专业的基础理论，包括细菌、真菌、病毒等微生物的形态与结构、生理特性、遗传与变异、感染与免疫。

熟悉微生物感染的防治原则、分类与命名等基本理论。

2.掌握微生物专业相关的仪器分析、免疫学、质量管理、医学统计学等专业技术知识。

（二)相关专业知识
1.熟悉感染性疾病的相关临床知识。

2.熟悉临床药理学的相关知识。

3.了解与本专业密切相关的专业知识如细胞生物学。

二、学科新进展医学全在线搜集整,理
1.熟悉新发现微生物及其所致感染性疾病的主要特点，如严重急性呼吸综合征（SARS)相关冠状病毒、禽流感病毒和猪链球菌等。

2.了解临床微生物检验的新方法和新技术，如蛋白质或核酸的检测芯片等；及时掌握美国CLSI/NCCLS颁布的体外药物敏感试验指南。

3.熟悉新发现的细菌耐药机制及耐药菌检测方法的新进展。

4.了解微生物分类与命名的新进展。

临床微生物学检验引言临床微生物学检验是一种通过检测和分析患者体内微生物的存在和活动水平来帮助诊断和治疗感染性疾病的方法。

微生物学检验可以确定感染的原因和类型，并确定适当的抗生素治疗方案。

本文将介绍临床微生物学检验的概念、常见的检验方法和其在临床实践中的应用。

临床微生物学检验的概念临床微生物学检验是通过收集患者样本（如血液、尿液、血液培养物等）并对其中的微生物进行培养、分离和鉴定来确定感染病原体的方法。

它涉及一系列实验室操作和技术，包括细菌培养、抗生素敏感性测试、鉴定和分子生物学方法等。

这些方法可以帮助确认感染病原体的存在、确定其感染类型（细菌、真菌、病毒等）以及选择适宜的治疗药物。

临床微生物学检验的常见方法细菌培养细菌培养是一种常见的微生物学检验方法，它涉及将患者样本置于培养基中以促进微生物的生长。

不同类型的培养基可以支持不同类型的微生物生长，如常见的血液琼脂培养基可用于细菌培养。

细菌培养的时间可以从几小时到几天不等，具体取决于患者样本中微生物的增殖速度和种类。

抗生素敏感性测试抗生素敏感性测试是一种用于确定感染病原体对不同抗生素的敏感性和抵抗性的方法。

常见的抗生素敏感性测试方法包括纸片扩散法和微量稀释法。

这些测试可以帮助医生选择最适合的抗生素治疗方案，以避免抗生素的滥用和抵抗性的产生。

分子生物学方法分子生物学方法在临床微生物学检验中也扮演着重要的角色。

这些方法可以通过检测微生物的核酸（如DNA或RNA）来快速鉴定微生物的存在和类型。

其中常用的方法包括PCR （聚合酶链反应）和实时荧光定量PCR。

分子生物学方法具有高度的特异性和敏感性，可以快速准确地检测微生物。

临床微生物学检验的应用临床微生物学检验在临床实践中具有广泛的应用。

它可以帮助确定感染的病原体，指导治疗方案的制定和调整，并监测治疗的疗效。

以下是临床微生物学检验在不同感染疾病中的应用示例：细菌感染在细菌感染的诊断和治疗中，临床微生物学检验可以帮助确定感染的菌种、菌株的数量和敏感性，从而选择适当的抗生素治疗方案。

临床医学检验知识速记--（真菌）微生物学真菌(fungus)是一类具有典型细胞核，有核膜和核仁，胞浆内有完整的细胞器，无根、茎、叶，不含叶绿素，无光合色素，细胞壁含几丁质和纤维素的，单细胞或多细胞异养真核细胞型微生物。

细胞壁：不含肽聚糖，含几丁质及纤维素临床分类(按致病部位)：浅部真菌、深部真菌形态学分类：单细胞真菌、多细胞真菌真菌的形态与结构在鉴定上起重要作用（一）形态与结构1、单细胞真菌：圆形或卵圆形，包括酵母型和类酵母型真菌。

酵母型真菌以芽生方式繁殖，芽生孢子成熟后脱落成独立个体，不产生菌丝，其菌落与细菌菌落相似。

类酵母型真菌也以芽生方式繁殖，菌落与酵母型真菌相似，但它产生的芽体不从母细胞上脱落，而是延伸入培养基内形成假菌丝。

对人致病的主要有新生隐球菌和白假丝酵母菌。

2、多细胞真菌：由菌丝和孢子两种基本结构组成（1）菌丝：在环境适宜情况下由孢子萌发长出芽管，逐渐延长呈丝状，称菌丝。

按照功能分为：①营养菌丝：伸入培养基；②气生菌丝：露出培养基向空气中生长；③生殖菌丝按照结构分为：①有隔菌丝：多数致病性真菌；②无隔菌丝。

菌丝的形态大小不一(螺旋状/球拍状/鹿角状)、菌丝间有无分隔、形状特征(绒毛状/絮状/粉末状) → 鉴别真菌（2）孢子：由生殖菌丝产生的一种繁殖体，是真菌的繁殖结构。

有有性孢子和无性孢子两类①有性孢子：同一菌体或不同菌体上的2个细胞融合经减数分裂形成。

包括：卵孢子、接合孢子、子囊孢子、担子孢子，多为非致病性真菌所产生。

②无性孢子：菌丝上的细胞分化或出芽生成，不经两性细胞的配合。

病原性真菌大多形成无性孢子。

可分为三种a. 分生孢子：又可分为大分生孢子（其大小、细胞数和颜色是鉴定的重要依据）、小分生孢子（真菌都能产生，诊断意义不大）b. 孢子囊孢子c. 叶状孢子：又可分为芽生孢子（一般芽生孢子生长到一定大小仍不与母体脱离，则形成假菌丝）、厚膜孢子（是真菌的一种休眠形态）、关节孢子真菌种类不同，孢子形状大小也不同→ 鉴别真菌3、二相性真菌：少数真菌在营养、温度、理化因素等不同环境条件下，可发生单细胞与多细胞两种形态的可逆转化，称为双向性真菌。

真菌的鉴定及药敏试验分析真菌对人类健康的危害包括由病原性真菌、条件致病真菌所致的深部真菌病和浅部真菌病；由气传真菌所致的变态反应真菌症即过敏；由污染真菌产毒所致的真菌中毒症。

随着医学的发展，特别是抗生素的广泛使用，大量治疗手段的开展，免疫障碍疾病的大量发生，使真菌感染的情况日益增加，医院感染中的真菌感染也不断增加，因而，掌握真菌检验的方法就成为检验工作中的一个重要组成部分。

1 材料与方法1.1 真菌来源收集临床送检标本所分离出的真菌120例，男性84例，女性36例，其中痰液96株，粪便11例，咽拭子12例、尿液5例、血液4例，分泌物3例。

1.2 采集及处理根据真菌侵犯组织和器官的不同而采集不同的标本，而采集最合适的标本是决定能否找到病原性真菌的关键，要尽量用消毒方法采集标本以免污染。

深部真菌病的标本如血液、脑脊液、脓液、尿、痰等应及时收集检查，一般不超过1～2h，以免变质污染，标本采取前，应忌用药。

为避免污染杂菌，在收集标本时，应严格无菌操作，必要时在培养基内加入抗生素类。

1.3 检验方法1.3.1 酵母样菌的检验直接涂片法各类标本，除脑脊液、尿、胸水、腹水等需离心沉淀后取沉淀物作涂片外，其他均可用生理盐水或10％～40％KOH作涂片后直接镜检或用革兰、墨汁、0.1％甲苯胺蓝染色后镜检。

分离酵母样菌所选用的培养基为沙保弱固体或液体培养基，在培养基中可加入各种抗生素抑制细菌的生长、有利于真菌生长含抑制剂的霉菌琼脂。

将备类标本直接接种上述培养基，除新型隐球菌需同时接种两支培养基；一支孵育于37℃，另一支孵育于22～28℃，其他酵母菌均孵育于22～28℃。

每日观察生长情况。

根据酵母菌在培养基上的菌落特征及在玉米粉吐温80培养基上生长物在显微镜下生长情况可作初步鉴定。

1.3.2 丝状真菌的检验某些丝状真菌如孢子丝菌或荚膜组织胞浆菌的直接涂片，必须染色后检查。

真菌的形态和结构通过染色更为清楚，不染色涂片不易保存，染色涂片可长期保存。

真菌感染的常规检验方法真菌的临床实验室检查一般包括标本采集、直接镜检、染色镜检、分离培养、生化反应及免疫学试验等。

以直接镜检和分离培养最重要。

1标本采集不同真菌感染应采用不同的临床标本。

浅部真菌感染可以采集毛发、皮屑、指(趾)甲、痂等，标本在分离前常先用75％的乙醇消毒。

深部真菌感染的检查可取痰、尿液、口腔或阴道分泌物、脑脊液、各种穿刺液和活检组织等。

采集标本时应注意无菌操作。

采集标本后应及时转运至实验室进行检查，一般不超过1～2h，以免标本变质污染。

标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。

2检查方法2.1 直接检查法直接镜检是最简单也是很有价值的实验室诊断方法。

其优点在于简便、快速，无菌部位的阳性结果可直接确定真菌感染。

但是，除了少数真菌外，多数不能确定其种类。

由于阳性率较低，阴性结果亦不能排除诊断，有时需反复检查或做其他方法检查以进一步确定。

直接镜检对于浅表和皮下真菌感染最有帮助。

2.1.1 不染色标本检查取皮屑、毛发、指(趾)甲屑等标本置于载玻片中央，滴加100～200g／L KOH溶液1～2滴，以盖玻片覆盖后在火焰上微微加热，使组织或角质溶解、透明后，先于低倍镜检查有无真菌菌丝或孢子，再以高倍镜检查其特征，可初步诊断真菌感染。

2.1.2 染色标本检查有些真菌如深部真菌需要染色后才能更清楚地观察，常用的染色方法如下。

(1)革兰染色法：多用于白假丝酵母菌、孢子丝菌和新近感染的组织胞浆菌等。

所有真菌均为革兰阳性。

(2)乳酸酚棉蓝染色法：取标本于载玻片上，滴加染液，加上盖玻片后于镜下观察，真菌被染成蓝色。

该法适用于各种真菌的直接检查，培养物涂片检查及小培养标本保存等。

(3)荧光染色法：用0.1％吖啶橙对标本涂片和组织切片进行染色，在荧光显微镜下观察，白假丝酵母菌、皮炎芽生菌、球孢子菌为黄绿色，新型隐球菌、鼻孢子菌为红色，组织胞浆菌为红黄色，曲霉菌为绿色。

2.2 分离培养法真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。

检验科常见病原体检测原理与方法一、引言病原体检测是临床检验科的重要工作之一，通过对患者体液、组织或分泌物中潜在的病原微生物进行检测，可以帮助医生确定疾病的诊断、预后以及治疗方案的选择。

本文将介绍常见的病原体检测原理与方法。

二、细菌检测原理与方法1. 培养法培养法是最常用的细菌检测方法之一。

基本原理是将样本接种到富含营养物的培养基上，利用细菌的生长及代谢特性，在培养条件下培养出细菌并进行鉴定。

常用的培养法有血培养法、尿培养法等。

2. PCR法PCR法是一种基于聚合酶链式反应（PCR）原理的细菌检测方法。

通过特异性引物，可以扩增靶标基因序列，进而检测细菌的存在。

PCR法具有高度敏感性和特异性的优势，可以快速准确地检测细菌。

3. 蛋白质组学分析蛋白质组学分析是一种通过检测样本中的蛋白质组成来鉴定细菌的方法。

通过质谱仪等设备，可以分析样本中的蛋白质质量和序列，进而确定细菌的种类。

三、病毒检测原理与方法1. 核酸检测法核酸检测法是目前最常用的病毒检测方法之一。

该方法通过提取样本中的核酸，利用PCR等技术检测病毒的核酸序列，进而确定病毒的存在。

2. 免疫学检测法免疫学检测法是基于免疫学原理来检测病毒的方法。

通过检测患者体液中的抗体或抗原，可以确定病毒的感染情况。

常用的免疫学检测法包括ELISA、免疫荧光等。

3. 电镜法电镜法是一种利用电子显微镜对病毒进行直接观察和检测的方法。

通过放大病毒颗粒的形态特征，可以确定病毒的存在。

四、寄生虫检测原理与方法1. 寄生虫卵检测法寄生虫卵检测法是最常用的寄生虫检测方法之一。

该方法通过对患者样本中的粪便、尿液等进行检测，寻找寄生虫卵的存在，以确定寄生虫感染的情况。

2. 血液学检测法血液学检测法是通过检测患者血液样本中的寄生虫的存在来确定感染情况。

常用的检测方法包括滴虫检测、钩虫检测等。

3. 分子生物学检测法分子生物学检测法是一种利用核酸检测寄生虫的存在的方法。

通过PCR等技术，可以检测患者样本中的寄生虫核酸序列，确定寄生虫感染情况。