真菌的常规检验法

一般生菌数检验方法
一般生菌数检验方法如下：
1.制备10倍品匀液。

按上一步操作程序，每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。

2.取样并制备平板。

同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内空白对照。

及时将15mL-20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃士1℃恒温水浴锅中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

3.待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃士1℃培养48h+2h。

如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按2.1条件进行培养。

4.平板上菌落计数可使用自动化菌落计数仪，也可用肉眼观察（必要时可用放大镜观察）记录培养基上菌落数量和相应的稀释倍数。

选取菌落数在30-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。

以上就是一般生菌数检验方法，希望对解决您的问题有所帮助。

检验真菌的方法
1. 直接镜检法：将短柄棉签蘸取患部分泌物、皮屑、毛发等样本，涂于玻璃片上，用40倍至100倍的显微镜下观察，检测真菌的形态和数量。

2. 细胞学检查法：可采用细胞学方法检查骨髓、淋巴结等组织样本中是否存在真菌，包括涂片法、细胞学初筛法、细胞学制片法等。

3. 培养法：将样本接种于含有丰富营养成分的培养基上，利用真菌的生长特点判定是否存在真菌的培养。

4. 核酸检测法：查找真菌的DNA或RNA序列，并使用PCR 技术的手段拓展浓度，最后用电泳技术侦察出真菌的情况。

5. 基于免疫学的检测：包括诸如ELISA和荧光法等方法，主要检测真菌产生的免疫球蛋白或抗原，以用于检测真菌是否存在。

真菌是一种广泛存在于自然界中的生物，也是一类常见的病原体。

在研究真菌时，鉴定其特征和分类是非常重要的步骤。

对真菌的鉴定需要注意其不同的形态、生长环境和遗传特征等多方面的因素，因此准确地识别真菌是一个相对困难的任务。

本文将讨论目前常用的真菌鉴定方法，包括形态学鉴定、遗传学鉴定和分子生物学技术。

1.形态学鉴定在真菌初步分类时，形态学鉴定是基本的方法。

这一方法通常会涉及到真菌菌丝体和子实体的形态特征。

菌丝体通常呈细丝状或短棒状，并且有时会形成分支或团块。

对于子实体，其外观（包括色彩、形状、质地和大小）以及内部的菌柄、孢子和异型等部分的特征都是鉴定的关键要素。

除了以上主要的形态学鉴定方法之外，还可以通过对真菌产生的代谢产物进行鉴定。

有些真菌会产生一些特殊的化合物，如次生代谢物等，这些代谢产物对真菌鉴定也有一定的帮助。

例如，人们可以通过对真菌产生的次生代谢物进行分析来判断其属于哪一品种或属。

2.遗传学鉴定随着技术的进步，越来越多的人选择了通过遗传学鉴定真菌。

这一方法建立在基因序列比对的基础上，主要利用真菌DNA序列的不同构成来对其进行分类。

在这一技术中，人们可以对真菌线粒体DNA序列、大肠杆菌RNA多序列比较和嵌合子单链多态性等进行分析。

遗传鉴定提供了一种非常准确的真菌鉴定方法，由于其几乎可以排除因为环境影响而导致的误判。

3.分子生物学技术在分子生物学技术中，PCR（聚合酶链式反应）和DNA杂交技术是最广泛应用的技术之一。

通过PCR技术，可以从真菌样品中扩增出自RNA的DNA片段（例如其特征序列），以此来进行鉴定。

DNA杂交技术则是基于双链碱基对形成的互补性，将RNA或DNA探针与指定标记DNA 杂交，从而实现对真菌物种的准确识别。

这些技术未来将会得到更广泛的应用和发展。

真菌的鉴定是一个相对复杂的过程，需要经验丰富、技术优秀的人员协助完成，同时多种技术的结合也是一个比较可行的解决方案。

随着科学技术的进步，我们可以更加准确地对真菌进行鉴定，从而更好地了解和利用这些生物的各个方面。

检测土壤真菌数量操作规程1. 引言土壤真菌数量的检测对于农业生产和环境保护具有重要意义。

本文档旨在提供一份操作规程，以帮助研究人员或实验室技术人员准确地检测土壤中的真菌数量。

2. 实验仪器和试剂准备2.1 实验仪器： - 显微镜 - 离心机 - 反应管或离心管 - 称量器 - 镊子或医用手套（用于样品处理）2.2 试剂： - 高温灭菌的蒸馏水 - 无菌培养基 - 过滤膜3. 样品采集3.1 样品选择： - 选择代表性的土壤样品，可以根据研究目的或采样位置进行选择。

- 避免采集过于湿润或干燥的土壤样品。

3.2 采样工具： - 使用无菌手套、镊子或其他无菌工具进行样品采集，避免外源性污染。

3.3 采样方法： - 在采样点附近挖取一块土壤，深度为10-20厘米。

- 将采样的土壤置于干燥的容器中，并尽快送入实验室进行处理。

4. 样品处理和离心4.1 样品干燥： - 将采集的土壤样品均匀分布在干燥的容器内，放置在通风处晾干。

- 避免土壤样品与其他异物接触，以防止污染。

4.2 样品研磨： - 将干燥的土壤样品研磨成粉末状，并过筛以去除较大的颗粒。

4.3 样品称量： - 取一定量的土壤样品，称量精确记录，并记录样品的湿重。

4.4 样品提取： - 使用高温灭菌的蒸馏水对称量好的土壤样品进行浸泡提取，保持一定时间（例如12小时）。

4.5 离心： - 将提取的土壤悬浊液进行离心，以分离土壤颗粒和真菌孢子。

5. 真菌数量检测5.1 过滤悬浊液： - 将悬浊液通过无菌的过滤膜过滤，以去除土壤颗粒。

5.2 培养基制备： - 准备无菌培养基，并按照制备说明进行培养基的配制。

5.3 填充培养基： - 将过滤后的悬浊液均匀地倒入培养基平板中。

5.4 培养： - 将培养基平板放入恒温培养箱中，在适当的温度下孵育一段时间（例如48小时至72小时）。

5.5 统计计数： - 借助显微镜观察并统计培养基平板上的真菌数量。

- 在视野内随机选择若干个区域，计数并记录每个区域中的真菌数量。

真菌感染的常规检验方法真菌的临床实验室检查一般包括标本采集、直接镜检、染色镜检、分离培养、生化反应及免疫学试验等。

以直接镜检和分离培养最重要。

1标本采集不同真菌感染应采用不同的临床标本。

浅部真菌感染可以采集毛发、皮屑、指(趾)甲、痂等，标本在分离前常先用75％的乙醇消毒。

深部真菌感染的检查可取痰、尿液、口腔或阴道分泌物、脑脊液、各种穿刺液和活检组织等。

采集标本时应注意无菌操作。

采集标本后应及时转运至实验室进行检查，一般不超过1～2h，以免标本变质污染。

标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。

2检查方法2.1 直接检查法直接镜检是最简单也是很有价值的实验室诊断方法。

其优点在于简便、快速，无菌部位的阳性结果可直接确定真菌感染。

但是，除了少数真菌外，多数不能确定其种类。

由于阳性率较低，阴性结果亦不能排除诊断，有时需反复检查或做其他方法检查以进一步确定。

直接镜检对于浅表和皮下真菌感染最有帮助。

2.1.1 不染色标本检查取皮屑、毛发、指(趾)甲屑等标本置于载玻片中央，滴加100～200g／L KOH溶液1～2滴，以盖玻片覆盖后在火焰上微微加热，使组织或角质溶解、透明后，先于低倍镜检查有无真菌菌丝或孢子，再以高倍镜检查其特征，可初步诊断真菌感染。

2.1.2 染色标本检查有些真菌如深部真菌需要染色后才能更清楚地观察，常用的染色方法如下。

(1)革兰染色法：多用于白假丝酵母菌、孢子丝菌和新近感染的组织胞浆菌等。

所有真菌均为革兰阳性。

(2)乳酸酚棉蓝染色法：取标本于载玻片上，滴加染液，加上盖玻片后于镜下观察，真菌被染成蓝色。

该法适用于各种真菌的直接检查，培养物涂片检查及小培养标本保存等。

(3)荧光染色法：用0.1％吖啶橙对标本涂片和组织切片进行染色，在荧光显微镜下观察，白假丝酵母菌、皮炎芽生菌、球孢子菌为黄绿色，新型隐球菌、鼻孢子菌为红色，组织胞浆菌为红黄色，曲霉菌为绿色。

2.2 分离培养法真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。

第二十八章真菌检验本章内容真菌的基本特性真菌的基本微生物检验方法病原性真菌一、真菌的基本特性真菌是真核细胞型微生物，属于真菌界。

具有典型细胞核，有完整细胞器，不含叶绿素；寄生或腐生方式生存，由单细胞或多细胞组成；细胞壁含几丁质和（或）纤维素；能进行有性生殖和（或）无性生殖。

分类绝大多数对人类有益，如食用真菌及能产生抗生素的真菌等。

能引起人类和动物疾病的真菌仅150余种。

分为黏菌、真菌两个门。

其中与医学有关的真菌主要属于接合菌亚门、子囊菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门，鞭毛菌门中仅腐霉属在医学上有重要性。

绝大部分致病性真菌属于半知菌亚门。

结构基本结构为菌丝和孢子。

菌丝：真菌在适宜环境中，由孢子生出芽管逐渐延长或呈丝状，称为菌丝。

菌丝继续生长并向两侧分支，交织成团，称为丝状体。

营养菌丝：伸入到培养基内的菌丝。

气中菌丝：露出培养基表面的（部分气中菌丝可产生有性或无性孢子的称为生殖菌丝）。

孢子有性孢子：同一个菌体或不同菌体上的两个细胞融合形成。

无性孢子：菌丝直接生成，并不发生细胞融合。

致病性真菌多为无性孢子。

真菌孢子与细菌芽孢区别区别要点真菌孢子细菌芽孢形态大小大小产生数目一条菌丝可产生多个一个细菌只形成一个形成部位细胞内、外均可形成只在细胞内形成热耐受性不强，60～70℃短时死亡强，煮沸短时间内不会死亡生物功能重要的繁殖方式非繁殖方式真菌与细菌区别特征真菌细菌结构核真核细胞（有核仁和核膜）原核细胞（无核仁和核膜）细胞浆有线粒体和内质网无线粒体和内质网,有中介体细胞膜含固醇缺少固醇（除支原体）细胞壁几丁质或葡聚糖为主肽聚糖为主孢子或芽孢有性和无性孢子，是繁殖方式芽孢，是一种生存方式双相性有（某些真菌）无代谢需碳有机物；无专性厌氧菌某些不需要碳有机物；某些为专性厌氧培养与繁殖气体环境：需要较高的湿度和氧气。

温度酸碱：22～28℃，某些深部病原性真菌在37℃生长良好，pH 5.0～6.0。

培养特点：最常用沙保弱培养基，生长缓慢。

真菌培养及鉴定方法有哪些真菌培养及鉴定方法有哪些真菌的营养要求不向。

在一般细菌培养基上均能生长。

真菌培养及鉴定有哪些的呢?本文是店铺整理真菌培养及鉴定的资料，仅供参考。

真菌培养及鉴定1.采集标本体表真菌的标本有毛发、皮屑、甲屑、痂等，标本在分离前常先用75%的乙醇消毒。

深部真菌的标本可根据情况取痰、尿液、粪便、脓液、口腔或阴-道分泌物、血液、脑脊液、各种穿刺液和活检组织，采集标本应注意无菌操作。

2.培养检查：可提高真菌检出率，并能确定菌种。

标本接种于葡萄糖蛋白胨琼脂培养基(Sabouraud agar)上，置室温或37℃培养1～3周。

必要时可行小培养协助鉴定。

菌种鉴定常根据菌落的形态及显微镜下形态判断。

对某些真菌，有时尚需配合其他鉴别培养基、生化反应、分子生物学方法确定。

真菌培养的方法与直接镜检法相比较而言，更能对大部分真菌感染的灰指甲作出准确的鉴定，也是诊断灰指甲的一个很重要的手段。

下面我们就从培养基的选择、培养时间、菌种鉴定三方面来了解一下灰指甲的真菌培养法。

1.培养基的选择通常培养真菌会同时选用两种培养基，如果单用一种培养基，则容易忽略其它种类的真菌诊断。

常见的两种培养基，一种为沙氏葡萄糖琼脂培养基中加抗菌剂，常为氯霉素和放线菌酮;另一种是沙氏葡萄糖琼脂培养基中仅加氯霉素，不加放线菌酮。

2.培养时间各种真菌的生长速度不同，所以报告的时间也不同。

一般皮肤癣菌生长较缓慢，在26℃-28℃的环境下需要培养2-4周才能发报告，但是，皮肤癣菌含盖的菌种较多也需要区别对待;酵母菌生长较快，通常2-3就可以发报告，如果为阴性则需要观察1周;霉菌生长也比较快，一般2-4天就可以发报告。

3.菌种鉴定(1)丝状真菌：包括皮肤癣菌和霉菌，根据菌落形成所需要的时间，在不同条件下生长的情况，菌落表面及背面的形态、色素，培养基中有无色素，培养物用乳酚棉蓝染色后镜检找特征性标志结构。

(2)酵母菌：分为形态学鉴定及生化试验。

微生物实验室真菌检查质量控制流程1.设立实验室标准操作程序（SOP）在实验室进行真菌检查前，首先需要制定标准操作程序。

SOP应该包括实验的目的、所需材料和试剂、操作步骤、质量控制要求、仪器设备的校准和维护等详细信息。

制定SOP有助于确保实验的规范化和一致性。

2.确认标准菌株和对照菌株在真菌检查中，确定一些标准菌株和对照菌株对于质量控制至关重要。

标准菌株通常用于检验实验室技术的准确性和可重复性，而对照菌株则用于验证其中一实验的可靠性。

标准菌株和对照菌株的选择应根据实验的具体目的和要求来确定。

3.样品采集和处理4.质量控制样品准备5.实验室设备的校准和维护实验仪器和设备的精确度和可靠性对实验结果的准确性具有重要影响。

实验室应定期对仪器设备进行校准和维护，并记录校准和维护的结果。

这样可以确保仪器设备的正常工作和准确性。

6.检测方法的验证实验室进行真菌检查时，应验证所使用的检测方法的准确性和可靠性。

方法的验证包括可重复性和恢复率等。

验证的结果应记录并与实验室要求进行比较。

7.质量控制数据分析质量控制实验的数据分析是质量控制的最后一步。

通过对数据的分析，可以评估实验的准确性和可靠性。

如果质控数据不符合预期的结果，应重新检查实验过程，找出问题所在，并采取措施进行纠正。

8.质量管理体系的建立和维护在真菌检查质量控制流程中，建立和维护一个完善的质量管理体系是非常必要的。

质量管理体系应包括实验室SOP的建立和执行、质量控制记录的管理、人员培训和技能认证等。

定期对质量管理体系进行审核和评估，以确保体系的有效性和持续改进。

以上是一个典型的真菌检查质量控制流程。

质量控制流程的目的是确保实验结果的准确性和可靠性，以提高实验室的技术水平和服务质量。

实验室应根据自身的具体情况和实验需求，制定适合的质量控制流程，并根据实际情况不断改进和完善。

常用的微生物检验方法微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义。

常见的检测方法有：生长量测定法、微生物计数法、生理指标法和商业化快速微生物检测等，大家一起学习一下这二十余种常用的检测方法的的原理，应用范围和优缺点。

一、生长量测定法1、体积测量法：又称测菌丝浓度法。

原理：通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。

菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。

这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

2、称干重法：原理：利用离心或过滤法测定。

一般干重为湿重的10-20%。

称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

3、比浊法：原理：微生物的生长引起培养物混浊度的增高。

通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。

该法主要用于发酵工业菌体生长监测。

4、菌丝长度测量法：方法：对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度。

二、微生物计数法1、血球计数板法:这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。

2、染色计数法：为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。

3、比例计数法：将已知颗粒(如霉菌孢子或红细胞)浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。

4、液体稀释法：对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN(most probably number)得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。

检验科中的微生物学检验方法微生物学是一门研究微生物种类、结构、属性、繁殖、传播、生理、生化、遗传、分子生物学以及微生物与其他生物和环境的相互关系的科学。

在医学检验中，微生物学检验方法是判断是否存在病原微生物感染、确定感染性疾病种类以及提供治疗方案重要依据之一。

本文将重点介绍检验科中的微生物学检验方法。

一、标本采集及送检微生物学检验的准确性与标本的采集过程息息相关。

标本的采集应遵循严格的操作规程，以保证标本的原始性、新鲜性和无污染。

常见的微生物学标本包括：血液、尿液、痰液、脑脊液、组织、分泌物等。

标本采集后，应迅速送到检验科，并严格按照要求填写送检单，注明标本的来源、采集日期、患者信息等。

送检单的填写要准确、清晰，以免给后续工作带来不必要的麻烦。

二、细菌学检验方法1. 细菌培养方法细菌培养是诊断细菌感染和鉴别不同细菌种类的重要手段。

常用的培养基有营养琼脂培养基、巴斯德培养基、大肠杆菌选择性培养基等。

培养条件包括温度、湿度和氧气浓度等要素的控制。

2. 细菌涂片染色细菌涂片染色是观察细菌形态、结构以及染色性质的常用方法。

常见的细菌涂片染色方法有革兰氏染色、抗酸染色、尼氏染色等。

3. 细菌鉴定方法细菌鉴定是根据其生理生化特性和形态特征，通过一系列实验，确定细菌的种类和属。

常用的细菌鉴定方法包括氧需求实验、生物化学试验、荧光抗体法等。

三、真菌学检验方法真菌感染在临床上常见，因此真菌学检验方法的正确运用具有重要意义。

1. 真菌直接涂片真菌直接涂片是一种快速简便的真菌检测方法，常用于皮肤、黏膜等较浅表部位的感染检测。

常见的涂片染色方法有10% KOH湿润涂片法、格拉姆涂片法。

2. 真菌培养方法真菌培养对于那些深部组织感染或真菌数量较少的病例具有较高的敏感性和特异性。

常用的培养基有马铃薯葡萄糖琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂加酸等。

3. 真菌分子生物学检验真菌分子生物学检验主要通过PCR、实时荧光定量PCR等技术，检测真菌DNA/RNA，实现对真菌的快速准确检测。

真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定规范操作1.目的建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。

2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。

3.实验原理（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。

4．产品性能指标4.1 灵敏度10pg/ml4.2 精密度批间CV≤10% 。

4.3 准确性回收率75-125%。

4.4 标准曲线相关系数r绝对值≥0.9805．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪，20~200µl加样器、100~1000µl加样器、旋涡混合器、定时器。

5.2实验耗材：200µl无热原吸头、1000µl无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。

5.3试剂盒组成：真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。

6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。

7．标本采集及保存7. 1检测样本：血液、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等。

7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。

常规病人早上用药治疗前采血/取样（血透患者透析前采血）。

7.3样本保存：样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-20℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。

8．操作程序8.1 打开MB-80微生物快速动态检测系统主机、电脑及恒温仪预热30min。

8.2 打开MB-80微生物快速动态检测系统软件，录入病人信息、样本种类及检测项目等信息后点击采集。

8.3 血液前处理过程，无菌操作，用专用无热原真空采血管（肝素类抗凝）抽取静脉血4ml轻轻混匀，按转速3000r/min进行离心1分钟，得到富含血小板血浆。