S0121 总抗氧化能力检测试剂盒_ABTS快速法_

抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法是通过对样品中的抗氧化物质含量和抗氧化活性进行定量分析，评估其对自由基的清除能力和抗氧化能力。

随着抗氧化研究的不断深入，测定方法也逐渐完善。

以下是对常见的抗氧化物活性测定方法的总结。

1. ORAC法（氧化应激反应活性测定法）：该方法通过测定样品清除自由基的能力来评估其抗氧化活性。

实验中，将样品与荧光试剂（如2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)）共同作用，观察其清除自由基的能力，并通过建立标准曲线计算样品的ORAC值。

2.DPPH法（1,1-二苯基-2-苦味基-苦味酸磷）：该方法是一种常用的快速测定抗氧化活性的方法。

实验中，将样品与DPPH稳定自由基共同作用，通过比色反应观察DPPH自由基被样品清除的程度，从而评估抗氧化活性。

3.ABTS法（2,2'-联氮双5-苯砜酸）：该方法通过ABTS离子自由基的生成和清除反应来测定样品的抗氧化活性。

实验中，ABTS与过氧化氢反应生成ABTS离子自由基，通过观察样品对其的清除能力来评估抗氧化活性。

4.FRAP法（亚铁离子还原能力）：该方法基于样品对人造抗坏血酸（Fe3+）的还原能力，通过测量还原后的Fe2+离子的生成量来评估抗氧化活性。

实验中，将样品与Fe3+离子反应生成Fe2+离子，通过比色反应来测定Fe2+的含量。

5. 碘标法（Iodine value）：该方法用于测定油脂、脂肪等样品的抗氧化活性。

实验中，将已知量的碘与样品中的不饱和化合物反应，在光反应下观察反应终点的颜色变化，并根据标准曲线计算样品的抗氧化活性。

6. 硝酸盐法（Nitrite method）：该方法用于测定样品中亚硝酸盐的含量，从而评估其抗氧化活性。

实验中，样品经过还原反应生成亚硝酸盐，然后与DANO（N-乙基-N-（2-苯基乙基）-对硝基苯胺）反应生成稳定的偶氮染料，通过比色测定反应终点的吸光度来计算样品中亚硝酸盐的含量。

总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)产品编号产品名称包装S0116 总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法) 100次产品简介：总抗氧化能力检测试剂盒(FRAP法)，即Total Antioxidant Capacity Assay Kit with FRAP method，简称T-AOC Assay Kit，是一种采用Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP)方法，可以对血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力进行检测的试剂盒。

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)主要包括羟基自由基、超氧自由基和过氧化氢。

在细胞或组织的正常生理代谢过程中会产生活性氧，同时一些环境因子例如紫外照射、γ射线照射、吸烟、环境污染等也可以诱导活性氧的产生。

活性氧产生后，可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤，诱发氧化应激(Oxidative stress)，继而导致各种肿瘤、动脉粥样硬化、风湿性关节炎、糖尿病、肝损伤、以及中枢神经系统疾病等。

机体中存在多种抗氧化物，包括抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶等，可以清除体内产生的各种活性氧，以阻止活性氧诱导的氧化应激(oxidative stress)的产生。

一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总的水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。

因此测定血浆、血清、尿液、唾液等各种体液，细胞或组织等裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的生物学意义。

植物或中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测可以用于检测各种溶液的抗氧化能力的强弱，可以用于筛选强抗氧化能力的药物。

FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tripyridyltriazine (Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。

抗氧化剂总状态测定试剂盒（ABTS法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清或血浆中总抗氧化能力。

1.1包装规格包装规格见表1。

表1 包装规格1.2 组成成分组成成分见表2。

表2 组成成分2. 性能指标2.1 外观试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂3为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标称量。

2.3 试剂空白吸光度A600nm下测定空白吸光度应≤ 1.0000。

2.4 准确度与已上市产品进行比对试验：在[0.10，2.50] mmol/L区间内，相关系数r≥0.975，在[0.10，1.00] mmol/L区间内测定的偏差应不超过±0.10mmol/L，在（1.00，2.50] mmol/L区间内测定的偏差应不超过±10%。

2.5 分析灵敏度样本浓度为2.3mmol/L时，其吸光度变化在0.1000～0.6000之间。

2.6 线性区间在[0.10，2.50] mmol/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[0.10，1.00]mmol/L 区间内测定的线性偏差应不超过±0.1mmol/L，在（1.00，2.50] mmol/L区间内测定的线性偏差应不超过±10%。

2.7 测量精密度2.7.1 重复性对高、低不同浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。

2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。

2.8 瓶间差试剂2、校准品、质控品的瓶间差应≤10%。

抗氧化物活性测定方法总结引言：抗氧化物活性测定在食品、医药、化妆品以及生命科学等领域具有重要应用。

目前，常用的抗氧化物活性测定方法主要包括化学法、生物法和物理法。

本文将对这几种方法进行总结。

一、化学法1.1.DPPH自由基法该方法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、通过DPPH自由基与抗氧化物发生反应，使DPPH自由基得以还原为无色溶液，测定溶液的吸光度来评估抗氧化活性。

1.2.ABTS自由基法该方法通过生成具有特定吸光度的ABTS自由基，评估抗氧化物对自由基的清除能力。

与DPPH自由基法相比，ABTS自由基法具有更高的灵敏度和稳定性。

1.3.羟自由基清除法该方法利用特定的化学反应，测定样品对羟自由基的清除能力，评估其抗氧化活性。

该方法适用于抗氧化物活性测定和体外抗氧化活性评价。

1.4.过氧化物清除法该方法测定样品对过氧化物的清除能力，通过测定生成的不稳定的自由基产物的分解速率，评估抗氧化活性。

该方法适用于测定生物样品的抗氧化活性。

二、生物法2.1.脂质过氧化抑制能力测定法该方法通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力，评估其抗氧化活性。

常用的指标包括丙二醛生成量、硫代巴比妥酸反应物（TBA）生成量等。

2.2.DNA损伤保护能力测定法该方法通过测定样品对DNA损伤的保护能力，评估其抗氧化活性。

常用的指标包括DNA链断裂率、碱基损伤率等。

2.3.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法该方法测定样品中SOD的活性，评估其清除超氧自由基的能力。

常用的指标包括抑制率、相对酶活等。

2.4.过氧化氢酶（CAT）活性测定法该方法测定样品中CAT的活性，评估其清除过氧化氢的能力。

常用的指标包括催化剂浓度、酶单位等。

三、物理法3.1.相对电子自旋共振法该方法通过测定样品中的自由基产物的电子自旋共振信号的强度，评估抗氧化物的活性。

常用的指标包括g值、线宽等。

3.2.高温氧化法该方法利用样品在高温条件下的氧化反应，评估其抗氧化活性。

用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、尿液、动植物组织、细胞等样本中总抗氧化能力。

检测范围及灵敏度检测范围：0.047-1.50 mmol/L灵敏度：0.047 mmol/L背景介绍机体存在两类抗氧化系统，一类是酶抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px）；另一类是非酶抗氧化系统，包括尿酸、维生素C、维生素E、谷胱甘肽、胆红素、α-硫辛酸、类胡萝卜素[1-3]。

抗氧化能力被认为是血液和体液中所有抗氧化剂的累积效应[3]。

检测原理ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS●+，在抗氧化物存在时ABTS●+的产生会被抑制，在414 nm测定ABTS●+的吸光度即可测定并计算出样本中的总抗氧化能力。

Trolox是一种维生素E的类似物，具有和维生素E相近的抗氧化能力，用作其他抗氧化物总抗氧化能力的参考。

例如，Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其他物质的总抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相应的倍数来表示。

本试剂盒测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。

提供试剂和物品注：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同批次试剂盒中的试剂不能混用。

Focus on your research Service for life science 耗材：枪头（1000 μL ，200 μL ，10 μL ）。

仪器：酶标仪（405-425 nm ）、微量移液器（1000 μL ，200 μL ，100 μL ，10 μL ）。

所需自备物品配制试剂之前，请穿戴好防护装备。

试剂盒中部分试剂含有危险性物质。

禁止食入，吸入，直接接触眼睛、皮肤和衣物。

使用完后的试剂瓶经彻底清洗后再处理。

安全提示试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl ）、PBS （0.01 M，pH 7.4）、80%乙醇。

实验关键点ABTS工作液配制完成后，室温避光保存，在30 min内使用完毕。

天然产物抗氧化活性的筛选方法及应用
一、筛选方法
1、DPPH自由基清除试验：DPPH自由基清除试验是用来检
测天然产物的抗氧化活性的一种常用方法，它可以测量天然产物抗氧化活性的强弱。

该方法的原理是利用天然产物中的抗氧化剂将DPPH自由基进行清除，从而检测天然产物的抗氧化
活性。

2、FRAP试验：FRAP试验也是一种检测天然产物抗氧化活性的常用方法，它可以测量天然产物抗氧化活性的强弱。

该方法的原理是利用天然产物中的抗氧化剂将Fe3+还原为Fe2+，从
而检测天然产物的抗氧化活性。

3、ABTS自由基清除试验：ABTS自由基清除试验也是一种
检测天然产物抗氧化活性的常用方法，它可以测量天然产物抗氧化活性的强弱。

该方法的原理是利用天然产物中的抗氧化剂将ABTS自由基进行清除，从而检测天然产物的抗氧化活性。

二、应用
1、食品抗氧化剂：天然产物的抗氧化活性可以用来制备食品
抗氧化剂，以延缓食品的氧化变质，延长食品的保质期。

2、医药抗氧化剂：天然产物的抗氧化活性可以用来制备医药
抗氧化剂，以防止药物氧化变质，延长药物的保质期。

3、保健品抗氧化剂：天然产物的抗氧化活性可以用来制备保
健品抗氧化剂，以防止保健品氧化变质，延长保健品的保质期。

总SOD活性检测试剂盒(WST法)产品编号产品名称包装S0102 总SOD活性检测试剂盒(WST法) 100次产品简介：¾碧云天的总SOD活性检测试剂盒(WST法)(Total Superoxide Dismutase Assay Kit with WST-1)是一种基于WST-1的显色反应，通过比色来检测细胞、组织或其它样品中SOD即超氧化物歧化酶活性的试剂盒。

¾超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢(H2O2)和氧气(O2)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。

¾目前有多种SOD活性测定法，其中NBT(氮蓝四唑)法由于使用方便而被广泛使用。

但NBT法产生的甲臜染料水溶性差，易和被还原的黄嘌呤氧化酶相互作用，抑制百分率达不到100%等，从而使检测的灵敏度和精确度受到影响；细胞色素C法也是一种常用来检测SOD活性的方法，但细胞色素C其氧化活性高，易受样品中的还原剂干扰，另外该方法需要连续测定吸光度值，对于SOD的检测灵敏度比较低，并且不太适合大批量样本的检测。

¾本试剂盒采用了目前测定SOD方法中最先进的WST-1法。

WST-1即2-(4-Iodophenyl)- 3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium, monosodium salt。

参考下图，WST-1可以和黄嘌呤氧化酶催化产生的超氧化物阴离子反应产生水溶性的甲臜染料(formazan dye)，该反应步骤可以被SOD所抑制。

通过对WST-1产物的比色分析即可计算SOD的酶活力。

基于黄嘌呤氧化酶藕联反应体系和WST-1的SOD酶活力检测原理图。

XO：xanthine oxidase。

¾WST-1本身吸光度很低，且反应产物是稳定的水溶性产物，提高了SOD检测的灵敏度和特异性，适合高通量筛选研究。

植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料ABTS 氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

适用于各种体液包括血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等各种体液的总抗氧化能力检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。

在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。

3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性是指物质对氧化过程的抑制作用，能够减缓或阻断自由基对细胞和组织的损害。

目前，常用的抗氧化活性测定方法主要包括DPPH 自由基清除法、ABTS自由基清除法和铁还原能力测定法。

以下将对这三种方法进行详细介绍。

1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-若氧基-苯基-π-苦味噁唑）自由基清除法是一种常用的抗氧化活性测定方法。

该方法是通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。

DPPH自由基是一种紫色稳定的自由基，在接触到氢供体（抗氧化剂）后，会发生颜色变化从紫色转变为黄色。

可以通过测定样品溶液的吸光度来评估其抗氧化能力。

吸光度的降低表明样品对DPPH自由基的清除能力较强。

2.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双（3-乙基苯并噻唑））自由基清除法也是一种常用的抗氧化活性测定方法。

ABTS自由基是一种无色可溶性自由基，其生成主要通过氧化剂与ABTS反应而产生。

测定方法是将ABTS与过氧化氢反应，生成蓝色自由基溶液，然后将样品加入到溶液中，通过测定吸光度的变化来评估样品的抗氧化活性。

吸光度的降低表明样品对ABTS自由基的清除能力较强。

3.铁还原能力测定法：铁还原能力测定法是一种评估抗氧化活性的常用方法，通过测定样品对Fe3+还原为Fe2+的能力来评估其抗氧化能力。

在这个方法中，还原剂（如抗氧化剂）会与Fe3+反应，生成Fe2+，并且Fe2+的浓度可以通过测量其吸光度来确定。

浓度越高，吸光度越高，表明样品的抗氧化能力越强。

这三种抗氧化活性测定方法各有其优势和适用范围。

DPPH自由基清除法适用于评估样品对自由基的清除能力，但其结果受其他化合物的影响较大；ABTS自由基清除法对于水溶性和脂溶性样品均适用，但其结果也受其他化合物的影响；铁还原能力测定法适用于样品中还原型物质的测定，可评估样品对金属离子的还原能力。

因此，在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法来评估样品的抗氧化活性。

氧化应激检测试剂盒使用说明氧化应激检测试剂盒北京华越洋生物超氧化物歧化酶测试盒(SOD)超氧化物歧化酶测试盒(SOD)碱性磷酸酶检测试剂盒谷胱甘肽一还原酶测试盒总巯基测试盒/总脂酶测试盒总抗氧化能力检测试剂盒（FRAP法）总抗氧化能力检测试剂盒（ABTS快速法）总抗氧化能力检测试剂盒（ABTS法）总抗氧化能力测试盒（比色法）总谷胱甘肽检测试剂盒总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒总SOD活性检测试剂盒（WST法）总SOD活性检测试剂盒（NBT法）脂质氧化（MDA）检测试剂盒脂褐质测试盒游离脂肪酸测试盒抑制与产生超氧阴离子自由基测试盒（比色法）乙酰胆碱转移酶测试盒乙酰胆碱酯酶测试盒一氧化氮检测试剂盒（硝酸还原酶法）一氧化氮检测试剂盒（化学法）一氧化氮合成酶测试盒胃蛋白酶测试盒维生素C测试盒微量丙二醛测试盒/脂质过氧化物测试盒唾液酸测试盒（带SA标准）糖化血清蛋白测试盒（果糖胺法）（带标准）胎盘碱性磷酸酶检测试剂盒酸性磷酸酶检测试剂盒神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒神经氨酸酶检测试剂盒乳酸脱氢酶测试盒乳酸测试盒（测血清、组织等）乳酸测试盒（测全血）醛缩酶测试盒羟脯氨酸测试盒（消化法）（测培养细胞、培养液）羟脯氨酸测试盒（碱水解法）（测动物血清、组织、尿液）葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒抗氟离子酸性磷酸酶检测试剂盒肌酸激酶测试剂盒活性氧检测试剂盒活性氧（羟自由基）测试盒（比色法）琥珀酸脱氢酶测试盒红细胞NADH高铁血红蛋白还原酶测试盒过氧化氢酶测试盒（可见光比色法）过氧化氢定量分析试剂盒（脂兼容性）过氧化氢定量分析试剂盒（水兼容性）过氧化氢测试盒谷胱甘肽还原酶检测试剂盒谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒谷氨酰胺测试盒肝/肌糖元测试盒钙调神经磷酸酶测试盒蛋白去除试剂S蛋白去除试剂M胆碱酯酶测试盒超氧化物试剂盒超微量ATP酶测试盒（可测总ATPase）超微量ATP酶测试盒（测Na+ K-ATPase）超微量ATP酶测试盒（测Ca2+ Mg2+ ATPase）超微量ATP酶测试盒（测Ca2+ ATPase）超微量ATP酶测试盒（Na+ K+、Ca2+ Mg2+ ATPase）丙二醛测试盒/脂质过氧化物测试盒ROS活性氧检测试剂盒NF-κB激活－核转运检测试剂盒H5N1神经氨酸酶抑制剂鉴定试剂盒GSH试剂盒（谷胱甘肽测试盒）（比色法）GSH—PX测试盒GSH—ST测试盒Catalase（抗氧化酶）GSH和GSSG试剂盒CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒（WST法）ATP酶测试盒（组织及细胞膜需高速离心）ATP酶测试盒（组织及细胞膜不需高速离心）ATP检测试剂盒。

用途本试剂盒适用于检测血清（浆）、尿液、动植物组织、细胞等样本中总抗氧化能力。

检测范围及灵敏度检测范围：0.047-1.50 mmol/L灵敏度：0.047 mmol/L背景介绍机体存在两类抗氧化系统，一类是酶抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px）；另一类是非酶抗氧化系统，包括尿酸、维生素C、维生素E、谷胱甘肽、胆红素、α-硫辛酸、类胡萝卜素[1-3]。

抗氧化能力被认为是血液和体液中所有抗氧化剂的累积效应[3]。

检测原理ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS●+，在抗氧化物存在时ABTS●+的产生会被抑制，在414 nm测定ABTS●+的吸光度即可测定并计算出样本中的总抗氧化能力。

Trolox是一种维生素E的类似物，具有和维生素E相近的抗氧化能力，用作其他抗氧化物总抗氧化能力的参考。

例如，Trolox的总抗氧化能力为1，相同浓度情况下，其他物质的总抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相应的倍数来表示。

本试剂盒测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。

提供试剂和物品注：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同批次试剂盒中的试剂不能混用。

Focus on your research Service for life science 耗材：枪头（1000 μL ，200 μL ，10 μL ）。

仪器：酶标仪（405-425 nm ）、微量移液器（1000 μL ，200 μL ，100 μL ，10 μL ）。

所需自备物品配制试剂之前，请穿戴好防护装备。

试剂盒中部分试剂含有危险性物质。

禁止食入，吸入，直接接触眼睛、皮肤和衣物。

使用完后的试剂瓶经彻底清洗后再处理。

安全提示试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl ）、PBS （0.01 M，pH 7.4）、80%乙醇。

实验关键点ABTS工作液配制完成后，室温避光保存，在30 min内使用完毕。

ABTS法抗氧化能力检测试剂配制方案汇总基于不同原理的各种体外抗氧化活性检测方法已广泛用于抗氧化剂的检测，这些方法虽然能够在不同的条件下反映抗氧化剂的多种功能特性，但也各有其局限性。

下面是ABTS法抗氧化法的一些基本原理：ABTS的英文全名为2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，中文名为2 ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐，CAS号为：30931-67-0，分子式：C18H24N6O6S4，分子量548.68。

ABTS与过硫酸钾反应生成稳定的蓝绿色阳离子自由基ABTS·+，向其中加入被测物质，如果该物质中存在抗氧化成分，则该物质会与ABTS·+发生反应而使反应体系褪色，然后在ABTS·+这种自由基的最大吸光波长下(一般选择734nm或405nm)检测吸光度的变化来反映物质的抗氧化能力。

根据实验的需求收集查阅的部分文献基本上得出三个比较常用的ABTS的配置方法以及所需要的浓度和测试仪器。

如下：1.ABTS自由基清除实验参照文献[1]方法。

用pH 7．4的PBS配制5 mmol·L_1的ABTS储液，与MnO2反应后用0．2 tan的PVDF膜过滤，再用PBS(pH 7．4)稀释到734nm处吸光度为0．70士0．02，--20℃保存备用。

在反应体系中，于10 m-L比色管中加入50vL不同浓度的样品或参比溶液(DMSO)，再加入3mL的ABTS反应溶液，振荡摇匀，于室温下避光静置6min，测定溶液在734nm处的吸光值，并扫描UV-Vis光谱。

ABTS自由基清除率：(J％)=(1一瓜他)×100％，其中As为样品管的吸光值；Ao为对照管的吸光值。

2.[2]ABTS·+ 法测定葡萄酒抗氧化活性的研究ABTS工作液的配制。

将5mL7mmol/L ABTS和88μL140mmol/L过硫酸钾溶液混合,在室温、避光条件下静置过夜,形成ABTS·+储备液,该储备液在室温、避光的条件下表现稳定[3],使用前用无水乙醇稀释成工作液,要求其在734nm波长下的吸光度为0.70 ±0.02。

总抗氧化能力总抗氧化能力（（T－AOC ）测定试剂盒 说明书修改日期说明书修改日期：：2015.11.06 Cat number ：KGT009 Store at 4 for for one year ℃ For Research Use Only一、测定意义机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系，该防御体系有酶促与非酶促两个体系，许多酶是以微量元素为活性中心，例如：超氧化物岐化酶（SOD ）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX ）、过氧化氢酶（CAT ）、谷胱甘肽S-转移酶（GST ）等，非酶促反应体系中主要为维生素、氨基酸和金属蛋白质。

例如：VE 、胡萝卜素、VC 、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、组氨酸、葡萄糖、铜兰蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等。

这个体系的防护氧化作用主要通过三条途径：（1）消除自由基和活性氧以免引发脂质过氧化：（2）分解过氧化物，阻断过氧化链；（3）除去起催化作用的金属离子。

防御体系各成分之间相互起到了协同作用，以及代偿作用与依赖作用。

二、测定原理机体中有许多抗氧化物质，能使+3Fe 还原成+2Fe ，后者可与菲啉类物质形成稳固的络合物，通过比色可测出其抗氧化能力的高低。

三、所需仪器设备721或722分光光度计、水浴箱。

四、试剂盒组份组份 KGT009（25 assays）保存条件 Buffer A 60.0 mL 4℃ 试剂 B 粉剂1支 RT 20×Buffer C 3.0 mL 4℃避光 Buffer C 稀释液30.0 mL 4℃ Buffer D 12.0 mL RT Buffer E 12.0 mLRT注意事项1． Buffer B ：试剂B 用时每支加双蒸水至120mL ，RT 保存。

2．1×Buffer C ：用前用Buffer C稀释液按1︰19稀释至1×Buffer C （现配现用）。

五、操作（一、）、血清血清血清（（浆）中总抗氧化能力的测定中总抗氧化能力的测定：（：（样本前处理见附录样本前处理见附录样本前处理见附录（（一）中的第一点中的第一点）） 1、操作表操作表：：对照管 测定管 Buffer A （mL ） 1.0 1.0 待测样本（mL ） a Buffer B （mL ） 2.0 2.0 1×Buffer C （mL ）0.50.5漩涡混匀器充分混匀，37℃水浴30分钟Buffer D （mL ） 0.10.1 待测样本（mL ）*a漩涡混匀器充分混匀，放置10分钟，蒸馏水调零，1cm 光径，520nm 处测各管吸光度。

怎么测量抗氧化能力的方法
测量抗氧化能力涉及许多不同的方法，以下是一些常用的方法：
1. 自由基清除能力测量：通过测量样品对自由基的清除能力来评估其抗氧化能力。

常用的自由基包括DPPH (2,2-二苯基-1-苦味肼)、ABTS (2,2'-联氮二（3-乙基苯并噻唑啉酸琥珀酸盐）二阳离子)和超氧阴离子自由基。

2. 过氧化氢清除能力测量：过氧化氢清除能力（或称过氧化氢酶样本）测量了样品对过氧化氢的清除能力，过氧化氢是由超氧阴离子自由基生成的。

3. 铁还原能力测量：铁还原能力指样品还原Fe3+离子为Fe2+离子的能力。

常用的铁还原能力测量方法包括FRAP (铁还原能力)和CUPRAC (铜还原能力)。

4. 水解抗氧化能力测量：通过测量样品对脂质氧化的抑制能力来评估其抗氧化能力。

常用的方法包括TBARS (酸性的硫代巴比妥酸反应物)、比色法和荧光法。

5. 抗氧化酶活性测量：通过测量样品中抗氧化酶（如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽-S-转移酶）的活性来评估其抗氧化能力。

需要注意的是，测量抗氧化能力的方法多种多样，选择适合的方法应根据研究目的和样品特性进行。

建议在进行实验之前进行充分的文献调研和试验验证，并在
专业人士的指导下进行实验操作。

总抗氧化能力(ABTS 法)试剂盒说明书微量法100T/96S注　意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

研究意义：测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。

在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理：ABTS 法是使用最广泛的间接检测方法，可用于亲水性和亲脂性物质抗氧化能力测定。

ABTS经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基ABTS+，能溶于水相或酸性乙醇介质中，在734nm 处有最大吸收。

被测物质加入ABTS+溶液后，所含抗氧化成分能与ABTS+发生反应而使反应体系褪色。

在734nm 检测吸光度的变化，并以Trolox 作为对照体系量化抗氧化物质的抗氧化能力。

自备实验用品：恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：提取液：液体120mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体24mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×2 瓶，4℃避光保存。

样品的制备：(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。

血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。

(2) 组织样品按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

(3) 细胞样品按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

总抗氧化能力（TAC）终点比色法定量检测试剂盒使用说明货号：BC130保存：保存在－20℃冰箱里，染色液A（Reagent B1）和氧化液（Reagent C），严格避免光照和室温空气中久置；有效保证3月。

产品内容：缓冲液（Reagent A）10ml染色液A（Reagent B1）1管染色液B（Reagent B2）1ml氧化液（Reagent C）500μL标准液（Reagent D）50μL产品说明：总抗氧化能力（TAC）终点比色法定量检测试剂是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料ABTS 氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。

通过过硫酸钾氧化2,2’-连氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）产生的ABTS自由基，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪（730nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。

适用于各种细胞、组织、血液、体液等样品的总抗氧化能力检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

用户自备：1. 1.5毫升离心管：用于标准样品配制的容器2.96孔板：用于比色的容器3.分光光度仪或酶标仪：用于比色分析实验步骤：一、标准液准备1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管2．分别加入20μL缓冲液（Reagent A）到2至5号管3．移取40μL标准液（Reagent D）到1号管，混匀4．小心移取20μL1号管的标准液（Reagent D）到2号管，混匀5．小心移取20μL2号管稀释的标准液（Reagent D）到3号管，混匀6．小心移取20μL3号管稀释的标准液（Reagent D）到4号管，混匀7．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表管号缓冲液（Reagent A）标准液（Reagent D）测定体系标准Trolox浓度1040μL25μmol/L220μL20μL1号管12.5μmol/L320μL20μL2号管 6.25μmol/L420μL20μL3号管 3.125μmol/L520μL00二、样品测读实验开始前，将－20冰箱里的试剂置于室温下融化，移取1ml染色液B（Reagent B2）到1管染色液A（Reagent B1）里，混匀，置于暗室里室温下孵育过夜（16小时）后，标记为染色工作液，避免光照。

abts抗氧化实验步骤ABTS抗氧化实验步骤引言：抗氧化实验是研究食物、药物或其他化合物抵抗氧化应激的能力的重要方法之一。

ABTS（2,2'-联氨基二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)）是一种常用的抗氧化实验试剂，通过测定其与自由基的反应来评估物质的抗氧化能力。

本文将介绍ABTS抗氧化实验的步骤。

一、实验前准备1. 准备所需试剂和仪器：ABTS、过氧化氢、乙酸乙酯、磷酸盐缓冲液、离心管、离心机、分光光度计等。

2. 预热分光光度计：将分光光度计设定在所需的波长（通常为734 nm），并预热至稳定状态。

二、制备ABTS溶液1. 称取适量ABTS粉末，并加入适量磷酸盐缓冲液，溶解后稀释至所需浓度（通常为7 mM）。

2. 加入相同体积的过氧化氢溶液（通常为 2.45 mM），混匀后静置室温下30分钟，使ABTS与过氧化氢反应生成自由基。

三、样品预处理1. 根据需要，将待测样品（食物、药物或其他化合物）制备成适当的浓度溶液。

2. 对样品进行必要的预处理，如过滤、离心等，以去除杂质。

四、测定抗氧化能力1. 取适量ABTS溶液，并加入等体积的样品溶液，混匀后静置室温下反应一段时间（通常为6分钟）。

2. 将反应液倒入离心管中，离心5分钟使样品沉淀。

3. 取上清液，用离心机离心5分钟，以去除残留的样品颗粒。

4. 用预热好的分光光度计测定上清液的吸光度（OD值）。

5. 测定空白对照组，即只加入样品溶液的ABTS溶液的吸光度。

6. 根据所测得的吸光度计算样品的抗氧化能力。

一般来说，吸光度越低，抗氧化能力越强。

五、数据分析1. 计算样品的抗氧化能力指数（TEAC值），通常使用标准曲线法或对照差法。

2. 根据所使用的方法，将样品的TEAC值转化为抗氧化能力指数单位，如mmol TE/100 g。

六、结果与讨论1. 根据实验结果，评估样品的抗氧化能力。

2. 结果的解释应结合样品的特性和实验条件，进行合理的讨论。

结论：ABTS抗氧化实验是一种常用的评估物质抗氧化能力的方法，通过测定样品与ABTS自由基的反应来评估其抗氧化活性。