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小麦叶片总抗氧化能力测定（F R A P法）一、实验原理
FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Ferric-tri-pyridyl-tria-zine(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ，随后在593nm测定蓝色的Fe2+-TPTZ即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行，可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM，因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显着干扰FRAP法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和TPTZ螯合的，样品本身含有的少量金属离子螯合剂通常也不会显着影响检测反应。
Antioxidant
Fe3+-TPTZ（橘黄色）——————> Fe2+-TPTZ (蓝色)
二、实验步骤
1.FRAP工作液配制：
0.3 M pH 3.6 醋酸缓冲液：0.364g无水醋酸钠+3.2mL冰乙酸定容至200mL，用1M HCl
调节pH至3.6；
10mmol/L TPTZ溶液25mL：0.078g TPTZ用40mM 盐酸溶液定容至25mL；
20mmol/L FeCl
溶液50mL：2.78g用RO水定容至50mL；
3
上述溶液以10:1:1的比例混合（现配现用）。
2.取叶片0.1g，加入2.5mL蒸馏水研磨稍沉淀后取1.5mL 12000g离心10min（4o C），取
上清液。
3.在反应管中加入100uL上清液，再加入2.4mL工作液，37o C条件下水浴10min，于593nm
处测定吸光度，
4.标准曲线绘制：以0.1-1.6mmol/L的FeSO
的标准液替代样品绘制标准曲线。
4
三、结果计算
以1.0mmol/L的FeSO
为标准，样品抗氧化活性以达到同样吸光度值为一个FRAP值，
4
计算结果。
[1]Benzie I F F, Strain J J. The Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) as a Measure of “Antioxidant Power”: The FRAP Assay[J]. Analytical Biochemistry, 1996, 239(1):70-6.
[2]Katarzyna Szafrańska, Rafa? Szewczyk, Krystyna Maria Janas. Involvement of melatonin applied to Vigna radiata, L. seeds in plant response to chilling stress[J]. Central European Journal of Biology, 2014, 9(11):1117-1126.
