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临床基因扩增实验室样本采集程序

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1目的
为保证实验真实、可信，给检验报告提供可靠的依据，使实验结果准确，制定本程序。

2 适用范围
适用于基因扩增实验室检验样品的采集及样本处理、样本的运输、样本的贮存、等工作。

3 职责
临床基因扩增检验实验室质量保证涉及到整个基因扩增检验的所有阶段，即测定分析前的标本采集处理、测定中的核酸提取、扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。

4标本的采集
4.1常用于基因扩增检测的临床标本包括EDTA或枸橼酸钠抗凝全血或骨髓、血清或血浆、痰、脑脊液、尿及分泌物等。

采血液等样本时，应使用一次性密闭容器，如真空采血管。

当使用非密闭采样系统时，如尿、分泌物和骨髓的采样，必须注意防止来自采样者的皮屑或分泌物的污染。

采样时必须戴一次性手套。

4.2玻璃器皿在使用前应高压处理，因为玻璃器皿常含有不易失活的RNA酶。

最好是热灭菌，250℃烘烤4小时以上可使RNA酶永久性失活。

4.3全血和骨髓标本必须进行抗凝处理。

EDTA和枸橼酸盐是首选的抗凝剂。

不能使用肝素抗凝，因为肝素是Taq酶的强抑制剂，而且在其后的核酸提取步骤中很难去除。

4.4临床用于RNA(如HCV RNA)扩增检测的血标本建议进行抗凝处理，并尽快(3小时以内)分离血浆，以避免RNA的降解。

如未作抗凝处理，则抽血后，必须在1小时内分离血清。

5标本的稳定化处理
5.1用于DNA扩增检测的标本，采集后一般不需要特殊的稳定化处理，但标本应及时送至实验室。

5.2由于RNA易受RNA酶的降解，因此用于RNA测定的标本有时必须进行稳定化处理，如流行病学调查的现场采样。

异硫氰酸胍盐(Guanidine thiocyanate,GITC)可使DNA酶和RNA酶立即失活，因此在采集标本时，可将标本材料如血清或血浆按1:4的比例加至含有5mol/L GITC的试管中，从而使血清(浆)中的RNA酶不可逆失活。

经上述稳定化处理后，标本一般不需要冷藏即可邮寄。

对于特定的检测项目，上述稳定化处理方法的效果究竟如何，要使用相应的逆转录PCR测定方法来评价。

6标本的运送
6.1标本采集后必须尽快送至实验室。

经过适当稳定化处理的标本可在常温下通过邮寄运送。

如用于DNA扩增检测的EDTA抗凝全血标本及用于RNA扩增检测的经GITC稳定化处理的标本。

通常在运送时，应采用不易破碎的容器装载标本。

用于RNA检测的标本，如果未经稳定化处理，则必须速冻后，放在干冰中运送。

7标本的贮存
临床体液标本如血清/血浆等可于-70℃下长时间贮存。

用于DNA测定的已纯化核酸样本可在10mmol/L
Tris-1 mmol/L EDTA缓冲液(pH 7.5-8.0)中4℃保存。

用于RNA测定的已纯化核酸样本应在缓冲液中-80℃或液氮中贮存。

用乙醇沉淀的核酸样本贮存在-20℃即可。

用GITC处理的RNA标本在室温可保存7天。

8标本的处理(核酸提取)
标本处理即核酸提取纯化是决定扩增检测成败的关键性步骤，在使用商品核酸提取试剂提取临床标本中的核酸模板前，应对其进行充分评价以验证其提取的有效性。

通常，核酸制备质量不高是由于抑制物去除不完全所致，抑制物可能来源于标本本身(如血红素及其前体或降解产物)或核酸提取过程中残留的有机溶剂(如酚、氯仿等)，这些物质对其后的Taq酶扩增反应步骤具有强烈的抑制作用，从而影响靶核酸的扩增测定。

当标本为痰时，则必须先进行液化处理，再提取核酸。

需注意的是，液化时不能加热，液化时间不能过长。

此外，当靶核酸为RNA时，逆转录PCR测定失败的常见原因是标本在运送前未经充分的稳定化处理及核酸提取试剂的RNA酶的污染。

对于前者，要核查测定分析前的步骤，如果发现有RNA降解的证据，实验室则应拒绝接受标本，要求重新采取标本，并对运送者给以详细的指导。

对于后者，建议使用高质量的商品核酸提取试剂。

9靶核酸的逆转录(RT)和扩增
9.1靶RNA的逆转录
cDNA合成为逆转录PCR中的第一个酶反应步骤，所产生的cDNA为靶RNA的反向互补链，为后面扩增的模板。

下述因素通常影响cDNA合成的效率：(1)逆转录效率的降低或完全缺乏。

其可能的原因有逆转录酶质量不高、试剂降解变质或加样错误等；(2)用于逆转录的标本中存在逆转录或Taq酶的抑制物(如酚、氯仿、血红素等)；
(3)RNA酶的存在导致RNA的降解。

9.2核酸的扩增
有多种因素可引起核酸扩增检测的假阳性或假阴性结果，如扩增靶核酸中抑制剂存在、Taq酶失活、退火温度不对、Mg++浓度不佳、患者标本或试剂受污染等。

扩增仪孔中热传导的均一性极为重要，必须定期对扩增仪的温度控制和加热模块中热传导的一致性进行检查，以避免假阴性结果。

10样本采集相关规定
按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》第九条的要求，采集病原微生物样本应当具备以下条件：
a）具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备；
b）具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员；
c）具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施；
d）具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段。

采集高致病性病原微生物样本的工作人员在采集过程中应当防止病原微生物扩散和感染，并对样本的来源、采集过程和方法等做详细记录。

11 相关文件
《工作环境控制程序》
《记录控制程序》
《灭菌过程控制程序》12相关记录
样本送检单
样本处理记录。

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临床基因扩增实验室正确的工作流程

临床基因扩增实验室正确的工作流程

临床基因扩增实验室正确的工作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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基因扩增检验标本的处理保存及核酸提取方法.

基因扩增检验标本的处理保存及核酸提取方法.


• 同上，重复洗涤一次 • 弃上清，沉淀即可用于DNA提取
• 5．体液 • 体液标本，包括胸水、腹水、脑 脊液、尿液等，可直接离心，取 沉淀物提取核酸。 • 血性胸腹水，可使用红细胞裂解 液处理：
• 加等体积红细胞裂解液，震荡混 匀，置5-10分钟
10000rpm，离心5分钟，弃上 清
可根据情况重复2-3次，沉淀物 用于DNA提取
具体方法：
• 用无菌平皿取患者肺深部咳出的痰液1-3ml， • 加入4倍体积4%NaOH，摇匀，室温下放置30 分钟左右液化 • 取1.5ml EP管，加0.5ml 液化痰液，再加0.5ml 4%NaOH室温放10分钟 •
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12000 rpm，离心15分钟 弃上清，加无菌生理盐水1 ml ，混匀， 12000rpm离心5分钟 弃上清，沉淀物用于 DNA提取
• 组织 • 新鲜组织最好保存于50%乙醇中， 具体方法：先用生理盐水将组织洗 一次，切成小块，加入适量生理盐 水，然后边摇边加入无水乙醇至终 浓度为50%，这样固定的组织标本 室温下可保存数日，4oC可保存6 年。
• 总而言之，标本的保存及适 当的预处理对核酸模板的成 功提取具有决定性作用。要 强调的是，所有用于上述处 理的容器如试管或离心管， 均应在使用前压灭菌。
• 实验中，如接触了“脏的”玻璃 器皿和其他物品以后，手套就可 能污染RNase，因此RNA提取 实验中，应勤换手套。
• RN A提取方法
• 下面以异硫氰酸胍结合氯仿-酚提 取法介绍RNA的提取。 • 异硫氰酸胍是一种强用力的蛋白质 变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致 细胞结构破碎，核蛋白由于其二级 结构的破坏消失而迅速与核酸分离。
• 棉拭子 • 用PCR方法检测性病病原体时（衣 原体、支原体、淋球菌、梅毒螺旋 体、人乳头状瘤病毒等），临床标 本一般为棉拭子。标本取材是关键， 衣原体等病原体感染上皮细胞，因 此取材一定要取到细胞。
临床基因扩增检验实验室临床标本接收及保存标准操作程序

临床基因扩增检验实验室临床标本接收及保存标准操作程序

临床基因扩增检验实验室临床标本接收及保存标准操作程
序
一、目的：
规范临床基因扩增检验实验室对临床标本的接受处理及保存，以确认标本送检的有效性。

二、适用范围：
临床基因扩增检验实验室收检的临床标本。

三、职责：
由临床基因扩增检验实验室专业技术人员制定程序文件，实验室负责人审核，科室主任批准实施。

四、程序：
1、核对标本的送检目的及标本是否符合送检目的要求。

2、标本收到后应立即处理，并按照样品编码规则进行编号。

3、标本保存：
1）DNA血清标本：
静脉血分离血清后放置-20℃保存，原抽血试管保留在
4℃冰箱7天，以便查对。

留取的血清一个月后放置-80℃
长期保存。

2）RNA血浆标本：
EDTA抗凝血分离血浆后血浆放置-80℃保存，原抽血试管放置4℃冰箱7天，以便查对。

3）痰标本：。

医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则

医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则

医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则一、实验室安全1.实验室必须符合相关的安全规范和操作规程，例如防火、防爆、防尘和环境污染控制。

2.所有实验室人员必须进行安全培训，并熟悉实验室的安全操作规程。

3.实验室设备和试剂必须定期检查和维护，确保其正常运行且不存在安全隐患。

二、样本接收与标本处理1.所有样本必须按照相关规定的方法和时间接收，并尽快进行处理。

2.接收样本时必须进行必要的标识和记录，并确保样本的完整性和唯一性。

3.样本处理必须按照相关的规范进行，包括离心、分装、保存和运输。

三、实验室质量控制1.实验室必须建立质量控制体系，确保实验的准确性和可靠性。

2.每次实验必须进行内部质控和外部质控样品的检测，并记录结果。

3.实验室必须参加相关质控活动，比如参加外部质量评估和互认活动。

4.实验室必须建立相关的质控指标和标准，确保实验的准确性和可靠性。

5.实验室必须建立完整的质量文件和记录，方便质量评审和内外审计。

四、实验操作规范1.实验室必须建立标准的实验操作规范，确保实验的准确性和可重复性。

2.每个实验人员必须按照规定的实验操作流程进行实验，并记录实验结果。

3.实验室必须建立实验数据的记录和存档机制，确保数据的完整性和可追溯性。

4.实验室必须定期对实验操作进行评估和培训，提高实验人员的技术水平和操作规程的遵守性。

五、实验室设备和试剂管理1.实验室设备必须定期检查和维护，确保其正常运行且符合质量要求。

2.实验室试剂必须按照相关规范和标准进行采购和存储。

3.实验室必须定期对试剂进行检查和过期处理，确保试剂的有效性和安全性。

4.实验室必须定期对试剂进行库存管理，确保试剂的供应和使用的连续性。

六、实验室环境和废物处理1.实验室必须保持干净、整洁和无杂乱物品的工作环境。

2.实验室必须建立废物处理制度，确保废物的分类、储存和处理符合相关规范和要求。

3.实验室必须建立应急预案，以应对可能发生的突发事件和意外事故。

七、数据管理和隐私保护1.实验室必须建立完善的数据管理系统，确保实验数据的安全和可靠性。