基因扩增实验室检测项目及意义.

一、前言自临床基因扩增实验室投入使用以来，我单位高度重视，严格按照相关法规和操作规程，积极开展临床基因扩增工作。

现将近期工作总结如下：二、实验室建设与运行情况1. 实验室建设临床基因扩增实验室由原胃镜室改建而成，投资160余万元，划分为试剂准备区、标本处理区、扩增区、产物分析区等4个主要核心区域。

实验室配备了PCR扩增仪、核酸提取仪、紫外线消毒车、生物安全柜、内排式压力蒸汽灭菌器等设备。

2. 实验室运行（1）人员培训：为确保实验室人员具备扎实的专业技能，我单位组织开展了多次培训，包括理论知识、实际操作、生物安全等内容，提高实验室人员综合素质。

（2）质量保证：实验室严格按照相关法规和操作规程，建立健全质量保证体系，确保检测结果的准确性和可靠性。

（3）设备维护：定期对实验室设备进行维护和保养，确保设备正常运行。

三、工作成果1. 独立开展核酸检测自5月7日起，临床基因扩增实验室已正式独立开展了全院核酸检测工作。

截至本月，共完成核酸检测样本X例，检测结果准确率达100%。

2. 优化检测流程通过不断优化检测流程，提高检测效率。

现将具体流程总结如下：（1）样本采集：严格按照操作规程采集样本，确保样本质量。

（2）样本处理：对采集到的样本进行编号、登记，并进行必要的预处理。

（3）PCR扩增：使用PCR扩增仪进行扩增，确保扩增效率。

（4）产物分析：对扩增产物进行检测，分析结果。

（5）出具报告：对检测结果进行审核、分析，出具检测报告。

3. 社会影响临床基因扩增实验室的建成和投入使用，提高了我院的医学检测水平，为新冠肺炎筛查和诊断提供了有力支持。

同时，也为周边乡镇居民提供了便捷的医疗服务，提升了社会满意度。

四、存在问题及改进措施1. 问题：实验室设备较为先进，但部分操作人员对设备熟悉度不高，影响检测效率。

改进措施：加强设备操作培训，提高人员操作技能。

2. 问题：检测样本量较大，导致部分检测项目存在排队现象。

改进措施：优化检测流程，提高检测效率，确保及时出具检测结果。

扩增目的基因实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是通过聚合酶链式反应（PCR）技术扩增特定的目的基因，以便后续的基因分析、克隆和表达等研究工作。

二、实验原理PCR 技术是一种在体外快速扩增特定 DNA 片段的方法。

其基本原理基于 DNA 半保留复制的机制，通过高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤的循环进行。

在高温下，双链 DNA 模板解链成为单链；在低温下，引物与单链模板结合；在适温下，DNA 聚合酶以引物为起始点，沿着模板链合成新的 DNA 链。

经过多次循环，目的基因得以大量扩增。

三、实验材料与设备1、材料模板 DNA：含有目的基因的基因组 DNA 或 cDNA 片段。

引物：根据目的基因的序列设计的一对特异性寡核苷酸引物。

dNTPs（脱氧核糖核苷三磷酸）：包括 dATP、dCTP、dGTP 和dTTP。

Taq DNA 聚合酶。

PCR 缓冲液。

无菌去离子水。

2、设备PCR 仪。

微量移液器。

离心管。

电泳仪。

琼脂糖凝胶。

四、实验步骤1、反应体系的配制在无菌的离心管中，依次加入以下成分：模板 DNA：＿____ng上游引物：＿____μM下游引物：＿____μMdNTPs：各_____mMTaq DNA 聚合酶：＿____U10×PCR 缓冲液：＿____μL无菌去离子水补足至总体积_____μL2、 PCR 反应条件设置预变性：95°C 5 分钟变性：95°C 30 秒退火：根据引物的退火温度，一般为 55 65°C 30 秒延伸：72°C 30 秒 1 分钟（根据目的基因的长度而定）循环次数：一般为 30 35 个循环终延伸：72°C 5 10 分钟3、 PCR 产物的检测配制 1 2%的琼脂糖凝胶。

取适量的 PCR 产物与上样缓冲液混合，点样于琼脂糖凝胶的加样孔中。

以适当的电压进行电泳，观察 PCR 产物的条带。

五、实验结果与分析1、电泳结果经过电泳，在凝胶成像系统中观察到了预期大小的条带，表明目的基因成功扩增。

基因扩增实验室检测项目及意义第一篇：基因扩增实验室检测项目及意义基因扩增实验室检测项目及意义核心提示:基因扩增实验室检测项目及意义项目临床意义标本种类EB病毒DNA定量检测（EB鼻咽癌早期筛查，恶性淋巴瘤传染性核细胞增多症血清，鼻咽拭子肺炎支原体DNA检测（MP）非典型肺炎全血，咽拭子，肺泡灌洗液肺炎衣原体DNA检测非典型肺炎全血，咽拭子，痰液流行性出血热DNA检测流行病学调查报告全血幽门螺旋体DNA检测（HP）慢性胃炎，胃溃疡，胃癌辅助治疗血清，胃液呼吸道合胞病毒DNA检测呼吸道疾病，肺炎全血咽拭子，肺泡灌洗液轮状病毒RNA检测腹泻粪便乙肝病毒DNA耐药检测乙肝患者，病毒携带者,手术前后常规体检血清结核杆菌DNA耐药检测TB 流行病学调查肌疗效观察，早期诊断全血，痰液，尿液，胸腹水脑脊液庚型肝炎RNA检测HGV庚肝患者病毒携带者血清端粒酶RNA 检测肿瘤血细胞 TTV病毒DNA检测输血传染病毒全血流感病毒DNA 检测流感鼻咽分泌物肿瘤Ras基因诊断肿瘤早期筛查白细胞肿瘤p53基因诊断抑癌基因检测白细胞人乳头瘤病毒HPV16.18高致变性尖锐湿疣病理活检组织或渗出液腺病毒DNA检测Adv腹泻咽拭子，咽喉洗液，脑脊液呼吸道合胞病毒RNA检测RSV呼吸道感染咽拭子柯萨奇病毒RNA检测CVB病毒性心肌炎血清，咽拭子，尿液性传播疾病(STD)检测性病，泌尿感染分泌物，渗出物，尿液支原体同上同上衣原体同上同上淋病性传播疾病同上梅毒性病血清尖锐湿疣同上渗漏出液，破溃组织单纯疱疹病毒DNA感染（HSV）疱疹感染，优生优育全血，分泌物，脑脊液owtext.5pt" width=221>尖锐湿疣同上渗漏出液，破溃组织单纯疱疹病毒DNA感染（HSV）疱疹感染，优生优育全血，分泌物，脑脊液第二篇：检验科基因扩增实验室管理制度检验科基因扩增实验室管理制度2021年11月绵阳经开区松垭人民医院检验科目录文件编号文件名页码实验室设置与布局实验室内务管理制度实验室人员配置及管理制度实验室工作人员岗位职责实验室工作程序生物防护与安全制度基因扩增实验室复检规则仪器设备管理制度仪器设备维护及保养制度仪器设备校准程序检测结果报告程序实验室清洁程序废弃物处理程序室内质量控制程序室间质评管理程序试剂与耗材购买验收及管理程序实验记录管理制度投诉处理程序应急处理程序实验室保密制度实验室生物安全管理制度个人三级防护用品穿脱流程压力蒸汽灭菌器灭菌操作流程紫外消毒操作及维护程序实验室设置与布局目的：建立科学、合理的实验室设置及管理，防止实验室交叉污染，保证检测结果准确。

临床基因扩增检验技术管理规范为了加强对四川省临床基因扩增检验技术的临床应用管理，保证医疗质量和医疗安全，根据•临床基因扩增检验实验室管理暂行办法‣（卫医发…2002‟10号），及附件•临床基因扩增检验实验室基本设置标准‣和•临床基因扩增检验实验室工作规范‣（卫检字…2002‟8号），结合我省临床基因扩增检验技术应用的实际情况，制定本规范。

本规范所指的技术是以临床诊断、治疗为目的以及其它与临床有关的用基因扩增检测技术测定核酸及其表达产物的技术。

一、医疗机构基本要求（一）二级以上医疗机构，或具备二级要求的民营医院。

（二）具备相应临床应用能力和条件的医疗机构。

（三）具备能够出具检验报告的机构或独立实验室。

（四）采、供血机构实验室。

（五）法律或主管部门要求的其他实验室。

（六）同一医疗机构不得设置多个临床基因扩增检验实验室。

二、人员基本要求（一）检验医学等医学相关专业、大学专科及以上学历，并须持有具有培训资质机构培训的合格的技术人员，同时要求具有一定分子生物学知识及3年临床检验操作经历，熟练掌握相关仪器设备的使用操作。

（二）实验室负责人应具有中级及以上专业技术职称任职资格，工作岗位固定，并能对临床基因扩增检验实验室涉及的技术、理论知识有较全面的了解和理解。

（三）三级及以上医疗机构、独立实验室至少应有3名持有具有培训资质机构培训合格的技术人员，三级以下医疗机构的实验室及其他机构的基因扩增检验实验室至少应有2名持有具有培训资质机构培训合格的技术人员。

（四）实验室人员须有计划地进行各种形式的学习和相关知识更新，积极参加卫生部临床检验中心和（或）省中心的各种学术活动及室间质量评价总结活动。

（五）实验室工作人员应建立技术档案，做到一人一档，每年更新。

三、技术管理基本要求（一）、实验室设施和设备的基本要求1.临床基因扩增检验实验室应具有四个独立的工作区域，即试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区，每个区域都应设立缓冲区，最好有专用通道。

P C R实验室可开展项目-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN基因扩增实验又称PCR实验，其特点是能将微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物学研究和实验的常规方法,广泛应用于生物学各个领域，如：检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病，癌基因的检测和诊断，DNA指纹、个体识别、亲子鉴别及法医物证，动、植物检疫，动物及其衍生产品检测，动物饲料、化妆品、食品卫生检测，转基因作物与转基因微生物检测等。

基因扩增实验室又称PCR实验室，实验室原则上分为四个单独的工作区域，前两区为扩增前区，后两区为扩增后区。

扩增前区与扩增后区应严格分开。

实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等，只能从扩增前区流向扩增后区，即从试剂准备区→样品处理区→扩增区→扩增产物分析区，不得逆向流动。

实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。

各工作区域应设置缓冲间，工作间与缓冲间之间宜安装连锁装置。

不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室，并有明显的标志，各区间不能直通。

各区之间如果是紧密相连，需安装物品传递窗。

每个工作区域的顶部应安装紫外灯，紫外灯的波长为254 nm，安装数量为每20 m2安装一支40W的紫外灯。

实验室较为理想的布局模式为有一个专用走廊，试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区很规范地排列在一起，前三个区各有一个缓冲间，可供换工作服和工作鞋使用，顶上可装一紫外灯。

内实验区域设为正压或常压状态，缓冲间内设为负压状态（可上设一抽风装置），使这三个区的空气流向为由实验区域内向外，缓冲间内通向内实验室和走廊的门可安装一种连锁装置，当一个门打开时，另一门必须处于关闭状态，防止出现两个门同时打开的情况。

产物分析区可不设缓冲间，但应设为负压状态（装一个排风扇即可），使空气流向由外向内，以防止扩增产物的随空气流出。

每一区域都须有明确的标记，工作按试剂准备区、标本制备区、扩增区至产物分析区单一流向进行，各区的仪器设备包括工作服、鞋、实验记录本和笔等都必须专用。

PCR实验室基因扩增检测实验及结果分析1、目的：保证扩增及结果分析的标准化、规范化。

2．适用范围：适用于本室使用的普通离心机。

3．负责人：操作人：4、标准程序：4.1基因扩增检测标准程序：扩增反应前须先在样本输入模板上按照事先排好的标本位置进行设置。

每次实验除待检标本，还需包括：阴性对照、阳性对照、室内质控品各一份，一组阳性标准品（4个梯度108、106、105、104）。

4.1.1打开电脑电源开关，进入Windows XP界面。

4.1.2 接着打开PCR仪电源开关，预热5分钟。

4.1.3双击电脑桌面的SLAN-96P图标进入程序设置界面。

4.1.4单击“文件”菜单中的“新建”命令，（或单击工具栏中的“新建”按扭）。

在测定、容器和模板中做相应的选择，点击OK。

4.1.5应用检测管理程序，并将其添加到样品板文档中。

4.1.6检测反应管，4.1.7 根据当次实验所需条件编辑时间和温度。

运行样品板文档。

4.2 结果分析标准程序：应按以下步骤进行：全部曲线——阴性对照——阳性对照——阳性室内质控品——阳性标准品——逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）——调整参数，获得较好的标准曲线，显示定量结果——登记，发报告。

4.2.1 整体曲线的观察：将所有曲线选中进行整体观察1）观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一Ct值出现上涨的情况。

2）观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。

4.2.2 阴性对照的分析阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。

作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。

4.2.3 阳性对照的分析阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。

作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。

4.2.4 室内质控品的分析室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知浓度室内质控品。

作用：用以监控日常实验的精密度。

临床基因扩增检验实验室技术审核合格证书摘要：一、背景介绍二、实验室简介三、审核过程四、审核结果与意义五、未来展望正文：临床基因扩增检验实验室技术审核合格证书，是对实验室技术实力的权威认可，也是对实验室质量管理体系的充分肯定。

本文将围绕实验室的背景、简介、审核过程、结果及意义以及未来展望展开介绍。

首先，让我们简要了解一下临床基因扩增检验实验室。

实验室主要从事基因扩增检验技术的研究与应用，旨在为临床提供精准、快速的检测服务，助力疾病的诊断和治疗。

基因扩增检验技术，又称PCR技术，是一种在体外将特定DNA序列快速扩增的方法，广泛应用于感染性疾病、遗传病、肿瘤等领域的诊断和研究。

接下来，谈谈实验室的审核过程。

实验室在经过一系列严格的申报、评估、验收流程后，终于获得了临床基因扩增检验技术审核合格证书。

这一过程充分体现了实验室在人员资质、设备设施、质量管理体系等方面的过硬实力。

审核过程中，专家们对实验室的各项指标进行了全面、细致的检查，包括实验室的基本情况、人员资质和结构、场地和设施设备、开展项目以及质量体系建设等。

实验室的工作人员以高度的专业素养和严谨的工作态度，顺利通过了审核。

获得审核合格证书的意义重大。

这不仅标志着实验室的技术实力和质量管理体系得到了权威认可，也为临床提供了更加可靠、高效的基因扩增检验服务。

实验室将继续秉持严谨的科学态度，不断提升技术水平，为患者的健康保驾护航。

展望未来，实验室将继续致力于基因扩增检验技术的研究与创新，拓宽检测项目，提升检测速度和准确性，以满足临床和患者的需求。

同时，实验室还将进一步加强与其他医疗机构的合作，共享资源，共同推动基因扩增检验技术的发展，为我国的医疗事业做出更大贡献。

总之，临床基因扩增检验实验室技术审核合格证书的获得，是对实验室过去努力的肯定，也是对未来发展的激励。

PCR检验室常规项目简介1. 乙型HBV-DNA定量HBV-DNA定量检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法间接检测的局限性，通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况从而对于HBV的准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等各个方面具有重大意义：1）判断疾病的严重程度和传染性。

HBV-DNA是直接反映HBV复制状态及传染性的最佳指标。

2）PCR定量结果与血清免疫学结果的综合评价。

采用FQ-PCR定量检测乙肝病毒DNA，结合“二对半”检测结果，对于机体乙肝病毒感染状态尤其变异株发生和病人预后的评估更为科学。

3）观察抗病毒药物疗效，指导药物用量。

直接检测血清中的HBV-DNA是监控HBV 传染和观察抗病毒药物疗效的最可靠的方法。

根据《2000拉米夫定临床应用指导意见》，中国慢性乙型肝炎病人治疗的目的之一就是要降低血清HBV-DNA。

同时血清HBV-DNA滴度的动态变化还可在临床上对用药的剂量、用药时间是否需要联合用药以及用药的效果等提供参考。

4）献血员窗口期病毒核酸的筛查及早期诊断。

HBsAg在血清中的检出通常在乙肝病毒感染后的2－4月出现，平均为56天左右。

而HBV-DNA的检出可以将该所谓″窗口期″提前6－15天，对于早期诊断和提高输血安全有着重要的意义。

5）预测病情、判断预后。

通常HBV-DNA持续阳性超过6个月的会转为慢性肝炎。

抗－HBe阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝损严重。

6）对阻断母婴传播的监测。

联合应用高价免疫球蛋白和乙肝疫苗有效地阻断母婴传播，但仍有5-10%婴儿对疫苗呈低反应，荧光定量PCR可对此进行监测。

7）器官移植中的作用。

肝脏器官移植是目前肝硬化晚期治疗的唯一方法，定量检测HBV-DNA为肝移植术后的跟踪观测具有较好的临床价值。

乙肝病毒定量相关检测还有：乙肝标志物定性，乙肝标志物定量，乙型HBV-DNA 定量，肝脏功能检测。

2. 乙型HBV-DNA定性HBV-DNA是乙肝病毒基因，其有无、多少是乙肝病毒存在及有无复制能力的直接标志。

为使基因扩增检验技术有效地应用于临床，更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务，保证检验质量，特制定本规范。

临床基因扩增检验实验室的规范化设置详见《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10 号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》 .为避免污染，必须严格遵循《临床基因扩增检验实验室设置标准》设置临床基因扩增检验实验室.临床基因扩增检验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备.各区域都必须有明确的标记,以避免设备物品如加样器或者试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。

进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区(简称扩增区)至产物分析区，避免发生交叉污染。

在不同的工作区域应使用不同颜色或者有明显区别标志的工作服,以便于鉴别。

此外，当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出。

清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因，因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。

不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。

下述操作在该区进行：贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备. 贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过产物分析区。

在打开含有反应混合液的离心管或者试管前,应将其快速离心数秒。

试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。

当贮存试剂溶液经检查可用后，应将其分装贮存备用，避免由于时常打开反应管吸液而造成污染。

含反应混合液的离心管或者试管在冰冻前都应快速离心数秒。

大多数用于扩增的试剂都应冰冻贮存。

为避免因单次反应取液而频繁的冻融主贮存试剂，应分装冰冻贮存试剂溶液。

贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数来决定。

主反应混合液的组成成份特别是聚合酶的合用性和稳定性通过预试验来检查,评价结果必须有书面报告。

PCR扩增技术在基因检测中的重要作用基因检测是现代生物学研究和医学诊断中的重要手段，可以用来诊断疾病、筛查潜在的遗传疾病、确定个体基因型、鉴别亲子关系以及进行犯罪鉴定等。

其中，聚合酶链式反应（PCR）扩增技术作为一种快速、准确、灵敏且高效的方法，为基因检测提供了广阔的应用前景。

PCR技术由美国生物化学家基里尔·穆利斯(Kary B. Mullis)于1983年发明并于1985年公开发表，该技术是一种体外合成DNA的方法。

PCR通过体外扩增靶标DNA的特定片段，使得原本稀少的目标DNA得以显著增加，从而便于后续检测和分析。

PCR在基因检测中的重要作用主要体现在下面三个方面。

首先，PCR技术在基因检测中实现了目标DNA的高效扩增。

PCR通过不断的循环扩增，迅速复制出特定的DNA片段。

PCR反应的三个步骤包括：变性、退火和延伸。

这三个步骤通过不断的循环重复，使得DNA链得以不断复制，最终产生大量目标DNA。

这种高度选择性的扩增使得PCR在基因检测中成为一种理想的工具，可以在体外扩增低浓度的靶标DNA，为后续的检测提供足够的目标物。

其次，PCR技术在基因检测中实现了DNA序列的测定和分析。

PCR扩增得到的DNA片段可以进一步进行测序分析，从而了解目标DNA的具体序列。

通过PCR扩增靶标DNA，并使用DNA测序技术，我们可以检测到特定基因中的突变或突变类型，为疾病的诊断和治疗提供重要的信息。

同时，PCR扩增也可以用于检测DNA甲基化的状态，DNA甲基化在基因组稳定性、基因调控等方面起着重要的作用，PCR扩增技术的应用使得我们能够更好地理解和研究DNA甲基化对基因功能的影响。

最后，PCR技术在基因检测中实现了基因型的鉴定和亲缘关系的确定。

PCR扩增技术可以实现特定的基因片段的体外扩增，从而得到相对于基因型的信息。

这种信息可以用于确定个体的遗传状况，如基因突变或表达水平。

此外，PCR扩增技术还可以应用于亲子鉴定等领域，通过比对特定的基因片段，判断是否存在亲子关系。

一、实习背景随着分子生物学技术的飞速发展，基因扩增技术在临床医学、法医学、生物安全等领域得到了广泛应用。

为了提高自身实践能力和专业技能，我于2021年8月至10月在XX市人民医院检验科进行了基因扩增实习。

以下是实习报告的具体内容。

二、实习目的1. 熟悉基因扩增技术的基本原理和操作流程；2. 掌握PCR、RT-PCR、巢式PCR等基因扩增实验技术；3. 了解基因扩增技术在临床医学、法医学等领域的应用；4. 培养严谨的实验态度和团队合作精神。

三、实习内容1. 实验原理及操作流程（1）PCR（聚合酶链反应）：PCR技术是一种在体外条件下模拟DNA复制过程的方法，通过高温变性、低温复性和中温延伸三个步骤，实现DNA片段的扩增。

（2）RT-PCR（逆转录-聚合酶链反应）：RT-PCR是在PCR的基础上，先进行RNA的逆转录，再进行DNA的扩增。

（3）巢式PCR：巢式PCR是在PCR的基础上，设置两对引物，先进行一轮扩增，然后取第一轮扩增产物作为模板，进行第二轮扩增，以提高扩增特异性。

2. 实验操作（1）PCR反应体系配制：根据实验目的和模板DNA浓度，配制PCR反应体系，包括模板DNA、引物、dNTPs、缓冲液、Taq酶等。

（2）PCR反应：将配制好的反应体系放入PCR仪，设置温度梯度，进行PCR扩增。

（3）琼脂糖凝胶电泳：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察扩增结果。

（4）产物纯化：对扩增产物进行纯化，为后续实验提供高质量模板。

3. 基因扩增技术在临床医学、法医学等领域的应用（1）临床医学：基因扩增技术在临床医学中主要用于病原体检测、遗传病诊断、肿瘤标志物检测等。

（2）法医学：基因扩增技术在法医学中主要用于DNA鉴定、亲子鉴定、个体识别等。

四、实习收获1. 熟练掌握了PCR、RT-PCR、巢式PCR等基因扩增实验技术；2. 增强了实验操作能力，提高了实验技能；3. 了解基因扩增技术在临床医学、法医学等领域的应用，为今后的工作奠定了基础；4. 培养了严谨的实验态度和团队合作精神。

PCR方法在基因分析中的重要意义和应用PCR（聚合酶链式反应）是一种基于DNA复制机制的体外DNA扩增技术，被广泛应用于基因分析领域。

PCR方法的发展为基因分析提供了高效、快速和精确的手段，对于了解基因功能、诊断疾病、研究进化以及推动个体化医学等方面具有重要意义。

PCR方法的重要意义体现在以下几个方面：1. 高度灵敏性：PCR方法能够在体外扩增极小数量的DNA，甚至是单个DNA分子。

这种高度灵敏的特性使得PCR方法在基因分析中能够检测到微量的目标DNA，例如病原体的核酸、疾病相关基因突变等。

对于一些低频突变的检测和研究，PCR方法是不可或缺的工具。

2. 特异性：PCR方法通过引物的设计可以选择性地扩增目标DNA序列。

通过合理选择引物的序列和温度条件，可以避免非特异性扩增，从而确保扩增产物的准确性和特异性。

这种特异性使得PCR方法在基因分析中能够区分目标基因和非目标基因，避免干扰信号的干扰。

3. 高度可靠性：PCR方法的结果是可重复的，这意味着研究者能够在不同实验室、不同时间点对同一样本进行PCR分析，结果应该是一致的。

这种高度可靠性使得PCR方法成为许多基因分析领域的金标准，例如基因突变检测、基因表达分析等。

PCR方法在基因分析中的应用远远不止于此，下面将介绍几个PCR方法的典型应用：1. 基因突变检测：PCR方法可以通过扩增目标基因的特定区域，然后使用各种方法进行突变检测，例如限制性片段长度多态性（RFLP）、单碱基扩增聚合酶链反应（PCR-RFLP）、聚合酶链式反应-限制片段长度多态性（PCR-SSCP）等。

这些方法能够快速、准确地检测基因突变，为临床诊断和基因遗传病的筛查提供重要依据。

2. 基因表达分析：PCR方法可以用于定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）来研究基因的表达水平。

通过逆转录转录为cDNA，然后使用引物特异性地扩增目标基因，可以快速测量目标基因在样本中的表达量，并分析其在不同条件下的变化。

ＨＥＲ－２基因扩增检测（荧光原位杂交法）
黄小征何京生周立新
北京肿瘤医院病理科 北京 １００１４２
目的：乳腺癌组织细胞中的ＨＥＲ－２基因扩增指导临床用药。

检验原理：临床上常用病理学检查确诊为乳腺癌患者组织石蜡包埋切片，经处理后用荧光原位杂交方法进行分析。

乳腺癌细胞核中脱氧核糖核酸与ＨＥＲ－２位点及１　７号染色体着丝粒特异性荧光原位探针分别在高温下变性成单链脱氧核糖核酸，４２℃环境中，这些已变性成单链的样本及探针核糖根据碱基互补的原则进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸，洗涤非特异性结合物，探针上标记的荧光信号可在显微镜下检测。

正常细胞显示２个红色ＨＥＲ－２位点信号及２个绿色１７号染色体位点信号。

结论：影响ＦＩＳＨ结．消化时间的长短是人工操作，所Ｉ
Ｊ—Ｊｌ＾
HER-2基因扩增检测(荧光原位杂交法)
作者：黄小征， 何京生， 周立新
作者单位：北京肿瘤医院病理科 北京 100142
本文链接：/Conference_7842676.aspx。

基因扩增实验又称PCR实验，其特点是能将微量的DNA大幅增加，PCR 是分子生物学研究和实验的常规方法,广泛应用于生物学各个领域，如:检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病，癌基因的检测和诊断，DNA指纹、个体识别、亲子鉴别及法医物证，动、植物检疫，动物及其衍生产品检测,动物饲料、化妆品、食品卫生检测，转基因作物与转基因微生物检测等.基因扩增实验室又称PCR实验室，实验室原则上分为四个单独的工作区域，前两区为扩增前区,后两区为扩增后区。

扩增前区与扩增后区应严格分开。

实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区，即从试剂准备区→样品处理区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动.实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。

各工作区域应设置缓冲间，工作间与缓冲间之间宜安装连锁装置。

不同功能的核酸检验工作区应是分隔独立的工作室，并有明显的标志，各区间不能直通。

各区之间如果是紧密相连，需安装物品传递窗.每个工作区域的顶部应安装紫外灯，紫外灯的波长为254 nm，安装数量为每20 m2安装一支40W的紫外灯。

实验室较为理想的布局模式为有一个专用走廊,试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区很规范地排列在一起，前三个区各有一个缓冲间,可供换工作服和工作鞋使用，顶上可装一紫外灯。

内实验区域设为正压或常压状态，缓冲间内设为负压状态（可上设一抽风装置）,使这三个区的空气流向为由实验区域内向外，缓冲间内通向内实验室和走廊的门可安装一种连锁装置，当一个门打开时，另一门必须处于关闭状态，防止出现两个门同时打开的情况。

产物分析区可不设缓冲间,但应设为负压状态（装一个排风扇即可)，使空气流向由外向内，以防止扩增产物的随空气流出。

每一区域都须有明确的标记，工作按试剂准备区、标本制备区、扩增区至产物分析区单一流向进行，各区的仪器设备包括工作服、鞋、实验记录本和笔等都必须专用。

如果无法作到以上模式,以下基本要求必须做到：1、四个区域必须是相互独立的；2、各区的仪器设备及各种物品必须是专用的;3、各区完全独立，缓冲间可有可无。

PCR技术的过程和意义一、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR是一种体外DNA 扩增技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性--低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环，使DNA片段在数量上呈指数增加，从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。

在环境检测中，靶核酸序列往往存在于—个复杂的混合物如细胞提取液中,且含量很低,对于探测这种复杂群体中的特异微生物或某个基因，杂交就显得不敏感。

使用PCR技术可将靶序列放大几个数量级,再用探针杂交探测对被扩增序列作定性或定量研究分析微生物群体结构。

二、PCR技术的步骤PCR由变性——退火——延伸三个基本反应步骤构成:1、模板DNA的变性模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备；2、模板DNA与引物的退火（复性)模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;3、引物的延伸DNA模板——引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链,重复循环变性——退火-—延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。

每完成一个循环需 2～4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

到达平台期(Plateau）所需循环次数取决于样品中模板的拷贝.三、PCR技术的意义1、特异性强PCR反应的特异性决定因素为:①引物与模板DNA特异正确的结合;②碱基配对原则；③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;④靶基因的特异性与保守性。