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TLR4信号通路关键基因在断奶仔猪不匾组织中的mRNA表达

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疫 密 切 相关 的 模 式 识 别 受 体 （ ｐ ａ ｔ ｔ ｅ ｒ ｎ ｒ ｅ ｃ ｏ ｇ ｎ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ
ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｓ ， Ｐ Ｒ Ｒ） ［ １ － ２ ］ 。 目前 已有 １ ０ 多种Ｔ Ｌ Ｒ 被发现 ， 其
羧基端结合 ， Ｍｙ Ｄ ８ ８ 通 过其死亡域与Ｉ Ｌ 一 １ 受 体 相 关
亡 域 相 结 合 ，从 而使 Ｉ Ｒ Ａ Ｋ １ 磷 酸 化 。磷 酸 化 后 的
Ｉ Ｒ Ａ Ｋ１ 与 肿 瘤 坏 死 因 子 受 体 相 关 因 子 ６（ Ｔ Ｎ Ｆ — Ｏ ｔ
免 疫 中起重 要作 用【 】 。 Ｔ Ｌ Ｒ ４ 是 识别 革兰 阴性 细菌 胞
壁成分 （ 内毒 素 ） 的关 键 分 子 ，激 活 Ｔ Ｌ Ｒ ４ 可诱 导 Ｔ Ｎ Ｆ — Ｏ Ｌ 、 Ｉ Ｌ 一 １ 和Ｉ Ｌ 一 ６ 等 的表 达 。 因此 ， Ｔ Ｌ Ｒ ４ 的表 达 水 平 可能 参 与调节 免疫 细胞 在接 受 革兰 氏 阴性 细菌 刺 激 后合 成细 胞 因子 的能力 ，且 启 动有 效 清除 革兰 氏 阴性细 菌感 染 的防御 反应 。Ｔ Ｌ Ｒ ４ 有３ 个结 构域 ： 胞 外
ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ — ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ６ ， Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６ ）结 合 并 使 其 激
活 。Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６ 最 终使 Ｎ Ｆ — Ｋ Ｂ 激活， 活化 的Ｎ Ｆ — Ｋ Ｂ 最 终转 移 到 细胞 核 内 ， 诱 导 炎 性 细 胞 因子 的表 达 （ 如Ｔ Ｎ Ｆ —
回肠组 织 。 应 用 实时荧光 定量Ｐ Ｃ Ｒ技 术 测 定 Ｔ Ｌ Ｒ４信 号 通 路 关 键 基 因 ， 包 括Ｔ Ｌ Ｒ４、 髓样 分化 因子 （ Ｍｙ Ｄ８ ８） 、 Ｉ Ｌ 一１ 受
体 相 关激 酶１ （ Ｉ Ｒ Ａ Ｋ １ ） 、 肿 瘤坏 死 因子 受体相 关 因子６ （ Ｔ Ｒ Ａ Ｆ ６ ） 、 核 因子一 Ｋ Ｂ（ Ｎ Ｆ — Ｋ Ｂ） 和 肿 瘤坏 死 因子 （ Ｔ Ｎ Ｆ ） 一 Ｏ ｒ ．
２ ０ １ ３ 年 第４ ９ 卷 鲭ｊ ７ 瑚
Ｎ ｕ ｔ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｆ ｅ ｅ ｄ ｓ ｔ ｕ ｌ ｆ ｓ・
瀚 料
Ｉ Ｌ Ｒ ４ 信号通路关键基 因在断奶仔猪不同 组织中的ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达
陈 逢 ， 刘 玉 兰 ， 李 权 ， 朱 惠玲 ， 侯永清， 易 丹， 陈 洪 波
激酶１ （ Ｉ Ｌ 一 １ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ — ａ ｓ ｓ ｏ ｃ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｋ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ １ ， Ｉ Ｒ Ａ Ｋ １ ） 的死
中最有 代表 性 、 研究 较 多 的是Ｔ Ｌ Ｒ ４ ｔ 。 Ｔ Ｌ Ｒ ４ 通 过对 病 原 体相 关 的分 子模式 的识 别及 通 过刺 激信 号 的级 联 反 应诱 导炎 症 因子 和细 胞 因子 的产生 ，在抗感 染 和
Ｔ ｏ ｌ ｌ 样 受体 （ ｔ ｏ ｌ ｌ — ｌ ｉ ｋ ｅ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ ｓ ， Ｔ Ｌ Ｒ） 是 一 类 与 免
得 信号 转 导到 胞 内。Ｔ Ｌ Ｒ ４ 的胞 内Ｔ Ｉ Ｒ区域 与髓样 分
化 因子 ８ ８（ ｍ ｙ ｅ ｌ ｏ ｉ ｄ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ８ ８ ， Ｍ ｙ Ｄ ８ ８ ） 的
各 组 织 对 病 原 的 识 别 和 抵 抗 能 力 有 关 关键 词 ： Ｔ Ｌ Ｒ ４信 号 通 路 ： 实时荧光 定量Ｐ ＣＲ； 断 奶 仔 猪
中 图分类 号 ： ￥ ８ ２ ８ ． ５
文献标 识码 ： Ｂ
文章 编号 ： ０ ２ ５ ８ — ７ ０ ３ ３ （ ２ ０ １ ３ ） １ ７ — ０ ０ ５ ３ — ０ ５
域、 跨 膜域 、 胞 内域 。胞 外域 为 一段 重复 的亮 氨酸 序 列（ Ｌ Ｒ Ｒ） ， 可 与Ｃ Ｄ 结合 ， 介导 病 原 相 关 分子 模 式 的 识别。 而 胞 内域则 存在 一段 保守 序 列 ， 该 序 列与 Ｉ Ｌ 一 １
、
Ｉ Ｌ 一 １ 和Ｉ Ｌ 一 ６ 等） ［ ７ － ８ ］ 。这些 炎 性 细胞 因子参 与机 体
的免 疫应 答 与免疫 调节 ，从 而清 除入侵 病 原 。本试
验通 过Ｒ ｅ ａ ｌ ｔ ｉ ｍ ｅ Ｐ Ｃ Ｒ 技术 测定 Ｔ Ｌ Ｒ ４ 信号 通路 关键 基
因 （ Ｔ Ｌ Ｒ ４ 、 Ｍｙ Ｄ ８ ８ 、 Ｉ Ｒ Ａ Ｋ 、 豫Ａ 、 Ⅳ Ｆ 一 和Ｚ ⅣＦ — Ｏ ／ ）
（ 武 汉轻 工大 学 ， 动 物 营养 与饲料 科 学 湖北省 重 点 实验 室 ， 湖北 武汉
４ ３ ０ ０ ２ ３ ）
摘 要 ： 本 试 验 旨在 研 究 Ｔ ｏ ｌ ｌ 样 受 体 ４（ Ｔ Ｌ Ｒ ４ ） 信 号通 路 关键 基 因在 断奶 仔猪 不 同组 织的 分 布情 况 。选 择 １ ２ 头 杜 Ｘ长 Ｘ大 断 奶 仔 猪 ， 屠宰 ， 取 脾脏 、 胸腺 、 肠道 淋 巴结、 下丘 脑 、 垂体、 肾上腺 、 肝脏 、 腓肠 肌 、 皮下 脂肪 、 空 肠 和
在各 组 织的ｍ Ｒ Ｎ Ａ表 达 水 平 。 结 果 表 明 ： Ｔ Ｌ Ｒ ４ 信 号 通 路 关 键 基 因在 所 检 测 的 ｌ １ 个 组 织 中均 有 表 达 ． 并 且 组 织 分
布规 律 基本 一致 。总体 看 来 ， 主要 在免 疫 组织 （ 脾脏 、 胸腺 、 淋 巴结 ） 表 达 量较 高 ， 在 皮 下 脂肪 和肠 道 （ 空肠 、 回 肠） 表 达量 居 中 ， 在 其 他 组 织 中表 达 量 较 低 。 Ｔ Ｌ Ｒ ４ 信 号 通 路 关 键 基 因 在 不 同组 织 中 表 达 差 异 较 大 ， 可 能 与 仔 猪

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TLR4信号通路在自然流产中的作用

TLR4信号通路在自然流产中的作用

TLR4信号通路在自然流产中的作用摘要】新近观点认为，自然流产的发病、病程发展均有Toll样受体4(TLR4)的参与和作用。

本综述针对与自然流产（重点是不明原因反复性流产，URSA）妇女的TLR4表达相关的文献资料进行回顾性总结，以期找到影响母体-胎儿的免疫学机制中的一些关键因素，提示临床对此进行重点关注和特异性干预，有望改善URSA患者的预后。

【关键词】 TLR4信号通路；自然流产；发病机制【中图分类号】R714.21 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）01-0061-021.前言自然流产的病因和发病机制尚未明确，存在多种观点。

不少专家认为，在自然流产的病因、病程发展中均有Toll样受体4(TLR4)的参与和作用[1-2]。

母体、胎儿之间的免疫平衡中存在多种免疫细胞和细胞因子的协调作用。

Toll 受体(TLR)是Ⅰ型跨膜受体，为免疫固有的关键性受体。

不同TLR通过识别其不同的配体,介导特有的信号转导通路而发挥不同的生物学功能。

2.有关自然流产病因和发病机制的研究胎盘滋养细胞上有TLR4表达。

其激活可释放大量Th1型细胞因子，能诱导免疫应答反应,有利于机体抗病原微生物感染和抗组织损伤。

然免疫反应过强会给机体带来不良影响。

研究认为[2]，Th1/Th2型细胞因子失衡、由TLR4介导的TLR4-NF-κB信号转导通路均可引发母、胎之间的免疫失衡，导致自然流产。

李莎等[3]的研究中考察了非妊娠、正常妊娠孕早期、孕早期低孕酮、孕早期低孕酮经黄体酮治疗的妇女这4组人群的TLR4表达。

结果发现，妊娠孕早期妇女单核细胞中的TLR4表达显著高于自然流产妇女[(52.58%±13.65%)Vs(31.91%±20.03%)(P<0.05)]，但低于非妊娠妇女[(60.69%±8.68%)(P<0.05)]。

表明不同状况下的孕早期妇女，其外周血中免疫相关受体TLR4的表达水平不同，TLR4的改变或可能与妊娠中存在着免疫耐受有关。

猪肠道碱性氨基酸转运载体(CAT1)mRNA表达的组织特异性和发育性变化

猪肠道碱性氨基酸转运载体(CAT1)mRNA表达的组织特异性和发育性变化


性氨基酸有很高的亲和力（Km值在mmol水平）， 司），DEPC，RNA酶（Sigma），Taq DNA聚合酶，
对中性氨基酸的亲和力很低。该系统依靠与细胞质 膜的化学电势偶联来转运并聚集底物[8]。谭会泽等
Ribonuclease Inhibitor（TaKaRa公司），DL-2000 Marker（宝生物工程公司），pEGM-T Vector，ABI
屠宰，采集十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品。以18S基因为内标，用实时荧光定量RT-PCR法（SYBR Green
Ⅰ试剂盒）检测CAT1mRNA 在60日龄长白猪十二指肠、空肠、回肠和结肠表达的组织特异性，以及在长白和蓝塘
猪不同日龄其十二指肠、空肠、回肠表达的发育性变化。结果显示：60日龄长白猪C A T1 m R N A 的表达丰度从十
阶段（P＜0.05）；空肠CAT1mRNA 的表达在26～150d各阶段都差异不显著，而26d显著高于1和7d（P＜
0.05）；1～60 d 长白和蓝塘猪回肠C A T1 m R N A 的表达都呈逐渐上升的趋势，60 d 后都显著下降（P＜0.05）。两
品种猪不同日龄时十二指肠和空肠C A T1 m R N A 的表达量都没有显著差异（P＞0.05）；长白猪回肠C A T1 m R N A
1.1 试验动物及样品采集 选取体况一致的长白和蓝塘公猪各35头。于
1、7、26、30、60、90和150日龄பைடு நூலகம்随机选取5头，称
赖氨酸和精氨酸等必需氨基酸为主的碱性氨基 酸转运类型有4种：系统y+L和b0，+ ，Na+/Cl-依 赖 性的系统B0，+ 及阳离子氨基酸转运家属（CAT家 属）系统y+ [ 3]。哺乳动物的CAT家属系统y+ 有4 个成员，即CAT1～4，其中CAT1～3具有60%左
断奶前后仔猪小肠Proglucagon mRNA的时空特异性表达

断奶前后仔猪小肠Proglucagon mRNA的时空特异性表达

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology2007,15(4):719~720*基金项目： 国家自然科学基金项目(No.30270975)和国家重点基础研究发展规划（973）项目(No.2004CB117505)资助。

**通讯作者。

Author for correspondence.教授， 主要从事营养生理学研究。

E­mail:<lapb@>.收稿日期： 2006­09­19接受日期： 2006­11­16·研究简报·断奶前后仔猪小肠不同肠段胰高血糖素原mRNA的表达 *王丽娜, 张 磊,倪迎冬,杨晓静, 陈 杰, 赵茹茜 **（南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室,南京 210095）关键词：仔猪；断奶；小肠上皮；胰高血糖素样肽 ­2中图分类号： S188 文献标识码： A 文章编号： 1006­1304(2007)04­0719­02Pattern of mRNA Expression in Different Small Intestine Segmentsof Weaning PigletsWANG Li­na,ZHANG Lei,NI Ying­dong,YANG Xiao­jing,CHEN Jie,ZHAO Ru­qian**piglets;weaning;intestinal epithelium;glucagon­like peptide2研究表明， 成年猪的肠上皮细胞大约2~4d更新 1次， 而 新生仔猪肠上皮细胞7~10d才能完成1次更新。

仔猪的胃肠 道功能发育迟缓，使其不能适应生产上早期断奶的需要， 出 现食欲不振、 腹泻， 甚至死亡。

仔猪断奶后小肠的功能发生相 当大的改变(Boudry ,2004)。

TLR4通路相关分子在猪可控性DCD供肝中的表达及意义的开题报告

TLR4通路相关分子在猪可控性DCD供肝中的表达及意义的开题报告

TLR4通路相关分子在猪可控性DCD供肝中的表达及意义的开题报告1. 研究背景器官移植是目前治疗多种疾病的唯一有效手段之一。

由于器官移植涉及到供体和受体之间的免疫问题，因此免疫抑制剂的使用成为移植术后免疫排斥的重要方法。

然而，由于免疫抑制剂的使用会存在一定的副作用和并发症，因此寻求替代方法成为当前研究的热点。

其中，可控性死亡供体（DCD）器官的使用被广泛研究，该器官通过控制捐赠者死亡时机，使器官得到可靠保护，从而减少排斥反应的发生。

猪是重要的移植器官供体，但由于猪的免疫系统与人的免疫系统存在较大差异，因此猪供体移植术后仍然存在免疫排斥的问题。

TLR4是猪的免疫系统中的重要分子，参与免疫途径的调节。

因此，研究TLR4通路相关分子在猪可控性DCD供肝中的表达及意义，有助于了解猪供体移植后免疫反应的机制，为猪供体器官移植提供理论支持。

2. 研究目的本研究旨在探究TLR4通路相关分子在猪可控性DCD供肝中的表达情况，并分析其对移植后免疫反应的影响，为研究猪供体移植后免疫排斥机制提供参考。

3. 研究内容及方法3.1 研究内容本研究将分为以下几个方面进行探究：（1）猪可控性DCD供肝TLR4通路相关分子表达情况的检测；（2）TLR4通路相关分子对移植后免疫反应的影响分析；（3）探究TLR4通路相关分子在移植后机体免疫耐受形成中的作用。

3.2 实验方法（1）采集猪可控性DCD供肝组织，提取组织总RNA，利用qRT-PCR技术检测TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κB等TLR4通路相关分子的表达情况；（2）将猪DCD供肝移植到接受者动物体内，观察移植后的免疫反应，比较移植前后TLR4通路相关分子的表达差异，以及移植后免疫细胞浸润的变化；（3）利用逆转录-PCR、Western blot等技术检测免疫细胞中TLR4通路相关分子的变化情况，以探究TLR4通路相关分子在移植后机体免疫耐受形成中的作用。

4. 研究意义及预期结果本研究的意义在于深入了解猪供体移植后免疫反应的机制，为猪供体器官移植提供理论支持。