日立l-8900氨基酸自动分析仪.ppt

日立氨基酸分析仪操作步骤 (1)日立氨基酸分析仪简介 (3)日立氨基酸分析仪操作注意事项 (4)日立氨基酸分析仪操作步骤1、开机：计算机开机及仪器开机。

2、创建新项目：打开软件→“项目”→“创建新项目”→填名称和路径，两个“□”打钩，点“启用程序”→“确定”→将D盘Method文件夹的6个方法复制到F盘Method文件夹。

3、泵的排气：“仪器”→“启动”和/或“离线启动”→关掉弹出窗口→点左下角“控制”→“仪器状态”→“Connet”→待左上角灰色框显示“Idle”，点“OPTION”→点Pump 1的“Purge”→ B1：B2：B3：B4 = 25：25：25：25 →“Start”→手动打开泵1开关（逆时针旋转90°）→“确定”→点Pump 2的“Purge”→R1：R2：R3 = 34：33：33 →“Start”→手动打开泵2开关→“确定”→待泵2的废液管液体无气泡，点Pump 2的“Purge”→拧紧泵2开关→点Pump 1的“Purge”→B5：B6 = 50：50 →“Start”→“确定”→待泵1的废液管液体无气泡，点Pump 1的“Purge”→拧紧泵1开关。

4、进样器的排气：“L 8900”→“Autosample”→“Sampler Wash”→“OK”→重复排气，直到进样器无气泡。

5、创建序列：“帮助”→“仪器向导”→“创建序列”→选方法“PH 4.6×60-2622”→“打开”→“下一步”→“样品”命名，加后缀→“数据文件”命名，选“样品ID”，加后缀“日期与时间”→填样品数（样品数= n+3，n为样品个数）→重复次数“1”→“下一步”→输入第一个样品瓶的编号→进样量“20”μL →“下一步”→“下一步”→“完成”→更改第一针方法为“PH 4.6×60-2622（Stand-by）”→更改第二针方法为“PH 4.6×60-2622（RG）”→更改样品瓶序号，与样品盘中一一对应→“文件”—“保存”—“序列”→命名文件夹→点“序列运行”。

日立L-8900全自动氨基酸分析仪样品前处理步骤（内部用）一、饲料样本中水解蛋白中氨基酸含量测定步骤（参考GB/T 18246-2000）1. 样品制备取具代表性的饲料样品，用四分法缩减分取25g 左右，粉碎并过。

.25m m孔径(60目)筛，充分混匀后装入磨口瓶中备用。

对于粗脂肪含量大于、等于5%的样品，需将脱脂后的样品风干、混匀，装入密闭容器中备用。

而对粗脂肪小于5%的样品，则可直接秤用未脱脂样品。

2. 氨基酸水解液制备（酸水解）称取含蛋白7.5 -25 mg的试样(约50~100 mg,准确至1 mg) 于20 mL水解管，加10.00 mL 酸解剂（6 mol/L HCl)，置液氮或干冰(丙酮)中冷冻。

然后，抽真空至7 Pa(-<5X1 0-'mm汞柱)后封口或充氮气封口。

将水解管放在110℃恒温干燥箱中，水解22~24 h。

冷却，混匀，开管，用水定容至50~100mL（保证上机液中总氨基酸浓度在50-250 nmol/mL），过滤，用移液管吸取1.0 mL 于真空干燥箱60℃蒸干，必要时，加少许水，重复蒸干1-2次（或50℃氮吹仪吹干，加少量水重复吹干2次）。

加入2 mL 0.02 mol/L HCl溶液，充分溶解，0.22 um滤膜过滤，上机。

二、血浆中游离氨基酸测定1. 样品制备采集约5 mL抗凝全血，4000 × rpm离心，获得血浆，检测前-20℃保存。

2. 分离游离氨基酸取血浆1.0 mL，加入1.0 mL 8%磺基水杨酸（8g磺基水杨酸溶于92mL的超纯水），4℃冰箱过夜，14000 × rpm 离心10 min，上清液过0.22 um滤膜，取约1 mL上机测定。

蛋白质氨基酸分析测试一、实验课程：组成蛋白质的氨基酸的定量分析二、实验项目：三、主要仪器设备日立L-8900高速氨基酸分析仪1 实验目的用于检测样品中蛋白水解氨基酸、游离氨基酸的种类及含量，广泛应用于食品、纺织等领域检测。

2 仪器用具和材料L-8900高速氨基酸分析仪、氮吹仪、真空泵、水解瓶等。

3 基本知识用水解的方法将蛋白质的肽链打开，形成单一的氨基酸进行分析。

所有的氨基酸在低PH值的条件下都带有正电荷，在阳离子交换树脂上均被吸附，但吸附的程度不同，碱性氨基酸结合力最强、其次为芳香族氨基酸、中性氨基酸、酸性氨基酸结合力最弱。

按照氨基酸分析仪设定的洗脱程序，用不同离子强度、PH值的缓冲液依次将氨基酸按吸附力的不同洗脱下来，被洗脱下来的氨基酸与茚三酮反应液在加热的条件下反应（135度），生成可在分光光度计中检测到的蓝紫色物质外标法定量。

4 实验步骤：1水解样品（1）药液0.02 N HCI稀释3倍以上（根据氨基酸的浓度）作样品。

（2）蛋白质固体a 6N-HCI，110℃水解样品24小时。

b 减压干燥，除去HCI。

c 0.02NHCI容量, 0.22um的滤膜过滤（最终浓度以200ug/ml为宜）。

2打开工作站主画面，点击control——instrument status键进入3 单击connect联机，大约两分钟后初始化完成。

4点击File——Sequence，建立样品表。

5依次输入未知样品顺序、样品号、数据路径、文件名称、样品个数、重复次数。

6 点击下一步，输入样品瓶号、标准瓶号、进样体积、样品间隔数。

7点击下一步，标准品号、路径、文件名、标准品个数、重复次数。

8点击完成，生成的样品表。

9点击File-Method-Open，调用方的。

10点击单一运行(Single Run)，及序列运行(Sequence Run)。

11采样结束后进行数据处理。

5.6 如何推测样品浓度本设备使用的各氨基酸样品的最适宜浓度范围为0.4至10 nmol/20 μL。

因此，在添加样品之前，必须对样品的浓度加以推测。

(1) 当在水解之前已知样品容量时这时，需先确定蛋白质或缩氨酸的重量。

假定平均分子量为120，那么，每次样品中20种氨基酸的净含量大约为5μg/20 μL。

于是，需制备5份这样的样品。

(2) 当样品浓度未知时这时，按下文所述与标准样品进行对比非常方便。

(a) 取两个试管，一个加入0.1 mL认为浓度适宜的样品，另一个加入0.1 mL的标准样品。

(b) 向两试管内均加入1 mL茚三酮试剂和1 mL缓冲溶液（PH-1）。

(c) 在100 ︒C的相同温度下对两个试管加热3分钟。

(d) 将颜色变化同标准样品进行比较，即测定570 nm波长时的吸光率。

(e) 为了推测近似浓度，需对比标准样品与稀释溶液的总容量e并估测二者之间的倍数关系，从而判断未知样品的容量。

例如，如果未知样品稀释至1/4时的浓度与标准样品的浓度相同，则未知样品的浓度为标准样品浓度的4倍，那么，未知样品的添加容量为1/4即可。

如果未知样品的浓度较低，在按此方式处理时，增加相应容量的即可。

在采用这种对比方法对多种氨基酸进行具体推测时，需仔细计算浓度。

(3) 样品浓度过高时(包括杂物的浓度过高的情况)(a) 自动进样器的进样针上粘附着高浓度样品时，将会促进进样口的磨损，而可能引发漏液。

为了防止漏液，对高浓度样品进行分析时，请更改自动进样器的清洗条件。

(b) 请参照方法的创建（L-8900高速氨基酸分析仪（OpenLAB系统）2.7.1「仪器条件的设定」），将进样针的清洗时间设定为1 s～5 s。

5.75.7 样品的预处理在加载到分析仪之前，必须根据具体的检测目标处理样品。

处理方法大体有两种。

一种方法是测定游离氨基酸，包括氨基酸及其化合物（以下称生理性液体分析）；另一种方法是测定蛋白质水解获得的氨基酸本身（以下称蛋白质水解分析）。

日立L-8900全自动氨基酸分析仪简易操作规程一、联机1、打开电脑。

2、打开主机电源。

3、双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。

1-14、在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击联机。

大约两分钟，初始化完毕。

中Uninitialized变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。

初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升。

分离柱的温度会升到50℃。

1-21-3二、手动各组件控制操作1、泵1和泵 2点击，出现2-1的画面。

设置泵1，流量0.ml/min，B1 100%。

点击打开泵1。

泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。

2-1点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。

点击打开泵2。

泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。

2-22、自动进样器点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。

2-32-43、反应柱柱温箱点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。

柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。

2-52-6三、编辑方法1、依次点击、、出现3-1-1的画面。

3-1-12、选中，点击。

再依次点击、，出现3-1-2的画面。

3-1-23、在设置中选中各个柱，其余参数默认。

4、将方法另存为L8900分析方法，文件名及路径均可自选。

注意一定不要覆盖原来的方法，一定得另存。

注意将梯度设为3-3-1所示，其余参数默认。

3-3-12、保存方法。

四、编辑Sequence1、依次点击、、，出现4-1画面。

选中，其余参数默认。

4-12、点击，出现4-2画面，根据需要填写各个参数。

4-23、点击，出现4-3画面，根据需要填写各个参数。

4-34、点击，出现4-4画面，根据需要填写各个参数。

4-45、点击，出现4-5画面。

4-56、通过复制、编辑，最终将Sequence编辑如图4-6所示。

注意此时第一行是再生程序（RG），进样体积为0，Run Type是Unknown，第二行是标准样品，三行起是未知样。

L-8900氨基酸分析仪分析柱重新填充方法陈蕊君;满目【摘要】2008年引进的L-8900高速全自动氨基酸分析仪由于使用过久、维护不当,导致泵1压强过高不能正常运行.通过更换线性过滤器,逆洗分析柱,仍没有解决问题,最后重填分析柱使仪器恢复正常.重填分析柱操作较复杂、容易出错,会造成树脂损失,因此,在重填过程中详细记录拆卸、清洗树脂、安装分析柱的完整过程,为今后工作和同行积累经验.【期刊名称】《分析测试技术与仪器》【年(卷),期】2019(025)003【总页数】3页(P204-206)【关键词】L-8900高速全自动氨基酸分析仪;压强过高;重新填充【作者】陈蕊君;满目【作者单位】中国人民解放军食品检测试验中心,北京 101301;中国人民解放军食品检测试验中心,北京 101301【正文语种】中文【中图分类】O657L-8900高速全自动氨基酸分析仪由日立(HITACHI)公司生产，是目前国内使用最多的氨基酸自动分析仪之一[1]. 当分析仪使用过久、维护不当时，其分析柱会发生堵塞或污染，从而导致系统压力升高，直接影响系统稳定性，同时引起保留时间的偏差. 当分析柱树脂老化，就会导致离子交换能力下降，柱效降低，相邻峰的分离度会变差，峰形也会改变，从而严重影响测试结果.1 故障表现分析仪开机后电脑进入设置界面，主机与软件连接正常. 初始化完毕，手动排出泵1和泵2流路中的气泡后，设置泵1流速(PH-1缓冲液B1为0.3 mL/min)和泵2流速(5%乙醇R3为0.2 mL/min)，执行后待流速逐渐升高，此时出现提示“PERSSURE MAX LIMIT ERROR” occurred on Pump 1(泵1压强过高)，主机停止运行.2 故障排除首先，根据使用说明书(主机)中故障诊断，首先检查线性过滤器是否被样品中的杂质堵塞. 卸下各部位的前推螺丝，卸下过滤器压板，取出过滤器，发现不仅被杂质污垢覆盖，并且已被腐蚀断裂. 更换新的过滤器并运行泵1，仍然弹出“泵1压强过高”的提示.第二步，确认分析柱是否发生堵塞. 采用逆洗方法，拆下分析柱并反向安装，不连接柱出口特氟隆管. 用RH-RG缓冲液B6冲洗10 min进行再生，再用缓冲液B1冲洗30 min，完成后将分析柱恢复正常流向，然后运行泵1，仍然弹出“泵1压强过高”的提示.最后，通过重新填充分析柱解决了问题. 因树脂价格昂贵，为避免造成损失，此操作需要小心谨慎，详见以下步骤.2.1 装柱工具玻璃棒、离心管、离心机等. 装柱工具一定要提前使用超纯水超声清洗，并用注射器清洗.2.2 试剂2 mol/L的HCl：将市售浓盐酸用蒸馏水稀释6倍. 2 mol/L 的NaOH：用烧杯称取氢氧化钠8 g，加水稀释，等溶液凉至室温后，转移定容至100 mL，存于聚乙烯试剂瓶中备用.丙酮和乙醇级别越高越好，如无色谱纯试剂，也可用国药的分析纯替代.2.3 树脂收集及清洗在柱温低于50 ℃时拆卸分离柱，拆下一端端帽后发现树脂明显变脏，用裁纸刀轻轻的去掉一层，重新连接分离柱，通过泵压把树脂冲洗出来(泵1流速设置为B1 0.999 mL/min)，收集至一空离心管中(如图1所示)，将分离柱金属外壳及两端端帽超声清洗.图1 树脂收集Fig. 1 Collection of resin把冲洗到离心管中的树脂进行离心，转速 5 000 r/min，离心5 min，弃去上清液(和树脂一同冲洗出的B1缓冲液). 向离心管中添加4～5倍量的丙酮(约10 mL)，用玻璃棒搅拌后离心(同时用丙酮冲洗玻璃棒)，转速5 000 r/min，离心5 min，弃去上清液，加入约10 mL超纯水搅拌，离心弃上清液，并重复2～3次. 向离心管中添加4～5倍量2 mol/L 的HCl，用玻璃棒搅拌后离心，转速5 000 r/min，离心5 min，弃去上清液，加入约10 mL超纯水搅拌，离心弃上清液，直到用普通pH试纸测试其pH值接近中性为止(或在5～6附近)，一般2-3次即可达到. 向离心管中添加4～5倍量2 mol/L 的NaOH，用玻璃棒搅拌后离心，转速5 000 r/min，离心5 min，弃去上清液，加入约10 mL超纯水搅拌，离心弃上清液，直到用普通pH试纸测试pH值接近8～9左右即可，一般洗2～3次即可达到.如清洗完成后无法立即重填柱子，可将清洗过的树脂加入少量B1缓冲液保存于冰箱中.2.4 填充分析柱拆开泵1 的出口，连接装柱工具. 因清洗过程中树脂会有损失，所以需要向清洗好的树脂中再添加少许新树脂. 将清洗好的旧树脂转移到装柱工具中(装柱工具总容量12.5 mL，树脂填充液添加至白色密封圈前约5 mm的位置)，转移完毕后重新连接装柱工具到泵1. 点击EZChrom 控制软件中的全自动装柱程序，设置压力为13 MPa. 把装柱工具和分离柱(如图2所示)斜向上，以排除柱中可能存在的气泡. 当没有气泡冒出后(约20 min)，放置如图3所示，开始填充分析柱. 当泵压上升至12.8 MPa时，等待60 min，即可拆开装柱工具及分离柱.图2 排除装柱工具中气泡Fig. 2 Remove air bubbles in packing tool图3 填充分析柱Fig. 3 Filling of analytical column拆下装柱工具后，用滤纸吸取分析柱另一端多余的水分，拧上端帽，安装至主机，泵1不再提示压强过高，实测氨基酸标准溶液，结果如图4所示. 由图4可见，设备运行正常.3 分析柱维护仪器一周以上不使用时，需要将分析柱的树脂用泵排出，并使用缓冲液B1浸泡，在4 ℃冰箱中保存，同时用蒸馏水清洗各个管路. 或每周使用手动清洗的方法：B6和R3缓冲液冲洗30 min，B1和R3缓冲液冲洗30 min. 需注意，冲洗后应将管路中的气泡排出干净，再将缓冲液泵接入分析柱. 由于样品中固形物、脂肪和蛋白质等污染物质的含量不同，分析柱使用寿命标准也不相同，当出现泵1压强过高、柱效降低等现象时，可考虑是否需要重填分析柱.图4 分析柱充填后标准溶液图谱Fig. 4 Standard solution map after refilling analytical column4 结语分析柱充填后，不仅解决了设备故障问题，分离度和重复性也有很大提高. 虽然重填分析柱可以恢复柱效，但是仪器的定期维护可降低重填的频率，维持较为稳定的仪器状态. 由于树脂价格昂贵，在充填树脂的过程中尤其要注意回收，避免浪费.仪器维修虽然可以利用说明书逐步推断故障原因，但在设备检查维修过程中，因元件较小，线路复杂，安装和拆卸错误会引起极大损失，因此操作时需格外小心谨慎. 在没有经验和技术支持的情况下，重填分离柱会有一定困难，为此将操作步骤进行记录与总结，以期为将来的工作和同行提供借鉴.参考文献:【相关文献】[1] 姜涛，冯永建，何学超，等. 氨基酸自动分析仪快速分析方法的研究[J].化学研究与应用, 2012,24(7):1159-1163.[JIANG Tao, FENG Yong-jian, HE Xue-chao, et al. Research on localized reagent and rapid analysis method of amino acid analyzer[J].Chemical Research and Application, 2012, 24(7):1159-1163.]。