氨基酸分析仪整理.ppt
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氨基酸测定仪测定操作规程1. 引言本操作规程旨在指导使用氨基酸测定仪进行氨基酸测定的操作流程,并确保准确、可靠地测定样品中氨基酸的含量。
2. 仪器和试剂准备•氨基酸测定仪•相应的试剂盒和标准品•电子天平•移液器和移液枪•显微镜和玻璃片3. 样品处理1.准备样品:选择需要测定氨基酸含量的样品,并记录每个样品的相关信息,如样品编号、来源等。
2.样品预处理:根据样品的特性,选择合适的预处理方法,如样品酶解、样品脱蛋白等,以保证测定结果的准确性。
3.样品稀释:根据测定方法的要求,将样品适当稀释,以确保在仪器检测范围内。
4. 仪器设置1.开启仪器:按照仪器的使用说明,正确开启氨基酸测定仪,并进行初始化操作。
2.设置参数:根据测定方法的要求,设置仪器的相应参数,如测定波长、积分时间等。
3.校准仪器:使用标准品进行仪器的校准,确保仪器的准确性和精确度。
5. 操作步骤1.取样和试剂加入:使用移液器或移液枪,取出预处理好的样品,加入试剂,并记录试剂的加入量。
2.反应和测定:将样品和试剂混合均匀,然后放入氨基酸测定仪中进行反应和测定。
确保每次测定都按照相同的时间进行,以保证结果的可比性。
3.数据记录与分析:根据仪器的测定结果,记录每个样品的氨基酸含量,并进行数据分析,如平均值、标准差等。
6. 结果计算与报告1.结果计算:根据仪器的测定结果和标准品的浓度,计算出样品中每种氨基酸的含量。
这部分可以使用计算软件或者自行编写程序进行计算。
2.报告撰写:根据实验结果,撰写相应的实验报告,并进行结果解释和结论汇总。
7. 安全注意事项•在操作过程中,严格遵守实验室的安全操作规程,佩戴实验室必要的防护用品。
•注意试剂的储存和使用方法,避免接触皮肤和吸入。
•避免样品交叉污染和仪器污染,每次操作后清洗仪器和工作台面。
8. 管理和维护1.仪器管理:定期对仪器进行维护和保养,保持仪器的良好状态。
如清洁仪器外壳、调试仪器等。
2.试剂管理:根据试剂的要求进行存储和保管,防止试剂过期或受污染。
氨基酸自动分析仪氨基酸是蛋白质的组成成分,是蛋白质化学研究的主要内容之一。
蛋白质是一切生命物质的基础,因此,探讨和揭示生命现象的发生、生长、新陈代谢、遗传变异过程,都与氨基酸的研究有关。
随着近代物理学、化学和电子学的飞速发展,氨基酸的分析技术亦在不断更新。
氨基酸分析仪是本世纪50年代研制的,仅40多年,已发展到现在的进样、分离、检测和数据处理全部自动化的程度。
检出量由微克分子到毫微克分子,分析时间由原来的24小时到现在的半个小时,分析技术的提高促进了其他科学领域的发展。
一、氨基酸自动分析仪的进展用于氨基酸分析的方法很多,有纸色谱法、柱色谱法、薄层色谱法、电泳法及气相色谱法等。
一般认为离子交换柱色谱法是较为精确的检测方法,氨基酸分析仪就是在此基础上研制成功的。
1951年Moor和Stein采用离子交换树脂色谱,用茚三酮试剂显色和分光光度计检测而设计,后来在Spaekman的协助下,使分析操作自动化。
迄今氨基酸分析仪的条件和自动程度有了很大的改观,其特点主要表现以下几个方面。
⒈树脂粒径减小近年来制成的小颗粒球状树脂,使氨基酸分析仪得到很大改进。
由于树脂粒径减小就对应地增加等量树脂的总面积,使现在少量树脂达到过去大量树脂的分离效果,从而减小了树脂柱的内径和体积,节省了试剂用量,缩短了分析时间。
树脂的粒径从200→20→10→5µm。
⒉色谱柱内径缩小树脂粒径减小使填充树脂床的色谱柱内径减小,由过去的粗长柱变为微柱。
色谱柱内径的变化为18→6→2.8→1.75mm。
⒊输压泵压力增高一般氨基酸分析仪采用低压泵,其施加于输液的压力只有几9.80665×104Pa,以后增加至几十9.80665×104Pa,现在发展到2068×104Pa。
⒋分析时间缩短由于树脂粒径的改善,色谱柱内径缩小和泵压增高,使分析时间大大缩短。
蛋白质水解液的分析时间从过去的24小时缩短到现在的半个小时左右。
氨基酸分析仪原理
氨基酸分析仪的原理可以分为两个基本部分:色谱分离和检测。
首先是色谱分离。
氨基酸分析仪使用液相色谱法进行氨基酸的分离。
将待测样品中的氨基酸与特定的试剂反应生成衍生化合物,提高氨基酸的稳定性和检测性能。
然后,样品溶液经过进样装置进入液相色谱柱。
液相色谱柱是由高效分离固定相填充的管状设备。
不同氨基酸根据其化学性质和物理性质在固定相上的分配系数不同,因此会以不同的速率通过色谱柱,实现氨基酸的分离。
其次是检测。
液相色谱柱通过检测器与数据处理系统连接。
最常用的检测方法是紫外光检测法。
在紫外线的激发下,氨基酸会发生吸收,产生特定的吸收峰。
检测器可以测量样品中吸收光强的变化,并转化为电信号,通过数据处理系统进行处理和分析,最终得到各个氨基酸的浓度。
在氨基酸分析仪中,还可以使用其他检测方法,如荧光检测法或融合球束电泳等,以满足不同实验需求。
但无论采用何种检测方法,氨基酸分析仪的核心原理仍然是通过色谱分离和检测来实现氨基酸的定量分析。