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日立氨基酸分析仪操作步骤 (1)日立氨基酸分析仪简介 (3)日立氨基酸分析仪操作注意事项 (4)日立氨基酸分析仪操作步骤1、开机：计算机开机及仪器开机。
2、创建新项目：打开软件→“项目”→“创建新项目”→填名称和路径，两个“□”打钩，点“启用程序”→“确定”→将D盘Method文件夹的6个方法复制到F盘Method文件夹。
3、泵的排气：“仪器”→“启动”和/或“离线启动”→关掉弹出窗口→点左下角“控制”→“仪器状态”→“Connet”→待左上角灰色框显示“Idle”，点“OPTION”→点Pump 1的“Purge”→ B1：B2：B3：B4 = 25：25：25：25 →“Start”→手动打开泵1开关（逆时针旋转90°）→“确定”→点Pump 2的“Purge”→R1：R2：R3 = 34：33：33 →“Start”→手动打开泵2开关→“确定”→待泵2的废液管液体无气泡，点Pump 2的“Purge”→拧紧泵2开关→点Pump 1的“Purge”→B5：B6 = 50：50 →“Start”→“确定”→待泵1的废液管液体无气泡，点Pump 1的“Purge”→拧紧泵1开关。
4、进样器的排气：“L 8900”→“Autosample”→“Sampler Wash”→“OK”→重复排气，直到进样器无气泡。
5、创建序列：“帮助”→“仪器向导”→“创建序列”→选方法“PH 4.6×60-2622”→“打开”→“下一步”→“样品”命名，加后缀→“数据文件”命名，选“样品ID”，加后缀“日期与时间”→填样品数（样品数= n+3，n为样品个数）→重复次数“1”→“下一步”→输入第一个样品瓶的编号→进样量“20”μL →“下一步”→“下一步”→“完成”→更改第一针方法为“PH 4.6×60-2622（Stand-by）”→更改第二针方法为“PH 4.6×60-2622（RG）”→更改样品瓶序号，与样品盘中一一对应→“文件”—“保存”—“序列”→命名文件夹→点“序列运行”。
日立L-8900全自动氨基酸分析仪样品前处理步骤（内部用）一、饲料样本中水解蛋白中氨基酸含量测定步骤（参考GB/T 18246-2000）1. 样品制备取具代表性的饲料样品，用四分法缩减分取25g 左右，粉碎并过。
.25m m孔径(60目)筛，充分混匀后装入磨口瓶中备用。
对于粗脂肪含量大于、等于5%的样品，需将脱脂后的样品风干、混匀，装入密闭容器中备用。
而对粗脂肪小于5%的样品，则可直接秤用未脱脂样品。
2. 氨基酸水解液制备（酸水解）称取含蛋白7.5 -25 mg的试样(约50~100 mg,准确至1 mg) 于20 mL水解管，加10.00 mL 酸解剂（6 mol/L HCl)，置液氮或干冰(丙酮)中冷冻。
然后，抽真空至7 Pa(-<5X1 0-'mm汞柱)后封口或充氮气封口。
将水解管放在110℃恒温干燥箱中，水解22~24 h。
冷却，混匀，开管，用水定容至50~100mL（保证上机液中总氨基酸浓度在50-250 nmol/mL），过滤，用移液管吸取1.0 mL 于真空干燥箱60℃蒸干，必要时，加少许水，重复蒸干1-2次（或50℃氮吹仪吹干，加少量水重复吹干2次）。
加入2 mL 0.02 mol/L HCl溶液，充分溶解，0.22 um滤膜过滤，上机。
二、血浆中游离氨基酸测定1. 样品制备采集约5 mL抗凝全血，4000 × rpm离心，获得血浆，检测前-20℃保存。
2. 分离游离氨基酸取血浆1.0 mL，加入1.0 mL 8%磺基水杨酸（8g磺基水杨酸溶于92mL的超纯水），4℃冰箱过夜，14000 × rpm 离心10 min，上清液过0.22 um滤膜，取约1 mL上机测定。
日立L-8900全自动氨基酸分析仪标准操作规程一. 目的为规范日立L-8900全自动氨基酸分析仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保氨基酸分析仪正常运转，特制定本程序。
二.适用范围本程序适用于日立L-8900全自动氨基酸分析仪。
三．责任1. 本程序的实施者为氨基酸分析仪操作者，各实验室负责人对本程序的实施情况进行监督。
2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由氨基酸分析仪操作者负责。
四. 内容1．联机（1）打开电脑。
（2）打开L-8900主机电源。
（3）双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。
1-1（4）在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击联机。
大约两分钟，初始化完毕。
中Uninitialized变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。
初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升，分离柱的温度会升到50℃。
如果打开反应柱的柱温控制，则温度大约20分钟升到135℃。
1-21-32、手动各组件控制操作（1）泵1和泵2点击，出现2-1的画面。
设置泵1，流量0.1ml/分钟，B6 100%。
点击打开泵1。
泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-1点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。
点击打开泵2。
泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-2（2）自动进样器点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。
2-3（3）分离柱柱温箱点击，出现2-4画面，设置柱温50℃，设置ON，打开柱温箱。
柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。
2-4（4）反应柱柱温箱点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。
柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。
2-5（5）钨灯点击，出现2-6画面，设置ON，打开钨灯。
钨灯打开后，背景颜色由灰色变为黄色。
2-63、编辑方法（1）Stand By 程序（a）依次点击、、出现3-1-1的画面。
全自动生化分析仪常规操作规程
1、开机检查试剂量是否充足，真空压力、水压、空气压力是否处在正常范围。
2、根据不同厂家仪器的操作要求安装试剂。
3、按照要求完成定标程序
4、生化室内质控
5、样本运行
6、审核病人报告：对每个病人报告逐一进行审核。
超过生化危急值必须复查，并立即向医生或病房电话报告。
全自动生化分析日常维护保养及使用安全事项
1、周保养：擦拭各样本针、试剂针：先按STOP键，然后用75%酒精擦拭，做完后按照操作要求“复位”。
2、月保养
（1）检查更换比色杯冲洗站上的小橡皮拭。
（2）清洗流动池
（3）清洗样本针、试剂针、搅拌针
（4）检查CL定标相关的SPAN值，根据需要保养或者更换CL电极。
3、根据仪器要求，更换缓冲液、样本、试剂注射器的活塞、K、Ca电极
4、做好仪器使用及保养的记录，以便核查。
日立L-8900全自动氨基酸分析仪简易操作规程一、联机1、打开电脑。
2、打开主机电源。
3、双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。
1-14、在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击联机。
大约两分钟，初始化完毕。
中Uninitialized变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。
初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升。
分离柱的温度会升到50℃。
1-21-3二、手动各组件控制操作1、泵1和泵 2点击，出现2-1的画面。
设置泵1，流量0.ml/min，B1 100%。
点击打开泵1。
泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-1点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。
点击打开泵2。
泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-22、自动进样器点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。
2-32-43、反应柱柱温箱点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。
柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。
2-52-6三、编辑方法1、依次点击、、出现3-1-1的画面。
3-1-12、选中，点击。
再依次点击、，出现3-1-2的画面。
3-1-23、在设置中选中各个柱，其余参数默认。
4、将方法另存为L8900分析方法，文件名及路径均可自选。
注意一定不要覆盖原来的方法，一定得另存。
注意将梯度设为3-3-1所示，其余参数默认。
3-3-12、保存方法。
四、编辑Sequence1、依次点击、、，出现4-1画面。
选中，其余参数默认。
4-12、点击，出现4-2画面，根据需要填写各个参数。
4-23、点击，出现4-3画面，根据需要填写各个参数。
4-34、点击，出现4-4画面，根据需要填写各个参数。
4-45、点击，出现4-5画面。
4-56、通过复制、编辑，最终将Sequence编辑如图4-6所示。
注意此时第一行是再生程序（RG），进样体积为0，Run Type是Unknown，第二行是标准样品，三行起是未知样。
氨基酸分析仪使用调试技术一、仪器安装调试仪器安装最好外接稳压器，安装安全闸防止突然停电造成难以排除的故障。
还要安装铜板地线，这样可使峰谱线稳定。
仪器各项技术指标的调试采用18种氨基酸混合标样（日本和光试剂公司H型氨基酸混合标准液）。
1. 基酸分辨率的检测该仪器要求苏一丝氨基酸分辨率为70%以上，甘-丙氨基酸分辨率为80%以上，采用5个标样经检测苏-丝氨基酸分辨率为85%以上，甘一丙氨基酸分辨率为以95%上（试验数据表略）。
2. 氨基酸峰位重现性检测：5个标样连续多次检测，丙氨酸最高和最低出峰保留时间不超过1分钟，精氨酸出峰时间最高和最低偏差在1%以内（试验数据表略）。
3. 氨基酸蜂面积重现性检测：5个标样、经多次检测甘氨酸和丙氨酸峰面积重现性编差平均值均达仪器指标2.5%以下（数据表略）。
4. 仪器重复性检测：仪器分离柱重新装树脂后，对10个标样进行检测,，17种氨基酸（不包括氨峰）的出峰保留时间（t）和峰面积（A）的变异系数（CV）值列表1。
表1看出种17氨基酸值均在以1%内，说明各种氨基酸峰面积再现性较好，仪器重复性好。
二、不同样品氨基酸含里测定1. 仪器检测原理和方法：该分析仪不锈钢分离柱内装有专利2619混合离子交换树酯（Hitachi Cuiuomion-Exchange Resin），根据离子吸附交换的原理,，样品用6摩尔盐酸水介法处理后，经自动进样器定量，然后进入分离柱，用流量稳定的泵1输送规定的缓冲液，按事先编好的程序卡规定的程序自动淋洗，样品水介后的酸性、中性和碱性氨基酸分别从分离柱上被洗脱下来，各种氨基酸分次与泵2输送的茚三酮显色液在混合器中充分混合，在温度为100℃左右的反应浴中进行显色，生成紫色色素Dikepohydrindlidene Dikerohydrinaomine（DrDA），此紫色发色液经单色分离器的分光光度计，用570 纳米和440 纳米两个注长连续检测，得到的吸光度进行信号放大，记录仪自动绘出各神氨基酸峰谱，以标准氨基酸峰谱为基准，采用峰面极H·W 法进行结果计算，或通过数据处理系统进行计算打印，得出各种氨基酸含量。
日立L-8900全自动氨基酸分析仪简易标准操作规程-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN日立L-8900全自动氨基酸分析仪标准操作规程一. 目的为规范日立L-8900全自动氨基酸分析仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保氨基酸分析仪正常运转，特制定本程序。
二.适用范围本程序适用于日立L-8900全自动氨基酸分析仪。
三．责任1. 本程序的实施者为氨基酸分析仪操作者，各实验室负责人对本程序的实施情况进行监督。
2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由氨基酸分析仪操作者负责。
四. 内容1．联机（1）打开电脑。
（2）打开L-8900主机电源。
（3）双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。
1-1（4）在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击联机。
大约两分钟，初始化完毕。
中Uninitialized变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。
初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升，分离柱的温度会升到50℃。
如果打开反应柱的柱温控制，则温度大约20分钟升到135℃。
1-21-32、手动各组件控制操作（1）泵1和泵2点击，出现2-1的画面。
设置泵1，流量分钟，B6 100%。
点击打开泵1。
泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-1点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量分钟，R3 100%。
点击打开泵2。
泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-2（2）自动进样器点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。
2-3（3）分离柱柱温箱点击，出现2-4画面，设置柱温50℃，设置ON，打开柱温箱。
柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。
2-4（4）反应柱柱温箱点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。
柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。
2-5（5）钨灯点击，出现2-6画面，设置ON，打开钨灯。
钨灯打开后，背景颜色由灰色变为黄色。
2-63、编辑方法（1）Stand By 程序（a）依次点击、、出现3-1-1的画面。
3-1-1（b）选中，点击。
再依次点击、，出现3-1-2的画面。
3-1-2（c）在设置中选中各个柱（也可以不选），其余参数默认。
（d）将方法另存为Stand-By，文件名及路径均可自选。
注意最好不要覆盖原来的方法，最好另存方法。
（2）再生程序如同Stand By 程序，只是选中而已。
将方法另存为RG。
（3）分析程序（a）如同Stand By 程序，选中，参数默认，将方法另存为Analyze。
4、编辑Sequence（1）依次点击、、，出现4-1画面。
选中，其余参数默认。
4-1（2）点击，出现4-2画面，根据需要填写各个参数（未知样品的个数、未知样品重复次数等）。
4-2（3）点击，出现4-3画面，根据需要填写各个参数（标样和未知样品的第一个瓶号，增量、进样体积等）。
4-3（4）点击，出现4-4画面，根据需要填写各个参数（标样品的个数、标样的重复次数等）。
4-4（5）点击，出现4-5画面。
4-5（6）通过复制、编辑，最终将Sequence编辑如图4-6所示。
注意此时第一行是升温程序（Stand-By），第二行是再生程序（RG），两行的进样体积均为0，Run Type是Unknown，第三行是标准样品，四行起是未知样。
（7）将Sequence另存为Test。
5、采集数据点击Control、Sequence Run，运行Sequence Test。
数据采集完后，机器自动进入清洗程序。
清洗一个小时后，自动关泵，关灯，关柱温箱。
6、关机点击断开连接，关闭程序，关闭主机电源。
7、试剂的准备反应液R1、R2：醋酸钠(CH3COONa·2H2O)、冰醋酸(CH3COOH)、茚三酮(C9H6O4)、丙二醇甲醚（CH3CH(OH)·CH2OCH3）、硼氢化钠（NaBH4）缓冲液B1到B6：柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)、柠檬酸(C6H8O7·H2O)、氯化钠(NaCl)、无水乙醇(C2H5OH)、氢氧化钠(NaOH)、硫代双乙醇（硫二甘醇）(S(C2H4OH)2)、苯甲醇（）、brij-35(聚氧乙烯十二烷基谜)、辛酸(C7H15COOH)试剂建议用优级纯的。
8．出峰情况Asp：天门冬氨酸 Thr：苏氨酸 Ser：丝氨酸 Glu：谷氨酸Pro：脯氨酸 Gly：甘氨酸 Ala：丙氨酸 Cys：胱氨酸Val：缬氨酸 Met：蛋氨酸 Ile：异亮氨酸 Leu：亮氨酸Tyr：酪氨酸 Phe：苯基丙氨酸 Lys：赖氨酸 NH3：氨气His：组氨酸 Trp：色氨酸 Arg：精氨酸9. 仪器使用注意事项（1）氮气压力：仪器需要的压力为—，压力过高会损坏仪器。
（2）为避免堵塞，注意泵1泵2的打开顺序。
先开泵1，再开泵2。
泵1用B6100%，分钟；泵2用R3100%，分钟。
（3）电脑严禁更改设置，严禁安装其他程序，严禁上网。
注意避免染上病毒。
因软件需要注册，如果操作系统发生故障，请通知天美公司。
（4）进样浓度范围：—10 nmol，过高的浓度会影响分析结果，且容易堵塞反应柱。
（5）注意检查仪器泵的压力是否正常。
（6）计划长期不用可以用B5清洗泵的流路。
但最好只清洗泵头，即开泵时最好将排放阀打开。
10. 样品的前处理准备想做测试的样品，在开动氨基酸分析仪之前，需要进行适合该项检测目的的处理，在这上分有两大系统，一个是将氨基酸以及和它有关连的化合物为对象对游离氨基酸的测定法（以下称生物液分析法），另一个是由蛋白质加水分解而得到的氨基酸对它的分析法（以下称蛋白质加水分解物分析法）在此对其中的几个作介绍。
另外，作为原则请用的过滤器对样品过滤。
（1）生物液分析法的前处理：主要目的是做氨基酸成分的提取（萃取），除去蛋白质以及不溶性物质。
（a）血液①把血液用7,000~10,000 rpm(7000~10000 G)离心分离15分钟②在澄清液中加入5~10%三氯醋酸，稀释2~3倍。
③用7,000~10,000 rpm（7000~10000 G）离心分离15分钟。
④将澄清液作为样品。
①剪开滤纸，沿着离心管的管壁放入（例如：②加入的1%三氯醋酸③用超声波清洗器震动2分钟④用7,000~10,000rpm（7000~10000G）离心分离15分钟⑤用的过滤器将澄清液过滤，使用微量小玻璃瓶装进自动进样器①在原尿中加入1%三氯醋酸再稀释2~5倍（由于有异常的尿有大量的氨基酸出来，所以要提高稀释倍率）。
②有混浊时，进行过滤或者离心分离。
③把得到的液体的~作样品。
①用1~5%三氯醋酸溶液稀释10倍②用7,000~10,000rpm（7000~10000G）离心分离15分钟③把澄清液作样品（e）酱油、酒等设有沉淀物的水系食品类①在稀释做样品（和PH的关系在3倍以上）①用研钵将样品搓碎，或是截断成细小状。
②在含有乙醇的20%~30%水中让其散开（1g样品/3ml乙醇/水）③在水浴器上用80℃，约20分钟以上提取（萃取）。
④将澄清液过滤提取，提取（萃取）要反复3次。
⑤使用漏斗将剩下的样品用酒精清洗。
⑥由④以及⑤的液体在水浴器上除去酒精。
⑦往残留下来的水溶液中加入乙醚提取（萃取）后，采取水层⑧把水层减压干硬⑨在 N HCI给一定的容量（2）蛋白质加水分解物分析法的前处理把混合了药液的氨基酸，以及用蛋白质加水分解得到的氨基酸作对象。
（a）药液①由 N HCI稀释3倍以上（根据氨基酸的浓度）作样品，包含有糖、核酸、维生素等水溶性物质，也不妨碍。
（b）盐酸加水分解①将样品在加水分解用的玻璃试管上秤②加入6N-HCI③在减压状态下封管，此时，若置换N2的话，将更正确。
④在加水分解炉中，用110℃、22小时加热分解。
分解时间以上面为准，根据目的而变更。
⑤减压干硬，除去HCI⑥在稀释一定的容量作样品（c）以回收Trp为目的的加水分解①代替6N-HCI的是使用4N甲烷磺酸，依从前面所述，盐酸加水分解的方法让其分解。
②分解后，由于不能减压干硬，加入4N-NaOH, 在PH=2调节。
③在给一定的容量作样品。
①精确秤量1~2mg样品。
②加入2ml过蚁酸，在0℃放置4~24小时。
③添加48%。
④减压干硬。
⑤依从盐酸加水分解的方法，减压进行到干硬为止。
⑥加入1ml的a2N-NaOH，放置1小时。
⑦在~a1NCHI，进行PH调制和给一定的容量。
五．仪器维护与保养1、样品处理严格按照程序处理样品，特别对生理体液样品，更需小心谨慎，加沉淀剂一定要过量，离心所用时间宁长勿短，最后，一定要用μm超滤膜进行超滤后方可上机，以防树脂的污染和柱头的堵塞。
2、缓冲液配置缓冲液配置后首先用360目的尼龙沙网过滤缓冲液（粗滤），然后，用全玻璃的溶液过滤器装上μm的微孔滤膜进行超滤。
配制茚三酮的缓冲液也应按上述程序进行。
三是进样器洗涤液关。
工作时，洗涤液要每日必换。
3、管路及部件的清洗经常需要进行清洗的管路和部件是吸样泵阀及泄液管的管路。
吸样泵阀的清洗步骤：将吸样泵止逆阀取下，放入超声波清洗池中，加30度左右的温水和几滴洗洁精，超声清洗10～15分钟，如发现仍不干净，可将阀体拆开清洗，冲洗干净后，再组装上（注意安装方向）。
吸样泵泄液管的清洗：在每次关机时，可将泄液管从阀上卸下，用玻璃注射器（50ml 以上并选用适当型号的针头）先用去离子水注射清洗，再用75%乙醇注射清洗。
如果管路中沉积物太多，不易清洗干净，或管路已完全堵塞，可将泄液管盘起放入超声波清洗池中，40度温水超声清洗10～15分钟，边清洗边用注射器反复推和抽，使管路里面的沉积物逐渐松动，最后完全清除。
必要时还可配合细铜丝等工具的使用，将沉积物捅开并清洗。
在突然断电又不能在短时间内来电的情况下，为了防止反应盘管中发生堵塞，也可采用注射器注入去离水的方法清洗反应盘管。
具体方法是：将混合器（三通）与反应盘管接合部卸下，选用适当型号的针头插入盘管一端，用注射器（50ml以上）注入去离水。
如压力太大，可将反应盘管后部的倍压线圈拆下另行清洗。
待反应液全部被去离子水置换出来后，再将管路接好。
注意：1、针头必须水平插入，以防刺破反应盘管的管壁；2、凡是有塑料管连接的部位，螺帽都需适度旋紧，以防管壁变形，使阻力增大。
4、分析柱的保养分析柱及去氨柱的保养分两个方面：1、样品及试剂的处理以防污染和堵塞，在前面已经提及；2、分析柱的再生。
合理的再生能有效的清除树脂及过滤器中的残余物，以减少因树脂污染和过滤器堵塞而引起的噪声，使仪器能够经常在较低的压力下工作，降低泵的工作负载，延长分析柱的使用寿命。
再生的具体做法是：开机后运行吸样泵清洗程序（4-2-0），然后，运行分析柱再生程序（1-6-0；2-10-0）。
