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药品质量标准分析方法验证(中国兽药杂志)

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4.4分析方法的验证

4.4分析方法的验证
第四节 分析方法的验证
药品质量标准分析方法验证
目的
证明采用的方法适用于相应检测要求
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证后 方能最终确定；
在药品生产工艺变更、制剂的组分改变、原分 析方法进行修订时，质量标准分析方法也需进 行验证，验证过程也称为方法再验证，再验证 的内容可以全面验证或部分验证。
目视法：非仪器分析的方法采用目视法确定检测限。 即用已知浓度的被测物，试验出可能被检出的最低 浓度或最低量。
信噪比法：对能显示基线噪音的仪器分析方法，可 将已知低浓度的被测组分溶液与空白样品的测定结 果进行比较，按信噪比（S/N）确定可被检出的最 低浓度。一般信噪比为3：1（S/N=3）或2：1时 相应的浓度或注入仪器的量确定检测限；
常采用强制破坏试验， 考察药物与降解产物的分离度； 如方法不够专属， 应采用多个方法予以补充。
强制破坏试验
检测限（LOD）
是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量。 LOD是一种限度检查效能指标，它反应方法是
否具有灵敏的检测能力，即是否具备足够的灵 敏度。它无需准确定量。
检测限（LOD）的方法
线性
两个参数是否有线性关系需要通过试验来确定。 考察的方法是配制一系列不同浓度的测定组分溶 液（至少5份），分别测定其响应值，用最小二乘 法以响应值对浓度进行线性回归，即可计算出相 关系数r和a、b的值。相关系数r接近于1，说明线 性关系好。
线性
8.E+0 6
6.E+0 6
4.E+0 6
2.E+0 6
在建立分析方法时，应对以上条件进行试验，以 考察方法的耐用性；
方法验证示例——HPLC法检查阿 司匹林游离水杨酸

药品质量标准方法学验证

药品质量标准方法学验证

大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
分析方法的验证
2．杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如 不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另 一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验 证的方法。在不能测得杂质或降解产物的响应因子 或不能测得对原料药的相对响应因子情况下，可用 原料药的响应因子。应明确表明单个杂质和杂质总 量相当于主成分的重量比（%）或面积比（%）。
分析方法的验证
八、耐用性
耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的 承受程度，为把方法用于常规检验提供依据。开始研究分析 方法时就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在 方法中写明。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品 的提取次数、时间等。液相色谱法中典型的变动因素有：流 动相的组成和pH值，不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱， 柱温，流速等。气相色谱法变动因素有：不同厂牌或批号的 色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样口和检测器 温度等。
药品质量标准分析方法的验证
分析方法的验证
药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用 的方法适合于相应检测要求。在建立药品质量 标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺 变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订 时，则质量标准分析方法也需进行验证。方法 验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起 草说明或修订说明中。
分析方法的验证
需验证的分析项目有：鉴别试验，杂质定 量检查或限度检查，原料药或制剂中有效 成分含量测定，以及制剂中的其他成分 （如防腐剂等）的测定。药品溶出度、释 放度等功能检查中，其溶出量等的测试方 法也应作必要验证。
分析方法的验证
• 验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中 间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、 线性、范围和耐用性。视具体方法拟订验证的内 容。附表中列出的分析项目和相应的验证内容可 供参考。

药品质量标准分析方法验证课件

药品质量标准分析方法验证课件
方案制定
制定详细的实验操作规程和注意事项，确保实验过程规范、 准确、可靠。
实验环境的控制与安全防护
环境控制
确保实验室的环境条件符合分析方法 的要求，如温度、湿度、清洁度等， 并对其进行监测和记录。
安全防护
根据实验过程中可能产生的危险因素 ，制定相应的安全防护措施，包括个 人防护用品的配备、废弃物的处理等 方面的内容。
数据处理与分析
数据分析
对分析结果进行解释和讨论，以评估方法的可靠性和准 确性。
使用适当的统计方法对数据进行处理和分析，如回归分 析、方差分析、主成分分析等。
根据分析结果提出改进措施和建议，以提高方法的性能 和可靠性。
实验结果的评价与判定
实验结果评价 根据预先设定的标准或参考值，对实验结果进行评价和比较。
验证的目的和意义
确保分析方法的准确性和可靠性
01
通过验证，可以确定分析方法是否准确可靠，能否用于药品的
质量控制。
符合法规要求
02
药品质量标准分析方法验证是法规要求的一部分，通过验证可
以证明分析方法符合相关法规要求。
提高药品质量控制水平
03
通过验证，可以不断完善和优化分析方法，提高药品质量控制
水平。
药品质量标准分析方法 验证课件
CONTENTS
目录
• 药品质量标准分析方法验证概述 • 药品质量标准分析方法验证的准备工作 • 药品质量标准分析方法验证的具体实施 • 药品质量标准分析方法验证的常见问题与解
决方案 • 药品质量标准分析方法验证的案例分析
CHAPTER
01
药品质量标准分析方法验证概 述
案例二：气相色谱法验证案例
总结词
气相色谱法适用于易挥发、热稳定性好的物质的分析，具有高分离效能、高灵敏度、高 选择性等优点。

药品质量标准分析方法验证

药品质量标准分析方法验证
法 予 以补 充 。
线 性 系指 在 设 计 的范 围 内 ， 试 结 果 与 试 样 中 测
被 测 物 浓 度 直 接 呈 正 比关 系 的程 度 。 应 在 规 定 的 范 围 内 测 定 线 性 关 系 。 可 用 一 贮
备 液 经 精 密 稀 释 ， 分 别 精 密 称 样 ， 备 一 系 列 供 或 制
总 量 相 当 于 主 成 分 的 重 量 比 （ ） 或 是 面 积 比 （ ） Байду номын сангаас ， 。 １ ３ 数 据 要 求 在 规 定 范 围 内 ， 少 用 ９次 测 定 ． 至
准 确 度 系 指 用 该 方 法 测 定 的 结 果 与 真 实 值 或 参考 值 接 近 的程 度 ， 般 以 回 收 率 （ ） 示 。 准 确 一 表 度 应 在 规 定 的范 围 内建 立 。
准 确 度 的方 法 比较 结 果 。
结 果 进 行 评 价 ， 如 制 备 ３个 不 同 浓 度 的 样 品 ， 例 各 测 定 ３次 。应 报 告 已知 加 入 量 的 回 收 率 （ ） 或 测 ， 定 结 果 平均 值 与 真 实 值 之 差 及 其 可 信 限 。
２ 精 密 度
匀 度 检 查 ， 围 应 为 测 试 浓 度 的 ７ ～ １ ０ ， 据 范 ０ ３ 根
察杂质能否得到分离 。 在 杂 质 或 降 解 产 物 不 能 获 得 的 情 况 下 ， 将 含 可 有 杂质 或 降 解 产 物 的试 样 进 行 测 定 ， 另 一 个 经 验 与
计算 。 数 据要 求 ： 列 出 回 归 方 程 、 关 系 数 和 线 性 应 相
图。
７ 范 围
范围系指能 达到 一定 精 密度 、 确度 和 线性 ， 准

药品质量标准分析方法验证指导原则

药品质量标准分析方法验证指导原则

药品质量标准分析方法验证指导原则《中国药典》2015年版药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。

在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证.方法验证理由、过程和结果均应记载在药品质量标准起草说明或修订说明中。

生物制品质量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法，其中理化分析方法的验证原则与化学药品基本相同，所以可参照本指导原则进行，但在进行具体验证时还需要结合生物制品的特点考虑；相对于理化分析方法而言，生物学测定方法存在更多的影响因素,因此本指导原则不涉及生物学测定方法验证的内容。

验证的分析项目有：鉴别试验、限量或定量检查、原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中其他成分（如防腐剂等,中药中其他残留物、添加剂等）的测定。

药品溶出度、释放度等检查中，其溶出量等的测定方法也应进行必要验证.验证指标有：准确度、精密度(包括重复性、中间精密度和重现性)、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。

在分析方法验证中，须采用标准物质进行试验。

由于分析方法具有各自的特点，并随分析对象而变化，因此需要视具体方法拟订验证的指标.表1中列出的分析项目和相应的验证指标可供参考。

一、准确度准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率(％)表示。

准确度应在规定的范围内测定。

1.化学药含量测定方法的准确度原料药采用对照品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较.制剂可在处方量空白辅料中，加入已知量被测物对照品进行测定。

如不能得到制剂辅料的全部组分，可向待测制剂中加入已知量的被测物对照品进行测定，或用所建立方法的测定结果与已知准确度的另一种方法测定结果进行比较。

准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。

2.化学药杂质定量测定的准确度可向原料药或制剂处方量空白辅料中加入已知量杂质进行测定。

药物分析-药品质量标准分析方法验证

药物分析-药品质量标准分析方法验证
图中应注明各组分的位置，色谱法中分离度应 符合要求。在能获得杂质的情况下，可加到试样 中，考察对结果的干扰。在杂质和降解物不能获 得的情况下，可用以验证方法和药典方法进行对 照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方 法。
四、检测限（limit of detection, LOD)
是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或 量，是限度检验指标。它无需测定，只要指出高 于或低于该规定的浓度或量即可。
HPLC法：制备一个标准系列，浓度点n=5～7; 以C对h或A或与内标物的峰面积之比， 建立回归方程r ＞ 0.9999。
指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测 定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产 物进行定量测定时，要求LOQ.常用信噪比法确定 定量限，一般以S/N=10时相应的浓度进行测定。
六、线性
是指在设定的范围内，测试结果与试样中被 测物浓度直接呈正比关系的程度。
UV法：首先制备一个标准系列，浓度点n =5; A = 0.3～0.7 建立回归方程C =aA+b ;r＞0.9999
2
（一）验证内容：重复性、中间精密度及重现性
1. 重复性 在相同条件下,由一个分析人员测定 所得结果的精密度.
2. 中间精密度 在同一个实验室，不同时间由 不同分析人员用不 同设备测定结果的精密度。
3. 重现性 在不同实验室由不同分析人员测定 结果的精密度。
（二）数据要求
应报告S或SD、RSD和可信限。用统计学 的可信性分析(t或f）。
第三节 药品质量标准分析方法验证
一、准确度 是指用该方法测定结果与真实值或参考值
接近的程度，用回收率表示 （一）含量测定方法的准确度
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行 测 定；或与已建准确度的另一方法测定的结果 进行比较。

9101药品质量标准分析方法验证指导原则

回收率限度（ ％) 98 〜 101 95 〜 102 92 〜 105 90 〜 108 85 〜 110 80 〜 115 75 〜 120 70 〜 125
待测定成分含量 100%
10% 1%
0. 1 %
可 用 对 照 品 进 行 加 样 回 收 率 测 定 ，即 向 已 知 被 测 成 分 含 量 的 供 试 品 中 再 精 密 加 人 一 定 量 的 被 测 成 分 对 照 品 ，依 法测 定 。用 实 测 值 与 供 试 品 中 含 有 量 之 差 ，除 以 加 入 对 照 品 量 计 算 回 收 率 。在 加 样 回 收 试 验 中 须 注 意 对 照 品 的 加 人 量 与 供 试 品 中 被 测 成 分 含 有 量 之 和 必 须 在 标 准 曲 线 线 性 范 围 之 内 ；加 人 对 照 品 的 量 要 适 当 ，过 小 则 引 起 较 大 的 相 对 误 差 ，过 大 则 干 扰 成 分 相 对 减 少 ，真 实 性 差 。 回 收率 ％ = ( C _ A ) /S X 100 % 式 中 A 为供试品所含被测成分量；
中 国 药 典 2 0 1 5 年版
9 1 0 1 药品质量标准分析方法
验证指导原则
药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适 合 于 相 应 检 测 要 求 。在 建 立 药 品 质 量 标 准 时 ，分析方法 需 经 验 证 ；在 药 品 生 产 工 艺 变 更 、制 剂 的 组 分 变 更 、原分析方法 进 行 修 订 时 ，则 质 量 标 准 分 析 方 法 也 需 进 行 验 证 。方法验证 理 由 、过 程 和 结 果 均 应 记 载 在 药 品 质 量 标 准 起 草 说 明 或 修 订 说 明 中 。生 物 制 品 质 量 控 制 中 采 用 的 方 法 包 括 理 化 分 析 方 法 和 生 物 学 测 定 方 法 ，其 中 理 化 分 析 方 法 的 验 证 原 则 与 化 学 药 品 基 本 相 同 ，所 以 可 参 照 本 指 导 原 则 进 行 ，但 在 进行具 体验 证 时 还 需 要 结 合 生 物 制 品 的 特 点 考 虑 ；相 对 于 理 化分析方法 而 言 ，生 物 学 测 定 方 法 存 在 更 多 的 影 响 因 素 ，因 此 本指导原 则不涉及生物学测定方法验证的内容。 验 证 的 分 析 项 目 有 ：鉴 别 试 验 、限 量 或 定 量 检 查 、原料 药 或 制 剂 中 有 效 成 分 含 量 测 定 ， 以 及制剂中其 他 成 分 ( 如防腐 剂 等 ，中药中其 他 残留物、添 加剂等 ) 的测定 。药品溶出度、释 放 度 等 检 查 中 ，其溶出量等的测定方法 也 应 进行 必要验证 。 验 证 指 标 有 ：准 确 度 、精 密 度 （ 包 括 重 复 性 、 中 间 精密 度和重现性） 、专 属 性 、检 测 限 、定 量 限 、线 性 、 范 围 和 耐 用 性 。在 分 析 方 法 验 证 中 ，须 采 用 标 准 物 质 进 行 试 验 。 由于 分 析 方 法 具 有 各 自 的 特 点 ，并 随 分 析 对 象 而 变 化 ，因 此需 要 视 具 体 方 法 拟 订 验 证 的 指 标 。表 1 中 列 出的分析 项 目和 相 应 的验证指标可供参考。 表 1

药品质量标准分析方法验证


耐用性
• 定义：测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度， 说明分析方法在常规使用时的可靠性。是衡量实验室和工作人员 之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。 • 分析方法重现性的测定是通过在不同的实验室内不同的实验者对 同一样品的分别测试而获得的。（获得的这种再与正常检定下的 精密度进行比较，从而确定该法的耐用性，或称粗放度）。 • 典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、时间等 • 液相色谱中典型的变动因素有：流动相的组成和PH值，不同厂牌 或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等。
A
准确度
• 含量测定方法的准确度 • 原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结 果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。 • 制剂可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空
白辅料中加入原料药对照品的方法。
• 如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进 行测定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果。
应用
各种含量测定方法对效能指标的要求
• 容量分析法：用原料药精制品(含量>99.5％)或对照品 考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于0.2％； 进行回收率试验。回收率一般在99.7～100.3％之间。
• UV法：用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大 于1％。制剂的测定，回收率一般应在98％～102％之 间。线性：吸光度A一般在0.2～0.7，浓度点n＝5。用 浓度c对A作线性回归处理，得一直线方程，r应达到 0.9999(n＝5)，方程的截距应近于零。
精密度
• 定义：指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得 结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏 差(RSD)（变异系数，CV）表示。 • 用标准偏差或相对标准偏差表示时，取样测定次数应有统计学意 义，至少用6次结果进行（n ≥ 6）。 • 偏差（d）：测量值与平均值之差

第三章药品质量标准和分析方法验证


（二）重复性、中间精密度及重现性
1. 重复性
2. 中间精密度 3. 重现性
第三章 药品质量标准分析方法验证
第三章 药品质量标准分析方法验证
三、专属性
——在其他成分可能存在下，采用 的方法能准确测定被测物的特性。
第三章 药品质量标准分析方法验证
四、检测限（LOD )
——试样中被测物能被检测出的最低 浓度或量。 非仪器分析目视法 仪器分析方法 —— S/N=2:1或3:1
需验证的分析项目：

鉴别试验、杂质定量或限度检查


原料药或制剂中有效成分含量测定
制剂中其他成分的测定 药品溶出度、释放度等功能检查
第三章 药品质量标准分析方法验证
验证内容* ：
准确度 精密度 专属性 检测限
定量限
线性
范围
耐用性
第三章 药品质量标准分析方法验证
（一） 准确度（accuracy）
B. 醚类药物的含量测定 C. 检查甾体激素类药物中的氟 D. 检查甾体激素类药物中的硒 E. 芳酸类药物的含量测定
9．用HPLC测得两组分的保留时间分别为 8.0min和10.0min，峰宽分别为2.8mm和 3.2mm，记录纸速为5.0mm/min，求两峰的分 离度？
10.用直接滴定法测定阿司匹林原料药的含 量，若供试品的称样量为m（g)，氢氧化钠 滴定液的浓度为c（mol/L），消耗氢氧化 钠滴定液的体积为V（ml），1ml氢氧化钠 滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的阿司 匹林，求阿司匹林原料药的含量。
药物分析
第三章
药品质量标准 分析方法验证
基本要求
1、掌握分析方法验证的效能指标； 2、掌握各效能指标的含义、表示方法 及测定方法等。

兽用化学药物质量控制分析方法验证的几项内容

测定 ９次 ，报告 已知加 入 量 的 回收率 或 测定 结果 平
保证兽药安全有效 的基础和前提。为达到控制质量
的 目的 ， 要 多 角度 、 层 面 来控 制 产 品质 量 ， 就 需 多 也 是 说 要 对药 物 进行 多个 项 目测 试 ，来 全 面考 察 产 品
均值与真实值之差及其可信限。
１ 专 属 性
专 属 性 系 指在 其 他 成分 （ 如杂 质 、 降解 物 、 料 辅 等 ） 能存在下 ， 可 采用 的分 析方 法 具 备 正确 鉴 定 、 检 出被分 析物 质 的特性 。通 常 ， 在鉴别 、 杂质 检查 、 量 含 测 定 方法 中均应 考察 其 专属 性 。如 采 用 的方 法 不 够
汀 检 疫 检 验
兽用化学药物质量控制分析方法验证 的几项 内容
汪 海浴 （ 黑龙 江省和平牧场二腾管理 区畜牧兽医站 １３５ ） ６８ １
保 证兽 药 安全 、 效 、 量可 控是 兽 药研 发 和评 有 质 价应 遵 循 的基 本原 则 ，其 中对 兽 药进 行 质量 控 制 是 以回收率 试 验来 进行 验 证 。试 验 设计 需 考 虑在 规定 范围内 ， 制备 ３个 不 同浓 度 的样 品 ， 测 定 ３次 ， 各 即
度。
应在设计 的范围内测定线性关 系。可用贮备液
经 精 密稀 释 ， 分别 精 密称 样 ， 备被 测物 质 浓 度 系 或 制
列进 行测 定 ， 至少 制备 ５个浓 度 。以测得 的响 应信 号
定 量 限体 现 出分 析方 法 是 否具 备 灵 敏 的定 量检 测 能 力 。杂 质定 量 试验 ， 考 察方 法 的定 量 限 ， 需 以保 证含 量很少 的杂 质能够 被 准确测 出。
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精密度系指在规定的测试条件下 ,同一个均匀 样品 ,经多次取样测定所得结果之间的接近程度 。 精密度一般用偏差 、标准偏差或相对标准偏差表 示。
© 1994-2006 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
可采用光二极管阵列检测和质谱检测 , 进行纯度 检查 。 4 检测限
检测限系指试样中被测物能被检测出的最低 量 。常用的方法如下 。 4. 1 非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物 , 试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量 。 4. 2 信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方 法 ,即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测 出的信号进行比较 ,算出能被可靠地检测出的最低 浓度或量 。一般以信噪比为 3∶1 或 2∶1 时相应浓 度或注入仪器的量确定检测限 。 4. 3 数据要求 应附测试图谱 ,说明测试过程和 检测限结果 。 5 定量限
维因肉鸡分为 4 个组 ,即中药组 、马杜霉素组 、感染 血清白蛋白和血清总蛋白显著低于其他各组 ( P <
不给药组和不感染不给药组 ,每组 20 只 。中药组从 0. 05) ;卵囊攻击后 7 d ,中药组血液红细胞数显著低
1 日龄开始即投喂含 0. 1 %中草药复方制剂 (由绞股 于不感染不给药组 ( P < 0. 05) ,但显著高于感染不
在杂质可获得的情况下 ,对于含量测定 ,试样 中可加入杂质或辅料 ,考察测定结果是否受干扰 , 并可与未加杂质和辅料的试样比较测定结果 。对 于杂质测定 ,也可向试样中加入一定量的杂质 ,考 察杂质能否得到分离 。
在杂质或降解产物不能获得的情况下 ,可将含 有杂质或降解产物的试样进行测定 ,与另一个经验 证实了的或药典方法比较结果 。用强光照射 , 高 温 ,高湿 , 酸 、碱水解 , 或氧化的方法进行加速破 坏 , 以研究降解产物 。含量测定方法应比对二法 的结果 , 杂质测定应比对检出的杂质个数 , 必要时
2003 ,37 (2) :53～55/ 本刊编辑部 中国兽药杂志
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药品质量标准分析方法验证
本刊编辑部
[ 文献标识码 ] E [ 文章编号 ] 1002 1280 (2003) 02 0053 03 [ 中图分类号 ] R921. 2
[ 编者按 ] 为证明采用的方法适合于相应的检测要求 ,需进行药品质量标准分析方法验证 。编者 在编辑文章中常常注意到许多检测方法研究没有严格按照方法学的要求进行 ,使分析方法的可 信度大打折扣 。为此 ,编者将《中国药典》2000 年版附录中“药品质量标准分析方法验证”摘编于 下 ,供从事检测方法研究者参考 。
定量限系指样品中被测物能被定量测定的最 低量 ,其测定结果应具一定准确度和精密度 。杂质 和降解产物用定量测定方法研究时 ,应确定定量 限。
常用信噪比法确定定量限 。一般以信噪比为 10∶1 时相应的浓度或注入仪器的量进行确定 。 6线性
线性系指在设计的范围内 ,测试结果与试样中 被测物浓度直接呈正比关系的程度 。
条件要求苛刻 ,则应在方法中写明 。典型的变动因 素有 :被测溶液的稳定性 ,样品提取次数 、时间等 。 液相色谱法中典型的变动因素有 :流动相的组成和 pH 值 ,不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱 ,柱 温 ,流速等 。气相色谱法变动因素有 :不同厂牌或 批号的色谱柱 、固定相 ,不同类型的担体 、柱温 ,进 样口和检测器温度等 。
含量测定和杂质定量测定应考虑方法的精密 度。 2. 1 重复性 在规定范围内 ,至少用 9 次测定结 果进行评价 ,如制备 3 个不同浓度的样品 ,各测定 3 次 ,或把被测物浓度当作 100 % ,用至少测定 6 次的 结果进行评价 。 2. 2 中间精密度 为考察随机变动因素对精密度 的影响 ,应设计方案进行中间精密度试验 。变动因 素为不同日期 、不同分析人员 、不同设备 。 2. 3 重现性 当分析方法将被法定标准采用时 , 应进行重现性试验 。如建立药典分析方法时通过 协同检验得出重现性结果 ,协同检验的过程 、重现 性结果均应记载在起草说明中 。 2. 4 数据要求 均应报告标准偏差 、相对标准偏 差和可信限 。 3 专属性
验证内容有 :准确度 、精密度 (包括重复性 、中 间精密度和重现性) 、专属性 、检测限 、定量限 、线 性 、范围和耐用性 。视具体方法拟订验证的内容 。 表 1 中列出的分析项目和相应的验证内容可供参 考。 1 准确度
准确度系指用该方法测定的结果与真实值或 参考值接近的程度 ,一般以回收率 ( %) 表示 。准确 度应在规定的范围内建立 。 1. 1 含量测定方法的准确度 原料药可用已知纯 度的对照品或样品进行测定 ,或用本法所得结果与 已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较 。
中加入已知量杂质进行测定 。如果不能得到杂质 或降解产物 ,可用本法测定结果与另一成熟的方法 进行比较 ,如药典标准方法或经过验证的方法 。如 不能测得杂质或降解产物的相对响应因子 ,则可用 原料药的响应因子 。应明确证明单个杂质和杂质 总量相当于主成分的重量比 ( %) ,或是面积比 ( %) 。 1. 3 数据要求 在规定范围内 ,至少用 9 次测定 结果进行评价 ,例如制备 3 个不同浓度的样品 ,各 测定 3 次 。应报告已知加入量的回收率 ( %) ,或测 定结果平均值与真实值之差及其可信限 。 2 精密度
制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进 行测定 。如不能得到制剂的全部组分 ,可向制剂中 加入已知量的被测物进行测定 ,或与另一个已建立 准确度的方法比较结果 。
如该法已建立了精密度 、线性和专属性 ,准确 度有时也能推算出来 ,不必再做 。 1. 2 杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂
表 1 检验项目和验证内容
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2003 ,37 (2) :53～55/ 本刊编辑部 中国兽药杂志
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限的 + 20 % ;杂质测定 ,研究时 ,范围应根据初步实 测 ,拟订出规定限度的 ±20 %。如果含量测定与杂 质检查同时测定 ,用百分归一化法 ,则线性范围应 为杂质规定限度的 - 20 %至含量限度 (或上限) 的 + 20 %。 8 耐用性
耐用性系指在测定条件有小的变动时 ,测定结 果不受影响的承受程度 ,为常规检验提供依据 。开 始研究分析方法时 ,就应考虑其耐用性 。如果测试
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中国兽药杂志 2003 ,37 (2) :53～55/ 本刊编辑部
在相同条件下 ,由一个分析人员测定所得结果 的精密度称为重复性 ;在同一个实验室 ,不同时间 由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度 ,称 为中间精密度 ;在不同实验室由不同分析人员测定 结果的精密度 ,称为重现性 。
应在规定的范围内测定线性关系 。可用一贮 备液经精密稀释 ,或分别精密称样 ,制备一系列供 试样品的方法进行测定 ,至少制备 5 份供试样品 。 以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图 ,观 察是否呈线性 ,再用最小二乘法进行线性回归 。必 要时 ,响应信号可经数学转换 ,再进行线性回归 计算 。
经试验 ,应说明小的变动能否通过设计的系统 适用性试验 ,以确保方法有效 。
核酸疫苗在动物疾病防治中的应用及其进展
减毒 、灭活疫苗 ,被称为第一代疫苗 。以后又研 制的亚单位疫苗被称为第二代疫苗 。减毒 、灭活疫 苗的潜在致病性和亚单位疫苗免疫反应的完全性迫 使人们继续寻找更为理想的免疫接种剂 。于是 ,被 称为第三代疫苗的核酸疫苗应运而生 。 ①核酸疫苗 产生的背景 。所谓核酸疫苗 ,即把外源性基因克隆 到真核质粒表达载体上 ,然后将重组的质粒 DNA 直 接注射到动物体内 ,使外源基因在活体内表达 ,产生 的抗原激活机体的免疫系统 ,引发免疫反应 。 ②核 酸疫苗的免疫机制 。核酸疫苗可以引发全面的免疫 应答 。近年来发现细菌 DNA 本身也是一种免疫佐 剂 ,可有效地激活免疫效应细胞 。 ③核酸疫苗在传 染病防治研究中的应用 。近年来有关质粒 DNA 疫 苗在人类及动物产生预防和治疗作用的研究报道不
断增加 ,应用范围也逐渐扩大 。在动物疾病的预防 和治疗方面 , 已经开发出抗绵羊和牛蓝舌病毒的 DNA 疫苗 ,加拿大和德国正在合作开发用于鲑鱼 、 真鳟 、甲壳纲动物和其它冷水鱼类的 DNA 疫苗 ,其 中有 5 种疫苗已完成初期试验工作 。④核酸疫苗的 优缺点 。虽然 DNA 疫苗可能会给某些疾病防治带 来一场根本性的变革 。然而 ,还有许多急待解决的 问题 ,如疫苗的生产工艺 、质量标准 、制剂 、效用 、安 全性等 。⑤核酸疫苗展望 。核酸疫苗的研究具有深 远意义 。可用于细菌 、病毒 、寄生虫等多种疾病的防 治 ,其多价 、高效 、廉价等优点使其潜在的应用价值 不可估量 。东北农业大学动物医学院的吕英等人撰 文对以上内容进行了介绍 。
药品质量标准分析方法验证的目的是证明采 用的方法适合于相应检测要求 。在起草药品质量 标准时 ,分析方法需经验证 ;在药物生产方法变更 、 制剂的组分变更 、原分析方法进行修订时 ,则质量 标准分析方法也需进行验证 。方法验证过程和结 果均应记载在药品标准起草或修订说明中 。
需验证的分析项目有 :鉴别试验 ,杂质定量或 限度检查 ,原料药或制剂中有效成分含量测定 ,以 及制剂中其他成分 (如降解产物 、防腐剂等) 的测 定 。药品溶出度 、释放度等功能检查中 ,其溶出量 等测试方法也应作必要验证 。
项 目 鉴 别
杂质测定
定量
限度
含量测定及 溶出量测定
准确度
-
+
-
+
精密度
-
-
-
+
重复性
-
+
-
+