溶剂提取法提取银杏叶中得黄酮实验报告

食品科技银杏叶中黄酮提取技术研究进展蒋迪尧1,2，吴肖肖1,2，梅秀明1,2（1.南京市产品质量监督检验院（南京市质量发展与先进技术应用研究院），江苏南京 210019；2.国家市场监管重点实验室（生物毒素分析与评价），江苏南京 210019）摘　要：黄酮是银杏中重要的一类功效成分，主要存在于银杏叶中，具有抗氧化、促进血液循环、调节血管、降低血糖以及增加血流量等作用，被广泛应用于保健食品等健康领域。

因此，研究并开发银杏叶中黄酮类功效成分的高效提取方法尤为重要。

本文梳理了当前银杏叶中黄酮成分常见的提取技术，并对各类方法进行了对比评估，旨在找到绿色高效、便捷可靠的前处理方法，为银杏叶中黄酮的提取技术改良和创新提供思路。

关键词：黄酮；银杏叶；提取Research Progress on Extraction Techniques for Flavonoidsfrom Ginkgo biloba LeavesJIANG Diyao1,2, WU Xiaoxiao1,2, MEI Xiuming1,2(1.Nanjing Institute of Product Quality Inspection (Nanjing Institute of Quality Development and AdvancedTechnology Application), Nanjing 210019, China;2.Key Laboratory of Biotoxin Analysis & Assessment for State Market Regulation, Nanjing 210019, China)Abstract: Flavonoids are an important class of functional components in Ginkgo biloba. They mainly exist in Ginkgo biloba leaves. They have the effects of anti-oxidation, promoting blood circulation, regulating blood vessels, reducing blood sugar and increasing blood flow. They are widely used in health food and other health fields. Therefore, it is particularly important to research and develop effective and efficient techniques for extraction of flavonoids from Ginkgo biloba leaves. This article summarizes common techniques for extracting flavonoids from Ginkgo biloba leaves, compares and evaluates different methods, aiming to find green, efficient, convenient and reliable pretreatment methods, to provide ideas for improving and innovating extraction techniques of flavonoids from Ginkgo biloba leaves.Keywords: flavonoids; Ginkgo biloba leaves; extraction银杏叶中的化合物组成多样且复杂，目前已知其中主要的生物活性功效成分为黄酮类化合物和银杏萜类内酯类化合物。

２００６年７月中成药Ｊｕｌｙ２００６第２８卷第７期ＣｈｉｎｅｓｅＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＰａｔｅｎｔＭｅｄｉｃｉｎｅＶ０１．２８Ｎｏ．７银杏叶中黄酮类化合物提取工艺研究苗建英（宝鸡文理学院化学化工系，陕西宝鸡７２１００７）关键词：银杏；黄酮类物质；提取工艺中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：Ｂ文章编号：１００１·１５２８（２００６）０７－１０６０－０２银杏（Ｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ·Ｌ）是我国的特产植物，研究证明：银杏叶中含有数十种活性成份，其中主要成分是黄酮类和萜内酯类化合物。

富含这两类成份的银杏叶活性物，具有捕获游离基、抑制血小板活化因子（ＰＡＦ）、促进血液循环及脑代谢等功能，ｌ临床上可用于治疗冠心病、心绞痛、老年痴呆症和防治皮肤病、脱发等多种疾病¨。

１，目前银杏叶提取物制剂已作为药品、保健品及化妆品等使用，对银杏叶中活性成份的提取和分离亦引起人们的高度重视。

据文献资料报道：浸取法提取银杏叶中的黄酮类化合物常用水、醇．水及丙酮．水体系进行提取。

水提法黄酮的总含量大约在１０％左右，黄酮含量偏低，一般不符合要求。

醇－水（７０％乙醇）一树脂法所得粗品，必须用树脂进行精制，生产周期长，操作过程繁锁，产品中黄酮类化合物含量低。

顽丙酮一水（５０％丙酮）提取法因丙酮易挥发且价格高等，普及应用受到了很大限制。

本文根据银杏叶中黄酮类化合物特点，对醇一水体系的提取物采用碱性溶解，酸性沉淀，溶剂萃取等方法，从银杏叶浸出液中富集分离黄酮类化合物，研究了提取过程的各种影响因素及其最佳工艺条件。

１实验部分１．１药品及仪器银杏叶（采于宝鸡市区）；７０％乙醇（工业级）；芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝和其它所用试剂均为分析纯。

Ｒ－２０１旋转蒸发仅及Ｒ－２０１恒温水浴锅（上海申生科技有限公司）；ＰＨＳ－３Ｃ型精密ＰＨ计、７２１Ｂ分光光度计（上海第三分析仪器厂），ＨＰＬＣ一１０Ａ液相色谱仪（日本岛津）。

１．２实验步骤称取２００ｇ干燥、粉碎的银杏叶，每次以７０％乙醇６００ｍＬ浸取剂，在一定温度及ｐＨ条件下浸取３次，每次３ｈ，合并浸取液，经抽滤、浓缩至无醇味，石油醚脱脂后，以２００ｍＬ的乙酸乙酯分两次萃取，合并萃取液，得乙酸乙酯相Ｉ；水相以稀ＨＣＩ调ｐＨ值至３．０，产生黄色沉淀，抽滤，沉淀物用１５０ｍＬ乙酸乙酯充分溶解，滤去不溶物，得乙酸乙酯相Ⅱ，合并乙酸乙酯溶液Ｉ、Ⅱ，真空蒸发，回收溶剂，得黄色粉末。

第30卷第5期Vol 130 No 15长春师范学院学报(自然科学版)Journal of Changchun Normal Universi ty(Natural Science)2011年10月Oct.2011银杏叶中总黄酮的提取和测定唐 婧,郑胜彪,朱金坤(安徽科技学院理学院,安徽凤阳 233100)[摘 要]本试验比较了有机溶剂浸提法和超声波法提取总黄酮的效果,选择提取率较高的超声波法来提取。

对料液比、超声时间和乙醇体积浓度对银杏中总黄酮提取效果的影响进行了单因子试验,并采用正交试验法找出最佳提取条件为料液比1g B 30mL 、超声时间30min 、乙醇浓度70%。

采用紫外可见分光法检测黄酮类化合物的含量,不加显色剂,直接以258nm 作为最大吸收波长。

结果表明,银杏中总黄酮的平均含量稳定在2177%,精密度的RSD 为01302%,该方法的平均回收率为10013%。

本试验方法样品处理简单,准确度高,精密度好,适合于银杏叶中总黄酮的提取和测定。

[关键词]银杏叶;黄酮;正交试验[中图分类号]R284[文献标识码]A[文章编号]1008-178X(2011)05-0063-05[收稿日期]2011-07-19[作者简介]唐 婧(1982-),女,安徽马鞍山人,安徽科技学院理学院助教,从事天然产物分析研究。

银杏(Ginkgo biloba L 1)又名公孙树,是我国的特产植物,其叶中含有丰富的的黄酮类化合物。

黄酮类化合物具有改善心脑血管循环、抵制血小板活化因子、降低胆固醇、抗病毒、防癌抗癌以及清除自由基等功效[1-2]。

我国拥有世界银杏树资源的70%以上,其提取方法常见报道。

通过对银杏叶中黄酮类化合物最佳提取条件的研究,可提高叶片黄酮提取率,最大化地实现银杏叶的药用和经济价值,使我国丰富的银杏树资源得到更加有效的利用。

本实验以芦丁为对照品。

芦丁(Rutin),又称芸香甙(Rutioside),属于黄酮苷类化合物,具有多种药用、生理活性作用,临床上用于治疗各种因毛细血管脆性增加而引起的出血性疾病[3],如高血压等。

编号：（）字号本科生毕业设计（论文）题目：银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究姓名：学号：班级：二〇一一年六月中国矿业大学本科生毕业设计姓名：学号：学院：材料科学与工程学院专业：材料科学与工程设计题目：银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究专题：指导教师：职称：二O一一年六月徐州中国矿业大学毕业设计任务书学院材料科学与工程专业年级任务下达日期：2011年3月1日毕业设计日期：2011年3月1日至2011年6月15日毕业设计题目：银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究毕业设计主要内容和要求：银杏叶中除含有黄酮类化合物外，还含有大量的蛋白质、鞣质、糖类和多酚类等水溶性物质。

黄酮类化合物在有机溶剂中溶解度较高，可以利用有机溶剂对黄酮类化合物进行提取。

研究表明，实验条件和工艺参数对于银杏中的黄酮类化合物的提取率具有显著的影响。

本论文主要研究了银杏叶黄酮类化合物的工艺参数，讨论试验结果得出最佳的提取工艺。

毕业设计任务如下：1 查阅有关国内外文献资料，了解银杏的营养价值，学习银杏中有关黄酮提取的研究现状和常用的提取方法，具体研究黄酮类化合物的有机溶剂萃取方法。

完成开题报告和毕业论文的综述部分（至少30篇文献，其中英文文献不少于5篇）。

1）了解银杏的历史，营养价值，药用价值。

2）了解银杏应用的历史，应用现状，和银杏的应用发展前景。

3）学习提取银杏中黄酮类化合物的常用方法，研究现状和前沿的研究方向。

4）研究本课题的目的和意义。

2 根据查阅文献结果，确定具体采用的实验方法，规划好实验流程做好实验设计。

购买实验所需仪器和药品，对实验结果进行分析总结，1）根据所查文献，设计实验方案，根据方案确定实验流程。

2）购买实验所需的药品和实验仪器，根据拟定的实验方案进行尝试性实验。

3）研究不同溶剂浓度，浸取温度，料液比，浸取温度对黄酮产量的影响。

4）对于通过实验得到的黄酮进行标定，得出最佳的实验方案。

3 翻译一篇与本课题密切相关的英文文献。

实验四、银杏黄酮的提取与检测一、实验目的：1、了解黄酮类物质的分离提取和检测方法。

2、了解大孔吸附树脂的特性和在生化分离中的应用。

二、实验原理：1、提取原理溶剂加到原料中进行提取的过程中，由于扩散、渗透作用，逐渐通过细胞壁透入细胞中，溶剂进入细胞后溶解可溶性物质，造成了细胞内外浓度差，于是细胞内的浓溶液不断向外扩散，溶剂又不断进入植物细胞中，可溶性成分不断被提取出来，如此多次反复，直到细胞内外浓度相等，达到动态平衡为止。

2、大孔吸附树脂纯化原理：大孔吸附树脂是一种具有多孔立体结构人工合成的聚合物吸附剂，是在离子交换剂和其它吸附剂应用基础上发展起来的一类新型树脂，为用于固体萃取而设计。

是依靠它和被吸附的分子（吸附质）之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作的。

大孔吸附树脂吸附能力高，易解吸，内部微孔即多又大，表面积也大，具有较多的活性中心，使离子、分子扩散速率增大，交换速度加快，在使用上可以缩短生产周期，提高效率，而且大孔吸附树脂可以进行再生重复使用，因此使生产成本大为降低，适于工业化生产。

3、银杏黄酮含量的分光光度法测定原理黄酮类化合物的测定使用较广泛的是络合—分光光度法，该法的基本原理是，黄酮类化合物分子结构中，凡在C 3或C 5位上有羟基，都会与铝盐形成有颜色的配位化合物，见图：O O OAl 2+O OOAl2黄酮和铝盐的络合物芦丁因此，银杏叶中的黄酮类化合物包括单黄酮、双黄酮和黄酮苷都能与铝盐形成络合物，比色测定结果是总黄酮含量。

硝酸铝络合分光光度法测定总黄酮的原理为:在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下,黄酮类化合物与铝盐生成螯和物,加入氢氧化钠溶液后显红橙色,在500波长处有吸收峰且符合定量分析的比尔定律,一般与芦丁标准系列比较定量.如果细说,硝酸铝显色法是先用亚硝酸钠还原黄酮，再加硝酸铝络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2’羟基查耳酮而显色.它的显色原理发生在黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位,不具有邻位无取代邻二酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时是不显色的.三、仪器：电子天平（0.1mg ）、紫外分光光度计、恒温水浴摇床、电热恒温水浴锅、索氏提取器、电热恒温干燥箱、微波炉、超声波破碎仪、超声波清洗机、旋转蒸发器、循环水式真空泵、布式漏斗、真空抽率瓶、真空泵。

银杏叶黄酮类化合物的提取研究进展银杏树Ginkgo biloba L.又称白果树、公孙树，是我国古老的树种之一，具有“活化石”的美称。

由于其生长规律特殊，抗病能力强而受到国内外的重视。

有关银杏叶的有效成分及疗效的研究日益受到重视，已开发出保健品、化妆品、药品等多达100多种，形成国际市场上销售额20多亿美元的新兴产业。

银杏叶的化学成分有黄酮类、萜类、内酯类、酚酸类以及生物碱、聚异戊二烯等化合物。

黄酮类为银杏叶的主要有效成分之一，含量随品种、产地、树龄、不同的采摘时间而不同。

黄酮类化合物优异的抗氧化、抗病毒、防治心血管疾病、增强免疫力等作用而受世人瞩目。

药学研究表明，有38种银杏黄酮类化合物从银杏叶中分离出来，其中黄酮类化合物主要有3类：黄酮(醇)及其昔28种：如槲皮黄酮等；黄烷醇类：如儿茶素等4种；双黄酮：如白果双黄酮等6种(儿茶素)。

1 银杏叶黄酮的提取分离1.1 溶剂提取法目前国内外掀起了研究开发银杏叶热。

国内银杏叶常用溶剂例如乙醇、丙酮、醋酸乙酯、水以及某些极性较大的混合溶剂浸泡银杏叶进行提取，溶剂提取方法一般有：煎煮、冷浸、回流、渗施等经典方法。

1.1.1 水提取树脂分离法有关水浸提银杏黄酮苷的文献报道不多。

肖顺昌等报道了用l6倍量沸水分3次浸提银杏叶，得到的水溶液，经冷藏、分离杂质得溶液，然后用D101型吸附树脂吸附得到浓度达38％的黄酮苷。

胡敏等研究水浸提银杏叶黄酮苷并用树脂精制的工艺，探讨了影响黄酮苷浸出的主要因素以及最适的精制方法，结果表明：水为提取剂，在90℃水溶回流浸提银杏叶2次，4h／次，经沉淀，过滤，浓缩后，用树脂精制、冷冻干燥后，制得总黄酮苷含量高的提取物、产品得率为银杏叶干重的 1.2％-1.5％。

水提取成本低，没有任何环境污染，产品安全性高，但是水对有效成分的选择性差，提取率低。

1.1.2 有机溶剂浸提法一般的有机溶剂浸提法。

田呈瑞等研究了乙醇浸提银杏叶黄酮的方法。

银杏叶中有效成分黄酮的提取研究及黄酮的检验和分析姬晨辉（内蒙古农业大学理学院内蒙古呼和浩特010018）摘要：银杏是我国的特有植物，又称公孙树。

银杏叶为最古老的中生代孑遗植物银杏的干燥叶。

银杏有裸子植物活化石之称。

据《本草纲目》记载，银杏果具有敛肺平喘、止遗尿、白带的作用。

在医药上有很高的利用价值。

银杏叶的提取方法有有机溶剂萃取法、水提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、超临界萃取法、超声波提取法、酶法等。

本文采取乙醇提取总黄酮的方法，用分光光度法测定总黄酮的含量。

关键词：银杏叶总黄酮乙醇含量测定Abstract: Ginkgo biloba is our country's endemic plants, also known as maidenhair tree. Ginkgo biloba is the oldest Mesozoic relict plant Ginkgo biloba dried leaves. Ginkgo has gymnosperms living fossil. According to the "Compendium of Materia Medica" records, ginkgo fruit with convergence lung asthma, only enuresis, vaginal discharge effect. In medicine has a high value in use. Ginkgo biloba extract organic solvent extraction method, water extraction, dilute alkali or alkaline aqueous alcohol extraction, supercritical extraction, ultrasonic extraction, enzymatic and so on. This paper adopts ethanol extract flavonoids method, using spectrophotometric determination of total flavonoids.Key word s: Ginkgo biloba Flavonoids Ethanol Determination1 材料与方法1.1 试验材料银杏叶采集于自然生长的银杏树叶、75%酒精、石油醚、旋转蒸发器、丙酮、4～5碳烷基醇、醋酸酯1.2 试验方法1.2.1 银杏叶总黄酮提取率计算方法银杏叶总黄酮提取率（%）=提取液中心黄酮的重/提取所用银杏叶中总黄酮含量*100%。

银杏叶提取黄酮及分离纯化组员：李佳辉、黄埔、赵超武一、实验目的1.掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取2.掌握紫外分光光度计的应用，以及相关溶液的配置3.学会自主设计实验，培养团队合作精神二、实验原理⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用；并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用；⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm;⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。

其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm（左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯—比尔定律（即A=kbc）一般与芦丁标准溶液比较定量。

先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。

显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。

（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）目前银杏叶黄酮的提取方法主要有：溶剂提取法、超临界流体萃取法（SFE法）、高速逆流色谱技术提取法（HSCCC)微波提取法、超色波提取法、酶提取法、分子烙印技术。

因溶剂提取法操作简单，所需试剂廉价易得，故通常使用此法来进行大规模生产。

其工艺流程如下：银杏叶—→粉碎—→NaOH-60%乙醇回流提取—→离心—→过滤—→滤液收集—→二次醇提—→合并两次滤液—→树脂吸附—→脱吸—→浓缩—→干燥—→提取物由于银杏叶黄酮中的类黄酮主要为芦丁，故用芦丁为对照物绘制标准曲线，并采用分光光度法进行测定。

三．实验材料及器材1.材料酸银杏叶、芦丁、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、95％乙醇、磷酸氢二钠、磷二氢钠、D101大孔吸附树脂、盐酸2.相关溶液的配制和树脂预处理0.20mg／mL芦丁标准溶液（500mL）、5％NaNO2（500mL）、10％AI(NO3)3（500mL）、1mol／LNaOH 、0.4mol／LNaOH（500mL）、0.4mol ／L HCl(500mL)、30%乙醇（500mL）30%乙醇（1）D101树脂预处理(500g)：商品树脂均残留惰性溶剂，故使用前根据应用需要，必须进行不同深度的预处理，在提取器内，加入高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3—4小时，然后放净洗涤液，为一次提取过程。

银杏叶黄酮提取及含量测定一、实验目的1、掌握银杏叶中黄酮的提取方法2、了解银杏叶中黄酮的含量测定二、实验原理近几年来，随着对黄酮类化合物研究的日益深入与重视，黄酮类化合物提取技术的发展也得到了促进。

目前提取黄酮类化合物的方法主要包括有机溶剂浸提法、超声波提取法、超临界流体萃取法、微波提取法和酶提取法等。

１．１有机溶剂浸提法目前国内外使用最广泛的银杏叶中黄酮的提取方法就是有机溶剂提取法，一般可用乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇或某些极性较大的混合溶剂，如甲醇－水（１＋１）溶液。

由于甲醇的毒性、挥发性较大，因此一般采用乙醇作为提取剂。

银杏叶干燥粉碎后用有机溶剂浸泡、提取、过滤，滤液中的溶剂经减压蒸馏除去后得银杏叶浸膏粗提物。

徐桂花等［１］提取银杏叶中黄酮类化合物时，采用乙醇（７０＋３０）溶液为提取剂，提取温度为７０℃，料液质量浓度比为１ｇ比４０ｍＬ，提取时间为４ｈ。

由于乙醇提取工艺在安全性、溶剂成本、效率及杂质酚酸去除等方面都不能应对日益严酷的市场竞争，张林涛等［1］提出了以硼砂－氢氧化钙碱水为溶剂提取银杏叶黄酮，其黄酮提取率与文献值相近，但提取工艺时间缩短为１ｈ。

１．２超声波提取法超声波提取法是利用搅拌作用、强烈的振动和空间效应、高的加速度等使药物有效成分进入溶剂，从而提高提取率，缩短提取时间，并能消除高温对提取成分影响的一种提取法。

刘晶芝等［2］运用了超声波技术与水浸提取相结合的方法得出超声波提取的最佳工艺条件为：超声频率４０ｋＨｚ，超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比１００，提取温度３５℃，静置３ｈ，提取率为８１．９％。

郭国瑞等［3］以水为介质，超声波提取银杏叶中黄酮苷，与常规水浸提法比较，超声波提取效率大大提高，确定超声波提取的最佳工艺为：超声处理时间５５ｍｉｎ，料液质量比１比３０，提取温度５０℃，提取率为８２．３％。

１．３超临界流体萃取法超临界流体萃取法是一种以超临界流体代替常规有机溶剂对有效成分进行萃取和分离的新技术。

银杏叶黄酮的提取与含量测定银杏叶黄酮的提取与含量测定摘要：本论文以银杏叶为原材料,用乙醇提取法提取银杏中的黄酮类物质,分别以银杏叶重量的9倍量和6倍量的7O％乙醇回流浸提两次，减压浓缩，加水沉降离心，过大孔吸附树脂柱，以80％乙醇洗脱，减压浓缩，真空干燥。

得到的银杏叶提取物其黄酮含量在33％以上,并以不同浓度的乙醇和水来分析黄酮的收率。

关键词：黄酮；大孔树脂；提取；乙醇Abstract: The present paper take the gingko leaf as material,ethanolextraction of Ginkgo biloba extract flavonoids substances , Ginkgo bilobarespectively to the weight of nine times and six times the volume of 7O %ethanol extraction twice ,decompression nrichment,Centrifugal watersettlement , with the pocket adsorption Resin Column, T o 80% ethanoleluting , decompression enrichment, Vacuum Drying ．The flavonoid contentabove 33% about the extraction of Ginkgo leaf, The yield of flavonoids wasanalyzed by the ethanol and water with different concentrations.Keywords: Flavonones ,he pocket adsorption Resin Column,xtraction,thanol1 前言银杏 (G inkgob iloba)为银杏科(Ginkgoaceae)银杏属(Ginkgo)多年落叶乔木，属于距今二亿多年前中生代侏罗纪的裸子植物，现仅存一科一属一种，有裸子植物“活化石”之称[1]。

银杏叶中黄酮提取及含量测定一、实验目的提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。

二、实验原理银杏系银杏科银杏属落叶乔木，银杏叶中含有多种生理活性成分，其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质，具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。

因此，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。

银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法，成本低但浸取率低；有机溶剂浸取法中，乙醇浸取的效率高且无毒，是目前采用较多的方法；韩玉谦等采用超临界流体萃取法，在70%乙醇溶液中加热回流法和CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分，银杏黄酮回收率为84 .4 % ，是常规萃取法回收率的2倍多；乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到8 6 . 7 %。

银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。

分光光度法自20世纪9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。

本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取，建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。

三、实验仪器和试剂材料：银杏叶粉末50g试剂：标准芦丁样品，无水乙醇（600ml），50mlAl(NO3)3（0.1mol/L），乙醚，5%NaNO2溶液，10%AL(NO3)3，4%NaOH溶液。

仪器：紫外分光光度计、电子分析天平、水浴锅、烘箱、烧杯、容量瓶（100ml1个、50ml1个、10ml6个）、索氏提取器、减压蒸馏装置、锥形瓶、沸石等。

四、实验步骤1.1提取银杏叶中总黄酮（1）将银杏叶洗净, 在103℃下烘干至恒重,用研钵捣碎制得银杏叶粉（2）准确称取10.0g，置于索氏提取器中，按下列条件加热回流提取：乙醇浓度80％，料液比1：20(g／ml)，回流温度85℃，回流时间2 h，平行进行1~3次实验。

10%乙醇提取银杏叶实验报告实验目的：通过低醇提取银杏叶实验，实现提取工序与柱层析工序对接，从而省去浓缩与水沉的工序，降低生产能耗，提高产品效能。

实验方法1.取不同批次银杏叶，分别用10%醇直提、套提，通过残渣检测，及最终产品的收率及质量，比较二者的提取效率。

实验内容实验一、10醇提取预实验1.提取取111.44g银杏叶（厂区后采摘的苗叶，黄酮0.89% 内脂0.44%），粉碎。

用228ml70%乙醇浸泡1h，加水1368ml，在65℃提取2h，过滤，收集滤液，向滤渣中加入1114ml10%乙醇，在65℃下提取2h.过滤后，收集合并两次滤液。

2.层析将上述滤液冷却后，通过混合树脂（AB-8与ADS017各75g）吸附，并用600ml水洗，150ml15%乙醇洗涤，用70%乙醇进行洗脱。

收集洗脱液，回收乙醇，烘干。

3.实验结果4.本次实验讨论1）通过预实验可知，10%乙醇提取后直接上柱黄酮回收率为86.9%，内脂回收率为59.2%，并不低于现车间生产工艺。

有效成分达到银杏叶提取物标准，不足的是提取溶剂量大。

2）实验时发现，粉碎后提取液较混作，上柱难度变大。

实验二、10%乙醇提取放大实验1.提取取500g银杏叶（批号16081401），剪碎。

用1000ml50%乙醇浸泡1h，加水4000ml，在65℃提取2h，过滤，收集滤液，向滤渣中加入4000ml10%乙醇，在65℃下提取2h.过滤后，向滤渣中加入4000ml10%乙醇，在65℃下提取1h.收集合并三次滤液。

2.层析将上述滤液冷却后，分别通过两根混合树脂（AB-8与ADS017各75g）吸附，并用600ml水洗，继用15%醇洗脱。

用70%乙醇进行洗脱。

分别收集洗脱液，回收乙醇，烘干。

3.实验总结5.本次实验讨论1）由于实验时上柱量未固定，使实验数值横向比较时，未规律的分布。

根据实验结果数值分析，树脂柱1和树脂柱3含量偏低原因可能是上柱量较少引起。

溶剂提取法提取银杏叶中得黄酮实验报告小组成员：周璟、胡静、左兵华、刘云飞2014年5月一、实验目的i）掌握传统的溶剂提取法并对银杏中的黄酮进行提取ii）掌握紫外分光光度计的应用，以及origin软件绘图的基本操作iii）学会自主设计实验，培养团队合作精神二、实验原理⑴关于黄酮：银杏中最具药用价值的成分，有提高人体免疫力的作用; 并且抗衰老、调节内分泌，还具有抗炎、抗真菌的作用；⑵实验需设置空白参比液，由文献资料可知芦丁标准液的最大波长大概为510nm;⑶本实验采用硝酸铝（氯化铝）法测定银杏叶总黄酮的质量浓度，因为黄酮类化合物可以与铝盐发生络合显色反应。

其主要原理为：在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐发生螯合反应，加入氢氧化钠溶液后，溶液显橙红色，在510nm （左右）处有吸收峰，且符合定量分析的朗伯一比尔定律（即A=kbc ）一般与芦丁标准溶液比较定量。

先用亚硝酸钠还原黄酮类化合物，再加铝盐络合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生成2-羟基查尔酮而显色。

显色原理发生在黄酮醇类邻位无取代的邻二酚羟基部位，不具有邻位无取代的邻二酚羟基的黄酮类成分加入上述试剂时是不显色的。

（如二氢黄酮类化合物就不发生该显色反应）三、实验药品及仪器⑴药品：银杏叶（阴干碾碎储藏备用），芦丁，无水乙醇，亚硝酸钠，氯化铝和氢氧化钠；⑵仪器：电子天平，旋转蒸发仪，索氏提取器，uv-1800 型紫外分光光度计，研钵，比色皿，容量瓶（10ml*6,50ml*1,100ml*2 ），移液管，量筒，烧杯，玻璃棒。

四．实验步骤I）配制60%的乙醇溶液（黄酮同时具有水溶和油溶性）。

II）准确称取10g银杏叶粉末置于索氏提取器中，加入60%的乙醇溶液10ml，回流提取3h，然后用旋转蒸发仪浓缩并回收乙醇溶液，抽滤得到银杏叶黄酮粗提物。

再用60%的乙醇定容到100ml。

皿）芦丁标准液的配置：准确称取芦丁标准品0.005g,用60%的乙醇溶液加热溶解，并转移到50ml 容量瓶内用乙醇溶液定容，摇匀，得质量浓度为0.1mg/ml 的芦丁标准液。

银杏中黄酮的提取分离纯化一、综述银杏树具有观赏、经济、食用、药用等价值，银杏叶含多种活性成分，包括黄酮、萜类、内酯、聚戍烯醇、生物碱、术酯体等，在药用方面，银杏叶提取物的有效成分主要是黄酮苷类和萜类物质，有通过降低血液黏弹性改善微循环系统的功能，银杏叶中黄酮类化合物的含量较高，主要有黄酮及其苷、双黄酮、儿茶素这三类物质。

其中黄酮及其苷类化合物大多数是由槲皮素、山萘醇及其苷组成。

黄酮类化合物主要是指母核为2-苯基色原酮的一类化合物，现在则泛指具有C6-C3-C6基本结构骨架的一大类天然化合物。

天然黄酮类化合物母核上常含一些助色团，使该类化合物多显黄色，又因为分子中γ-吡酮环上的氧原子能与强酸成盐而表现为弱碱性，因此称为黄碱素类化合物。

黄酮类化合物不仅来源广泛而且表现出多种多样的药理活性,具有对免疫系统作用、防癌抗癌作用、抗肿瘤作用、抗心血管疾病作用、对内分泌系统的作用、消除自由基和抗氧化活性。

二、实验依据1、黄酮类化合物的分析方法①分光光度法该法是测定黄酮类化合物含量最为普遍的一种分析方法。

；黄酮类化合物可与氯化铝、硝酸铝、氢氧化钾等形成稳定的络合物,并产生特征吸收光谱，通常采用硝酸铝比色法,黄酮类化合物与Al(NO3)3进行络合显色，测定其含量[33]。

②高效液相色谱法高效液相色谱的固定相有硅胶柱和氨基柱，C18在黄酮类化合物的分析过程中应用广泛，在检测器的选择中，紫外检测仍是最普遍的检测方法，此外还有电化学检测器、光电二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器等2、黄酮类化合物提取方法①有机溶剂提取法最常用的黄酮类化合物提取溶剂为乙醇和甲醇，高浓度的醇(如90%～95%)有利于于提取苷元，浓度为60%的乙醇或甲醇水溶液适则有利于于提取苷类物质；乙酸乙酯和丙酮也常用来提取黄酮类化合物。

②水浸提法随着黄酮类提取物在市场上销售价格的降低，对于提取剂的选择，首先要考虑其成本问题，显然水浸提法对于降低成本，提高产品的市场竞争力有很大的帮助，而且就环保的角度出发，水浸提法更加环保、安全。