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总黄酮（Flavonoid）含量(铝盐显色法酶标仪96样)（一）检测原理：总黄酮，即黄酮类化合物，包括黄酮，黄酮醇，黄烷酮，橙酮，异黄酮，黄烷醇，花青素等，是植物重要的一类次生代谢产物，具有有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性（比如抗紫外）和抗病虫害方面有重要作用。
实验采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法测定黄酮总含量，即在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。
（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求备注试剂一液体1.6m L×1支4℃保存试剂二液体3m L×1瓶4℃保存试剂三液体12m L×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存做标曲，则用到该试剂（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、粉碎仪、筛子、60%乙醇、离心机、蒸馏水。
（四）总黄酮测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g新鲜样本(若水分充足，可增加样本取样质量)；或者称取约0.03g烘干样本（将样本在105℃下杀青3min，然后60℃烘干至恒重，粉碎，过40-60目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的60%乙醇（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h（若蒸发用60%乙醇定容至1.5mL），25℃×12000rpm，离心10min，取上清待测。
【注】：若样本量较少，可同比例缩减样本量，如取0.02g干样，加入1mL60%乙醇，60℃振荡提取2h。
25℃×12000rpm，离心10min，取上清，用60%乙醇定容至1mL待测。
②液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：①酶标仪预热30min，调节波长至510nm。
菊花中总黄酮的含量测定
菊花是一种常见的草本植物，被广泛用于中药和食品加工中。
菊花具有多种药用价值，其中菊花中总黄酮的含量是其重要的营养指标之一。
本文将从菊花的营养成分、总黄酮的定义和作用、测定总黄酮含量的方法以及菊花中总黄酮含量的研究进展等方面进行探讨。
一、菊花的营养成分
菊花富含多种营养成分，包括蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质等。
其中，总黄酮是菊花中的重要成分之一，具有很高的生物活性。
二、总黄酮的定义和作用
总黄酮是一类具有黄酮骨架的化合物的总称，包括黄酮类、异黄酮类和花色苷类等。
总黄酮具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性，对人体健康具有重要的保护作用。
三、测定总黄酮含量的方法
测定总黄酮含量的方法主要有比色法、高效液相色谱法和质谱法等。
其中，比色法是最常用的方法之一，通过与标准品的比色反应来确定总黄酮的含量。
四、菊花中总黄酮含量的研究进展
近年来，越来越多的研究关注菊花中总黄酮的含量及其健康功效。
研究表明，菊花中总黄酮的含量受多种因素的影响，如品种、生长环境、采摘时间等。
此外，研究还发现不同品种的菊花中总黄酮含量存在差异，有些品种的菊花中总黄酮含量较高，具有更好的保健效果。
五、总结
菊花中总黄酮的含量是其重要的营养指标之一。
测定菊花中总黄酮含量的方法多种多样，比色法是最常用的方法之一。
菊花中总黄酮的含量受多种因素影响，研究表明不同品种的菊花中总黄酮含量存在差异。
进一步的研究可以探索菊花中总黄酮的生物活性及其与其他成分的相互作用，为菊花的开发利用提供科学依据。
第30卷第5期Vol 130 No 15长春师范学院学报(自然科学版)Journal of Changchun Normal Universi ty(Natural Science)2011年10月Oct.2011银杏叶中总黄酮的提取和测定唐 婧,郑胜彪,朱金坤(安徽科技学院理学院,安徽凤阳 233100)[摘 要]本试验比较了有机溶剂浸提法和超声波法提取总黄酮的效果,选择提取率较高的超声波法来提取。
对料液比、超声时间和乙醇体积浓度对银杏中总黄酮提取效果的影响进行了单因子试验,并采用正交试验法找出最佳提取条件为料液比1g B 30mL 、超声时间30min 、乙醇浓度70%。
采用紫外可见分光法检测黄酮类化合物的含量,不加显色剂,直接以258nm 作为最大吸收波长。
结果表明,银杏中总黄酮的平均含量稳定在2177%,精密度的RSD 为01302%,该方法的平均回收率为10013%。
本试验方法样品处理简单,准确度高,精密度好,适合于银杏叶中总黄酮的提取和测定。
[关键词]银杏叶;黄酮;正交试验[中图分类号]R284[文献标识码]A[文章编号]1008-178X(2011)05-0063-05[收稿日期]2011-07-19[作者简介]唐 婧(1982-),女,安徽马鞍山人,安徽科技学院理学院助教,从事天然产物分析研究。
银杏(Ginkgo biloba L 1)又名公孙树,是我国的特产植物,其叶中含有丰富的的黄酮类化合物。
黄酮类化合物具有改善心脑血管循环、抵制血小板活化因子、降低胆固醇、抗病毒、防癌抗癌以及清除自由基等功效[1-2]。
我国拥有世界银杏树资源的70%以上,其提取方法常见报道。
通过对银杏叶中黄酮类化合物最佳提取条件的研究,可提高叶片黄酮提取率,最大化地实现银杏叶的药用和经济价值,使我国丰富的银杏树资源得到更加有效的利用。
本实验以芦丁为对照品。
芦丁(Rutin),又称芸香甙(Rutioside),属于黄酮苷类化合物,具有多种药用、生理活性作用,临床上用于治疗各种因毛细血管脆性增加而引起的出血性疾病[3],如高血压等。
青钱柳叶片中总黄酮的提取方法研究【摘要】本研究旨在探究青钱柳叶片中总黄酮的提取方法，并分析影响提取效果的因素。
通过文献综述和实验验证，得出最佳提取方案，并建立青钱柳叶片中总黄酮的检测方法。
实验结果表明，采用特定条件下的提取方法可以高效提取总黄酮，并获得准确的检测结果。
结论部分讨论了提取方法的优缺点，并展望了未来研究方向。
本研究为青钱柳叶片中总黄酮的提取和检测提供了有效的方法和技术支持，为相关领域的研究提供了借鉴。
在未来，该研究成果具有重要的应用前景，有望在药物研发和保健产品开发中发挥重要作用。
【关键词】青钱柳叶片、总黄酮、提取方法、影响因素、检测方法、实验结果、优缺点、未来研究方向、应用前景1. 引言1.1 研究背景青钱柳（Salix psammophila）是一种生长在中国北方干旱地区的柳树，具有较强的耐干旱和耐盐碱能力。
其叶片含有丰富的总黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种生物活性，被广泛应用于药品、保健品和化妆品等领域。
随着人们对天然植物成分的需求增加，青钱柳叶片中总黄酮的提取方法成为研究的热点之一。
目前，关于青钱柳叶片中总黄酮的提取方法研究还比较有限，大多数方法存在提取效率低、操作复杂、耗时长等问题。
开展对青钱柳叶片中总黄酮的提取方法的研究具有重要的意义。
本研究旨在探讨青钱柳叶片中总黄酮的提取方法，提高提取效率，减少成本，为进一步开发利用青钱柳资源提供科学依据。
通过对影响总黄酮提取效果的因素的研究，为实际生产中的工艺改进提供参考。
我们希望通过本研究，为青钱柳叶片的综合利用和开发提供一定的技术支撑和理论指导。
1.2 研究目的研究目的是通过探究青钱柳叶片中总黄酮的提取方法，寻找最有效的提取方式，从而为青钱柳叶片的有效利用提供技术支持。
通过深入研究总黄酮的提取方法，可以为开发青钱柳叶片的药用和保健价值提供科学依据，同时也可以为相关产业的发展提供新的技术支撑。
通过研究影响总黄酮提取效果的因素，可以有效地优化提取工艺，提高总黄酮的提取率，为进一步提高青钱柳叶片的综合利用价值打下基础。
紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法紫外分光光度法是检测植物黄酮含量的最有效的方法，紫外分光光度的检测方法有很多，本文主要介绍了直接测定法、显色测定法、差示测定法、多波长法测定的方法，这些方法的应用条件不同，需要结合实际，综合考虑后选择适用的测定方法，这样才能提高测定的工作效率，保证测定结果的正确性。
通过对植物黄酮含量的测量，可以掌握黄酮类化合物含量的原理，还能对植物的特性进行科学的分析，具有一定的医药价值。
标签：紫外分光光度法植物黄酮方法【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）11-0709-02黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一類重要的天然有机化合物，很多植物中都含有一定量的黄酮。
黄酮种类很多，其主要类型有黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇等等，具有一定的保健和药用价值。
黄酮类化合物的存在形式既有与糖结合成糖苷的，也有游离态，多呈黄色，在紫外光下一般具有荧光，具有很强的抗氧化性。
紫外分光光度法是测定植物黄酮含量的主要方法，下面对具体的测定方法进行一些介绍，以供参考。
一直接测定法黄酮是指具有α或β苯基苯稠吡喃酮的一类化合物，这种化合物的分子中含有肉桂酰基，也还有苯甲酰基，是一种综合的共轭体系，在甲醇溶液中，大多数黄酮类化合物在甲醇中的紫外吸收光谱由两个主要吸收带组成。
出现在300～400nm之间的吸收带称为带Ⅰ，出现在240～280nm之间的吸收带称为带Ⅱ。
带Ⅰ是由B环桂皮酰基系统的电子跃迁引起的吸收，而带Ⅱ是由A环苯甲酰基系统的电子跃迁引起的吸收，如图1所示。
峰带Ⅱ吸收紫外线的能力较强，也更适合直接测定法的检测。
在利用直接测定法对植物含黄酮量进行测定时，需要运用lambert- Beer 定律进行计算。
直接测定法主要利用了黄酮结构的特点，在测定的过程中不需要使用显色剂，在黄酮特征吸收峰处直接测定即可。
这种方法比较直接快速，而且操作简单，但是也具有一定的缺点，只适合单一成分的测定，在检测的过程中，若样品含有一定杂质，可能会影响检测结果的准确性。
344 食品与药品 Food and Drug 2013年第15卷第5期量，以保证蛋白质特别是优质蛋白、维生素和矿物质摄入量。
3.2 养成良好的饮食习惯大学生应养成良好的饮食习惯，少吃零食，杜绝偏食挑食, 不盲目节食，不暴饮暴食，防止消瘦或肥胖。
一日三餐热量分配尽量合理，重视早餐的质和量，午餐要吃好，晚餐要适量。
3.3 加强营养宣传平衡膳食首先应使学生从心里重视，加深对膳食营养的认识。
有必要加强营养宣传和教育，建议学校应将营养学列入公共选修课程，保证学生具有一定的营养知识，向大学生推荐既经济实惠又营养全面的配餐，以改善大学生膳食营养状况。
参考文献[1] 江月玲. 浅谈大学生的营养与健康[J]. 中山大学学报论丛，2007，27(8)：157-159.[2] 蔡花真，张朝飞，马振兴，等. 平顶山市大学生膳食调查与分析[J]. 河南工业大学学报(社会科学版)，2006，2(4)：121-124.[3] 李艳平，何宇纳，翟风英．称重法、回顾法和食物频率法评估人群食物摄人量的比较[J]．中华预防医学杂志，2006，40(4)：273-280.[4] 王丽琼. 食品营养与卫生[M]. 北京：化学工业出版社，2011：109.[5] 慕永利，马勇. 高校学生膳食营养状况调查[J]. 食品与药品，2006，8(10)：60-61.牡丹花蕊中总黄酮的提取与测定吴震生*，侯 昌，毛文岳（菏泽尧舜牡丹生物科技有限公司，山东 菏泽 274000）摘 要：目的 探讨牡丹花蕊中总黄酮的提取工艺。
方法 预实验考察溶剂对总黄酮提取率的影响，用L 9(34) 正交试验进一步优选提取条件。
结果 预实验结果提示乙醇为较合理的溶剂；最佳工艺条件为20倍于原料的80 %乙醇，25 kHz 下超声提取30 min 。
结论 此实验确定的最佳工艺稳定性好且简便易行，牡丹花蕊中的总黄酮含量为18.85 mg/g 。
关键词：牡丹；花蕊；总黄酮；提取；正交试验中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1672-979X （2013）05-0344-02Extraction and Determination of Total Flavonoids from Peony Stamens and PistilsWU Zhen-sheng, HOU Chang, MAO Wen-yue(Heze Yao ＆ Shun Peony Biotechnology Co., Ltd., Heze 274000, China )Abstract ：Objective To investigate the best extraction technology of total flavonoids from peony stamens and pistils. Methods The effect of solvents on the total flavonoids extraction rate was investigated by preliminary experiment. The extraction technology was further optimized by L 9(34) orthogonal test. Results The result of preliminary experiment showed that alcohol was more applicable solvent. The best extraction technology was as follows: the raw material was extracted with 20 times of 80 % alcohol for 30 min, under the ultrasonic frequency of 25 kHz. Conclusion The extraction technology is simple, accurate and reliable. The content of total flavonoids in peony stamens and pistils reached 18.85 mg/g.Key Words ：peony; stamens and pistils; total flavonoids; extraction; orthogonal test收稿日期：2013-01-24作者简介：吴震生（1984-），男，山东菏泽人，硕士研究生，从事牡丹产业化的开发和研究工作 E-mail: ssnny520@ 牡丹（Peaonia rockii ）属毛茛科芍药属灌木，有“花中之王”的美誉，在我国各地均有广泛种植，尤以菏泽、洛阳牡丹为最。
试验植物总黄酮的提取与测定摘要本实验采用紫外分光光度法测定芹菜体内总黄酮含量，利用黄酮类化合物与铝盐反应生成红色络合物。
以芦丁为标准品在510nm处测定吸光度。
得出标准曲线，然后计算样品的黄酮量。
下面会就本实验出现的一些状况作出详尽想分析。
材料与方法材料新鲜芹菜叶方法试剂的配制标准品芦丁；甲醇；石油醚；磷酸；95%乙醇；硝酸铝；亚硝酸钠；氢氧化钠；去离子水步骤1 总黄酮提取称取新鲜芹菜叶子10.0g，研磨后于回流装置中用70ml 95%乙醇回流2h，过滤，然后用石油醚做溶剂萃取1~2次去脂溶物。
溶剂用量为提取液的1/2，除脂后浓缩并定容至50ml。
2 芹菜黄酮含量的测定吸取10ml置25ml容量瓶中，加30%乙醇2.5ml，再加入5%亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min，加10%硝酸铝液0.75ml，摇匀，放置5min，再加1mol/L NaOH溶液10ml，摇匀，加30%乙醇至刻度，放置10min，在510nm波长处测定吸光度。
同时，取上述稀释液10ml，置于25ml容量瓶中，加30%乙醇至刻度，作为对照溶液。
根据测得的吸光度得出标准曲线3 标准溶液配制精确称取与120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品20mg，置100ml容量瓶中，加60%乙醇溶液，稀释至刻度，精确量取25ml，置于50ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀既得每1ml 含芦丁0.1mg的标准溶液。
4标准曲线制作精确量取标准溶液0。
0，2.5,5.0,7.5,10.0,12.5ml，分别置于25ml容量瓶中，加30%乙醇补足至12.5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min，精确加入10%硝酸铝液0.75ml，摇匀，放置5min，再精确加入1mol/L氢氧化钠液10ml，用30%乙醇稀释至刻度，以第一管为空白，与510nm波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准溶液。
结果标准：A1=0.000;A2=0.121;A3=0.266;A4=0.394;A5=0.530;A6=0.673样品：A（1）=0.000；A（2）=0.036由标准曲线图可得样品中黄酮的含量为0.042分析1 在实验之前，必须要仔细检查实验仪器的密封性，如萃取瓶，回流装置的密封性。
1 总黄酮含量测定1．1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。
1．1．1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。
具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。
1．1．2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。
常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。
1．1．3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。
而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。
1．1．4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。
在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。
如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。
2 药理作用2．1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。
银杏总黄酮( TFG) 腹腔内注射可显著抑制甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体反应数。
总黄酮的提取方法1、熔剂法热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法2、 2.1 微波提取法微波提取是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异,使基体物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使被提取物质从基体或体系中分离，进入介电常数较小，微波吸收能力相对差的提取剂[1］。
这种方法的优点是对提取物具有较高的选择性、提取率高、提取速度快、溶剂用量少、安全、节能、设备简单3、 2.2 超声波提取法用超声波提取法提取黄酮类物质，是目前比较新的方法。
原理是利用超声波在液体中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，还利用其次效应，如机械振动、扩散、击碎等，使其加速被提取成分的扩散、释放。
超声波提取法具有设备简单，操作方便，提取时间短，产率高，无需加热,同时有利于保护热不稳定成分，省时,节能，提取率高的优点.4、2。
3 超临界流体萃取法超临界流体萃取技术是利用超临界流体处于临界温度和临界压力以上，兼有气体和液体的双重特点，对物质具有良好的溶解能力,从而作溶剂进行萃取分离。
可做超临界流体的物质很多,一般为低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等.目前多采用CO2 做萃取剂，因为它具有密度大、溶解能力强、临界压力适中、临界温度接近常温、不影响萃取物的生理活性、无毒无味、化学性质稳定、生产过程中容易回收、无环境污染、价格便宜等一系列优点。
但单一的CO2作萃取剂只对低极性、亲脂性化合物有较强的溶解能力，对大多数极性较强的组分则不起作用,因此,在其中加入夹带剂，通过影响溶剂的密度和溶质与夹带剂分子间的作用力来影响溶质在二氧化碳流体中的溶解度和选择性［15]。
超临界流体萃取技术有许多传统分离技术不可比拟的优点：过程容易控制、达到平衡的时间短、萃取效率高、无有机溶剂残留、对热敏性物质不易破坏等[16］。
但它所需要的设备规模较大,技术要求高，投资大，安全操作要求高,难以用于较大规模的生产.5、 2.4 酶法提取酶解法适用于被细胞壁包围的黄酮类物质，利用酶反应的高度专一性，破坏细胞壁，使其中的黄酮类化合物释放出来。
总黄酮的提取和测定实验原理黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健品和中药材的有效成分之一。
黄酮类化合物的定量方法常用的有 HPLC法和分光光度法，在实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，而对总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。
在碱性条件下黄酮类化合物与铝盐形成络合物、在500nm波长处有最大吸收峰。
标准品选用芦丁。
试剂和器材一、试剂芦丁标准品。
5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；70％乙醇。
二、材料新鲜银杏叶。
三、器材容量瓶10ml（×7），25ml（×1），100ml（×2）；吸管 0.5ml（×2），1ml（×2），2ml（×1），5ml（×1）；分光光度计。
操作方法一、制作标准曲线精密称取芦丁标准品5mg，用70％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，摇匀，得0．2mg／mL的标准溶液。
精确吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入 5％NaNO2 0.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1 (NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。
以试剂空白作为参比溶液。
用1cm比色皿，在500nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。
二、总黄酮的提取把新鲜的银杏叶低温烘干，使水分小于8％，制成干粉。
精确称取干粉1．0g，置于 100mL容量瓶中，加入70％乙醇30mL，浸泡24h。
超声波提取30min，过滤，滤液用70％乙醇定容于100mL容量瓶中，得到黄酮提取液，待用。
三、测定吸取黄酮提取液1.00mL, 置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。
超声波-回流法银杏叶中总黄酮提取的研究摘要：对超声波和回流法两种不同提取银杏叶中总黄酮方法进行了探讨,研究超声浸提时间、乙醇浓度、料液比对银杏叶总黄酮浸提的影响，并对试验结果进行验证．测定了银杏叶中总黄酮的含量。
实验结果表明,超声波提取方法较回流法提取率高。
超声波提取总黄酮的最佳操作条件是用80%乙醇浸提,时间50min,料液比1：10。
关键词：银杏叶;黄酮;超声波；回流前言：银杏叶是银杏的叶片,含有黄酮类活性物质。
根据文献记载,银杏叶提取物在医药、保健品、化妆品等领域已得到广泛的应用。
其所含有的黄酮类物质,可防止高血压及动脉硬化,活血化瘀,抗肝脏毒,抗炎,祛痰,解热,提高机体免疫功能,抗菌,抗病毒,缓解高血压患者的头痛等多种药理作用。
它的提取主要以回流法为主,操作简便,但费时。
本文采用超声波提取方法并与传统的回流提取方法比较;同时对超声波提取方法的各项影响因素进行了研究。
结果表明,超声波提取法不但提取率高且节省时间。
1实验部分1.1实验目的1.1.1探讨超声波和回流法提取银杏叶中的总黄酮提取率的高低。
1.1.2采用单因素实验探究超声浸提时间、乙醇浓度、料液比对银杏叶总黄酮含量的影响。
1.2实验原理银杏叶为银杏的干燥叶，我国的银杏资源占世界70%以上。
银杏黄酮是银杏叶中主要活性成分之一，是开发医药、保健食品和绿色化学品的重要资源。
另外银杏叶还含有39种营养及功能成分，包括蛋白质、糖、维生素C、维生素E、胡罗卜素、18种氨基酸、25种矿物质营养微量元素，其中钙、磷、硼、硒含量较高，其他如人体所需的铁、氟、铜、锰、锌、铬等含量也较丰富，其中维生素C、维生素E、胡罗卜素、硒、锌、钙等作为营养性抗氧化剂与非营养性抗氧化剂—银杏黄酮、萜内酯、儿茶素、多酚类等对保护机体不受自由基所致的氧化和损伤发挥着重要的作用。
因此，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。
紫穗槐果实中总黄酮提取与含量测定李修伟;刘美璇;纪明山;梁亚萍【摘要】为了测定紫穗槐果实中总黄酮含量,采用超声波辅助乙醇溶液提取紫穗槐果实中总黄酮,并以鱼藤酮为标准对照品,建立了紫外分光光度法测定紫穗槐果实总黄酮含量的方法.通过试验得出利用紫外比色法可以测定分析紫穗槐果实中总黄酮含量的结论,该方法检测波长为289.1 nm,定量标准曲线为y=102.18x-0.0486,相关系数R为0.9996.加标回收率97.80％,相对标准偏差为0.7485％.在此检测条件下测定的紫穗槐果实总黄酮平均含量为23.38mg/g.利用本方法测定紫穗槐果实中总黄酮含量操作简便、节省时间,结果准确可靠,可用于紫穗槐果实总黄酮含量检测.【期刊名称】《河北农业大学学报》【年(卷),期】2018(041)004【总页数】5页(P77-81)【关键词】紫穗槐果实;总黄酮;紫外分光光度法;含量测定【作者】李修伟;刘美璇;纪明山;梁亚萍【作者单位】沈阳农业大学植物保护学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学植物保护学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学植物保护学院,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学植物保护学院,辽宁沈阳110866【正文语种】中文【中图分类】S551+3紫穗槐(Amorpha fruticosa L.)为豆科紫穗槐属多年生落叶灌木，原产北美。
全世界约有25种，我国引进1种，作为水土保持树种用于防风固沙。
紫穗槐全国各地均有栽培，植物资源丰富[1]。
紫穗槐根、茎、叶、果实可作药用，具有祛湿消肿功效，主治痈肿、湿疹、烧烫伤[2]，临床上多单方应用[3]。
紫穗槐的化学成分国外进行了大量研究，结果表明其所含的主要化学成分为黄酮类化合物[4]，此外尚含芪类(Ohyama 1998)、甘油酯类、挥发油[5]及多糖等成分。
紫穗槐提取物及相关化学成分的医用生物活性主要有抗肿瘤[6]、抗炎[7]、抗菌[8,9]、保肝作用[10-11]和抗糖尿病作用[12-13]。
鱼腥草全草中黄酮的提取和含量测定摘要:以乙醇为溶剂,采用索氏回流法提取鱼腥草全草中的黄酮｡优化了索氏回流法的提取温度､乙醇体积分数､提取时间､固液比等提取条件;索氏回流法的最佳提取条件为提取温度100℃､乙醇体积分数80%､提取时间 4 h､固液比1∶30(m/V,g∶mL,下同),在此条件下,黄酮提取率为12.59%｡采用硝酸铝比色法测定鱼腥草全草中的黄酮含量,结果表明,芦丁浓度在48.75~377.31μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系(R2=0.999 4);相对标准差RSD为0.21%,加样平均回收率为99.10%,表明该方法重复性良好,结果稳定可靠｡关键词:鱼腥草全草;黄酮;索氏提取法;紫外分光Content Determination of Flavonoid in Whole Plants of Houttuynia cordata Abstract:Taking the whole plant of Houttuynia cordata Thunb. as the raw material, ethanol as solvent extraction, Soxhlet extraction method was used to extract flavonoid. The elements such as extraction temperature, ethanol concentration, extraction time, solid-liquid ratio which affected the yield of flavonoid from whole plants of H. cordata were investigated by orthogonal experiment. Content of flavonoid was determined by Al(NO3)3 colorimetry.The results showed that absorption had good linear relationship with rutin concentration at the range of 48.75~377.31μg/mL(R2=0.999 4). RSD was 0.21%, indicating good repetitiveness. The average recovery rate was 99.10%, it showed that the method was stable and reliable. The optimal conditions were as follows: extraction temperature at 100℃,ethanol concentration of 80%, extraction time 3 h, solid-liquid ratio 1∶30. The yield was 12.59% under these conditions.Key words: Houttuynia cordata Thunb whole plant; flavonoids; soxhlet extraction method; spectrophotometry鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)为三白草科一年生草本植物,始载于《名医别录》,自古以来供食药两用[1],现被国家卫生部正式确定为“既是食品,又是药品”,极具开发价值[2-4]｡紫赤色,易于种植,肥地能蔓生,多生长在湿地山谷阴处｡黄酮类化合物(Flavonoids)是经植物光合作用产生的一大类化合物[5,6],它广泛存在于药用植物､水果和蔬菜中,特别是高等植物的花､叶､根中较多[7]｡黄酮具有广泛的生理活性,如抗氧化､抗癌､防治心脑血管疾病､防治糖尿病､抗菌､抗病毒､抗过敏､祛痰､平喘､抑制消化道疾病､保肝等作用｡植物体内的黄酮的提取主要采用溶剂法､微波法､超声波提取法和超临界流体萃取法等｡科研工作者对黄酮的提取做了大量的工作[8-14]｡黄酮类化合物的提取主要采用热水浸提法,由于黄酮类化p1材料与方法1.1材料与试剂供试材料:鱼腥草全草(于2010年4月中旬采于湖南省永州市零陵区),自然风干备用｡供试试剂:芦丁标准品(中国药品生物制品检定所);无水乙醇､硝酸铝､亚硝酸钠､氢氧化钠等均为国产分析纯｡1.2仪器UV-752紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司),AL104电子天平(Mettler Toledo仪器公司),DF-101S集热恒温磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司),索式提取器｡1.3鱼腥草中黄酮提取条件的优化取风干后的鱼腥草全草,切碎,放入去离子水中浸泡0.5 h,沸水中煮沸5 min,用清水漂洗数次,洗至沥液接近无色为止,沥干,置烘箱(70℃左右)中烘干,碾碎成粉末状｡准确称取4.0 g经预处理的鱼腥草全草,置于索式提取器的回流管中｡在磁力搅拌器下,以乙醇为溶剂,选择不同提取温度､提取时间､乙醇浓度和固液比为参试因子,以总黄酮的提取量为衡量指标,采用L9(34)正交试验设计表布置试验,以确定鱼腥草中黄酮最佳提取工艺,各因素水平如表1｡所得提取液经过滤,即得到黄酮浸提液｡抽滤,得到黄酮滤液及滤渣｡将滤渣注入到相同体积的､已预冷的甲醇溶液中,静置,得到甲醇-黄酮混合物｡将所得黄酮滤液和甲醇-黄酮混合物进行抽滤,打散滤饼,用95%乙醇溶液洗涤,再抽滤,再打散滤饼,最后用无水乙醇洗涤脱水,得到黄酮提取液｡1.4鱼腥草中黄酮含量的测定1.4.1溶液的制备标准品溶液:取120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品约50 mg,精密称定,置于50 mL容量瓶中,加60%乙醇适量,水浴上微热,使溶解,放冷后用60%乙醇稀释至刻度,摇匀｡样品溶液:准确称取干燥鱼腥草叶粉末4 g,加入120 mL 80%的乙醇溶液,在100℃下回流提取3 h,冷却､过滤,共提取3次,合并滤液并定容至200 mL,得测定用样液｡1 mol/L NaOH溶液:准确称取4.000 0 g NaOH固体,用去离子水溶解定容于100 mL的容量瓶中｡NaNO2溶液(1∶20):准确称取5.000 0 g NaNO2,用去离子水溶解定容于100 mL的容量瓶中｡Al(NO3)3溶液(1∶10):准确称取10.000 0 g Al(NO3)3,用去离子水溶解定容于100 mL的容量瓶中｡1.4.2标准曲线的绘制吸取标准品溶液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0及5.0 mL,分别置于50 mL容量瓶中,各加60%乙醇使其成为5.0 mL｡加入NaNO2溶液(1∶20)0.5 mL,摇匀,放置6 min后;加Al(NO3)3溶液(1∶10)1.5 mL,摇匀,放置6 min;加1.0 mol/L NaOH试液4.0 mL,去离子水稀释至刻度,摇匀,放置15 min｡在510 nm波长下测定各溶液的吸光度｡以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线｡1.4.3样品稳定性试验制备样品溶液,吸取2.0 mL显色剂,比色溶液显色后,每隔5 min测定其吸光度,共测定2 h｡1.4.4重复性试验分别量取5.0 mL样品溶液5份,测定其吸光度,计算平均值,标准差及相对标准差｡1.4.5加样回收率试验准确吸取芦丁标准溶液0.10､0.15､0.20 mL各两份分别于6个25 mL容量瓶中,各加入1.00 mL稀释至一定浓度的测定用样品样液,测定其吸光度,通过标准曲线计算样品中黄酮含量,测定回收率｡1.4.6黄酮提取率的计算1)黄酮提取率计算公式为:黄酮提取率(%)=[C×V×10×10-6/m]×100式中,C——从标准曲线查得的黄酮浓度(μg/mL);V——提取的浓缩液体积(mL);m——样品质量(g);10-6——将μg/mL换算的系数｡2)黄酮含量计算公式为:黄酮含量=C×V×10×10-6式中,C——从标准曲线查得的黄酮浓度(μg/mL);V——提取的浓缩液体积(mL);10-6——将μg/mL换算的系数｡2结果与分析2.1正交试验结果由L9(34)正交试验结果(表2)可知,各单因素对于鱼腥草全草中黄酮提取率的影响次序为A>B>D>C,即提取温度>乙醇体积分数>固液比>提取时间｡因此在该试验条件下,以乙醇为溶剂采用索式回流的方法提取黄酮的最佳条件是:提取温度100℃,乙醇体积分数80%,提取时间4 h,固液比1∶30｡按此条件进行6次验证试验,黄酮的平均提取率为12.59%｡2.2黄酮含量测定方法的确定2.1.1标准曲线的绘制测定溶液的吸光度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线｡结果表明,芦丁浓度在48.75~377.31 μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系,回归方程为A=0.972 4C+0.011 1,R2=0.999 4(图1)｡2.1.2稳定性试验样品溶液在显色后15~45 min内,吸光度变化小于5%｡此后随着时间的延长,吸光度下降明显,说明该试验显色是稳定的,样品测定应在显色后15~45 min内完成｡2.1.3重复性试验重复性试验结果表明,该测定方法的相对标准差是0.21%,说明该方法的重复性良好｡2.1.4加样回收率试验准确吸取芦丁标准溶液0.10､0.15､0.20 mL各两份分别于6个25 mL容量瓶中, 各加入1.00 mL稀释至一定浓度的测定用样液,测定回收率｡结果见表3｡从结果中得出加样平均回收率为99.10%｡表明该试验方法测定结果稳定可靠｡3小结与讨论同传统提取方法相比,索式回流方法是利用溶剂的回流和虹吸原理｡随着提取温度升高,回流不断的发生,这样大大地缩短了提取时间｡以乙醇为溶剂采用索式回流对液固物质中所需成分进行连续提取,溶剂能反复利用,这样就节约了大量的溶剂｡随着提取时间的缩短,溶剂也相应地减少,萃取出来的样品也相应地提高｡正交试验结果表明,以乙醇为溶剂采用索式回流提取黄酮的最佳工艺条件为:提取温度为100℃,乙醇体积分数为80%,提取时间为4 h,固液比为1∶30｡上述条件下所得黄酮平均提取率为12.59%｡药用植物中黄酮的定量检测常用高效液相色谱法和分光光度法｡对于黄酮单体的定量检测常采用前者,而对于总黄酮的测定,考虑到方法的快速､简便和可行性等,多采用硝酸铝分光光度法｡该试验中,笔者参照相关文献[18]芦丁提取条件,采用硝酸铝比色法[19]在波长510 nm处测定样品溶液的吸光度｡结果表明,芦丁浓度在48.75~377.31 μg/mL范围内与吸光度呈良好的线性关系(R2=0.999 4);其相对标准差为0.21%,重复性良好;加样平均回收率为99.10%,表明该方法测定结果稳定可靠｡因此,该试验设定的技术参数和方法适用于鱼腥草全草中黄酮的定量分析｡黄酮含量的测定结果表明,鱼腥草全草中含有丰富的黄酮类化合物,且其资源丰富,药理作用广泛,有着良好的开发应用前景｡通过黄酮的提取率和黄酮含量的测定可知,改进的工艺优于常规工艺｡参考文献:[1] 廖德胜,王敬勉.鱼腥草黄酮的制备及其应用研究[J].中国食品添加剂,2002(2):81-83.[2] 吴佩颖,徐莲英,陶建生.鱼腥草的研究进展[J].上海中医药杂志,2006,40(3):62-64.[3] 魏秀俭,郭彦,时明芝,等.绿色食药明球——鱼腥草[J].中国食物与营养,2006(1):56-57.[4] 胡凤莲,倪细炉,刘文哲. 鱼腥草中总黄酮和槲皮素含量的动态变化[J]. 安徽农业科学,2008,36(10):4128-4130.[5] 陈业高.植物化学成分[M].北京:化学工业出版社,2004.[6] 张睿,徐雅琴,时阳.黄酮类化合物提取工艺研究[J].食品与机械,2003(1):21-28.[7] 刘玉芬,夏海涛,杨树平.紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮含量[J].食品科学,2005,26(9):418-422.[8] 胡敏,张艳红,胡艳.银杏黄酮甙的水浸提方法研究[J].食品与发酵工业,1997,24(4):31-34.[9] 丁利君,吴振辉,蔡创海,等. 菊花中黄酮类物质提取方法的研究[J].食品工业科技,2002,23(2):20-22.[10] 王兰珍,马希汉,王妹清,等.元宝枫叶总黄酮提取方法研究[J].西北林学院学报,1997,12(4):64-67.[11] 范志刚,麦军利,杨莉斌,等.微波技术对雪莲中黄酮浸出量影响的研究[J].中国民族医药杂志,2000,6(1):43-44.[12] 何熹,韩宁. 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甘草中总黄酮的提取及含量测定集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]甘草中总黄酮的提取及含量测定前言甘草是我国传统常用中草药之一，也是我国重要的植物资源? 。
甘草黄酮类成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、增强一t5血管功能、增强免疫力等作用。
因此，开展甘草的深加工，使甘草资源得以充分利用，增加资源的附加值，前景十分可观。
为此，笔者以甘草为对象，研究了甘草黄酮的乙醇回流提取工艺，单因素试验确定各因素对提取工艺的影响，正交试验确定甘草黄酮提取的最佳工艺条件。
1材料与方法材料甘草，市售；试剂：亚硝酸钠、碳酸钠、石油醚、蒸馏水、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、芦丁；仪器：烧杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流装置、滤纸、HH-4数显恒温水浴锅、分析天平、AB104．N电子天平、布氏漏斗、SHZ—C型循环水多用真空泵、分光光度计。
方法1.2.1标准曲线的绘制称取芦丁对照品10 mg，用95%的乙醇溶解，摇匀，定容至10 ml，使之成为浓度为1 mg/ml的芦丁标准品溶液，作为贮备液备用。
量取上述溶液、、、、、 ml，分别加水至3 ml，加5%亚硝酸钠溶液ml，放置6 min，加10%的硝酸铝溶液0.5 m1，摇匀、放置6 min后加5%的氢氧化钠溶液2.5 m1，混匀、放置15 min后蒸馏水定容至10 ml。
用紫外分光光度计在500 nm处测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。
1.2.2 材料处理取甘草根茎粉(粉碎过40-60目筛)3 g置于烧杯中,按甘草粉末:乙醇(1:30)加入90ml浓度为70%的乙醇混合均匀.1.2.3试验设计（按每组自己做的时候用的方法的具体过程写）第五组：1.配置芦丁标液：2.配置标准曲线所需不同浓度溶液3.测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线。
4.处理样品5.测出样品吸光度，按照标准曲线，得出样品总黄酮含量1.2.4甘草黄酮含量测定收集滤液并测量滤液体积，取样按绘制标准曲线的方法测定其吸光度值，根据公式计算每克甘草中黄酮的含量。
试验植物总黄酮的提取与测定
摘要本实验采用紫外分光光度法测定芹菜体内总黄酮含量，利用黄酮类化合物与铝盐反应生成红色络合物。
以芦丁为标准品在510nm处测定吸光度。
得出标准曲线，然后计算样品的黄酮量。
下面会就本实验出现的一些状况作出详尽想分析。
材料与方法
材料新鲜芹菜叶
方法
试剂的配制
标准品芦丁；甲醇；石油醚；磷酸；95%乙醇；硝酸铝；亚硝酸钠；氢氧化钠；去离子水
步骤
1 总黄酮提取称取新鲜芹菜叶子10.0g，研磨后于回流装置中用70ml 95%乙醇回流2h，过滤，然后用石油醚做溶剂萃取1~2次去脂溶物。
溶剂用量为提取液的1/2，除脂后浓缩并定容至50ml。
2 芹菜黄酮含量的测定吸取10ml置25ml容量瓶中，加30%乙醇2.5ml，再加入5%亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min，加10%硝酸铝液0.75ml，摇匀，放置5min，再加1mol/L NaOH溶液10ml，摇匀，加30%乙醇至刻度，放置10min，在510nm波长处测定吸光度。
同时，取上述稀释液10ml，置于25ml容量瓶中，
加30%乙醇至刻度，作为对照溶液。
根据测得的吸光度得出标准曲线
3 标准溶液配制精确称取与120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品20mg，置100ml容量瓶中，加60%乙醇溶液，稀释至刻度，精确量取25ml，置于50ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀既得每1ml 含芦丁0.1mg的标准溶液。
4标准曲线制作精确量取标准溶液0。
0，2.5,5.0,7.5,10.0,12.5ml，分别置于25ml容量瓶中，加30%乙醇补足至12.5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.75ml摇匀，放置5min，精确加入10%硝酸铝液0.75ml，摇匀，放置5min，再精确加入1mol/L氢氧化钠液10ml，用30%乙醇稀释至刻度，以第一管为空白，与510nm波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准溶液。
结果
标准：A1=0.000;A2=0.121;A3=0.266;A4=0.394;A5=0.530;A6=0.673
样品：A（1）=0.000；A（2）=0.036
由标准曲线图可得样品中黄酮的含量为0.042
分析
1 在实验之前，必须要仔细检查实验仪器的密封性，如萃取瓶，回流装置的密封性。
前者的疏忽会导致萃取液的泄漏，后者的疏忽会导致乙醇的泄漏，使芹菜叶不能很好地进行回流提取。
2 这次的样品并不是像以往那样的有标准溶液作为对照，而是运用样品作为对照，因为这次的样品是有颜色的，如果再用标准溶液做对照，会导致数值太大，测不准。
3这次是用紫外光测定吸光度，所以要用专用的硅比色皿，普通的玻璃比色皿会吸取紫外光，所以不可用。
4这次的芦丁标准溶液的配制是在通风处完成的，即其有一定的毒性，做实验时要做好防护的措施。
5黄酮类化合物的生理活性：抗氧化等或是具有一些抗发炎反应功效。
也被认为有抵抗或是减缓肿瘤的形成。
（资料来源于互联网）
6 黄酮类化合物的种类黄酮、黄烷醇、总黄酮、黄酮醇、和花青盐。
（资料来源于互联网）。
