不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响

石蜡切片免疫组化中抗原修复方法的选择和注意事项免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过抗原抗体特异性反应来检测并定位蛋白的方法，目前广泛应用于组织病理学诊断。

其中，抗原修复（Antigen repair，AR）是免疫组化过程中不可忽略的关键步骤。

原因是组织经福尔马林等固定液固定和石蜡包埋后，抗原决定簇与核酸易发生交联，引起蛋白质空间结构的改变，导致抗原决定簇被封闭，使抗原与抗体的结合点减少，从而令抗原的阳性检测率及着色强度相对减弱。

这种交联在高温加热或是蛋白酶水解的作用下会发生可逆反应，恢复蛋白的原有构象，这一过程就是抗原修复。

一AR常用的方法是否进行AR、采用什么方法进行AR 要按抗体说明书的要求决定，不同的抗体选择适合该抗体的AR方法，有的要求高温修复，有的要求酶消化。

➤微波法方法：切片于抗原修复液中经微波炉内微波辐射5-20min。

它是利用微波每秒以24亿5千万次的快速运动产生瞬间热。

微波辐射可以使各物质分子作极性运动，促进形成的醛键断裂开。

分子间运动所产生的瞬间热可导致甲醛固定后的蛋白的变性。

该法的特点是：产热迅速，容易操作，但也容易引起抗原修复液的沸腾，使得修复液温度不稳定。

➤高温高压法方法：切片于抗原修复液中在高压锅中加热至沸腾，盖上压力阀至喷汽后持续1-5min。

该法利用高压和高热来促进醛键的断裂，当加热至开锅，加上高压阀后，汽体喷出，此时的温度在100℃-120℃之间，而高压也易使蛋白变性。

➤真空负压法方法：切片于抗原修复液中在预先调至95℃的真空负压干燥箱中真空负压处理5-10min。

这是一种操作简单，效果特佳，温度恒定，能一次性处理大量切片的方法。

该法特点是分子在失重的情况下四处飘游，可以增加各分子间的碰撞机会，而且恒定的温度能保证使甲醛固定的蛋白发生变性又不会使抗原修复液达到沸点。

➤酶修复法方法：0.10%胰蛋白酶或0.40%胃蛋白酶在室温或37℃消化切片15-30min。

不同抗原修复方法对免疫组化试验结果的影响
马建梅;陈承;张彦
【期刊名称】《承德医学院学报》
【年(卷),期】2008(25)2
【摘要】免疫组织化学技术是用已知抗体或抗原检测组织细胞中的未知抗原或抗体的技术，能将形态、代谢和功能密切结合起来，具有操作简单、敏感性高、特异性强等优点，已广泛用于病理诊断。

但在常规福尔马林固定、石蜡包埋的组织中抗原显示存在一定的问题，这主要是由于组织在福尔马林或其他固定液中会引起蛋白内和蛋白间亚甲基桥的桥连，导致许多抗原簇被封闭，因此表达反应微弱，染色效果不佳，影响到诊断的准确性，
【总页数】3页(P179-181)
【作者】马建梅;陈承;张彦
【作者单位】西安医学院附属医院,陕西,西安,710077;西安医学院附属医院,陕西,西安,710077;西安医学院附属医院,陕西,西安,710077
【正文语种】中文
【中图分类】R446.6
【相关文献】
1.高原地区不同抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响 [J], 杨举伦;宋蜀伶;李霞;赵玺龙;蔡琳
2.不同抗原修复方法对大鼠嗅黏膜低亲和力p75NTR免疫组化的影响 [J], 马秀利;
杨枭雄;周立新
3.不同抗原修复方法对层粘连蛋白免疫组化染色结果的影响 [J], 刘鲜艳;郝斌威;马爱玲;何进喜;陈娟
4.不同抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响 [J], 毕晓芳;陈利萍;方虹
5.不同的抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响 [J], 廖德贵;黄世章
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石蜡切片照样可以做免疫荧光的，只不过需要抗原修复，尽量不要用H2O2阻断（据军科院的老教授说会减弱荧光显色）
可以用于免疫荧光的抗体当然可以用于免疫组化，前面的原理都是一样的，只不过二抗一个选的是辣根酶标记的，一个是荧光素标记的，当然免疫组化跟免疫荧光所需的条件不同，需要重新摸索适当的浓度比例如果免疫荧光做出来了，说明一抗可以和目的蛋白结合，二抗跟一抗结合也没问题，那么免疫组化做不出就可以怀疑是二抗问题了
当然还有一个极端情况，就是免疫荧光看到的就不是目的蛋白而是自发荧光，那么就是一抗问题了。

实验研究 不同抗原修复法对视网膜石蜡切片相关功能蛋白表达检测的影响李 颖 胡运韬 马 汀 马志中The effects of varied antigen retrieval m ethods on i m m unohistoche m istry of functional protei ns in reti nal paraffi n sectionL i Ying,H u Yuntao,M a T ing,M a Zh izhong.P ek ing Un i v ersit y Thir d H osp ital,P eking University Eye Center,B eijing100191,ChinaA bstrac t Background A nti gen retr i eva l m ethod i s the key o f i m prov i ng t he successf u l rate of i m m unoh istoche m i ca lassay i n para ffi n secti ons.T o study an ava ilab l e m et hod o f anti g en retr i eva l is a go al to ach ieve bo t h good i m m unoche m istry result and preserv ing re ti na l protei ns. O b jective The a i m o f present st udy is to i nvesti gate tyrosi n d i gesti on,h i gh temperature heat pressure,w ater ba t h hea ti ng and m icro w ave repa i r i n anti gen re trieval f o r re ti na l tissues. M e thods Re ti nal tissue was i so lated and obta i ned from clean Ch i nch ill a rabb its.F our hundreds re ti na l pa raffi n sections were prepared.Four kinds o f anti gen retr i eva l m ethods for reti na l ti ssue i nc l udi ng ty rosin d i gesti on,hi gh te mperature heat pressure,w ate r bath heati ng and m i crowave repa ir w ere used respec ti ve l y.The dep i g m entated reti nal para ffi n secti on w it hout an tigen retrieva lw as used as contro.l T he po siti ve rates o f express i on o f CRALBP,Rhodopsi n and ops i n prote i ns w ere eva l uated and compared among f our ki nds o f anti gen retr i eva l m ethods by i m muno che m i stry. Resu lts CRALBP,R hodops i n and opsi n pro tein was positi ve l y expressed i n cy top las m of reti na l p i gment epithelial ce lls and the outer segm en t o f photo receptor respecti ve ly.N o si gn ificant d ifference w as f ound in t he positi v e expressi on rates of t hese t h ree pro te i ns a m ong four k i nds o f anti gen retr i eva l me t hods(P>0 05),but t he d ifferences i n ti ssue integ rity and backg round sta i n i ng w ere stati stica lly sign ificant(P<0 01).T he structura l damage of re ti na inc l uded loss and pucke r o f sca lera,crack of nuc leus and abnor m a l background sta i n i n high te m pe rature hea t press u re m ethod,w ate r bath hea ti ng m ethod and m icro w ave retr i eva l m ethod.H o w ever,stable CRALBP,R hodops i n and opsi n pro tein expression and straine ffectiveness,clear background w ithout unspecific staini ng and i ntegrated ti ssue w ere seen i n t y rosin d i gesti on m ethod.Conc l u sion D uring t he c linical pa t ho l ogy ana lysis of re tina l tissue,t he app lica ti on o f ty rosin d i gesti on in anti gen retr i eva l could obta i n a be tter e ffecti veness.K ey word s antigen retriev a;l i m m unoh istochem istry;CRALBP;Rhodopsi n;opsin;re ti na摘要 目的 比较4种抗原修复法对视网膜组织抗原修复的效果。

不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响目的探讨了不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响。

方法选取该院30例肾活检标本作为研究对象，随机分成对照组与研究组，对照组采用冰冻切片方法，研究组采用石蜡切片方法，其中分成应用无抗原修复组、胰酶抗原修复组、高压加热抗原修复组，均进行免疫荧光染色。

分析和对比研究组与对照组标本的免疫荧光染色结果。

结果研究组中的胰酶抗原修复组与对照组的免疫荧光染色结果基本相同（P＜0.05）；研究组中高压加热抗原修复组的假阴性明显高于对照组（P＜0.05），研究组中无抗原修复组的染色效果比对照组较差（P＜0.05）；两组所观察的有效肾小球数均≥3个，两组数据差异无统计学意义（P>0.05）。

结论冰冻切片的免疫荧光染色标本无肾小球的时候，可以采用胰酶抗原修复作为补救措施。

标签：抗原修复方法；肾活检；石蜡切片；免疫荧光染色免疫荧光技术又被称为荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种，具有特异性强、敏感性高、速度快等特点，在肾穿刺活检的病理诊断中具有很大的意义。

选取该院2013年2月—2013年9月间确诊为肾小球疾病的患者为研究对象，主要探讨了不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响，现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料该院共接收30例经确诊为肾小球疾病的患者，男性14例，女性16例，年龄在19～64周岁之间，平均年龄为（41.5±13.4）周岁。

其中有9例患者属于IgA 肾病，8例患者属于局灶节段硬化性肾小球肾炎，6例患者属于轻度系膜增生性肾小球肾炎，4例患者属于膜性肾病，3例患者属于系统性红斑狼疮。

将每例患者的肾活检标本分别制成采用10%福尔马林固定的2 μm厚石蜡切片，和2 μm 厚的冰冻切片，冰冻切片为对照组，石蜡切片为研究组，并将研究组的标本随机分为胰酶抗原修复组、无抗原修复组、高压加热抗原修复组，分析和对比两组的免疫荧光染色结果，两组患者的年龄、性别、病程、病史等一般资料，数据差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

不同的抗原修复方法在免疫组化染色中的应用郭丽;祁荣;吴鹏【摘要】目的:选择最适宜的抗原修复法.方法:在免疫组织化学染色中,选用鼠抗人5种单克隆抗体,用不同的抗原修复法,对不同染毒剂量、正常对照暴露大脑皮质及海马,石蜡组织切片,依阳性颗粒表达的情况,确定适宜的抗原修复.结果:抗原修复的方法直接影响到组织中抗原的暴露,高压加热法能把被掩盖或交联变性的抗原暴露或修复,使免疫组化的结果更准确可靠,特别是核阳性组织,适用于高压加热法；电炉煮沸法,阳性结果不佳；酶消化抗原修复法,与高压锅加热抗原修复法的阳性结果无区别.结论:核阳性表达的抗体应选用高压锅抗原修复法,推测核阳性表达的抗体也适用于酶消化抗原修复法.【期刊名称】《沈阳医学院学报》【年(卷),期】2012(014)003【总页数】2页(P152-153)【关键词】免疫组化染色;抗原修复;核阳性表达【作者】郭丽;祁荣;吴鹏【作者单位】沈阳医学院科学实验中心,辽宁沈阳110034;沈阳医学院科学实验中心,辽宁沈阳110034;沈阳医学院科学实验中心,辽宁沈阳110034【正文语种】中文【中图分类】R392-33目前，免疫组化染色技术已成为病理学诊断的重要手段。

几年来抗原修复广泛应用于免疫组化检测，抗原修复使抗原决定簇充分暴露是免疫组化染色成功的关键。

在热修复法中，压力锅加热法又较微波炉加热法更有效，酶消化法修复的抗原免疫组化的染色效果不如热修复法[1] 。

有少数抗原酶消化后染色的结果优于热修复法[2]。

电炉煮沸抗原修复法也被许多人所采用。

为了选择适宜的抗原修复法，我们先后采用压力锅抗原修复、电炉煮沸抗原修复、复合酶抗原修复法，对五种抗体的免疫组化染色结果进行筛选，选择最适宜的抗原修复法，以获得最佳的免疫组化的阳性结果。

1 材料与方法1.1 实验动物与染毒 Wistar大鼠120只(沈阳药科大学实验动物中心提供)体质量230～250 g，按雌∶雄为2∶1于每晚6时合笼，次晨7～9时阴道涂片检查精子，查到精子定为妊娠0 d。

3种抗原修复方法对免疫组化染色效果的影响郑秋桦;李钰湘;柯野;张海明【摘要】为了确定5种抗体在免疫组织化学染色效果中的最佳修复方法,本文分别采用水煮法、微波法和高压法对抗原进行修复后,按常规免疫组化方法进行染色、镜检.结果表明5个抗体在高压修复下都是强表达,P53、P63在微波修复20 min 下也是强表达.因此,从修复效果、时间及稳定性等角度综合考虑,高压0.1Mpa(121℃)修复2 min是对P53、P63、Ki67、CK5/6、CK7的较佳修复方式.【期刊名称】《韶关学院学报》【年(卷),期】2017(038)012【总页数】4页(P51-54)【关键词】免疫组织化学;抗原修复;染色【作者】郑秋桦;李钰湘;柯野;张海明【作者单位】韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关512005;广州安必平医药科技股份有限公司,广东广州510663【正文语种】中文【中图分类】R446.61免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究.在免疫组织化学的试验过程中，常采用固定石蜡包埋组织，然而组织在使用甲醛固定过程中，形成的醛键会封闭抗原的决定簇，影响抗体和抗原的结合，从而影响染色观察结果；因此，对抗原的修复在免疫组织化学中就尤为重要［1］.不同的抗原修复方法对免疫组化染色结果产生不同的影响［2-3］.如加热抗原修复技术既能保留福尔马林固定石蜡包埋技术良好的组织学形态，又明显提高抗原的检出率，提供良好的IHC染色结果［4-5］；影响加热抗原修复的因素主要包括修复的温度、加热的时间、热源、抗原修复液的pH值等方面［1］.本文采用控制变量法，探究在改良Tris-EDTA(PH9.0)修复试剂中，采用水煮、微波和高压3种不同的热修复方法对P53、P63、Ki67、CK5/6、CK7这5个抗体的免疫组化染色效果的影响.1 材料与方法1.1 试验组织与试剂1.1.1 试验组织由广州安必平（LBP）医药科技股份有限公司提供的阳性组织材料.1.1.2 试验试剂抗体试剂均由LBP公司提供的即用型产品（见表1）；环保透明脱蜡剂；无水乙醇；过氧化物酶封闭液（3%过氧化氢）；二抗试剂：LBP-VBrightI二抗HRP鼠兔通用型（一步法）；DAB显色液（加强型）：1 mL DAB色原/20 mL DAB缓冲液；改良Tris-EDTA(PH9.0)浓缩液（50×）；Mayer’s苏木素染液；PBS 缓冲粉：2 000 mL/包；Tween-20.1.1.3 试剂的配制DAB显色液（加强型）：一滴DAB原液加入至1 mL DAB缓冲液中，该溶液易氧化，现配现用.Tris-EDTA(pH9.0)修复液：改良Tris-EDTA(pH9.0)浓缩液（50×）40 mL加入1 960 mL的蒸馏水搅拌均匀.表1 试验所用抗体信息抗体名称CK5/6 CK7 Ki67 P53 P63克隆号D5、16B4OV-TL12/30 MIB-1 DO7 4A4阳性组织肺鳞癌肺腺癌扁桃体/乳腺癌结肠癌前列腺PBS缓冲液：一包PBS缓冲粉加入蒸馏水2 000 mL搅拌至粉末全部溶解加入4 mL Tween20继续搅拌至完全融合即可.1.2 试验设备Thermoscientific切片机、武汉俊杰电子有限公司生物组织摊烤片机、微波炉、Leica DM500显微镜、Leica ICC50 HD Camera、苏泊尔YS20ED 20 cm高压锅.1.3 方法1.3.1 组织蜡块的切片与前期处理将五种组织蜡块-20℃冷冻，2～3 min后取出，打开空气加湿器减少静电作用，在切片机上连续切片（2μm），放入20%的酒精中展片，再使用防脱载玻片进行捞片，保证每张片捞的方向及位置一样且尽可能在载玻片的中央处，以便阅片及效果对比.每个组织块捞9片，在44℃热水中进行摊片使组织与载玻片平整粘附，无褶皱，60℃的烤片机上进行烤片至组织与载玻片较牢固结合，不会由于重力作用而出现移位，将载玻片转至耐高温塑料切片架后，放入烘片机进行55℃烘片2 h.1.3.2 片子的脱蜡与水化将已完成初步处理的片子放进通风橱中的环保脱蜡剂（代替二甲苯）中进行脱蜡处理3次，每次10 min，确保脱蜡干净后进行梯度水化，梯度水化为无水乙醇→95%乙醇→90%乙醇，每个梯度水化5 min.1.3.3抗原修复1.3.3.1 水煮修复法取2 000 mL修复液于不锈钢锅中，置于电磁炉上加热至沸腾后，放入组织片进行修复，修复时间分别为10 min和20 min.1.3.3.2 微波修复法将组织切片放入2 000 mL修复液中置于微波炉中，微波炉高火（功率750 W）加热至沸腾后，调至中火（功率375 W）开始修复，修复时间分别为10 min和20 min，修复后用自来水迅速降至室温.1.3.3.3 高压修复法将组织切片完全浸置于修复液中，放入高压锅内0.1 MPa（121℃）分别进行修复2 min、2.5 min、3 min和5 min，修复完后，迅速降压降温至常温常压后进行清洗.1.3.4 阻断（内源性过氧化物酶的灭活）立即将修复完后的组织切片进行多次水洗后，置于过氧化物酶封闭液中阻断10min，再进行水洗，然后置于PBS溶液中.1.3.5 抗体孵育从PBS溶液中取出组织切片，迅速甩干大量水珠，放于免疫组化湿盒中，快速滴加即用型一抗，23℃孵育30 min后，用PBS溶液冲洗后，置于PBS溶液清洗缸中取出组织切片去掉大部分水份滴加二抗，室温孵育20 min，再用PBS冲洗后浸泡.1.3.6 DAB显色与苏木素复染从PBS溶液中取出组织切片，甩干大量水分后，迅速滴加DAB显色液，显色3 min后，吸干大部分显色液后，置于DAB清洗液中多次水洗，然后用Mayer’s 苏木素溶液进行复染30 s.1.3.7 PBS返蓝将组织切片放进PBS溶液中进行返蓝1 min，返蓝后的苏木素是标记出细胞核的位置，方便观察时做目标区域的参照物，返蓝后多次水洗.1.3.8 脱水、透明、封片和镜检将片子放进95%乙醇脱水1min后，分别用无水乙醇脱水2次，每次1 min；将切片架放于环保透明脱蜡剂中脱蜡2次，每次3 min，用中性树胶滴入封片后，标记归类；利用Leica ICC50 HD Camera进行拍照保存，并对染色结果进行评分.1.4 评分标准判断评分标准参考文献［6］的方法进行评分.评分方法1：在判断中只考虑阳性细胞所占的百分比，按不同的百分比分级；将阳性细胞百分比分成5级，无阳性细胞为0分，阳性细胞≦25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分.评分方法2：在判断中只考虑阳性细胞的染色程度，按不同的染色强度分级；着色强度无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分［6］.试验中，Ki67 采用方法 1 的评分方法；CK5/6、CK7、P53和P63采用方法2的评分方法.图1 CK5/6的3种修复方法比较结果图图2 CK7的3种修复方法比较结果图2 结果与分析对5种抗体的3种修复方式，结果分别见图1-5，评分结果见表2.由图1-5和表2可知：5种抗体高压修复的效果均为强表达；微波20 min修复P53和P63均为强表达.CK5/6、CK7和ki67在高压修复较其它两种修复方式有更为理想的染色效果；从节省时间，降低掉片概率及出现背景概率等方面综合考虑，故将Tris-EDTA(pH9.0)高压修复2 min作为最佳修复方式.而P53及P63的微波修复20 min染色强度与高压修复的结果一致，均为强阳性.5种抗体的水煮修复法的染色效果均不理想，主要由于修复液的大量蒸发不但浪费试剂还有可能影响修复液浓度从而导致修复效果不稳定，故不宜使用该方法.微波修复20 min对于部分组织的修复效果可以达到要求，但是微波修复也存在不足，如：长时间的浸泡和机械力容易导致掉片；修复液的大量蒸发浪费试剂，严重时导致干片，抗原失活.综上所述，较佳的修复方式为高压修复2 min.图3 ki67的3种修复方法比较结果图图4 P53的3种修复方法比较结果图3 讨论免疫组织化学的染色质量受整个试验过程多方面因素的影响，如温度、抗原修复方法、抗体浓度、孵育时间及显色时间等多种因素.抗原修复方法是关键的因素之一.由于采用不同的抗原修复方法，导致免疫组化实验结果差异极大甚至出现假阴性.因此寻找理想的抗原修复方式可提高抗原检出率，提高免疫组化结果的准确性［7］.图5 P63的3种修复方法比较结果图表1 3种抗原修复法对免疫组化染色结果的比较注：“0”为阴性；“1”为弱阳性；“2”为阳性；“3”为强阳性抗体名称高压2 min高压2.5 min高压3 min高压5 min水煮10 min水煮20 min微波10 min微波20 minCK5/6CK7Ki67P53P63 3 3 3 3 1 2 1+3 3 3 3 1 2 1 3 3 3 3 1 2 1 2+3 3 3 3 12 1 2+33 3 3 1 2 12++3+3本研究仅对5种抗体采用了3种修复方式的研究，有待一步探究其它的修复方式，以期获得更为直观和方便可行的修复方法.参考文献：［1］姚梅宏,郑智勇.免疫组化抗原修复技术新进展[J].临床与实验病理学杂志,2013,29(5):544-547.［2］陈余朋,张声,王行富,等.不同的抗原修复方法在Ⅳ型胶原免疫组化染色中的应用[J].临床与实验病理学杂志,2014,30(1):98-100.［3］宿颖,刘曼,张辛燕.不同抗原修复方法对KLF4在小鼠舌黏膜上皮中表达的比较[J].北京口腔医学，2014,14(6):344-346.［4］Jagirdar J.Immunohistochemistry:then and now[J].Arch Pathol Lab Med,2008,132(3):323-5.［5］Shi S R,Taylor C R.Extended application of antigen retrieval technique in immunohistochemistry and in situ hybridization[A].Shi S R，Taylor C R，eds.Antigen retrieval immunohistochemistry based research and diagnostics[C].Hoboken:John Wiley,2010:25-45．［6］许良中，杨文淘.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志,1996,6(4):229-231.［7］何新明,顾霞,郭文婷,等.免疫组织化学染色存在的问题及解决方案[J].实用医技杂志,2017,24(8):871-872.。

不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响作者：谭文贾晓敏来源：《中外医疗》2014年第15期[摘要] 目的探讨了不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响。

方法选取该院30例肾活检标本作为研究对象，随机分成对照组与研究组，对照组采用冰冻切片方法，研究组采用石蜡切片方法，其中分成应用无抗原修复组、胰酶抗原修复组、高压加热抗原修复组，均进行免疫荧光染色。

分析和对比研究组与对照组标本的免疫荧光染色结果。

结果研究组中的胰酶抗原修复组与对照组的免疫荧光染色结果基本相同（P0.05）。

结论冰冻切片的免疫荧光染色标本无肾小球的时候，可以采用胰酶抗原修复作为补救措施。

[关键词] 抗原修复方法；肾活检；石蜡切片；免疫荧光染色[中图分类号] R692.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）05（c）-0190-02免疫荧光技术又被称为荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种，具有特异性强、敏感性高、速度快等特点，在肾穿刺活检的病理诊断中具有很大的意义。

选取该院2013年2月—2013年9月间确诊为肾小球疾病的患者为研究对象，主要探讨了不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响，现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料该院共接收30例经确诊为肾小球疾病的患者，男性14例，女性16例，年龄在19～64周岁之间，平均年龄为（41.5±13.4）周岁。

其中有9例患者属于IgA肾病，8例患者属于局灶节段硬化性肾小球肾炎，6例患者属于轻度系膜增生性肾小球肾炎，4例患者属于膜性肾病，3例患者属于系统性红斑狼疮。

将每例患者的肾活检标本分别制成采用10%福尔马林固定的2 μm 厚石蜡切片，和2 μm厚的冰冻切片，冰冻切片为对照组，石蜡切片为研究组，并将研究组的标本随机分为胰酶抗原修复组、无抗原修复组、高压加热抗原修复组，分析和对比两组的免疫荧光染色结果，两组患者的年龄、性别、病程、病史等一般资料，数据差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

不同方式的抗原修复对免疫组化结果的影响目的：探讨免疫组织化学中不同抗原修复方式对染色结果的影响。

方法：采用高温高压修复法、微波修复法和酶消化法对病理科采用的四项免疫组织化学标记（p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1）进行染色，在显微镜下对染色阳性率进行比较。

结果p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1四项标记在三种修复方法下均具有较高的阳性率。

高温高压修复法、微波修复法的染色结果阳性率较高，与酶消化法相比，有统计学意义（P＜0.05）。

结论：三种修复方法均有实用性，三者相比，高温高压修复法、微波修复法修复效果更好，对病理诊断指导意义较大。

标签：免疫组化；抗原修复；方法对比免疫组化技术是病理科常见鉴别技术，在病理诊断中发挥显著作用。

石蜡切片由于在制作过程中使用大量有机溶剂（酒精、二甲苯）和包埋过程中加热处理使抗原活性丧失，所以通常采用抗原修复方法来提高石蜡切片免疫组化反应的敏感性。

抗原修复的质量在一定程度上决定了染色结果的好坏，从而影响诊断结果的判定[1]。

目前，抗原修复的方法有酶修复法、高温高压修复法、微波修复法等。

本科室采用不同抗原修复法对p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1进行比较获取最佳抗原修复方法。

1 材料1.1 材料：选用新疆医科大学第二附属医院病理科2010年3月-2016年6月期间手术切除的经病理证实为食管鳞癌的石蜡包埋组织共150例。

经两位病理医师诊断确诊，组织直径在3cm以上，苏木精-伊红染色法（HE）染色切片细胞清晰，对比度明显、颜色鲜艳。

1.2 主要试剂：即用型p53、Ki67、C-erbB-2、cyclin D1一抗，二抗，DAB 试剂，高压锅、微波炉。

2 方法2.1 染色方法：组织经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，3～5μm连续切片，60℃烤箱烤片过夜备用。

抗原修复法分三组：①将切片置于盛有柠檬酸盐缓冲液的高压锅内高压修复3min；②用柠檬酸盐缓冲液微波加热10min；③或用胰酶或胃酶消化15min。