酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(麝香草酚肽比色法)
- 格式:pdf
- 大小:271.62 KB
- 文档页数:2
迪信泰检测平台
酸性磷酸酶(ACP)检测
酸性磷酸酶(Acid phosphatase, ACP)是一种是非特异性磷酸单酯酶,可以催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应,生成无机磷酸和相应的醇、酚、糖等,还可以催化磷酸基团的转移反应,并直接参加磷代谢,在钙、磷的消化、吸收和分泌过程中发挥了重要的作用。
诱导并分泌酸性磷酸酶是植物应对低磷环境的重要适应性反应之一,血清酸性磷酸酶活力已成为诊断和监测多种疾病重要手段。
迪信泰检测平台采用生化法,结合相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测酸性磷酸酶的活性变化。
此外,我们还提供其他酯酶类的检测服务,以满足您的不同需求。
生化法测定酸性磷酸酶样本要求:
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期:2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告,报告包括:
1. 实验步骤(中英文)。
2. 相关参数(中英文)。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 酸性磷酸酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案,具体可免费咨询技术支持。
C肽(C-P)测定试剂盒(酶联免疫法)适用范围:用于体外定量测定人血清中C肽(C-P)的含量。
1.1产品型号/规格试剂盒包装规格为48人份/盒、96人份/盒,具体组成见表1:表1 试剂盒主要组成成分2.1外观和物理检查液体组分应澄清,无沉淀或絮状物;所有组分应无包装破损。
各组分装量应不少于表1中要求。
2.2准确性试剂盒校准品与相应浓度的国家标准品同时进行分析测定,用双对数(Log-Log)数学模型拟合,要求两条剂量-反应曲线不显著偏离平行(t检验);以C-P国家标准品为对照品,试剂盒校准品的实测浓度与标定浓度的比应在0.90~1.10之间。
2.3线性用Log-log数学模型拟合,在0.5 ng/ml~8.0 ng/ml范围内,剂量-反应曲线相关系数(r)的绝对值应不低于0.9900。
2.4精密度2.4.1批内精密度(CV%)应不高于15.0%。
2.4.2批间精密度(CV%)应不高于15.0%。
2.4.3 冻干组分批内瓶间差异应不高于15.0%。
2.4.4 冻干组分批间差异应不高于15.0%。
2.5最低检出限试剂盒最低检出限应不大于0.25 ng/ml。
2.6质控血清测定值每次检测结果均应在允许范围之内。
2.7特异性与胰岛素原(pro-Insulin),胰岛素(INS)没有显著交叉反应。
配制高浓度pro-insulin,INS溶液,测量结果应符合下表。
表2 与其它激素的交叉反应数据2.8稳定性2.8.1 37℃放置7天,测定结果应符合上述2.1~2.7项要求。
2.8.2 2~8℃放置12个月后,测定结果应符合上述2.1~2.7项要求。
2.8.3 冻干品于复溶后2~8℃保存一个月或-20℃保存至失效期,冻融不超过两次,必要时分装冻存。
(本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断!)Elabscience®碱性磷酸酶(ALP)比色法测试盒Alkaline Phosphatase (ALP) Activity Assay Kit产品货号:E-BC-K091-M产品规格:48T(32 samples)/96T(80 samples)检测仪器:酶标仪(500-530 nm)使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题,请通过以下方式联系我们:销售部电话************,************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签),以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测动物血清(浆)、体液、组织及细胞中碱性磷酸酶的活力。
检测原理在pH=10的反应液中,碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠水解,生成游离酚和磷酸。
酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉结合,并经铁氰化钾氧化生成红色的醌的衍生物,根据红色的深浅计算酶活的高低。
本试剂盒检测组织和细胞样本时,需测定总蛋白浓度,推荐使用BCA法(货号:E-BC-K318-M)。
提供试剂和物品说明:试剂严格按上表中的保存条件保存,不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂,使用前请先离心,以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器:酶标仪(500-530 nm,最佳检测波长520 nm)、涡旋混匀仪、37℃恒温箱。
耗材:枪头(1000 µL,200 µL,10 μL)、EP管(10 mL,2 mL)。
试剂:双蒸水、PBS(0.01 M,pH 7.4)或生理盐水(0.9% NaCl)试剂准备①试剂盒中的试剂平衡至室温。
②工作液的配制:按试剂一:试剂二为1:1的体积比混匀,现用现配,未用完的试剂2-8℃避光可保存1天。
③不同浓度标准品的稀释:样本准备①样本处理血清血浆等液体样本:直接测定。
Caspase 8 活性检测试剂盒(比色法)产品简介:Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)家族在介导细胞凋亡过程的起着极其重要的作用,其成员包括Caspase1~11等,均属于蛋白酶家族。
Caspase 8又称FLICE、MACH、Mch5、Caspase-8,通常以酶原的形式存在,在细胞凋亡的信号转异过程中被激活,在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡过程中Caspase 8被激活,形成一个由p18和p10组成的二聚体,进一步激活下游的Caspase 4、Caspase 6、Caspase 9、Caspase 10。
Jimei Caspase 8活性检测试剂盒(比色法)(Caspase 8 Colorimetric A ssay Kit)的检测原理是利用Caspase 8催化特异性底物acetyl- Ile -Glu-Thr-Asp p-nitroanilide(Ac-IETD-pNA)产生黄色的游离硝基笨胺pNA (p-nitroaniline),通过测定分光光度比色法测定pNA在400~410nm处吸光值,从而间接获得Caspase 8的活性。
自备材料:1、水浴锅或恒温箱2、96孔板3、酶标仪或分光光度操作步骤(仅供参考):1、制备标准曲线:①按照Caspase Lysis buffer:Assay buffer=1:9的比例配制适量的标准品稀释液。
②用标准品稀释液稀释pNA(10mM),使pNA分别达到200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM,另外设置一般不加pNA仅含标准品稀释液作为零管,把以上系列浓度物质作为标准品。
③取pNA浓度分别为200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、0的标准品各100μl加入至96孔板或取适量体积加入至容量不超过100μl的比色杯,测定405nm处吸光值即A405。
临床生化常用的色原及检测波长Toos 545nm苯酚(对氯苯酚)505nmNAD(P)H指示系统,波长340nm,项目:ALT、AST、GLUC己糖激酶法、C K、UREA、LDH等。
苯衍生物类,波长400-410nm,如ALP、GGT、CHE等。
过氧化物酶指示系统,项目:TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。
可见光波长及其互补色:可见光波长及其相应被吸收的颜色依次为:红色(630~700nm)、橙色(600~630nm)、黄色(570~600nm)、绿色(500~570nm)、蓝色(435~500nm)、紫色(400~435nm)。
★540nm:1. 双缩脲测蛋白:所有蛋白质分子都含有肽键。
在碱性溶液中,肽键与铜离子结合,生成蓝紫色化合物,在540nm处吸光度与肽键的数量呈正比关系,可以计算蛋白质含量。
2. 染料结合法测脑脊液蛋白:在柠檬酸存在的酸性条件下,伊红Y燃料离解成阴离子型,染料的黄色消退,使试剂空白吸光度降低;另外,蛋白质多肽链中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸残基,离解生成带-NH3+基团,与染料阴离子的羧基和酚基借静电吸引而结合成红色蛋白燃料复合物,其540nm处吸光度大小与蛋白质浓度呈比例。
★628nm:1. 溴甲酚绿法测血清白蛋白:在PH4.2的缓冲液中,白蛋白分子带正电荷,与带负电荷的溴甲酚绿(BCG)生成蓝绿色复合物,在波长628n m处有吸收峰。
复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比。
★603nm:1. 溴甲酚紫法(BCP)测血清白蛋白:BCP溶于PH5.2的醋酸缓冲液中,呈黄色。
当它与白蛋白结合后转变为绿色的符合物,在波长603出有最大吸收峰。
★650nm:1. 磷钨酸法测黏蛋白:以0.6mol/L过氯酸沉淀血清中蛋白质时,黏蛋白不被沉淀,仍存留在滤液中,再加磷钨酸使黏蛋白沉淀,然后以酚试剂测定沉淀物中蛋白质的含量。
U/I 4062-羧基丁酸<10mmol/l 37o C U/I 3072-羧基丁酸<10mmol/l 30o C U/I 2302-羧基丁酸<10mmol/l 25o C 酸性磷酸酶(总) ACP(Total) U/I23.51-萘基磷酸酯底物动力学方法 37o C g/l30.0 g/dl3.00 g/l28.2 g/dl2.82 g/l27.5 g/dl2.75 U/l484二乙醇胺缓冲液 DEA 37o C U/I377二乙醇胺缓冲液 DEA 30o C U/I309二乙醇胺缓冲液 DEA 25o C U/l336IFCC 改良AMP,37o C U/I262IFCC 改良AMP,30o C U/I215IFCC 改良AMP,25o C U/l320未改良AMP,37o C U/I249未改良AMP,30o C U/I204未改良AMP,25o C U/l149IFCC/SFBC 方法 含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 37o C U/I110IFCC/SFBC 方法 含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 30o C U/I84IFCC/SFBC 方法 含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 25o C U/l141IFCC/SFBC 方法 不含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 37o C U/I104IFCC/SFBC 方法 不含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 30o C U/I79IFCC/SFBC 方法 不含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 25o C U/l133SCE 方法 Tris 缓冲液 37o C U/I98SCE 方法 Tris 缓冲液 30o C U/I75SCE 方法 Tris 缓冲液 25o C U/I258免疫抑制EPS 底物 37o C U/I255罗氏液体稳定pNPG7 37o C U/I288朗道液体乙醛缩pNPG7 37o C U/I292pNP 麦芽糖三糖苷37o C U/I294西门子系列阻断系统 pNPG7 37o C U/I233朗道乙缩醛pNPG7 37℃ U/I318朗道液体乙缩醛pNPG7 37℃ U/I278宝灵曼/罗氏 比色法 pNPG7 37o C U/I293贝克曼 Synchron CX4/CX5/CX7 37o C U/I343西门子麦芽五糖/六糖37o C U/I269酶糖化法 37o C U/I284罗氏Integra2-氯pNPG7 37o C U/I283其他罗氏2-氯pNPG7 37o C U/I278罗氏液体稳定pNPG7 37o C U/I352西门子2-氯pNPG7 37o C U/I291贝克曼库尔特阻断pNPG7 37o C U/I299贝克曼 Synchron AMY7 37o C U/I323雅培非IFCC 校准 37°C U/I357雅培IFCC 校准 37°C U/I285贝克曼 CNPG3(衰减系数) 37°C U/l181IFCC/SFBC 方法 含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 37o C U/I122IFCC/SFBC 方法 含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 30o C U/I86IFCC/SFBC 方法 含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 25o C U/l143IFCC/SFBC 方法 不含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 37o C U/I97IFCC/SFBC 方法 不含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 30o C U/I68IFCC/SFBC 方法 不含磷酸吡哆醛的Tris 缓冲液 25o C U/l139SCE 方法,Tris 缓冲液,37o C U/I94SCE 方法,Tris 缓冲液,30o C U/I 66SCE 方法,Tris 缓冲液,25o C 白蛋白ALB 碱性磷酸酶ALP 丙氨酸氨基转移酶ALT 胰淀粉酶pAMY 天冬氨酸氨基转移酶AST溴甲酚绿溴甲酚紫比浊法检测α羟丁酸α-HBDH淀粉酶AMYmmol/l 17.5比色法 mmol/l 17.4不同速率PH 改变 mmol/l 17.5酶法 mmol/l 18.5离子选择性电极μmol/l 45.0第4代循环酶法μmol/l44.5第5代循环酶法μmol/l25.4 mg/dl1.49μmol/l27.5 mg/dl1.61μmol/l27.3 mg/dl1.60μmol/l28.4 mg/dl1.66μmol/l87.8 mg/dl5.14μmol/l81.9 mg/dl4.79μmol/l77.0 mg/dl4.51μmol/l79.2 mg/dl4.63μmol/l92.4 mg/dl5.41 mmol/l3.24 mg/dl13.0 mmol/l3.12 mg/dl12.5 mmol/l3.24 mg/dl13.0 mmol/l3.26 mg/dl13.1 mmol/l114比色法 mmol/l115间接离子选择性电极 mmol/l116直接离子选择性电极 mmol/l7.15 mg/dl276胆碱酯酶 CHE U/l5347比色法 丁酰硫代胆碱 37o C U/l525CK-NAC 血清启动DGKC 37o C U/I329CK-NAC 血清启动DGKC 30o C U/I223CK-NAC 血清启动DGKC 25o C U/l515CK-NAC 底物启动DGKC 37o C U/I322CK-NAC 底物启动DGKC 30o C U/I219CK-NAC 底物启动DGKC 25o C U/l504CK-NAC (IFCC )37o C U/I316CK-NAC (IFCC )30o C U/I214CK-NAC (IFCC )25o C U/l524硫代甘油 37o C U/I328硫代甘油 30o C U/I223硫代甘油 25o C μmol/l26.9μg/dl171μmol/l25.4μg/dl162μmol/l358 mg/dl4.05μmol/l363 mg/dl 4.11重氮二氯苯胺(DCA)比色法重氮对氨基苯磺酸总胆汁酸TBA 甲基酚酞络合剂非去蛋白碱性苦味酸法罗氏NM-BAPTA 标记物硝基苯重氮盐肌酸激酶CK 离子选择性电极二氯苯重氮(DPD )二氯苯重氮(DPD)重氮对氨基苯磺酸二氧化碳CO 2氧化胆绿素(钒酸盐法)重氮二氯苯胺(DCA)偶氮砷Ⅲ(AR Ⅲ)氧化胆绿素(钒酸盐法)原子吸收铜Cu 直接胆红素D.Bil 总胆红素T.Bil 氯CL 总胆固醇CHOL 钙Ca 胆固醇氧化酶去蛋白碱性苦味酸法肌酐CREATμmol/l368 mg/dl4.16μmol/l370 mg/dl4.18μmol/l364 mg/dl4.11μmol/l397 mg/dl4.49μmol/l377 mg/dl4.26μmol/l368 mg/dl4.16D3(β)-羟丁酸 Ranbut mmol/l1.15Tris 缓冲液 100mmol/l pH8.5 U/I171γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺 37o C U/I135γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺 30o C U/I106γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺 25o C U/I146γ-谷氨酰-4-硝基苯胺 37o C U/I115γ-谷氨酰-4-硝基苯胺 30o C U/I90γ-谷氨酰-4-硝基苯胺 25o C U/I180γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(IFCC )37o C U/I142γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(IFCC )30o C U/I111γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(IFCC )25o C U/I185朗道γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺 37o C U/I146朗道γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺 30o C U/I114朗道γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺 25o C U/I27三乙胺缓冲液 50 mmol/l 37o C U/I21三乙胺缓冲液 50 mmol/l 30o C U/I17三乙胺缓冲液 50 mmol/l 25o C mmol/l15.5 mg/dl279 mmol/l15.7 mg/dl283 mmol/l15.2 mg/dl274 mmol/l15.5 mg/dl279μmol/l38.1μg/dl213μmol/l37.7μg/dl211mmol/l5.59mg/dl50.4 mmol/l5.54 mg/dl49.9 mmol/l5.36 mg/dl48.3亮氨酸氨基转肽酶 LAP U/l15NAGEL 37o C U/l329L →P 37o C U/I238L →P 30o C U/I167L →P 25o C U/l803P →L 斯堪的纳维亚及荷兰 37o C U/I580P →L 斯堪的纳维亚及荷兰 30o C U/I407P →L 斯堪的纳维亚及荷兰 25o C U/l696P →L 德国 37o C U/I503P →L 德国 30o C U/I353P →L 德国 25o C U/l693P →L SFBC 37o C U/I500P →L SFBC 30o C U/I 351P →L SFBC 25o C 葡萄糖氧化酶朗道紫外酶法比色法(标本未经沉淀预处理)苦味酸速率法苦味酸速率法空白比较(-26μmol/l )苦味酸速率法空白补偿(-18μmol/l )酶电极铁Fe 乳酸Lactate 乳酸氧化酶比色法葡萄糖脱氢酶已糖激酶比色法(标本经沉淀预处理)葡萄糖Glu 肌酐PAP 法美国强生Vitros IDMS(同位素稀释质谱法)γ-谷氨酰转肽酶GGT 谷氨酸脱氢酶GLDH 紫外法氧电极肌酐CREAT 乳酸脱氢酶LDHU/l 365L →P IFCC 37o C U/I 264L →P IFCC 30o C U/I 185L →P IFCC 25o C U/I53罗氏比色法 37o C U/I80朗道比色法 37o C mmol/l2.11 mg/dl1.47 mmol/l2.04 mg/dl1.42 mmol/l2.04 mg/dl1.42 mmol/l1.78 mg/dl4.33 mmol/l1.75 mg/dl4.25 mmol/l1.80 mg/dl4.37 mmol/l1.77 mg/dl4.30 mmol/l1.80 mg/dl4.37 mmol/l1.77 mg/dl4.30 mOsm/kg353计算法 mOsm/kg385冰点抽压法 mmol/l2.39 mg/dl7.41 mmol/l2.40 mg/dl7.44 mmol/l6.05酶法 mmol/l6.14直接离子选择性电极法 mmol/l6.22间接离子选择性电极法 g/l46.1 g/dl4.61 g/l45.0 g/dl4.50 mmol/l158酶法 mmol/l160直接离子选择性电极法 mmol/l162间接离子选择性电极法μmol/l45.3μg/dl253μmol/l48.6μg/dl272μmol/l47.0μg/dl263μmol/l42.8μg/dl239μmol/l50.2μg/dl281 mmol/l2.95 mg/dl261 mmol/l2.97 mg/dl263 mmol/l3.00 mg/dl266 mmol/l2.94 mg/dl 260马来酸氯苯吡胺Ⅲ紫外磷酸盐法酶法甲基麝香草酚蓝磷酸盐酶法钙镁络合指示剂偶氮砷Ⅲ二甲苯胺蓝光谱光度测量脂肪酶/甘油脱氢酶脂肪酶/GPO-PAP 0.11mmol/l 校正直接比色法朗道直接检测法脂肪酶/甘油激酶终点法.无游离甘油校正镁Mg 摩尔渗透压浓度Osmolality 清除过量游离铁双缩脲终点法Randox 比色法转铁蛋白计算法铁+未结合铁(铁饱和度)脂肪酶 Lipase 脂肪酶/GPO-PAP 无游离甘油校正总铁结合力TIBC 双缩脲动力法离子选择性电极无机磷P 钾K 总蛋白TP 钠Na 乳酸脱氢酶LDH甘油三脂TG锂Limmol/l 19.9 mg/dl 120 mmol/l 19.9 mg/dl120 mmol/l19.9 mg/dl55.9 mmol/l0.542 mg/dl9.11 mmol/l0.565 mg/dl9.50 mmol/l0.561 mg/dl9.42 mmol/l0.558 mg/dl9.37 mmol/l0.556 mg/dl9.34μmol/l37.2μg/dl 243去蛋白比色法尿酸过氧化物酶不含抗坏血酸氧化酶TIPS : 各位老师:RANDOX 人血清基质校准血清CAL2350(正常值)和CAL2351(异常值)针对不同厂家的生化分析仪和不同的分析方法给出了不同的靶值,篇幅所限如果在本靶值单中未能找到您需要的数据,请查看包装盒内附赠的光盘,其中含有本产品的全部信息,您也可以联系您的产品供应商或公司本部,我们将竭诚为您服务。
土壤酸性磷酸酶(soil acid phosphatase)活性测定试剂盒(分光光度法)使用说明货号:BC0140规格:50T/48S产品简介:土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响,根据最适pH范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
酸性环境中,S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。
产品内容:试剂一:液体×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。
用前加50mL蒸馏水充分溶解。
试剂三:液体×1瓶,4℃保存。
试剂四:粉剂×1支,4℃避光保存。
临用前加1152μL无水乙醇(自备),48μL蒸馏水充分溶解。
(变褐色后不能再使用)标准品:液体×1支,0.5μmol/mL苯酚标准液,4℃保存。
操作步骤:一、粗酶液提取:称取风干混匀土壤约0.1g,加入0.05mL甲苯(自备),轻摇15min;加0.4mL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。
8000rpm,25℃离心10min,取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤:1.分光光度计预热30min以上,调节波长到660nm,蒸馏水调零。
2.空白管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL蒸馏水,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30min,于660nm 测定吸光度,记为A空白管。
3.标准管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL标准液,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30min,于660nm 测定吸光度,记为A标准管。
4.测定管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL上清液,100μL试剂三,20μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30min,于660nm 测定吸光度,记为A测定管。
组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC2145规格:100T/48S产品内容:提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体15mL×1瓶,4℃避光保存,变成蓝绿色不能使用。
标准品:液体1mL×1支,2μmol/mL酚标准液,4℃保存。
产品说明:AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。
在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:称取约0.1g组织,加提取液1mL充分研磨,4℃、10000rpm离心10min,取上清液待测。
血液可直接用于测定,或者适当稀释后用于测定。
二、测定步骤:1.分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到510nm,蒸馏水调零。
2.试剂二置于37℃水浴中预热30min以上。
试剂名称(μL)测定管对照管空白管标准管蒸馏水--4-2μmol/mL标准品---4上清液4---试剂一40404040试剂二40404040混匀后置于37℃水浴中保温15min试剂三120120120120上清液-4--混匀后于510nm测定吸光度,分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
三、AKP/ALP活性计算:1.按蛋白浓度计算活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(麝香草酚酞比色法)
简介:
酸性磷酸酶(acid phosphatase ,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内,各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5~5.5。
Leagene 酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(麝香草酚酞比色法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是在酸性条件下酸性磷酸酶(ACP)水解麝香草酚酞,产生麝香草酚酞和无机磷,经碱处理后麝香草酚酞呈蓝色,产物蓝色越深,说明酸性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,100T 该试剂盒可检测约50次样本。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:
操作步骤(仅供参考):
1、 准备样品:
① 血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的
测定,尿液通常也可以直接用于测定,-20℃冻存,用于酸性磷酸酯酶的检测。
② 细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离
心取上清,-20℃冻存,用于酸性磷酸酯酶的检测。
③ 高活性样品:如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶,可以使用原有的裂解液或
PBS 等进行稀释,也可以采用ACP Assay buffer 稀释。
2、 稀释标准品:取适量的麝香草酚酞标准(30mM)和标准稀释液,按下表稀释。
加入物(μl)
0 1 2 3 4 5 麝香草酚酞标准(30mM) 0 5 10 15 20 25 标准稀释液
50 45 40 35 30 25 相当于ACP 活性(U/L)
10
20
30
40
50
编号 名称
TE0037 100T Storage
试剂(A): 麝香草酚酞标准(30mM) 2ml 4℃ 避光 试剂(B): 标准稀释液 10ml RT 试剂(C): ACP Assay buffer 30ml RT 试剂(E): ACP 终止液 100ml
RT 使用说明书
1份
3、ACP加样:按照下表设置对照管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注
意避免产生气泡。
如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置平行管。
加入物(ml) 对照管标准管测定管
待测样品--0.05
系列麝香草酚酞标准-0.05 -
ACP检测工作液(37℃预温) 0.5 0.5 0.5
37℃准确保温30min。
待测样品0.05 --
ACP终止液 1.0 1.0 1.0
4、ACP检测:轻轻混匀,检测595nm处吸光度。
如果是制作标准曲线:以标准曲线的”0”
号管调零,读取各标准管吸光度;如果是测定管,应以蒸馏水调零,读取各管吸光度。
一般应数小时内检测完毕。
计算:
求得系列标准的吸光度,与相应的酶活性单位绘制标准曲线。
测定管吸光度减去对照管吸光度后,查标准曲线,求得ACP活性单位。
注意事项:
1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂,同时需避免反复冻融。
2、建议每次测定时都做标准曲线,以使标准更准确,另外标准品需避免反复冻融。
3、如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但应考虑根据比色杯的最小检
测体积,尽量采用小体积的比色杯。
4、如果希望进行酶活性的绝对定量,进行酶反应时应精确计时,此时推荐采用孵育30min
或更长时间,以减小操作过程中的时间误差。
5、待测样品中酸性磷酸酶活性较低时,可适当延长孵育时间至30min。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。