大蒜中大蒜素含量简便测定法

高效液相色谱法测定大蒜中大蒜素的含量韩贵芝;王文军;王芳【摘要】[目的]通过有机萃取法中萃取剂的选择、用量和萃取时间等条件的优化处理,建立大蒜中大蒜素含量测定的分析方法.[方法]将新鲜大蒜捣碎、酶解后,分别用乙醇和乙酸乙酯作为萃取剂萃取得到大蒜素溶液.用高效液相色谱仪分析样品中大蒜素的含量,确定最佳萃取剂;通过对不同时间段提取物检测对比,确定最佳萃取时间.[结果]以乙醇作为萃取剂提取大蒜素,大蒜素的平均浓度可以达到28.85μg/mL,乙酸乙酯提取组中的大蒜素平均浓度为13.24 μg/mL;经对比分析,乙醇提取大蒜素的最佳萃取时间为3.0h.[结论]乙醇作为实验室常用的化学试剂具有低毒、无污染、高效的提取效果,可为医药、食品等实验室对大蒜素的提取开发和利用提供参考.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(000)007【总页数】3页(P57-58,72)【关键词】乙醇;乙酸乙酯;大蒜素;萃取时间优化【作者】韩贵芝;王文军;王芳【作者单位】济宁医学院公共卫生学院,山东济宁272013;济宁医学院公共卫生学院,山东济宁272013;济宁医学院公共卫生学院,山东济宁272013【正文语种】中文【中图分类】S41-33大蒜为百合科葱属植物，在我国有2 000多年的种植历史。

大蒜属药食同源植物，其鳞茎中富含钙、铁、锌、锗等元素以及多种必需氨基酸[1-5]，具有较高的食用和药用价值，能有效防治高血压等疾病。

在传统医学中，大蒜也是一味中草药，能够激发免疫功能，诱生出干扰素，抑制生成肿瘤坏死因子，降低致癌物的作用，具有提高人体免疫功能的重要作用[6]。

大蒜中的有机含硫化合物——大蒜素，其化学名称是二烯丙基三硫化物(DATS)。

新鲜完整的大蒜中并不含大蒜素，只含有其前体物质——蒜氨酸。

蒜氨酸存于大蒜的细胞质中，但当大蒜的细胞破碎后，液泡内的内源蒜酶被释放并与蒜氨酸接触，经酶解生成大蒜素。

现代医学研究得出，大蒜素的药理作用包含以下几种：抗微生物、抗肿瘤、抗寄生虫、抗溃疡、抗衰老、降血压、降血脂、提高机体免疫力等[7-8]。

大蒜中大蒜素的提取及含量测定摘要：大蒜素是大蒜中的主要活性成分，是大蒜破碎后，蒜氨酸在蒜酶催化作用下产生的一种具有生物活性的有机硫化物，具有抗菌消炎、降血压、降血脂、防癌等作用，可用于多种疾病的防治，在临床上的应用也越来越广泛，作为药物或保健品开发具有广阔前景[1]。

大蒜素的提取方法可以分为三类：水蒸气蒸馏法、溶剂萃取及超临界流体萃取[2-3]，但是采用水蒸气蒸馏得到的提取物中大蒜素含量很低，导致提取物的活性很低。

超临界萃取法提取率高、品质好，但生产成本高、设备复杂、操作技术难度大[4]。

综合考虑在有机溶剂萃取法的基础上，以乙醇为提取剂萃取大蒜素，研究确定了其最佳工艺参数。

用硫酸钡沉淀法测定大蒜素的含量。

关键词：大蒜素、提取、含量测定Extraction and Determination of allicin in garlic(Yunnan Agricultural University College of Basic Science andInformation Engineer,Kunming 650201)ABSTRACT：Allicin is the main active ingredient in garlic,crushed garlic alliin in the garlic enzyme catalysis of a biologically active organic sulfides,With antibacterial anti-inflammatory role in lowering blood pressure, lowering blood pressure, anti-cancer,Can be used for the prevention and treatment of many diseases,Clinical application is more and more widely, and has broad prospects for development as drugs or health products .Allicin extraction methods can be divided into three categories:Steam distillation, solvent extraction and supercritical fluid extraction method,However, the extract obtained by steam distillation and the allicin content is low, resulting in low activity of the extracts.Supercritical extraction extraction rate, the quality is good, but the high cost of production, complex equipment operation prehensive consideration on the basis of the organic solvent extraction, ethanol extraction solvent extraction of allicin, research to determine the optimum parameters. Determination of allicin content of barium sulfate precipitation method.Key words: Allicin;Extract ;Content ;determination大蒜中大蒜素的提取含量及测定1 引言研究意义：通过以大蒜为原料来提取大蒜素，大蒜素的提取方法可以分为三类：水蒸气蒸馏法、溶剂萃取及超临界流体萃取[2-3]，但是采用水蒸气蒸馏得到的提取物中大蒜素含量很低，导致提取物的活性很低。

大蒜素研究进展21.GC及GC-MS联用最低检测限0.2ng 为避免被测物在高温条件下分解，柱温不易过高，适宜温度为70℃；GC-MS可以测出大蒜油中各种组分及含量最低检测限为0.005g/100g2. 高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法克服了气相色谱法中温度高, 不稳定的缺点, 柱温可控制在较低温度, 大蒜素的检测一般采用反相高效液相色谱法。

测定波长为240 nm。

该方法最低检测浓度为0. 18 g /mL3.定硫法定硫法的原理[ 16] 是大蒜中蒜氨酸的亚砜基和大蒜素的硫代亚砜基被浓硝酸氧化成硫酸离子, 与氯化钡反应形成硫酸钡沉淀, 根据硫酸钡的重量换算出大蒜素的含量。

在定硫法中, 氧化剂的用量, 酸度和沉淀剂用量等因素都会对测定结果产生影响。

氧化剂用量在2. 0~ 5. 0 mL之间较好, 氧化剂量过多或过少都会使测定结果偏低, 测定溶液的酸度值在2. 0~ 3. 0之间最佳, 沉淀剂用量在5~ 30 mL之间对测定结果影响较小。

在大蒜素保健食品中常用该方法进行大蒜素含量测定4.分光光度法在一定温度下大蒜素在蒜酶的作用下水解产生丙酮酸, 可以利用测定丙酮酸含量的方法测定大蒜中大蒜素的含量。

丙酮酸可以和2, 4- 二硝基苯肼作用生成丙酮酸- 2, 4 - 二硝基苯腙沉淀。

利用分光光度计对苯腙进行比色分析, 测出消光值D, 在D- C 标准曲线上找出对应的苯腙浓度, 从而换算出大蒜素的含量。

除此之外, 还可以通过测定半胱氨酸的含量从而计算出大蒜素含量。

其原理是基于一分子的大蒜素会与两分子的半胱氨酸发生反应, 可以通过过量的半胱氨酸与大蒜素反应, 用5, 5 -'二硫代双( 2- 硝基苯甲酸) 法测定反应前后半胱氨酸的量, 根据半胱氨酸减少量计算大蒜素含量。

结果为大蒜素平均含量0. 270 mmol/100g。

5. 其他方法除以上方法外, 还有生物检测法, 薄层扫描法, 硝酸汞沉淀法, 适用于定性分析。

大蒜素含量计算公式推导方法
大蒜素是指大蒜中含有的一种强效生物活性成分。

下面是大蒜素含量计算公式的推导方法：
1. 首先需要了解大蒜素的化学式：C6H10S2。

2. 大蒜素含量的计算，需要先测定大蒜素的含量，一般的测定方法是高效液相色谱法（HPLC）。

测定出大蒜素在溶液中的浓度。

3. 然后，需要知道大蒜素的摩尔质量，即11
4.2g/mol。

4. 接下来，将大蒜素的浓度换算成摩尔质量的浓度，即将浓度除以摩尔质量：C（mol/L）=浓度（g/L）÷摩尔质量（g/mol）。

5. 再将大蒜素的摩尔浓度转换成质量百分比，乘以摩尔质量，并乘以100%：质量百分比=摩尔浓度×摩尔质量×100%。

6. 最后，可以根据这个计算出大蒜素的含量。

以上是大蒜素含量计算公式的推导方法。

需要注意的是，在进行计算时需要严格按照化学计算规则进行，避免出现计算错误。

此外，不同的大蒜品种、生长环境和处理方法都会对大蒜素含量产生影响，因此进行大蒜素含量的测定时，需要选择适当的样本和方法，确保测定结果的准确性。

一种大蒜素的提取方法大蒜素是一种具有广泛生物活性的天然产物，其具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、促进免疫等多种功效。

因此，大蒜素的提取方法一直备受关注。

目前常见的大蒜素提取方法包括溶剂提取法、超声波提取法、微波提取法、酶解提取法等。

下面将详细介绍其中一种大蒜素提取方法。

1.实验材料及仪器：材料：新鲜大蒜、无水乙醇、无水乙酸；仪器：研钵、研钉、过滤纸、滤液瓶、离心管、旋转蒸发仪、超声波仪、分光光度计等。

2.提取步骤：（1）准备工作：将新鲜大蒜剥皮，洗净，切成细丁备用；称取适量的大蒜丁放入研钵中，加入适量的无水乙醇与无水乙酸，使之充分浸泡。

（2）提取大蒜素：将研钵放入超声波仪，开启超声波功能，进行超声波提取。

超声波的作用可以加速大蒜素的溶解和传递，提高提取效率。

超声波提取的参数一般为50-80℃的温度，20-40分钟的时间。

（3）离心分离：将超声波提取液倒入离心管中，然后对提取液进行离心分离。

通过离心作用，将大蒜素与固体渣滓分离开来。

一般可以选择高速离心3000-5000转，10-15分钟。

（4）浓缩：将分离后的大蒜素乙醇液倒入旋转蒸发仪中，进行浓缩。

旋转蒸发仪通过转动烧杯，加速溶剂的挥发，使得大蒜素得以浓缩。

（5）冷冻干燥：将浓缩后的大蒜素溶液置于低温(-20℃)的冷冻干燥器中，进行冷冻干燥。

冷冻干燥是将溶液中的水分冻结，然后通过低压下的真空处理，使水分直接从固态变成气态，以实现干燥的目的。

（6）称量、保存：将冷冻干燥后得到的无水大蒜素称量，进行保存。

一般可以使用干燥密封瓶等保存容器进行保存，避免大蒜素与空气中的氧气、湿度接触。

3.提取效果评价：（1）蒜素含量测定：通过分光光度计等仪器对提取得到的大蒜素进行含量测定。

根据大蒜素的特征吸收峰在245nm处，以此为波长进行测定。

（2）其他指标评价：如需进一步评价提取效果，还可以对大蒜素的抗菌活性、抗氧化活性、抗肿瘤活性等进行检测。

总结：该提取方法是一种常规的大蒜素提取方法，通过超声波的作用加速大蒜素的溶解，具有简单、高效的特点。

大蒜中大蒜素等含硫化合物的GC/M S 法测定李 雪 李英峰 刘必前(中国科学院化学研究所 北京 100080)摘 要 对大蒜中的有效成分)))大蒜素进行提取,并利用气相色谱-质谱联用仪对大蒜中的大蒜素进行测定。

确定大蒜素的成分主要包含二烯丙基一硫醚,二烯丙基二硫醚,二烯丙基三硫醚等在内的多种含硫化合物。

关键词 大蒜素 气相色谱-质谱联用法 乙醇提取法引言大蒜(Alium sativum L)是百合科葱属的多年生草本植物1,以鳞茎、花茎、嫩叶为主要产品。

我国是大蒜的主要生产国,约占世界总产量的1/4,鲜蒜及其加工制品除供国内消费外,还大量出口日本、东南亚等国家2。

我国人民食用大蒜主要作为调味品,大蒜的医药保健功效远远没有得到有效的利用,造成大量的浪费。

大蒜作为一种高效中草药绿色添加剂可应用于饲料工业,在畜牧养殖业中有重要作用,可增加饲料的适口性,有效促进畜禽地生长3;可提高生产效益,降低成本;改善畜牧产品品质,保护环境。

大蒜在医药领域具有抗菌消炎作用,能够增强肝脏解毒功能4,具有防治心血管疾病5,防治糖尿病的功能,能够起到防癌抗癌作用,有抗衰老的作用6。

由于大蒜具有较高的营养保健功效,使得提取以及测定大蒜中有效成分的工作显得尤为重要。

自从1840年德国化学家Theodor Wertheim 开始大蒜成分的研究以来,全世界的化学及医药科技工作者已弄清大蒜中的许多化学成分及其降解产物。

大蒜的食疗价值,主要是大蒜中的有效成分)))大蒜素在起作用。

大蒜素并非单一组分组成,它是由20多种易挥发物组成,主要有大蒜新素(C 6H 10O 2S),大蒜辣素(C 6H 10OS 2)及多种烯丙基,丙基,甲基组成的硫醚化合物7。

据生物化学分析证明,新鲜大蒜中并不含有大蒜素,而含有它的前体)))蒜氨酸。

蒜氨酸以稳定无臭的形式与多糖类结合在一起存在于大蒜中,蒜氨酸和蒜氨酸酶分别存在于大蒜细胞组织的不同部位,蒜氨酸及亚砜类化合物存在于细胞溶胶中,而蒜氨酸酶存在于液泡中。

高效液相色谱法测定大蒜油缓释片中大蒜素的含量一、背景大蒜素是一种具有抗菌、抗病毒、降血压、预防动脉粥样硬化等多种药理作用的天然活性物质，广泛应用于医学、保健品和食品添加剂等领域。

随着大蒜素及其制剂的使用范围逐年扩大，药品的质量和安全问题越来越引起人们的关注。

大蒜油缓释片是一种含大蒜素的保健品，其中的大蒜素含量是评价其质量的重要指标。

常规的大蒜素检测方法有紫外分光光度法、高效液相色谱法等。

其中，高效液相色谱法具有操作简单、准确度高、灵敏度好的特点，已成为现代化工分析中较为重要的分析方法。

二、测定方法本文采用高效液相色谱法测定大蒜油缓释片中大蒜素的含量，具体步骤如下：2.1 实验仪器与试剂•仪器：高效液相色谱仪、固相萃取仪•试剂：大蒜素参考标准品、大蒜油缓释片样品、甲醇、乙腈、水2.2 样品制备1.取大蒜油缓释片10片，粉碎成细末。

2.取1.0g大蒜油缓释片粉末，加入10mL甲醇，进行超声提取10min。

3.将提取液离心，取上清液，剩余物加入2mL水中，再进行一次超声提取10min，将两次提取液合并。

4.用固相萃取仪将提取液中的大蒜素进行富集，然后用甲醇进行洗脱。

最后浓缩洗脱液，加入2mL乙腈进行重溶。

2.3 色谱条件•色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）•流动相：甲醇:水（50:50，体积比）•检测波长：254nm•流速：1.0mL/min•注射体积：10μL2.4 合适分离条件的的确定将大蒜素标准品的浓度分别逐一注入色谱柱，测量峰面积的变化。

通过标准品峰面积的高度值与浓度值的线性拟合，确定适合分离的条件。

2.5 样品测定用注射器将样品注入色谱柱，根据标准品峰面积的高度与浓度值的线性关系计算得出样品中大蒜素的含量。

三、结果分析采用本方法测得20批大蒜油缓释片样品中，大蒜素的含量均在合理范围内，没有发现明显的质量问题。

专利名称：一种测定大蒜素片中大蒜素含量的方法专利类型：发明专利
发明人：叶少文,苏昭仑,游景水
申请号：CN201611197737.2
申请日：20161219
公开号：CN106596783A
公开日：
20170426
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于质量控制技术领域，具体涉及一种测定大蒜素片中大蒜素二烯丙基三硫醚含量的方法。

该方法将大蒜素片待测样品与N,N‑二甲基甲酰胺试混合溶解，高效液相色谱法检测，外标法分析得到所述二烯丙基三硫醚的含量。

本发明提供的检测方法可将二烯丙基三硫醚从大蒜素片中充分分离，从而能够准确检测大蒜素片中二烯丙基三硫醚的含量。

本发明检测方法线性、重复性、稳定性良好，精密度高，空白对测定结果基本无干扰，检出限、定量限低，回收率高。

申请人：汤臣倍健股份有限公司
地址：519040 广东省珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号
国籍：CN
代理机构：北京集佳知识产权代理有限公司
代理人：赵青朵
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第24卷,第3期光　谱　实　验　室V ol.24,N o.3 2007年5月Ch inese J ou rnal of S p ectroscop y L aboratory M ay,2007硫酸钡吸光比浊法测定大蒜中大蒜素含量马茜①(太原理工大学化学化工学院　太原市　030024)摘　要　用浓硝酸将大蒜中有机硫化物定量氧化成硫酸根,在聚乙烯醇介质中与钡离子反应生成稳定的硫酸钡悬浊液,吸光比浊法测定其硫酸根含量,从而换算出大蒜素含量。

建立了吸光比浊法测定大蒜中大蒜素含量的新方法,该法不需大蒜素标准样品,简单、快速、实用,结果与定硫法(重量法)基本一致。

关键词　比浊法,大蒜,大蒜素,聚乙烯醇。

中图分类号:O657.32 文献标识码:B 文章编号:100428138(2007)03203452031　前言大蒜是百合科葱属植物的地下鳞茎,在我国和世界各地作为民间用药已有数千年历史。

大蒜有抗菌、消炎、杀虫、降脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤和提高机体免疫力的作用。

大蒜的医疗保健作用与大蒜中的主要含硫化合物大蒜素密切相关。

因此大蒜素含量已成为评价大蒜及其制品质量的重要指标。

但大蒜素稳定性差,测定较为困难。

目前测定大蒜中大蒜素含量多采用定硫法[1](重量法)和高效液相色谱法[2],前者操作繁琐费时,后者则必须有大蒜素标准样品,硫酸钡吸光比浊法测定大蒜中大蒜素未见报道。

该法不需大蒜素标样,操作简单、快捷、实用。

结果与重量法基本一致。

2　实验部分2.1　测定原理新鲜大蒜中含硫化合物都以蒜氨酸(大蒜素的前体物质)形式存在,当鳞茎组织受损时,分解成大蒜素[3]。

用浓硝酸将大蒜中蒜氨酸的亚砜基和大蒜素的硫代亚砜基定量氧化成硫酸根,在聚乙烯醇介质中与氯化钡反应生成稳定的硫酸钡悬浊液,吸光比浊法测定其硫酸根含量,从而换算出大蒜素含量。

2.2　仪器与试剂TU21901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司).;SO2-4标准溶液:0.1 g L,以硫酸钾配制;10%氯化钡溶液;2%聚乙烯醇溶液;20%六次甲基四胺2HC l缓冲溶液;浓硝酸;试剂均为分析纯;实验用水为蒸馏水。

大蒜中大蒜素的提取及含量测定摘要：大蒜素是大蒜中的主要活性成分，是大蒜破碎后，蒜氨酸在蒜酶催化作用下产生的一种具有生物活性的有机硫化物，具有抗菌消炎、降血压、降血脂、防癌等作用，可用于多种疾病的防治，在临床上的应用也越来越广泛，作为药物或保健品开发具有广阔前景[1]。

大蒜素的提取方法可以分为三类：水蒸气蒸馏法、溶剂萃取及超临界流体萃取[2-3]，但是采用水蒸气蒸馏得到的提取物中大蒜素含量很低，导致提取物的活性很低。

超临界萃取法提取率高、品质好，但生产成本高、设备复杂、操作技术难度大[4]。

综合考虑在有机溶剂萃取法的基础上，以乙醇为提取剂萃取大蒜素，研究确定了其最佳工艺参数。

用硫酸钡沉淀法测定大蒜素的含量。

关键词：大蒜素、提取、含量测定Extraction and Determination of allicin in garlic(Yunnan Agricultural University College of Basic Science andInformation Engineer,Kunming 650201)ABSTRACT：Allicin is the main active ingredient in garlic,crushed garlic alliin in the garlic enzyme catalysis of a biologically active organic sulfides,With antibacterial anti-inflammatory role in lowering blood pressure, lowering blood pressure, anti-cancer,Can be used for the prevention and treatment of many diseases,Clinical application is more and more widely, and has broad prospects for development as drugs or health products .Allicin extraction methods can be divided into three categories:Steam distillation, solvent extraction and supercritical fluid extraction method,However, the extract obtained by steam distillation and the allicin content is low, resulting in low activity of the extracts.Supercritical extraction extraction rate, the quality is good, but the high cost of production, complex equipment operation prehensive consideration on the basis of the organic solvent extraction, ethanol extraction solvent extraction of allicin, research to determine the optimum parameters. Determination of allicin content of barium sulfate precipitation method.Key words: Allicin;Extract ;Content ;determination大蒜中大蒜素的提取含量及测定1 引言研究意义：通过以大蒜为原料来提取大蒜素，大蒜素的提取方法可以分为三类：水蒸气蒸馏法、溶剂萃取及超临界流体萃取[2-3]，但是采用水蒸气蒸馏得到的提取物中大蒜素含量很低，导致提取物的活性很低。

附件：一、保健食物中大蒜素的测定1 范围本方式适用于以大蒜及其制品为原料的保健食物中大蒜素（三硫二丙烯，C6H10S3）的含量测定。

本方式最低检出浓度为mL；取100mg试样，提取定容时，试样中大蒜素最低检出质量浓度为/100g。

本方式最正确线性范围： mL～ mg/mL。

2 原理：依照大蒜素为挥发性油成份，经有机溶剂提取，用气相色谱仪分析，采纳外标法定量。

3 试剂除特殊说明，所用试剂均为分析纯。

无水乙醇正己烷标准溶液：称取标准品，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，该溶液中含大蒜素浓度为mL。

此溶液可在冰箱中保留七天。

取该溶液，置于10mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，此溶液含大蒜素浓度为mL。

4 仪器气相色谱仪：附氢火焰（FID）检测器数据处置机或积分仪分析天平：万分之一超声清洗机离心机：3000r/min5分析方式试样提取固体试样：称取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精准至），加无水乙醇适量，密塞，超声70min，掏出冷却，加正己烷定容（调剂大蒜素含量约为1mg/mL），振摇，静置分层后，取上层溶液进样。

液体试样吸取试样适量（相当于含大蒜素5mg，精准至），置于分液漏斗中，加5mL正己烷振摇提取1min ，静置（或离心）分层后，取上层溶液进样。

气相色谱参考条件 色谱柱：HP-5(30m×柱箱温度：100℃（3min ）min)10(℃200℃150℃/min 20℃/min 10−−−→−−−−→−进样口温度：220℃ 检测器温度：250℃ 载气：氮气（1mL/min ）氢气：40mL/min ；空气：400mL/min 5.2.7 进样量：1μL定性分析：在参考操作条件下，以对照品与试样比较保留时刻定性。

定量分析：试样中大蒜素色谱峰面积或峰高与标准的色谱峰面积或峰高比较定量。

结果计算W =100021⨯⨯⨯⨯m A VC A ×100式中：W —大蒜素的含量，g/100g （g/100mL ）； A 1—试样利用液色谱峰面积或峰高； A 2—标准利用液峰面积或峰高； C —标准利用液浓度，mg/mL ； V —试样定容体积，mL ； m —试样量，g （mL ）。