实验四-玉米种子盐溶蛋白凝胶电泳.

盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度试验中的几个问题
向东山
【期刊名称】《内蒙古农业科技》
【年(卷),期】2006(000)002
【摘要】盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度已经广泛应用于种子鉴定中,但仍然存在一定的技术问题.文章仅就鉴定过程中药品的选择、溶液的配制和电泳成像方面易出现问题的技术环节进行分析.
【总页数】2页(P34,36)
【作者】向东山
【作者单位】湖北省生物资源保护与利用重点试验室、湖北民族学院生物技术研究所,湖北,恩施,445000
【正文语种】中文
【中图分类】S513
【相关文献】
1.盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法 [J], 师范生
2.盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度试验报告 [J], 黄象男;任建升;郑祥艳;郭晓慧;李永强
3.盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度应注意的问题 [J], 李维明;陶学英;柴宗华;景彦彪
4.盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度方法改进初探 [J], 白文斌;郎海岩
5.改进的盐溶蛋白电泳法鉴定玉米品种农大108种子纯度及品种真实性 [J], 张文玲
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玉米盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的工作原理，是从玉米种子中提取的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用下得到良好分离，通过染色显示蛋白质谱带类型；根据分子遗传学的理论，遗传信息的转移是遵守DNA →RNA →蛋白质这样的中心法则的，遗传信息在不同的大分子之间的转移都是单向的，不可逆的，只能从DNA 到RNA （转录），从RNA 到蛋白质（翻译）。

不同的玉米品种具有不同的遗传物质，那么种子内也就具有不同的蛋白质，不同的蛋白质其所带电荷不同，电泳谱带也就不同，通过对电泳谱带的分析达到对种子的真实性和品种纯度的鉴定。

玉米盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳，经过从试剂的配制到灌胶制板、从样品的制备到点样、从通电到卸板、再到胶板的染色等一系列复杂的程序之后，终于得到了一块染色清晰的胶板，接下来最关键也是最重要的一步就是对谱带进行分析，如何对谱带进行正确的分析、分析时又会遇到哪些问题，现结合多年工作经验就这些问题总结分析。

1　电泳谱带区域划分及其作用首先要对谱带进行区域划分，电泳谱带一般按分子量的大小划分为3个区域：主谱带区、次谱带区、辅助区。

主谱带区位于胶板的中间区域，该区由中分子量的蛋白质所组成，在该区域中，蛋白质谱带数量多、染色深，品种间差异大，是纯度鉴定的主要区域；次谱带区，位于胶板的下部区域，该区由小分子量的蛋白质所组成，在该区域中蛋白质谱带数量少，谱带扩散，染色相对较浅，品种间有差异，但不太显著，在纯度鉴定中，当主谱带区差异不明显时，可根据该区域的谱带差异进行鉴定；辅助区，该区域在胶板的上部，该区由大分子量的蛋白质所组成，蛋白质谱带数量多，染色谱带细，易受电泳条件的影响，对于虫蚀、发霉、生病的子粒，该区域谱带会部分或全部消失，所以，在磨样时要先将虫蚀、发霉、生病的子粒剔除，该区域品种间差异小，不太容易观察，最好不作为纯度鉴定时用，如果主谱带区和次谱带区无差异，只有辅助区有差异时，最好严格控制操作条件，使该区域的谱带清晰，以便容易观察分析。

玉米种子室内纯度测定技术应用电泳技术是国际公认的作为种子室内种子纯度鉴定有效方法，电泳在品种鉴定中的成功开发应用是基于蛋白质可作为对编码的结构基因的标记。

种子贮藏蛋白组分是由遗传基因控制的，不同品种的蛋白质电泳图谱必然存在差异，因此，可有效区分不同品种的玉米作物。

我们将醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶玉米电泳技术和玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法进行比较，得出适合新疆玉米室内鉴定方法。

1醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和盐溶蛋白电泳技术的对比性研究1.1两种玉米电泳技术对玉米亲本及杂交种的鉴定试验首先抽取具有代表性的玉米种子样品采用醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶玉米电泳技术和玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定两种方法进行室内的纯度鉴定，检测样品中自交系和异品种的数量，从基因水平鉴定玉米种子样品的纯度状况，同时验证小区种植鉴定结果。

1.2两种玉米电泳技术图谱分析通过对样品的鉴定我们对醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和盐溶蛋白电泳技术进行了比较，两种方法鉴定结果基本一致，从图谱的外观上看，盐溶蛋白电泳技术谱带平整清晰，底色清亮，谱带与底色反差大，易鉴定，因为是不连续电泳谱带非常平整，胶板谱带美观，制作干板的成功率高。

但操作相对繁琐复杂；醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(AU-PAGE)是连续电泳，只需配一种凝胶溶液，仍然具有浓缩效应(与配方有关)，操作方法简单易于掌握，电泳分离效果好，谱带信息量大。

胶板弹性较好，对变质的种子也有较好的分离效果，此方法需检验人员有较丰富的实践经验，经验不足，蛋白提取量掌握不均，加样量不匀，可造成谱带不平，鉴定困难。

2新疆玉米室内纯度鉴定技术实际情况新疆种子生化试验技术起点较低，检测人员技术水平与内地相比有一定差距，多数生产企业不具备生化试验条件，实验室仪器配备相对滞后。

多年来，醋酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术用于企业生产玉米种子纯度自检，具有较丰富的实践经验和熟练操作技巧，对仪器设备的要求不高，国产大一厂稳压稳流电泳仪、垂直板电泳槽、离心机、手动粉碎器等就可进行实验操作，实验所需药品试剂在新疆都能购买到，因此这项技术在新疆具有一定的应用基础，分离效果较好，简单可操作性强，便于在新疆推广。

·种子科技··2012（04）·于10℃，湿度85%~90％。

将瓶苗移到温室摆放在畦内，浇透水，瓶间距5cm，3天后打开瓶盖封膜，每天用喷壶喷水一次，4天后脱毒苗变绿就可以定植。

一般炼苗7~10天，使幼苗叶片黑绿中大、气生根多而发达时定植。

温室顶部要覆遮荫网，防止爆晒。

4.2定植将畦内蛭石浇水达饱和状态，用木板刮平，按8cm行距划行。

将脱毒苗用镊子从培养瓶中取出，放在清水中轻轻洗净根部的培养基，按株距5cm、行距12cm栽入基质内2.0~2.5cm深（大苗稍深，小苗略浅）。

栽满畦后用喷壶小水细喷一遍，使基质与种苗充分愈合。

栽植后温室顶部覆遮荫网遮荫7~10天，遮荫期间每隔一天细水喷浇一遍，保持空气湿度85%~ 90％，促使幼苗早生根，早发新叶。

7~10天后即可转入正常管理。

实践证明，在温、湿度条件合适时，移栽成活率可达90%以上。

4.3马铃薯移栽苗的扦插试验为了提高马铃薯微型种薯产量，降低生产成本，根据马铃薯的生理特性，我们在苗畦内进行了马铃薯移栽苗的扦插试验。

在试管苗移栽成活、苗高8~10cm、15~20天时，切取顶芽（3~5cm）进行扦插，扦插后立即浇透水，使空气湿度保持在85%左右，3天后略喷点水，以保持湿润。

当发现基质变干时立即浇水，正常情况下两天浇水一次，具体视苗床干湿情况决定，要用手深入到基质中掌握干湿。

需要注意的是，水分也不能过多，否则易引起烂苗。

浇水一般在上午10时以前进行。

通过试验调查：扦插苗结薯数量比试管苗略少，但薯块却明显大于试管苗所结薯块。

试验结果表明：在微型种薯生产过程中，采用试管苗移栽结合顶芽扦插技术，可明显提高微型种薯产量和质量，并降低成本。

收稿日期：2012-02-16玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定较传统的生态方法具有速度快、准确可靠、成本低廉、技术比较容易掌握等优点，在检验工作中应用广泛。

但它涉及到化学、生化、遗传学和植物学等多方面的知识，测定操作步骤较为繁琐，在实际操作中往往会出现一些问题，影响鉴定的正常进行。

浅析玉米种子纯度检验方法【摘要】农业作为我国国民经济发展过程中的重要支柱性行业，农业的增产丰收关系着国家的安全团结，而种子作为农业生产的基础性物资，与农业的产量的息息相关。

本文对影响玉米种子质量的因素进行了分析，并进一步对玉米种子纯度的检验方法进行了具体的阐述。

【关键词】玉米种子；质量；纯度；检验方法为了确保种子的质量和纯度，需要对农作物种子一个或多个质量特性进行一定的检验，从而使其满足规定的质量要求，这样不仅可以有效的保证种子的质量，同时也可以实现农业的增产丰收。

玉米是当前种植较为普遍的农作物，所以在播种前需要对其种子质量进行检验，通过检验合格的种子才可以进行播种，这样可以有效的确保播种的品种的优质性，同时也有效的保证了农业生产的安全性。

1.影响玉米种子质量的因素玉米作为广泛种植的农作物，其播种面积不断的扩大，这就对玉米种子的需求量增加，玉米种植过程中如果想要达到高产，则需要有效的保证玉米种子的纯度，使玉米种子的质量得以保证。

而在实际繁殖和培育中，导致玉米种子纯度受到影响的因素较多，大致总结为以下几个方面：（1）种子在繁殖田期间没有及时对所产生的杂合粒进行去杂，从而导致种子的纯度降低。

（2）由于玉米制种田中种子的亲本纯度不高，又没有及时进行去杂，从而导致异品种株及变异株的产生，影响到玉米种子的纯度。

（3）没有对玉米制种田进行良好的隔离，从而导致异品种花粉传入，从而导致杂合籽粒的产生。

（4）玉米种子在收获、运输、存储等过程中由于管理不严格，使异品种籽粒混入玉米种子中间，使玉米种子的纯度受到影响。

2.玉米种子纯度的检验方法2.1田间检验这是在玉米种子生产过程中所需要进行的检验，通过田间检验可以有效的保证种子的质量，使玉米种子的纯度得以进一步的提高。

（1）在检验过程中需要对玉米种子名称、种类、制种地、前期作业情况及田间管理等情况进行一个全面的了解，同时还要对其玉米种子的各生育期的特征进行掌握，从而对玉米种子的各方面情况有一个全面的了解和掌握。

试论玉米中蛋白质含量测定的技术方法玉米是世界四大粮食作物之一，也是人类重要的食用和经济作物之一，而玉米中蛋白质含量的测定对于玉米的优质育种和加工利用具有重要意义。

玉米中蛋白质含量测定的技术方法有多种，本文将从传统方法到现代方法进行探讨，并对比它们的优缺点，以期对玉米中蛋白质含量的测定方法有一个较为全面的了解。

一、传统方法：考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法是一种比较传统的蛋白质含量测定方法，其原理是将样品中的蛋白质与考马斯亮蓝形成复合物，然后用特定波长下的光吸收率来测定复合物的浓度。

这种方法操作简单，使用范围广泛，但其对样品的选择性不够高，容易受其他物质的干扰，而且需要大量有机溶剂，不符合现代绿色环保的要求。

二、生物学方法：凝胶电泳法凝胶电泳法是一种生物学方法，其原理是根据蛋白质在凝胶电泳中的迁移速率和大小分子间的差异，来对蛋白质进行分离和测定。

这种方法能够对蛋白质进行定性和定量分析，但操作复杂，需要较长时间，且对实验者的技术要求较高。

三、色谱法：高效液相色谱法高效液相色谱法是一种利用高效液相色谱仪进行分析的方法，其原理是利用样品中蛋白质与色谱柱填料相互作用不同，从而使蛋白质分离，并通过检测器进行定量分析。

这种方法具有分析速度快、选择性好、准确度高等优点，但仪器价格昂贵，维护成本高，不适合一般实验室的使用。

四、光谱法：红外光谱法不同的方法各有优缺点，具体选择何种方法还需根据实际情况来综合考虑。

在实际应用中，可以根据实验目的、仪器设备和实验操作水平等因素来选择合适的方法。

随着科学技术的不断进步，蛋白质含量测定的方法也在不断更新和完善，相信未来会有更多更加精准和便捷的方法出现，为玉米中蛋白质含量的测定提供更多选择。

玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法NY／T449—20011 范围本标准规定了玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度的室内检测方法。

本标准适用于玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度鉴定。

2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。

本标准出版时，所示版本均为有效。

所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB／T 3543．2—1995 农作物种子检验规程扦样GB／T 3543．5—1995 农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定GB 4404．1—1996 粮食作物种子禾谷类3 定义本标准采用下列定义。

3．1 种子真实性供检品种与文件记录(如标签等)是否相符。

3．2 品种纯度品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示。

[GB／T 3543.5]3．3 育种家种子育种家育成的遗传性状稳定的品种或亲本种子的最初一批种子，用于进一步繁殖原种的种子。

4 原理从玉米种子中提取的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用下进行分离，通过染色显示蛋白质谱带类型。

不同玉米品种由于遗传组成的不同，种子内所含的蛋白质种类有差异，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对种子真实性和品种纯度进行鉴定。

5 仪器设备及试剂5．1 仪器设备电泳仪(500V±5V连续可调、0～400mA连续可调、额定输出功率200W)、垂直板夹心式电泳槽、单籽粒粉碎器、天平(感量0．0lg、0．001g、0．000 1g 各一台)、酸度计、磁力搅拌器、高速离心机(5 000r／mln以上)、电冰箱、电炉、离心管(1．5 mL)、离心管架、移液管(10 mL、5 mL、2 mL各两支)、微量进样器(5～100μL)、恒温箱、观片灯等。

5．2 试剂丙烯酰胺、NN－亚甲基双丙烯酰胺、乳酸、乳酸钠、甘氨酸、抗坏血酸、硫酸亚铁、氯化钠、蔗糖、甲基绿、三氯乙酸、过氧化氢、考马斯亮蓝R250、无水乙醇、（略：正丁醇等）(所用试剂均为分析纯，所用水均为去离子水)。

玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法之改进探究摘要：种子检验是保证种子质量最有效的手段，笔者总结多年从事检验工作之经验，探究玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法中的有关步骤，提出一些改进方法，旨在为从事种子纯度鉴定的同行提供参考。

关键词：种子；纯度；鉴定；方法中图分类号：s513 文献标识码：b我国的玉米种植面积仅次于美国，位居世界第二。

由于玉米较之其他农作物抗逆性强、适应性广、产量高、价格也在逐年上涨，致使玉米单交种的数量每年都在递增。

同时，利润的驱使，全国每年都有不少假种和低纯度种子播种的案件发生，给农民和农业生产造成重大的损失。

玉米种子的纯度鉴定已成为我国种子生产和质量管理中突出的问题之一。

因此探究和掌握玉米种子纯度实验室精准的鉴定方法显得尤为重要。

玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法在20世纪70年代开始应用于种子纯度鉴定，并逐渐得到推广，2001年9月被列为行业标准，是现阶段各级农作物种子质量监督检验站及种业集团普遍采用的实验室纯度检测方法。

较传统的鉴定方法它具有成本低、准确可靠、快速和稳定等优点，另外重演性也比较好，特别是作为种子营销过程的验证方法，具有很大的使用价值，在检验工作中广泛应用。

但是玉米种子纯度盐溶蛋白质电泳鉴定方法，科技含量高，专业技术性强，测定操作步骤较为烦琐，在实际操作中往往会出现一些问题，影响鉴定的正常进行。

笔者根据多年从事种子检验工作的实际经验，探究该鉴定方法中的有关步骤，总结提出以下一些改进方法，在此供同行们体会参考。

1药剂配置方面1.1玉米盐溶蛋白质电泳的试剂配制如下1.1.1 90克丙烯酰胺+3克双丙烯酰胺用蒸馏水准确定容至500ml，过滤液存放在棕色瓶中。

1.1.2 1.14 ml乳酸钠+3.5～4 ml乳酸用蒸馏水准确定容至100 ml，过滤液存放在棕色瓶中。

1.1.3 0.2900g维生素c+0.0030g硫酸亚铁用蒸馏水准确定容至200 ml，过滤液存放在棕色瓶中。

盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法摘要介绍了盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法，以期为玉米种子纯度鉴定提供参考。

关键词盐溶蛋白电泳法；玉米种子；纯度鉴定；常见问题；处理方法盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度是基于品种间种子贮藏蛋白中盐溶蛋白质的组分差异来鉴定玉米种子纯度[1]。

从玉米种子中提取出的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应、分子筛效应、电荷效应作用下得到分离，通过染色显示系列蛋白质谱带根据谱带差异情况鉴定玉米种子的真实性和品种纯度。

该方法快速准确、经济实用，于2001年被列为行业标准。

该标准是我国第一部利用种子贮藏蛋白电泳技术鉴定玉米种子纯度的行业标准。

标准的实施为我国玉米种子室内纯度鉴定提供了重要的手段，在玉米种子纯度检验工作中得到了广泛的应用。

笔者结合工作实践总结在实际使用该标准中可能遇见的问题及处理建议，以供同行们商榷。

1 凝胶液不凝或者聚合缓慢不能形成胶体如果在胶液中加入催化剂过氧化氢后，凝胶液不凝或聚合缓慢不能形成胶体，可能由以下几个原因造成：一是药品纯度不够；二是试剂配比不当；三是胶液过期；四是催化剂失效。

在实际操作中，常常会碰到分离胶能够聚合，而浓缩胶不能聚合成胶体的情况，这是因为浓缩胶对试剂纯度的要求比分离胶液更高，若出现该种情况，首先，要特别注意N，N-亚甲基甲叉双丙烯酰胺的纯度和保质期，要求其纯度最好是99.0%以上的分析纯；其次，由于抗坏血酸不稳定，极易分解，因此在胶液中可适当增大抗坏血酸的比例至标准中的1.5倍或2.0倍。

可促进胶液聚合，并可有效延长胶液的保存期30～40 d。

2 点样孔破裂较多从浓缩胶中拔出样品梳时，点样孔破裂较多，会使试验终止。

这是应用电泳法检测种子纯度最常发生的情况，可能有以下几种原因，一是样品梳齿厚度不合适；二是催化剂过氧化氢的用量不合适；三是凝胶聚合的时间不够；四是拔梳子时用力不均，方式不对。

通常在进行该步操作时，首先，要仔细检查样品梳齿的厚度与两玻璃板狭槽是否合适，不能过紧，要稍微有一点空隙为宜，否则凝胶聚合后，很难拔出。

DOI:10.3969/j.issn.1003-1650.2024.13.025在保证种子质量的问题上，玉米种子是一个重要的代表。

保证玉米种子的纯度和真实性是控制玉米种子质量的关键。

同时，借助现代化新农业技术和基因鉴定技术鉴定玉米种子纯度也成了解决问题的核心。

通过基因鉴定技术，可以快速准确地鉴定出玉米种子是否经过杂交，从而保证玉米种子的质量和产量。

为了解决种子质量和耕地问题，需要加大监督和管理力度，同时加强技术研发和创新，推广现代化新农业技术和基因鉴定技术，提高农业生产效率和粮食安全保障能力。

种子是农业生产的基础，种子的质量直接影响到作物的产量和质量。

优化种子检测技术是推动农业现代化发展的重要措施之一。

种子的检查标准包括净度、发芽率、水分等，这些指标直接关系到种子的品质和生长能力，因此必须严格控制。

同时，做好安全隔离、选取优质种子、规范制种流程、病虫害防治、父本管理和割除等工作也是提高种子的纯度、发芽率的重要手段。

玉米种子是广泛应用的种子之一，控制玉米收获时间，做好晾晒、脱粒和运输工作，控制种子水分，标注种子名称等是保证玉米种子质量的重要步骤。

在晾晒和脱粒过程中，要注意控制温度、湿度和通风，避免种子受到过度损伤。

一、影响玉米种子质量的因素1、玉米种子的发芽率玉米种子是农业生产中的重要作物之一，其种子的质量直接影响到作物的产量和品质。

而种子的发芽率是衡量其质量的关键因素。

根据质量标准要求，单粒播种子发芽率要求不低于92%。

这也就意味着，如果玉米种子的发芽率低于这一标准，就会影响到种植后的播种效果。

2、玉米种子的品种纯度首先，去杂不干净是种子纯度较差的主要原因之一。

种子在收获后需要经过去杂处理，以保证种子的纯度。

但是，如果去杂不干净，就会导致杂质残留在种子中，从而影响种子的品质。

其次，隔离不安全也是导致种子纯度下降的原因之一。

如果不同品种的玉米种植在相邻的地块上，就会发生杂交现象，这会影响玉米种子的纯度和品质。

盐溶蛋白电泳技术鉴定玉米种子纯度常见问题的处理
刘玉欣
【期刊名称】《种子科技》
【年(卷),期】2005(023)005
【摘要】利用盐溶蛋白电泳技术鉴定玉米种子纯度,具有经济实用、快速准确、操作简便等优点,在检验工作中应用广泛.但在实际操作时往往会出现诸如胶液不凝等问题,影响鉴定的正常进行.下面结合实践体会谈谈常见问题产生的原因和处理方法.【总页数】2页(P291-292)
【作者】刘玉欣
【作者单位】河北省种子总站,河北,石家庄,050031
【正文语种】中文
【中图分类】S339.3+1
【相关文献】
1.盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法 [J], 师范生
2.玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法 [J], 张金汉
3.盐溶蛋白电泳检验玉米种子纯度操作及注意问题 [J], 杨京;赵会薇;李军虎
4.玉米种子纯度盐溶蛋白电泳操作中注意事项及其故障原因分析 [J], 崔健;董利娟
5.应用盐溶蛋白电泳技术鉴定玉米种子纯度的建议 [J], 续建国;孟全业
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