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电泳技术鉴定玉米种子应注意的几个问题电泳技术是一种用电流将混合物中的不同成分分离出来的方法。
在农业领域，电泳技术被广泛应用于种子品质鉴定和品种鉴定等方面，特别是玉米种子的鉴定。
然而，电泳技术在使用过程中需要注意一些问题，以保证鉴定结果的准确性和可靠性。
本文将介绍电泳技术鉴定玉米种子应注意的几个问题。
首先，需要选择合适的电泳方法和条件。
目前，常见的电泳方法包括垂直电泳和水平电泳两种。
垂直电泳是将试样置于竖直方向上的凝胶中，再通以电流，根据DNA分子的大小、形状和电荷等特征进行分离。
水平电泳是将凝胶放置在平板上，再通以电流，分离效果相对较弱。
在选择电泳方法时，应根据样品的性质、鉴定的目的和要求来确定。
同时，还要根据试样的电泳结果进行条件优化，如电泳电压、电泳时间、凝胶浓度、缓冲液pH值等，以提高分离效果和准确性。
其次，需要选择合适的电泳指纹分析技术。
电泳指纹分析技术是利用电泳方法对DNA或蛋白质等生物分子进行特征组成的定量和定性分析。
常见的电泳指纹分析技术包括基因PCR扩增和RAPD等。
其中，基因PCR扩增是通过引物的选择，在样品中扩增出特定长度的DNA片段，再进行电泳分离和检测。
RAPD则是通过选取不同长度的引物进行PCR扩增，产生具有不同大小和序列的DNA片段，在电泳中进行分离和检测。
选择合适的电泳指纹分析技术，可以提高样品的分辨率和鉴定准确性。
还需要注意样品的处理和保存。
样品的处理和保存对电泳分析的结果影响很大。
首先，需要掌握样品的数量、质量和纯度等方面的要求，以保证样品是具有代表性和稳定性的。
其次，需要在样品采集后尽快进行处理，并遵循一定的处理步骤和技术要求，如DNA和蛋白质的提取、洗涤和检测等。
最后，需要对样品进行适当的保存和存储，以避免外部环境和条件的影响，如光照、温度、湿度和酸碱度等。
总之，电泳技术是一种有效的种子鉴定技术，可以用于玉米种子的品质鉴定和品种鉴定等方面。
但要保证鉴定结果的准确性和可靠性，需要注意选择合适的电泳方法和条件，选择合适的电泳指纹分析技术，注意样品的处理和保存等重要问题。
实验9 玉米种子纯度测定（电泳法）一、实验目的练习玉米杂交种种子纯度的蛋白质电泳法的测定技术。
二、材料与仪器1.玉米杂交种：鲁单981、农大1082.仪器：电泳仪（稳压0-500?V、稳流0-400mA）、垂直板夹心式电泳槽、单籽粒粉碎器、天平、酸度计、移液管、烧杯、容量瓶）、试剂瓶、离心机、离心管（1.5mL）、离心管架、冰箱、微量移液器、磁力搅拌器、注射器、观片灯箱、油灰刀、染色盘、玻璃棒、研钵、滴管、毛刷等。
3.试剂：（略）三、方法步骤1．溶液配制（1）样品提取液：称取18g尿素，加水溶解后加12mL冰乙酸、4mL四甲基乙二胺，加水定容至100mL。
转入试剂瓶并加入0.05g甲基绿，4℃贮存备用。
（2）凝胶溶液：称取50g丙烯酰胺、50g尿素、1.0g N,N'—亚甲基双丙烯酰胺，加水溶解，加15mL冰乙酸，再加0.10g硫酸亚铁，加水定容至500mL，4℃贮存备用。
（3）催化剂溶液：称取1.75g过硫酸铵，加水溶解并定容至50mL，4℃可短期贮存。
（4）电极缓冲液：量取15mL冰乙酸，加水定容至1000mL。
（5）染色液（现用现配）：称取0.4g考马斯亮蓝R-250，用25mL无水乙醇溶解，倒入染色盘?，加50-60g三氯乙酸，加水500mL，搅匀。
2.操作步骤:一般包括：样品的提取、凝胶的制备、上样电泳、染色观察等步骤（1）蛋白质提取从送验样品随机数取100粒×2,用单粒粉碎器粉碎，置1.5mL离心管中，用滴管按样品体积的1.5-2倍加样品提取液，混匀提取30min后离心（8000r/min）4min，取上清备用。
（2）凝胶制备取预先洗净晾干的玻璃板装入橡胶框，固定在电泳槽内。
取10mL左右凝胶溶液于烧杯中，加1滴催化剂溶液，迅速搅匀沿高玻璃板外侧倒入底部，迅速轻轻振动电泳槽2次并放平，5min左右凝胶聚合。
取30mL左右凝胶溶液于烧杯中，加2滴催化剂溶液，迅速搅匀，将凝胶溶液倒满两玻璃板之间，迅速插入样品梳，2-3min聚合后将样品梳拔出，用注射器吸净样品槽中的水分。
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法NY／T449—20011 范围本标准规定了玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度的室内检测方法。
本标准适用于玉米单交种及亲本的真实性和品种纯度鉴定。
2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB／T 3543．2—1995 农作物种子检验规程扦样GB／T 3543．5—1995 农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定GB 4404．1—1996 粮食作物种子禾谷类3 定义本标准采用下列定义。
3．1 种子真实性供检品种与文件记录(如标签等)是否相符。
3．2 品种纯度品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示。
[GB／T 3543.5]3．3 育种家种子育种家育成的遗传性状稳定的品种或亲本种子的最初一批种子，用于进一步繁殖原种的种子。
4 原理从玉米种子中提取的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶的浓缩效应、分子筛效应和电泳分离的电荷效应作用下进行分离，通过染色显示蛋白质谱带类型。
不同玉米品种由于遗传组成的不同，种子内所含的蛋白质种类有差异，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对种子真实性和品种纯度进行鉴定。
5 仪器设备及试剂5．1 仪器设备电泳仪(500V±5V连续可调、0～400mA连续可调、额定输出功率200W)、垂直板夹心式电泳槽、单籽粒粉碎器、天平(感量0．0lg、0．001g、0．000 1g 各一台)、酸度计、磁力搅拌器、高速离心机(5 000r／mln以上)、电冰箱、电炉、离心管(1．5 mL)、离心管架、移液管(10 mL、5 mL、2 mL各两支)、微量进样器(5～100μL)、恒温箱、观片灯等。
5．2 试剂丙烯酰胺、NN－亚甲基双丙烯酰胺、乳酸、乳酸钠、甘氨酸、抗坏血酸、硫酸亚铁、氯化钠、蔗糖、甲基绿、三氯乙酸、过氧化氢、考马斯亮蓝R250、无水乙醇、（略：正丁醇等）(所用试剂均为分析纯，所用水均为去离子水)。
盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法摘要介绍了盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度常见问题及处理方法，以期为玉米种子纯度鉴定提供参考。
关键词盐溶蛋白电泳法；玉米种子；纯度鉴定；常见问题；处理方法盐溶蛋白电泳法鉴定玉米种子纯度是基于品种间种子贮藏蛋白中盐溶蛋白质的组分差异来鉴定玉米种子纯度[1]。
从玉米种子中提取出的盐溶蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳的浓缩效应、分子筛效应、电荷效应作用下得到分离，通过染色显示系列蛋白质谱带根据谱带差异情况鉴定玉米种子的真实性和品种纯度。
该方法快速准确、经济实用，于2001年被列为行业标准。
该标准是我国第一部利用种子贮藏蛋白电泳技术鉴定玉米种子纯度的行业标准。
标准的实施为我国玉米种子室内纯度鉴定提供了重要的手段，在玉米种子纯度检验工作中得到了广泛的应用。
笔者结合工作实践总结在实际使用该标准中可能遇见的问题及处理建议，以供同行们商榷。
1 凝胶液不凝或者聚合缓慢不能形成胶体如果在胶液中加入催化剂过氧化氢后，凝胶液不凝或聚合缓慢不能形成胶体，可能由以下几个原因造成：一是药品纯度不够；二是试剂配比不当；三是胶液过期；四是催化剂失效。
在实际操作中，常常会碰到分离胶能够聚合，而浓缩胶不能聚合成胶体的情况，这是因为浓缩胶对试剂纯度的要求比分离胶液更高，若出现该种情况，首先，要特别注意N，N-亚甲基甲叉双丙烯酰胺的纯度和保质期，要求其纯度最好是99.0%以上的分析纯；其次，由于抗坏血酸不稳定，极易分解，因此在胶液中可适当增大抗坏血酸的比例至标准中的1.5倍或2.0倍。
可促进胶液聚合，并可有效延长胶液的保存期30～40 d。
2 点样孔破裂较多从浓缩胶中拔出样品梳时，点样孔破裂较多，会使试验终止。
这是应用电泳法检测种子纯度最常发生的情况，可能有以下几种原因，一是样品梳齿厚度不合适；二是催化剂过氧化氢的用量不合适；三是凝胶聚合的时间不够；四是拔梳子时用力不均，方式不对。
通常在进行该步操作时，首先，要仔细检查样品梳齿的厚度与两玻璃板狭槽是否合适，不能过紧，要稍微有一点空隙为宜，否则凝胶聚合后，很难拔出。
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于10℃，湿度85%~90％。
将瓶苗移到温室摆放在畦内，浇透水，瓶间距5cm，3天后打开瓶盖封膜，每天用喷壶喷水一次，4天后脱毒苗变绿就可以定植。
一般炼苗7~10天，使幼苗叶片黑绿中大、气生根多而发达时定植。
温室顶部要覆遮荫网，防止爆晒。
4.2定植
将畦内蛭石浇水达饱和状态，用木板刮平，按8cm行距划行。
将脱毒苗用镊子从培养瓶中取出，放在清水中轻轻洗净根部的培养基，按株距5cm、行距12cm栽入基质内2.0~2.5cm深（大苗稍深，小苗略浅）。
栽满畦后用喷壶小水细喷一遍，使基质与种苗充分愈合。
栽植后温室顶部覆遮荫网遮荫7~10天，遮荫期间每隔一天细水喷浇一遍，保持空气湿度85%~ 90％，促使幼苗早生根，早发新叶。
7~10天后即可转入正常管理。
实践证明，在温、湿度条件合适时，移栽成活率可达90%以上。
4.3马铃薯移栽苗的扦插试验
为了提高马铃薯微型种薯产量，降低生产成本，根据马铃薯的生理特性，我们在苗畦内进行了马铃薯移栽苗的扦插试验。
在试管苗移栽成活、苗高8~10cm、15~20天时，切取顶芽（3~5cm）进行扦插，扦插后立即浇透水，使空气湿度保持在85%左右，3天后略喷点水，以保持湿润。
当发现基质变干时立即浇水，正常情况下两天浇水一次，具体视苗床干湿情况决定，要用手深入到基质中掌握干湿。
需要注意的是，水分也不能过多，否则易引起烂苗。
浇水一般在上午10时以前进行。
通过试验调查：扦插苗结薯数量比试管苗略少，但薯块却明显大于试管苗所结薯块。
试验结果表明：在微型种薯生产过程中，采用试管苗移栽结合顶芽扦插技术，可明显提高微型种薯产量和质量，并降低成本。
收稿日期：2012-02-16
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定较传统的生态方法具有速度快、准确可靠、成本低廉、技术比较容易掌握等优点，在检验工作中应用广泛。
但它涉及到化学、生化、遗传学和植物学等多方面的知识，测定操作步骤较为繁琐，在实际操作中往往会出现一些问题，影响鉴定的正常进行。
笔者结合多年在实践工作中的经验和教训，摸索出的玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定的方法及注意事项，现介绍如下，供同行参考。
1试剂配制
1.1提取液的配制
甲基绿0.15g，氯化钠5.80g，蔗糖200.00g，倒入1000ml烧杯中；加“水”800ml溶解，加热至微沸，放至室温；再加“水”定溶至1000ml，存放在4℃下保存。
1.2分离胶的配制
A号液：丙烯酰胺90g，甲叉双丙烯酰胺3g，定溶至500ml；
B号液：抗坏血酸0.3g，硫酸亚铁溶液3ml（硫酸亚铁溶液配制：0.1g硫酸亚铁定溶至100ml），定溶至200ml；
C号液：4ml乳酸，1.14ml乳酸钠，定溶至100ml。
配制：A号液500ml+B号液200ml+C号液100ml。
1.3浓缩胶的配制
D号液：丙烯酰胺12g，甲叉双丙烯酰胺2g，定溶至100ml；
E号液：抗坏血酸0.11g，乳酸0.05ml，乳酸钠0.57ml，硫酸亚铁溶液1ml，定溶至100ml。
配置：D号液100ml+E号液100ml。
1.43%过氧化氢溶液的配制
3%过氧化氢1ml，加“水”9ml定溶。
1.5电极缓冲液的配制
甘氨酸6.0g，倒入2000ml烧杯中，加“水”1800ml，用2ml乳酸调至pH值3.3，加“水”定溶至2000ml。
1.6染色液的配制
称取考马斯亮蓝2g，在研钵中用100ml无水乙醇研磨溶解，过滤于棕色瓶中。
取10ml该溶液，加入200ml的10%（W/V）三氯乙酸溶液中，混匀。
2操作流程
2.1样品磨碎
取单粒玉米种子，在单粒粉碎机上磨碎，收集到1.5ml离心管中，按约1：1的量加入提取液，震荡、摇
文章编号：1005-2690（2012）04-0036-02中图分类号：S513.037文献标志码：B
玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定
的流程方法及注意事项
侯银娟，木卜文，杨薇，魏小社
（宝鸡市种子管理站，陕西宝鸡721001）
·适用技术·
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匀，自然沉降4h后取上清液加样。
2.2准备
洗净玻璃板，装入橡胶封条中待用。
2.3灌胶
底层灌封底胶配制：5ml分离胶+20μL3%过氧化氢液；中间灌分离胶配制：15ml分离胶+20μL3%过氧化氢液；上层灌浓缩胶配制：5ml浓缩胶+40μL 3%过氧化氢液。
2.4插入样品梳
上层浓缩胶灌入后，迅速插入事先准备好的样品梳，稍后等上层胶液颜色稍微变白后再小心拔出样品梳。
2.5加样
加样前准备好两个烧杯，其中一个盛上蒸馏水，用微量进样器吸取15~25μL玉米提取液的上清液依次加入样品槽。
2.6电泳
将制备好的胶膜装入电泳槽中，对角拧紧螺栓，固定好胶膜，倒入配好的电极缓冲液（电极缓冲液液面要高于短玻板）。
将电源线连接，打开电源开关，调节电压为300~500v进行电泳。
待甲基绿指示剂下移至胶底部边缘时，关闭电泳，时间一般为40~60min。
2.7卸板
倒出电极缓冲液，从电泳槽内取出胶板，启开玻璃板，取出胶片，浸入染色液中。
2.8染色
在20~30℃条件下染色3~4h。
2.9洗板
取出胶片，在净水中用软毛刷轻轻涮洗干净。
2.10结果计算
待整个供检样品电泳结束后，在关灯片上鉴定胶片上电泳谱带的特征和一致性，计算本样品数占供检样品数的百分率，代入回归方程式，然后计算出品种纯度。
3注意事项
3.1样品提取
在每份样品制备测定前，必须先从净度分析后的种子样品中定量随机数出所测样品的粒数。
3.2加入双亲自交系
在测定每个品种每份样品时，最好加几粒该品种的双亲自交系同时分析鉴定。
因为玉米杂交种和亲本自交系的电泳谱带能清楚的反映出亲本自交系和杂交种间的互补性。
3.3磨样
研磨样品要磨碎磨细，以利于提取。
注意不能有样品散失，特别是胚部不能散失。
另外，接样容器每接一次要处理干净，防止样品之间交叉污染。
3.4封底缝后渗漏
这是一种常见毛病，主要是橡胶槽不干或者一次倒胶不均匀。
如果渗漏很快，则需将橡胶槽卸下，洗净、晾干后重新封缝。
3.5灌胶产生气泡
灌胶速度过快易产生气泡，致使电泳区带不整齐。
一旦有气泡产生，可振动电泳槽将气泡赶出，或用钢丝将气泡挑出。
3.6上样
点样时先按要求调好微量进样器，尽量吸取上清液，保证每次吸取的药液均匀一致。
另外，上样量要尽量减少，这样可产生比较窄的起始区带，最终谱带才会更清晰，更易观察。
3.7卸板
用油灰刀从玻璃板的一角撬开，注意用力要均匀。
然后用长针头注射器沿玻璃板边缘一边注水一边剥离凝胶板，剥离后将胶片缓慢放入染色液中，以防胶片破碎。
收稿日期：2012-02-21
Y两优302系长沙年丰种业有限公司用Y58s与F302配组育成的籼型两系杂交水稻新组合，2010年通过国家农作物审定委员会审定。
松溪县2010年引进试种，2011年较大面积示范推广，表现熟期适中、抗逆性强、穗大粒多、产量高、米质优、口味好等特点，深受农民欢迎。
现将其特征特性及栽培技术要点介绍如下：1特征特性
1.1生育期
该品种属籼型两系杂交水稻。
在长江中下游作一季中稻种植，全生育期平均136.5天，比对照Ⅱ优838
文章编号：1005-2690（2012）04-0037-02中图分类号：S511.048文献标志码：B
超高产优质杂交水稻Y两优302
特征特性与栽培技术
陈斌1，林峰1，刘奇文1，陈育荣2
（1.松溪县种子管理站，福建松溪353500； 2.松溪县农业局）
·良种良法·
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