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亳芍生物碱提取鉴定及含量测定

亳芍生物碱提取鉴定及含量测定
亳芍生物碱提取鉴定及含量测定

亳芍生物碱提取及含量测定

作者周飞

指导教师陈乃东

摘要:用95%乙醇提取亳芍干粉,总提物回收乙醇后以盐酸酸化,继以二氯甲烷萃取,水相加氨水至pH ﹥8.0后以氯仿萃取,回收氯仿获粗提物。对该粗提物的TLC检测表明,亳芍中含有生物碱,且可能是乌头碱类生物碱。酸碱滴定法初步测定的生物碱含量,以乌头碱计,亳芍中总生物碱含量约为0.07%。

关键词:亳芍生物碱显色反应酸碱滴定

The primary research of the extracting and assaying of the alkaloids

from Baishao Paeoniae Radix Alba

Bachelor candidator Fei Zhou

Adviser Nai-Dong Cheng

Abstract:Total extract was extracted from Root of herbaceous peony's dry powder by using95%alcohol.We recover alcohol from the total extract,then join hydrochloric acid,then using

methylene chloride to extract.We join ammonia to pH﹥8.0in aqueous phase,then using chloroform to extract. We recover chloroform to get rough extract.TLC testing indicated that Baishao Radix Paeoniae Alba contains alkaloids,and the alkaloids may be aconitine class.Acid-base titration rough determination showed that Baishao Paeoniae Radix Alba content about0.07%total alkaloid with the aconitine represented.

Key words:Baishao Paeoniae Radix Alba Alkaloids Color reaction Acid-base titration

亳芍(Radix Paeoniae Alba),即亳白芍,主产安徽省亳州地区,为安徽道地药材之一,是芍药科植物芍药(Paeonia lactiflora)或其变种毛果芍药(Paeonia trichocarpa)栽培品的根。芍药为多年生草本植物,夏秋季采挖其根部,去净泥土和支根,沸水浸或略煮至受热均匀,再经晒干等处理后即炮制成中药亳芍,加工后的亳芍呈粉白色或白色。亳芍具有抗炎、免疫调节、抗病毒、抗氧化、抗惊厥、护肝等作用,对胃肠道疾病和心血管疾病也有一定的疗效[1]。

已有的研究表明,亳芍主要含有单萜[2-7]、倍半萜及三萜[7,8]、单宁[9]、挥发油[10]、黄酮[8,11]、多酚类[13,14]、多糖[15,16]等活性成分,其中,芍药苷(一种单萜类化合物)是亳芍的主要活性成分[5,17-19]。为了进一步揭示亳芍的药效物质基础,为开发利用亳芍资源、繁荣当地经济提供参考依据,我们对亳芍的化学成分进行了一次深入研究。初步的定性鉴定研究结果表明,亳芍中含有生物碱。到目前为止尚未有亳芍中含有生物碱的研究报道,为此,本文对亳芍生物碱的提取、定性鉴定以及亳芍生物碱含量的初步测定等进行了研究,为后续的亳芍生物碱的分离鉴定奠定基础。

1材料仪器试剂

1.1材料

实验材料亳芍购于安徽省亳州市,品种经安徽中医学院黄和平博士鉴定。

1.2仪器

GJ14-DGF3006型电热恒温干燥箱(金坛市荣华仪器制造有限公司),HH-4型数显恒温水浴锅(金坛市国华电器有限公司),LX-02型利祥100g手提式粉粹机(上海江信科技有限公司),RE-52D型旋转蒸发器(上海浦沪仪器厂),FA-1004型电子天平(上海精科天平厂),WD-9402E型紫外检测器(北京市六一仪器厂),TDL-5Z台式多管架自动平衡离心机(湖南星科科学仪器有限公司),冷凝管,漏斗,分液漏斗,碱式滴定管,250mL锥形瓶2个,150mL 锥形瓶5个,25mL量筒1个,50mL量筒1个,1mL移液管1个,5mL移液管1个,10mL移液管1个,250mL烧杯1个,50mL烧杯3个,100mL容量瓶1个

1.3试剂

无水乙醇(扬州沪宝化学试剂有限公司),氨水(扬州沪宝化学试剂有限公司),无水乙醚(扬州沪宝化学试剂有限公司),氯仿(西陇化工股份有限公司),二氯甲烷(西陇化工股份有限公司),乙酸乙酯(西陇化工股份有限公司),甲醇(河北四友卓越科技有限公司),冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司),甲醛(无锡市展望化工试剂有限公司),浓硫酸(汕头市西陇化工厂有限公司),次硝酸铋,碘化钾(蚌埠化学试剂厂),浓盐酸(汕头市西陇化工厂有限公司),茚三酮,甲基红,溴甲酚绿,硫酸,氢氧化钠以上试剂药品均为国产分析纯。

2方法

2.1工艺流程图

本实验中亳芍总生物碱的提取工艺流程如下:

2.2亳芍总生物碱的提取

2.2.1干燥

亳芍先剪成薄片状,然后粉粹,干燥箱中干燥至恒重。

2.2.2提取

称取25g干燥至恒重的亳芍粉末,以95%乙醇、料液比1:4(g:mL)、85℃冷凝回流提取三次,每次提取4小时。过滤,合并滤液,减压浓缩回收乙醇至提取液无醇味,浓缩液备用。

2.2.3纯化

将在2.2.2中所获生物碱浓缩液加水适当稀释、定容,缓缓加入浓盐酸,使溶液中浓盐酸含量达5%(V/V),摇匀,待充分反应后4000转/min离心5分钟,弃去沉淀,上清液加等体积二氯甲烷萃取萃三次取除杂,水相备用。

2.2.4萃取

向2.2.3所获水相中缓慢滴加氨水至溶液显碱性p H≧8.5(精密pH试纸测定),加入等体积氯仿萃取三次,合并氯仿相,减压回收氯仿,得亳芍总生物碱,加氯仿定容至100mL,平均分成2份,备用。

2.3亳芍生物碱的鉴定

2.3.1薄层层析

取一份总生物碱适当浓缩,在五块G254硅胶薄层板上分别点样,以乙酸乙酯:氯仿:

甲醇:氨水=8:2:3:2系统为展开剂薄层层析。

2.3.2显色剂的配制

(1)碘化铋钾显色剂的配制:0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸,加水40ml,8g碘化钾溶于20ml水,混匀后使用。

(2)甲醛浓硫酸显色剂的配制:30%甲醛溶液0.2mL与10mL浓硫酸混合均匀后使用。

(3)浓硫酸显色剂的配制:直接使用浓硫酸即可。

(4)浓硝酸显色剂的配制:直接使用浓硝酸即可。

(5)茚三酮显色剂的配制:1.5g茚三酮+100mL正丁醇+3.0mL醋酸,溶解混匀即可。

2.3.3紫外检测

取出薄层板,吹干薄层板上的展开剂,分别在254nm和365nm紫外灯下照射,记录现象。

2.4亳芍生物碱的含量测定

亳芍生物碱的测定,主要参照杨云[20]的方法改进而来。取另一份亳芍总生物碱,用于测定含量。

亳芍总生物碱的含量测定的计算公式为:

-V NaOH)×M×100%÷1000W

生物碱总含量=C×(V

空白

在公式中:

C是滴定用NaOH浓度,在本实验中C=0.02mol/L;

V NaOH是滴定加入过量硫酸的生物碱所用NaOH体积;

V空白是滴定相同浓度相同体积硫酸所用NaOH体积;

M是代表生物碱的相对生物分子量,在本实验中选择乌头碱的分子量。M=654.74为代表计算亳芍总生物碱的含量。

W是样品的质量,在本实验中W=25.8545g

2.4.1指示剂的配制

取0.1%甲基红的乙醇溶液20mL,加入0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL,摇匀,备用。

2.4.2有机试剂溶解

精确吸取配制的亳芍总生物碱溶液液10mL,置水浴锅上蒸干,残渣加无水乙醇3mL,再加乙醚5mL,使之溶解.

2.4.3滴定

精密加入0.01mol/L硫酸10mL,摇匀,置水浴锅上加热,使之充分反应,放置冷却,加蒸馏水15mL和甲基红-溴甲酚绿指示剂2滴,用0.02mol/LNaOH溶液滴定至淡绿色即得,记录数据。

2.4.4空白对照

在锥形瓶中精密加入相同浓度相同体积的硫酸溶液(0.01mol/L硫酸10mL),加蒸馏水15mL和甲基红-溴甲酚绿指示剂2滴,用0.02mol/LNaOH溶液滴定至淡绿色即得,记录数据。

3.结果

3.1亳芍生物碱的显色鉴定结果

亳芍生物碱的显色鉴定结果见表1及图1~7。

表.1亳芍生物碱总提物TLC检测结果[21]

Table.1The identifications of alkaloids in Baishao Paeoniae Radix Alba by TLC

显色剂检测依据检测结果结论

碘化铋钾遇生物碱显橙红色4个橙红色斑点含有生物碱

浓硫酸遇乌头碱显紫色2个紫红色斑点可能含有乌头碱类

甲醛浓硫酸遇吗啡显橙色至紫色4个紫黑色斑点可能含有生物碱

浓硝酸遇秋水碱显蓝色,遇咖啡碱不

显色

未见显色斑不含秋水仙碱

茚三酮遇所有氨基酸及具有游离α-

氨基的肽都会产生显色反应

产生蓝紫色或(亮)黄色物质

未见显色斑不含氨基酸、短肽等

254nm紫外可观测到显色斑2个暗斑可能含有生物碱

365nm紫外可观测到显色斑2个蓝色荧斑

可能含有生物碱

图1碘化铋钾显色图2浓硫酸显色图3甲醛浓硫酸显色图4浓硝酸显色Fig.1Colored by Fig.2Colored by Fig.2Colored by Fig.4Colored by Potassium DOVAP formaldehyde/DOVAP nitric acid Heptaiodobismuthate

图5茚三酮显色图6254nm紫外下检测图7365nm紫外下检测

Fig.5Colored by Fig.6Colored by UV254nm Fig.7Colored by UV365nm

ninhydrin

3.2含量测定结果

滴定样品消耗的NaOH的体积V NaOH=9.40mL,滴定空白对照消耗NaOH的体积V空白=9.55mL。

将相关数据代入公式计算

亳芍总生物碱总含量=0.02mol/L×(9.55mL?9.40mL)×654.74g/mol÷(1000×25.8545g)×

100%×10

=7.5972×10-4

4讨论

4.1亳芍生物碱的鉴定

碘化铋钾是鉴定生物碱最常用的显色剂,如遇生物碱显橙红色。在我们的实验条件下,采用碘化铋钾显色,亳芍总生物碱检测到四个明显的橙红色显色斑(图1),说明亳芍中含有生物碱。但是一些含氮非生物碱物质如氨基酸等遇到碘化铋钾也会显色。为此,我们选择了浓硫酸、甲醛浓硫酸、浓硝酸和茚三酮等常用显色剂及紫外检测对亳芍总生物碱进一步TLC 显色鉴定以验证我们的结论。

TLC结果表明,采用浓硫酸显色,亳芍总生物碱提取物中可检测到两个明显的紫色显色斑(图2),提示亳芍中可能含有乌头碱类生物碱;用甲醛浓硫酸显色检测到四个明显的紫黑色显色斑(图3);浓硝酸显色,未见明显的显色斑(如4);253nm和365nm下分别观察到相应的显色斑(图6、7);用茚三酮显色未见明显的显色斑(图5)。

上述显色原理和显色结果表明,在亳芍氯仿提取物中,没有三帖、氨基酸、甾体、叔胺等小分子物质,可能含有乌头碱类生物碱。

4.2亳芍生物碱含量测定

酸碱滴定法是测定生物碱含量的经典方法,虽然此法的灵敏度较低,但是操作简便,成本低廉,且准确性、稳定性均较好[22]。在本实验条件下,测得生物碱的含量约为万分之七,远低于芍药苷的3.5%[6],因此,从含量角度考虑,生物碱可能不是亳芍的主要活性成分,这也可能是长期以来未能为人们发现报道的原因之一。

生物碱是人们最早研究的天然药物成分,也是最重要的中药有效成分之一。生物碱绝大多数分布在植物界,且在豆科、毛莨科等双子叶植物中含量较为丰富[23]。生物碱具有多种药物活性,如苦参碱、喜树碱等生物碱具有较强的抗肿瘤作用[24],四氢鸭木碱具有舒张血管平滑肌的作用[25],附子生物碱有较强的镇痛作用[26],贝母碱对卡他球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、克雷佰氏肺炎杆菌有抑制作用[27]等等,生物碱是天然药物活性成分中成药性较大的一类化合物。而在以前的研究中未见有亳芍生物碱的研究报道,因此,我们的实验结果对于研究中药亳芍及其复方的药效物质基础、探讨亳芍药理活性提供了新的研究方向,也为获得天然来源的生物碱提供了新的基源植物。

5.结论

(1)亳芍中含有生物碱,采用酸碱滴定法、以乌头碱计,亳芍中生物碱的含量约为0.075%;(2)初步显色鉴定显示,亳芍中可能含有乌头碱类生物碱。但对亳芍生物碱确切的类型及分子结构,尚待后续的定向分离研究加以确定。

致谢:

在此感谢我的毕业论文指导老师陈乃东老师,陈老师的细心指教使我的实验能够顺利完成,陈老师严谨的实验态度,让我明白实验得认认真真做,不能捏造数据,必需得追求真实,让我学到了很多知识。感谢在A503一起做实验的同学们,金亮和胡小玉同学在实验细节上的指导让我少走了很多弯路,严丽和陈洋同学借的实验仪器使我实验能够顺利完成,侯小龙和杜兆松同学的实验帮忙让我实验能够提前完成,一起做实验的时光开心而短暂,我们相处的很愉快,也学到了很多知识。在做实验这段期间,辅导员夏艳老师在班级工作上的即时通知,使我不必担心班级的事,解除了我的后顾之忧,在此感谢夏艳老师。

参考文献

[1]Jia,N.;Shu,Q.Y.;Wang,L.S.;Du,H.;Xu,Y.J.;Liu,Z.A.Analysis of petal anthocyanins to investigate coloration mechanism in herbaceous peony cultivars.Sci.Hortic[J].2008,117 (2):167–173.

[2]Lang,H.Y.;Li,S.Z.;McCabe,T.and Clardy,J.A new monoterpene glycoside of Paeonia lactiflora[J].Planta Medica,1984,50(6):501-504.

[3]Jin,Y.;Elix,J.A.,;Iskander,https://www.doczj.com/doc/495066657.html,ctiflorin,a monoterpene glycoside from paeony

root[J].Phytochemistry.1990,29(12):3859-3863.

[4]Kaneda,M.;Iitaka,Y.;Shibata,S.Chemical studies on the oriental plant drugs—XXXIII:The absolute structures of paeoniflorin,albiflorin,oxypaeoniflorin and benzoylpaeoniflorin isolated from chinese paeony root[J].Tetrahedron,1972,28(16):4309-4317.

[5]Braca,A.;Kiem,P.V.;Yen,P.H.;Nhiem,N.X.;Quang,T.H.;Cuong,N.X.;Minh,C.V.New monoterpene glycosides from Paeonia lactiflora[J].Fitoterapia,2008,79(2),117–120.

[6]Kim,N.;Park,K.R.;Park,I.S.;Park,Y.H.Application of novel HPLC method to the analysis of regional and seasonal variation of the active compounds in Paeonia lactiflora[J].Food Chem. 2006,96(3),496–502.

[7]Wang,H.B.;Gu,W.F.;Chu,W.J.;Zhang,S.;Tang,X.C.;Qin,G.W.Monoterpene glucosides from Paeonia lactiflora[J].J.Nat.Prod.2009,72(7),1321–1324.

[8]何丽一,冯瑞芝,肖培根.芍药苷在芍药属植物中的存在[J].药学学报,1980,15(7):429~429.

[9]Ikuta,A.;Kamiya,K.;Satake,T.;Saiki,Y.Triterpenoids from callus tissue cultures of Paeonia species[J].Phytochemistry1995,38(5):1203–1207.

[10]Kamiya,K.;Yoshioka,K.;Saiki,Y.;Ikuta,A.;Satake,T.Triterpenoids and flavonoids from Paeonia lactiflora[J].Phytochemistry.1997,44(1):141–144.

[11]Tanaka,T.;Fukumori,M.;Ochi,T.;Kouno,I.Paeonianins A?E,New dimeric and monomeric ellagitannins from the fruits of Paeonia lactiflora[J].J.Nat.Prod.2003,66(6):759–763. [12]Kumar,N.;Motto,M.G.Volatile constituents of peony flowers[J].C hytochemistry.1985,25 (1):250–253.

[13]Guo,D.;Ye,G.;Guo,H.A new phenolic glycoside from Paeonia lactiflora[J].Fitoterapia. 2006,77(7–8):613–614.

[14]Lee,S.C.;Kwon,Y.S.;Son,K.H.;Kim,H.P.;Heo,M.Y.Antioxidative constituents from Paeonia lactiflora[J].Arch.Pharm.Res.2005,28(7):775–783.

[15]Tomoda,M.;Matsumoto,K.;Shimizu,N.;Gonda,R.;Ohara,N.Characterization of a Neutral

and an Acidic Polysaccharide Having Immunological Activities from the Root of Paeonia lactiflora[J].Biol.Pharm.Bull.1993,16(12):1207

[16]Tomoda,M.;Matsumoto,K.;Shimizu,N.;Gonda,R.;Ohara,N.;Hirabayashi,K.An Acidic

Polysaccharide with Immunological Activities from the Rooot of Paeonia lactiflora[J].Biol.

Pharm.Bull.1994,17(9):1161-1164

[17]Chen,F.;Lu,H.T.;Jiang,Y.Purification of paeoniflorin from Paeonia lactiflora Pall.by high-speed counter-current chromatography[J].J.Chromatogr.A.2004,1040(2):205–208. [18]Lee,B.;Shin,Y.W.;Bae,E.A.;Han,S.J.;Kim,J.S.;Kang,S.S.;Kim,D.H.Antiallergic effect of the root of Paeonia lactiflora and its constituents paeoniflorin and paeonol[J].Arch.Pharm. Res.2008,31(4):445–450.

[19]Xiao,L.;Wang,Y.Z.;Liu,J.;Luo,X.T.;Ye,Y.;Zhu,X.Z.Effects of paeoniflorin on the cerebral infarction,behavioral and cognitive impairments at the chronic stage of transient middle cerebral artery occlusion in rats[J].Life Sci.2005,784(12):413–420

[20]杨云,王浴铭,赵晓华.附子中乌头生物碱定量方法的研究[J].时珍国医国药,1998,9(4):331~331.

[21]吴继洲.天然药物化学[M].北京:高等教育出版社.2010:177-178.

[22]何军,祝林,秦建芳.附子总生物碱含量测定方法比较[J].现代中药研究与实践,2003,17(6):20~22

[23]全国中等卫生学校统编教材《中草药化学》编写组.中草药化学[M].南京:江苏科学技术出版社.

1980:44~45.

[24]林洪生,李树奇,朴炳奎,李攻戍,裴迎霞,祁鑫.三参冲剂对肺癌转移中内皮细胞及粘附因子的影响[J].中

国肿瘤,1988,8(12):574~576.

[25]陶朝阳,易杨华,许强芝,陈贵清.滇钩藤化学成分研究[J].中国新药杂志,2000,9(1):31~31.

[26]张为亮,徐楚江,杨明,沈映君.附子毒效关系的实验研究[J].广西医药,1997,20(3):43~43.

[27]于晓琳,季晖,王长礼,李萍.贝母的药理作用研究概况[J].中草药,2000,31(4):313~313.

比色法测定总皂苷含量

比色法测定总皂苷含量 1、仪器 紫外分光光度计、电热恒温水浴锅、电子分析天平、旋转蒸发器、大孔树脂柱(内径0.8 cm,长20 cm)。 试剂 无水甲醇、无水乙醇、正丁醇、冰醋酸、高氯酸和香草醛等均为分析纯;大孔树脂 DM-301、对照品、洋金花药品。 2、方法 2.1 对照品溶液的制备 取对照品 10 mg,加甲醇溶解定容至 10 ml,制成 1 mg/ml对照品溶液。 2.2供试品溶液的制备 取药材粉末(过4号筛)约0.2 g,准确称定,置于150 ml具塞锥形瓶中。精密加入50 ml 甲醇后,准确称重。浸泡60 min,超声提取30 min,再次称重,补加甲醇至超声前重量。过滤,精密移取续滤液25 ml于蒸发皿中,水浴蒸发至干,用5 ml水溶解残留物,所得溶液缓缓通过已处理好的大孔吸附树脂柱(径高比1:5),以水50 ml洗脱,弃去水液,之后再以50 ml 95%乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,蒸干。用20 ml水分次将残留物溶解转移至60 ml分液漏斗中,用水饱和的正丁醇萃取(4×20 ml),合并正丁醇层,减压蒸干。残留物用70%甲醇溶解转移至10 ml量瓶中,定容,摇匀,即得。 2.3测定波长的选择 精密移取1.5 ml的对照品及l ml供试品溶液,于70℃水浴蒸发至干,加入5%香草醛一冰醋酸(临用新配)0.2ml,高氯酸0.8 ml,于60℃水浴显色15 min后流水冷却 lO min。加冰醋酸5 ml,摇匀。立即在紫外分光光度计于400~800 nm波长下扫描,同时空白溶液作参比。对照品及供试品的最大吸收波长均在475 nm,故选取475 nm为检测波长。 2.4线性关系考察 精密量取对照品溶液0.60,1.50,2.40,3.30,4.20 ml,置具塞试管中,于70℃水浴蒸发至干,加入5%香草醛-冰醋酸(临用新配)O.2 ml,高氯酸0.8 ml,于60℃水浴显色15min后流水冷却10 min。各加冰醋酸5 ml,摇匀,以同法平行处理的空白溶剂为空白,在475 nm处测定吸光度。以对照品质量c(mg)为横坐标,吸光度A为纵坐标,使用软件OriginPro 7.0进行回归分析,得到回归方程为:A=0.007 4+1.120 83c, r=0.999 97。在0.096—0.672 mg内线性关系良好。 2.5精密度试验 精密吸取对照品溶液1.5 ml,依“2.4”项下方法显色测定吸收度,连续测定5次,结果RSD为0.254%,说明仪器的测试性能良好。 2.6稳定性试验 取对照品和样品溶液,依“2.4”项下方法操作,按不同时间测定吸光度,结果见表1。2.7样品含量测定 取供试品溶液6份,每份精密吸取80 μ L,按“2.3”项的方法显色后,在540nm测定吸光度,计算样品含量。 2.8加样回收率试验 取供试品溶液8份,每份精密吸取80μL,加入0.2mg/mL齐墩果酸溶液50 u I。,按“2.3”项的方法显色后,在540hm测定吸光度,计算加样回收率。

金线莲总生物碱的提取及含量测定

第17卷第4期 化 学 研 究V o.l 17 N o .42006年12月CHE M I CAL RESEARC H D ec .2006 金线莲总生物碱的提取及含量测定 钟添华1,黄丽英1,王 勇2 (1.福建医科大学药学院,福建福州350004; 2.福建省药物检验所,福建福州350004) 收稿日期:2006-08-02. 作者简介:钟添华(1980-),男,硕士,主要从事天然药物有效成分的提取及结构鉴定工作,E O m ai:l zt h23-1980@163.co m. 摘 要:建立了金线莲总生物碱的提取和测定方法.将金线莲全草粉末用p H =2的水溶液提取,以阳离子交换 树脂吸附后,经酸化,用氯仿/甲醇(体积比2B 1)对其进行索氏提取,蒸发有机溶剂.冷冻干燥即得金线莲总生物 碱.以盐酸麻黄碱为对照品,酸性染料比色法测定总生物碱,折算为盐酸麻黄碱获得总生物碱含量.测得金线莲 总生物碱含量是0.0794%,线性回归方程A =0.0092C -0.0016(r =0.9999),回收率103.13%.本提取及 含量测定方法操作简单,总生物碱的提取率较高. 关键词:金线莲;总生物碱;提取分离;酸性染料;比色法 中图分类号:R 284.2文献标识码:A 文章编号:1008-1011(2006)04-0068-03 Extraction and Deter m i nation of t he A l kaloi ds i n Anoectochil us For mosanus Z HONG T i a n-hua 1,HUANG L-i y i n g 1,WANG Y ong 2 (1.P har m ac y C oll ege of Fujian M e d ic a l Un i versit y,Fuzh ou 350004,Fujian,Ch i na; 2.F ujian Insitit u te for D rug Control ,Fuzhou 350004,Fujian,Ch i na ) Abstract :Developed a m ethod to extract and deter m ine the to tal alkaloids fro m anoectoch ilus for m osa - nus .H erbs of anoectochilus for m osanus w ere leached by aci d ifi e d w ater ,and the total alka l o ids i n t h e leached so l u ti o n w ere absorbed by cation i c exchange resi n ,then t h e resi n w as acidified and extracted w ith a m i x ed organ ic so lvent i n a Soxh let extractor .The tota l a l k alo i d s w ere tested at 412n m w ith t h e spectroscopy by acid dye .The cali b rati o n cur ves of alka l o ids w ere li n ear(r =0.9999).The recovery w as perfect(103.13%).M ostly ,the content o f the to tal alka loids i n the herb is 0.0794%.The m et h od for ex traction and de ter m inati o n is si m ple ,qu ick w it h h i g h recovery . Keywords :anoectochilus for m osanus ;to ta l a l k alo i d s ;extracti o n ;acid dye ;co l o ri m etric m ethod 金线莲系兰科(Orchi d aceae)开唇兰属(Anoectochil u s )多年生草本植物,该属植物已发现35种,在我国约有20种[1].本属的部分种全草民间作药用,其中具有神奇功效、享有/药王0、/金草0、/乌人参0的珍稀草药 金线莲备受人们的关注[2] ,特别在福建和台湾民间,广泛用于治疗肝炎、肾炎、肺炎、小儿惊风高热、糖尿病、高血压、肿瘤、风湿病等 [3],还兼治小儿发育不良及毒蛇咬伤[4].据报道,金线莲中含有糖苷类化合物、有机酸、甾体化合物、黄酮类化合物、糖类化合物、生物碱[5-10]等.作者主要研究了金线莲中总生物碱的提取及测 定.1 实验部分 1.1 仪器与试剂 DJ -10A 型倾倒式粉碎机(上海淀久中药机械制造有限公司),UV-752PC 型紫外分光光度计(上海光谱

野生半夏总生物碱含量的测定解析

野生半夏总生物碱含量的测定 【关键词】半夏;,,生物碱;,,紫 外光谱 摘要:目的用紫外分光光度法测定东北地区野生半夏中总生物碱的含量。方法以溴百里香本分蓝为显色剂,λmax=407 nm,测得生物碱在1.6~8.0 μg/ml范围内具有良好线性关系,r=0.999。结果生物碱含量为0.137 7%。结论与其他地区相比,该含量较高。 关键词:半夏;生物碱;紫外光谱 Determination of the Content of Alkaloids in Wild Pinellia ternate Abstract:ObjectiveTo determine the content of alkaloids in wild Pinellia ternate in north east Yunnan area by UV spectrophotometry.MethodsThe bromothymol was used as the chromogenic agent, and the detection wavelength was 407 nm, the calibration curve was linear in the range of 1.6~8.0 μg/ml(r=0.999).ResultsThe content of alkaloids in wild Pinellia ternate was 0.137 7%.ConclusionThe content of alkaloids is very rich in wild pinellia ternate in north east Yunnan area compared to other areas. Key words: Pinellia ternate; Alkaloids; UV spectrum 半夏Pinellia ternate(Thunb.) Breit.为天南星科植物,是一味使用了2000多年的常用中药,药材部分为干燥的块茎;具有燥湿化痰,降逆止呕,消痞散结之功[1]。首载于《神农本草经》,其性温,味辛,有小毒,归脾、胃、肺经。《中国药典》1963~2005年均有记载。具有十分重要的药用价值,目前市售镇咳类中药复方制剂中多含有半夏[2]。麻黄碱具有抗哮喘的作用[3],因此半夏中生物碱的含量可以作为其品质的标准[2]。滇东北地区的半夏一直是半夏市场的重要产地[4],半夏块茎粒大,质白,表观品质好;其生物碱含量测定未见报道,本文测定了该地区半夏中总生物碱的含量,并与其它地区半夏的总生物碱含量做了比较,为该地区半夏开发利用提供理论依据。 1 仪器与材料 1.1 仪器与试剂TU1800PC紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司); Na2HPO4NaH2PO4缓冲液(pH 6.8)(0.2 mol/L Na2HPO4 240 ml与0.2 mol/L NaH2PO4250 ml配制而成)[5];溴百里香酚蓝溶液(0.1 g溴百里香酚蓝加0.05 mol/L NaOH溶液3.2 ml溶解,加水稀释至200 ml配制而

附子总生物碱含量测定方法比较

附子总生物碱含量测定方法比较 何 军1,2,祝 林1,奉建芳1 (1.上海医药工业研究院药物制剂部,上海200437;2.四川大学华西药学院,四川成都610041) 摘要:目的 比较滴定法和紫外分光光度(UV )法在测定附子总生物碱中差异,探讨适宜附子总生物碱的含量测定方法。方法 用两种方法测定相同样品,比较测定结果差异,并考察操作步骤对测定结果的影响。结果 两种不同的测定方法对附子总生物碱含量测定结果有较大的影响,滴定法的加样回收率为97.7%,而 UV 法为75.6%,滴定法测定结果更准确。水分及萃取静置时间对UV 法测定结果有一定影响。结论 附子 总生物碱含量测定以滴定法(药典法)为宜,紫外分光光度法用于其测定有待于进一步改进。 关键词:附子;附子总生物碱;含量测定 中图分类号:R 284.2 文献标识码:A 文章编号:100422199(2003)0620020203 中药川乌、草乌、附子等其主要有效成分为总生物碱,虽然含量较低[1],但因药理作用强、有一定的毒性,常作为中药的制剂质量控制的指标。2000版中国药典中有关总生物碱的含量测定方法为滴定法[2],文献中多采用紫外分光光度法[3,4],但哪一种方法更灵敏、准确和具有更好的重现性,文献中并未见报道。本文以附子提取物作为样品,对这两种方法用于测定附子总生物碱的含量进行比较研究,为含该类成分的中药制剂的质量控制提供实验依据。1 仪器、材料与试剂 仪器:7512G W 分光光度计(安捷伦科技上海分 析仪器有限公司)。 材料:乌头碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:072029807)。制附子(上海雷允上中药饮片厂)。所用试剂均为分析纯。2 实验方法与结果2.1 样品溶液制备 取制附子药材适量,粉碎成中粉,加85%的乙醇溶液加热回流2次。醇提液经回收乙醇、浓缩、调pH 、 过滤后得提取液。提取液经大孔吸附树脂分离纯化,收集80%醇洗脱液,经减压浓缩与药材量相当后所得溶液作为样品溶液。 2.2 滴定(药典)法测定附子总生物碱含量精密量 取样品液20.0m l 蒸干,残渣以少量水溶解,置分液漏斗中,以氨水调pH =10~11,氯仿萃取5次(10,10,10,8,8m l ),合并氯仿液,回收氯仿,水浴挥干,残渣用乙醇5.0m l 溶解,精密加入硫酸滴定液(0.01m o l L )15m l 、水15m l 与甲基红指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.02m o l L )滴定至黄色, 读取消耗的N aO H 溶液的量,计算总生物碱的含量 [每1m l 硫酸滴定液(0.01m o l L )相当于12.9m g 的乌头碱(C 34H 47NO 11)]。 2.2 紫外分光光度(U V )法测定附子总生物碱含量[4] 2.2.1 对照品溶液制备 精密称取12.0m g 乌头 碱对照品于50m l 的容量瓶中,加1m o l L 盐酸溶液数滴,溶解,加等量1m o l L N aO H 溶液,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,即得浓度为0.24m g m l 的对照品溶液。 2.2.2 标准曲线的制备 精密量取乌头碱对照品 液0、0.35、0.40、0.50、0.80、1.00m l ,分别置于分液漏斗中,各加蒸馏水3.00、2.65、2.60、2.50、2.20、2.00m l ,加溴麝香草酚蓝指示液2.0m l ,邻苯 二甲酸氢钾2氢氧化钠(pH =6)缓冲液5.0m l ,加氯仿10m l ,振摇3m in ,静置1h ,分取氯仿液,并加入 0.5g 无水硫酸钠,放置0.5h ,以第一份为空白,于410nm 处测定吸收度,计算回归方程,A =0.0035 M -0.0869,r =0.9999,乌头碱含量在84~240Λg 范围内线性关系良好。 2.2.3 样品测定方法 取上柱洗脱液5.0m l 蒸 干,残渣以少量水溶解,置分液漏斗中,以氨水调pH =10~11,氯仿萃取5次(10,10,10,8,8m l ),合并氯仿液,回收氯仿,水浴挥干,残渣用少量1m o l L 盐酸溶解后,加入等量的1m o l LN aO H 溶液,用蒸馏水定容至25m l ,摇匀。精密吸取2.00m l ,按标准曲线项下测定总生物碱含量。结果见表2。2.3 两种测定方法含量测定结果的比较 取同一样品溶液,分别用上述两种测定方法各 — 02—现代中药研究与实践2003年第17卷第6期R esearch and P ractice of Ch inese M edicines

亳芍生物碱提取鉴定及含量测定

亳芍生物碱提取及含量测定 作者周飞 指导教师陈乃东 摘要:用95%乙醇提取亳芍干粉,总提物回收乙醇后以盐酸酸化,继以二氯甲烷萃取,水相加氨水至pH ﹥8.0后以氯仿萃取,回收氯仿获粗提物。对该粗提物的TLC检测表明,亳芍中含有生物碱,且可能是乌头碱类生物碱。酸碱滴定法初步测定的生物碱含量,以乌头碱计,亳芍中总生物碱含量约为0.07%。 关键词:亳芍生物碱显色反应酸碱滴定 The primary research of the extracting and assaying of the alkaloids from Baishao Paeoniae Radix Alba Bachelor candidator Fei Zhou Adviser Nai-Dong Cheng Abstract:Total extract was extracted from Root of herbaceous peony's dry powder by using95%alcohol.We recover alcohol from the total extract,then join hydrochloric acid,then using methylene chloride to extract.We join ammonia to pH﹥8.0in aqueous phase,then using chloroform to extract. We recover chloroform to get rough extract.TLC testing indicated that Baishao Radix Paeoniae Alba contains alkaloids,and the alkaloids may be aconitine class.Acid-base titration rough determination showed that Baishao Paeoniae Radix Alba content about0.07%total alkaloid with the aconitine represented. Key words:Baishao Paeoniae Radix Alba Alkaloids Color reaction Acid-base titration 亳芍(Radix Paeoniae Alba),即亳白芍,主产安徽省亳州地区,为安徽道地药材之一,是芍药科植物芍药(Paeonia lactiflora)或其变种毛果芍药(Paeonia trichocarpa)栽培品的根。芍药为多年生草本植物,夏秋季采挖其根部,去净泥土和支根,沸水浸或略煮至受热均匀,再经晒干等处理后即炮制成中药亳芍,加工后的亳芍呈粉白色或白色。亳芍具有抗炎、免疫调节、抗病毒、抗氧化、抗惊厥、护肝等作用,对胃肠道疾病和心血管疾病也有一定的疗效[1]。

总皂苷检测方法-总皂苷含量测定法-实验流程图-李熙灿-XicanLi

总皂苷检测方法-总皂苷含量测定法(香草醛法):实验流程图2017.10 【文献】Xican Li, Qiuping Hu, Shuxia Jiang, Fei Li, Jian Lin, Lu Han,Yuling Hong, Wenbiao Lu, Yaoxiang Gao, Dongfeng Chen. Folium Sennae Protects against Hydroxyl Radical-induced DNA Damage via Antioxidant Mechanism: An in vitro Study. Botanical studies. 2014; 55:16. 【简介】皂苷广泛存在于中药及其他植物中,而且化学结构大同小异的皂苷往往同时存在。为了测定这些皂苷的总含量,便建立了总皂苷的检测方法。总皂苷的检测多使用分光光度法,并以某种标准品绘制工作曲线,依该曲线所建立的回归方程,计算其含量。 【溶液配制】 1.香草醛-冰醋酸溶液(测试液)配制:精密称取25mg香草醛,加冰醋酸定容至5mL。即制成5mg/mL 香草醛-冰醋酸测试液。 2.样品液配制:将待检测的样品用甲醇溶解,配成约5mg/mL的样品液。具体浓度视样品的溶解度而定, 但是必须有精确的数据。 3.齐墩果酸标准品溶液配制:精密称取齐墩果酸1mg,加甲醇定容至5mL,配成0.2mg/mL齐墩果酸标 准品溶液。(也可以使用其他的皂苷物质,如人参皂苷Rg3。但必须是纯的化合物) 4. 高氯酸:分析纯试剂。 5. 冰醋酸:即纯的无水乙酸(分析纯) 【检测方法与实验流程图】 【标准曲线绘制】(齐墩果酸) 取上述齐墩果酸溶液x μL (x=0,40,80,120,160,200),依“实验流程图”,在70℃水浴15mim 后呈桃红色。以第一份溶液(x=0)作为空白对照,测A540nm值。以“产物混合物”时的齐墩果酸的质量,为横坐标,A540nm值为纵坐标,绘制标准曲线。以此标准曲线计算,得线性回归方程。 【样品液的测定】 将上述“实验流程图”中的“齐墩果酸标准品溶液”换成样品液,进行实验,并测定其A540nm值。将此A540nm代入线性回归方程,即可计算出其总皂苷的含量(以齐墩果酸计)。 【说明】 1.此法是以齐墩果酸为标准品测得总皂苷的含量。所以,其结果应表示为,如:“某某提取物中含 有0.12mg/g的总皂苷(以齐墩果酸计)”。这并不意味着该提取物中真的就含有齐墩果酸。 2.“实验流程图”中,在“彻底挥干溶剂”一步中,如果溶剂挥干不彻底,哪怕是有一点点,都 会干扰。水也要彻底挥干。 1

食物中常见生物碱研究进展

生物碱是一类含氮有机化合物,广泛存在于毛茛科、芸香科、豆科等科植物的根、果中。它们能引起摄食者轻微的肝损伤,但中毒的第一反应是恶心、腹痛、腹泻甚至腹水,连续食用生物碱食品2周甚至2年才有可能出现死亡。由于生物碱大都具有苦涩性,容易使动物产生拒食,所以引起人体生物碱中毒的主要食物源有:①谷物等农作物被含生物碱的杂草污染,进入面粉及相关食品中;②食用含生物碱植物的动物所产的奶和蜂蜜等食品;③特殊食疗食品、个别调味料和特殊提取物饮料等[1-2]。一些嗜好植物(如咖啡、可可、烟草、槟榔、茶、罂粟等)含有咖啡碱、可可碱、尼古丁等生物碱成分。大多数辛香料也含生物碱成分(如辣椒中的辣椒碱),有毒植物则有不少种类含有有毒生物碱[3]。 1生物碱对人体的生理学作用 生物碱对机体的作用具有特异性,且与摄入量有关。适量对人体具有止痛、欣快、催眠等功效,过量或反复摄入,将导致成瘾。毒品就是一大类特殊生物碱品种[4-9]。 2食品中常见生物碱及其利用价值 2.1罂粟壳中的阿片生物碱 许多食品中都包含对人体有害的有毒生物碱,对这些生物碱的分析将有助于防止生物碱滥用或中毒[10]。罂粟壳中含有大量吗啡碱,易成瘾,不宜常服[11]。近年来,发现有不少在食品中违法添加罂粟壳,损害消费者健康的案例。通过测定食品中阿片生物碱,可判断是否掺入罂粟壳,其测定方法主要有薄层扫描法、高效液相法、快速ELISA检测法、气相色谱法等[12-17]。 2.2番茄中的生物碱 番茄中青果生物碱含量较高,具有抑菌抑虫、抗炎、降低胆固醇、调节机体免疫功能等作用。作为天然食品防腐剂具有良好开发前景[18]。 2.3绿茶中的生物碱 茶叶中咖啡碱含量较高,在一定浓度范围内,对人体具有强心、利尿、解毒等作用。可取代部分添加剂和药物,有巨大开发潜力[19-20]。茶梗和纤维废料作为燃料使用没有经济价值,但是在特定条件下提取咖啡因将带来巨大的经济效益并且环保[21]。 2.4荷叶中的生物碱 荷叶总碱具显著降血脂和降胆固醇活性,在减肥降脂产品中应用越来越广泛。研究其富集和分离方法、制定质量标准是非常必要的[22]。在离子液体中用微波辅助萃取,已从荷叶中成功提取了3种生物碱[23]。 2.5莲子心中的生物碱 莲子心含有莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱等生物碱。具有降压、抗心律失常、体外抗氧化活动、抗心律失常等药理作用[24]。 2.6槟榔中的生物碱 槟榔中主要含有的生物碱为槟榔碱、槟榔次碱、去甲基槟榔次碱等,均与鞣酸结合存在[25]。槟榔碱具有免疫抑制、肝毒性、致突变和畸形作用,在大鼠体内可能干扰某些内分泌器官[26]。2.7魔芋中的生物碱 魔芋生物碱影响昆虫生长、发育和繁殖,且有较强毒杀作用,用于绿色蔬菜生产,还可减少环境污染问题[27]。 2.8辣椒中的生物碱 辣椒碱是辣椒中引起辛辣的主要化学物质。其低纯度形式,如辣椒精、辣素等已作为添加剂广泛应用于食品工业中。与 食物中常见生物碱研究进展 吴丹1,巩江2,高昂1,曹梦晔1,陈晔丹1,赵婷1,路锋1,李易非1,倪士峰1*1.西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室/西北大学生命科学学院,陕西西安710069; 2.西藏民族学院医学院,陕西咸阳712082 摘要:检索大量文献基础上,对食物中常见生物碱的种类、主要活性及利用价值等方面进行了概述,为相关研究和开发提供科学资料。 关键词:生物碱;生物活性;利用价值 中图分类号:Q946.88文献标识码:A文章编号:1002-204X(2011)03-0063-02 Recent Developments of Common Alkaloids in Food WU Dan et al(Key Laboratory of Resource Biology&Biotechnology in Western China of Ministry of Education/College of Life Sciences,Northwest University,Xi’an,Shaanxi710069) Abstract Based on the vast literature retrieval,relevant materials for the research and development information on main activity and utilization value etc of common alkloids in food have were summarized,in order to provide basis information for its further development. Key words Alkaloid;Bioactivity;Use value 项目基金:西部资源生物与现代生物技术实验室教育部重点实验室基 金(KH09030);西藏自治区科技厅重大科技专项基金(20091012);陕西 省教育厅科学研究项目计划(2010JK862)资助。 作者简介:吴丹(1988-),女,陕西西安人,硕士研究生,研究方向:中 药生物工程。*通讯作者,博士后,副研究员,从事中药化学、中药资源 学、中药现代化与中医学研究。 收稿日期:2011-01-27 宁夏农林科技,Ningxia Journal of Agri.and Fores.Sci.&Tech.2011,52(03):63-64,6663

华山参片总生物碱的含量测定

实训二十一华山参片总生物碱的含量测定 一、实训目的 1.掌握紫外-可见分光光度法(对照品比较法)含量测定的一般操作步骤和技能。 2.理解紫外-可见分光光度法(对照品比较法)含量测定原理 二、测定依据 1.华山参片药品标准 [《中国药典》2005年版(一部)正文部分 440页] 本品为华山参浸膏片 【含量测定】对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品,加水制成每1ml相当于含莨菪碱7μg的溶液,即得。 供试品溶液的制备取本品40片,除去糖衣,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于12片的重量),置具塞锥形瓶内,精密加入枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)25ml,振摇5分钟,放置过夜,用干燥滤纸滤过,取续滤液,即得。 测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液各2ml,分别置分液漏斗中,各精密加枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH4.0)10ml,再精密加入用上述缓冲液配制的0.04%溴甲酚绿溶液2ml,摇匀,用10ml三氯甲烷振摇提取5分钟,待溶液完全分层后,分取三氯甲烷液,用三氯甲烷湿润的滤纸滤入25ml量瓶中,再用三氯甲烷提取3次,每次5ml,依次滤入量瓶中,并用三氯甲烷洗涤滤纸,滤入量瓶中,加三氯甲烷至刻度。照紫外-分光光度法(附录ⅤA)分别在415nm的波长处测定吸光度,计算,即得。 本品含生物碱以莨菪碱(C17H23NO3)计,应为标示量的80.0%~120.0%。 【规格】0.12mg 2.紫外-可见分光光度法[《中国药典》2005年版(一部)附录Ⅴ A] 三、测定原理 1.本品有效成分为莨菪类生物碱,主要有莨菪碱、东莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪内酯等(图5-36)。药品标准以莨菪碱为指标,测定总生物碱的含量,以此控制药品质量的优劣。

乌头生物碱含量测定方法现况

综 述 乌头生物碱含量测定方法现况河北医科大学中医学院 张国红 由会玲 刘云肖(石家庄050091) 提要 综述了乌头生物碱的含量测定方法,并对各测量方法进行了分析和比较。 关键词 乌头;生物碱;含量测定 中图分类号:R28412 文献标识码:B 文章编号:1007-5615(2000)01-0045-03 川乌为毛茛科植物Aconrtum carmichaeli De2 bx的干燥母根,草乌为毛茛科植物Aconitum Kusnezo ffii的干燥块根,为临床常用中药,具祛风除湿止痛的功效。临床多用于治疗风湿性关节炎。近年,又有用于抗癌止痛的倾向。但是,乌头有大毒,因此,对乌头中的有效成分和毒性成分进行含量测定,以确保临床用药的安全性和有效性,是很有必要的。生物碱类成份是乌头的主要有效成份和毒性成份。以下,对生物碱的含量测定方法做一综述。 1 总生物碱成份的测定  111 中和法[1] 此法为测定生物碱的经典方法,为1990年版中国药典所采用。分为直接滴定法和回滴定法。直接滴定法终点突破不明显,难于判断;回滴定法灵敏度低,有较大误差。  112 交流示波极谱滴定法[2] 此法测定终点直观,准确,但受pH影响大,需特殊仪器。  113 酸性染料比色法[3~6] 是利用生物碱和酸性染料反应生成离子对而进行比色测定的方法。根据所用酸性染料的不同,又分为溴麝香草酚蓝法、溴甲酚绿法、甲橙提取比色法等。利用酸性染料比色法测定生物碱总量时,要注意符合比尔定律的含量范围,水相pH的选择,呈色的稳定性。从呈色稳定性考虑,甲橙提取比色法优于溴甲酚绿法。溴甲酚绿法优于溴麝香草酚蓝法。  114 导数分光光度法[7,8] 可设定不同的求导阶数以清除干扰组分的吸收。利用导数分光光度法,样品经乙醇提取后,不经分离即可直接测定,测定结果与药典法比较,无显著差别,但该法更灵敏、准确、简便,且提取溶剂乙醇比氯仿对人体更安全。 以上4种总生物碱提取方法,以导数分光光度法最为简便,且分光光度计为常备仪器,因此笔者认为该法对于测量总生物碱为最佳方法,适于药厂使用。 乌头中总生物碱是有效部位,因此用总生物碱含量来衡量乌头的药效大小是可行的。但是,不能用总生物碱含量作为毒性指标。因为乌头总生物碱中包括双酯型生物碱、单酯型生物碱、氨醇型生物碱和其他类生物碱,这几种生物碱的毒性差异极大:单酯型生物碱为双酯型生物碱的1/5~1/10,氨醇型生物碱为双酯型生物碱的1/2000~1/4000,同样含量的总生物碱,若这几种生物碱的比例不同,总生物碱的毒性也不相同。因此,乌头的毒性指标应以双酯型生物碱含量为指标。 2 乌头碱的含量测定  211 荧光薄层法[9] 该法灵敏度高,分析速度快,但需特殊仪器—荧光分光光度计。  212 纸上电泳分离—洗脱分光光度法[10] 该法对乌头碱的分离效果好,但所需时间长。 ? 5 4 ? 2000年 第15卷 第1期V ol.15 N o.1 2000 河北中医药学报 JOURNA L OF HE BEI TC M AND PH ARM ACO LOGY

三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进

作者简介:冯亮(1980-),男,正攻读药剂学专业的博士学位。3通讯作者(C orrespondent author ),jxh1013@https://www.doczj.com/doc/495066657.html, 三七总皂苷中各组分含量测定方法的改进 冯 亮,蒋学华3,叶利民 (四川大学华西药学院,四川成都610041) 摘要:目的 用薄层扫描法(T LSC )和高效液相色谱法(HP LC )测定三七总皂苷中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参皂苷Rg 1(Rg 1)和三 七皂苷R 1(R 1)3种主要成分的含量,并对两种方法进行比较,为修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。方法  T LSC 法用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂,27%硫酸无水乙醇溶液为显色剂,测定波长λs =535nm ,λR =460nm ;HP LC 法用C 18色谱柱,以乙腈-水线性梯度洗脱,0min (25∶75)~15min (45∶55);流速1.5ml ?min -1;测定波长200nm 。结 果 T LSC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1、R 1的含量分别为31.07%、23.30%、9.35%;HP LC 法测得三七总皂苷原料中Rb 1、 Rg 1、R 1含量分别为30.46%、22.65%、5.83%。结论 HP LC 法能将多种皂苷很好地分离并检测,简便快速,减少了误差。其准 确度和测定结果的稳定性均优于T LSC 法。 关键词:薄层扫描法;高效液相色谱法;三七总皂苷;人参皂苷Rb 1;人参皂苷Rg 1;三七皂苷R 1中图分类号:R927 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2006)02-0187-03 Improvement of determination method of the main components in Panax notoginseng saponions FE NGLiang ,J I ANG Xue -hua 3,YE Li -ming (West China School o f Pharmacy ,Sichuan Univer sity ,Chengdu 610041,China ) Abstract :OBJECTIVE T LSC and HP LC were adopted to determine the contents of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions.And results of the tw o methods were compared ,which could provide the basis of revising the determination method in quality standard.METH ODS T LSC has been established with the upper layer of the mixture of butanol -ethyl acetate -H 2O (4∶1∶5)as developing s olvent ,and 27%sulphuric acid ethanol s olution as coloring reagent ,λs =535nm ,λR =460nm.HP LC was adopted with C 18column ,acetonitrile -H 2O (25∶75at 0min and 45∶55at 15min ,linear gradient elution )was used as m obile phase and detective wave 2length was set at 200nm.The flow rate was 1.5ml ?min -1.RESU LTS The content of ginsenoside Rb 1,ginsenoside Rg 1and sanchinoside R 1in Panax notoginseng saponions determined by T LSC was 31.07%,23.30%and 9.35%;and that determined by HP LC was 30.46%,22.65%and 5.83%,respectively.CONC L USION HP LC could separate and determine various components in Panax notoginseng saponions and determine them.Its accuracy and stability are better than T LSC. K ey w ords :T LSC ;HP LC ;Panax notoginseng saponions ;G insenoside Rb 1;G insenoside Rg 1;Sanchinoside R 1C LC number :R927 Document code :A Article I D :1006-0103(2006)02-0187-03 三七是五加科人参属植物Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen 的干燥根;含有皂苷、多糖、氨基酸等多种化学成分。其中三七总皂苷(Panax noto 2 ginseng saponions )为其主要的有效成分,具有活血化 淤的功效。三七总皂苷含有人参皂苷Rb 1、Rb 2、Rc 、Rd 、Re 、R f 、Rg 1、Rg 2、Rh 1和三七皂苷R 1、R 2、R 3、R 4、R 6等20余种皂苷成分,均属达玛烷型(Dammarane type )四环三萜皂苷。其中人参皂苷Rb 1(Rb 1)、人参 皂苷Rg 1(Rg 1)是三七总皂苷中含量最高的两个成分,而三七皂苷R 1(R 1)则是三七总皂苷的特征化合物[1]。对于三七总皂苷原料及其口服制剂,文献[2]规定采用比色法测定总皂苷含量。而比色法在操作过程中存在操作烦琐、影响因素多及重复性差等问题[3],尤其是不能分别测定三七总皂苷中各主要成 分的含量。为此,特建立了薄层扫描法(T LSC )测定 三七总皂苷原料中Rb 1、Rg 1和R 1的含量[4];同时建立了HP LC 含量测定法,并与T LSC 法进行比较,为重新修订质量标准中含量测定方法及含量限度提供依据。 1 实验部分 1.1 仪器与试药 LC -9A 高效液相色谱仪,SPD -6AV 紫外检测 器(日本岛津);CS -930薄层扫描仪;Dikma Diam on 2sil C 18色谱柱(200mm ×4.6mm ,5μ m ,美国Dikma 公司);硅胶G 板(大连化物所)。Rb 1、Rg 1和R 1对照 品(中国药品生物制品检定所);三七总皂苷(云南特 安钠制备厂);乙腈(色谱纯,美国Dikma 公司);水(超纯水);其余试剂均为分析纯。1.2 T LSC 法1.2.1 含量测定 取三七总皂苷样品约50mg ,精 华西药学杂志 W C J ?P S 2006,21(2):187~189

中药莲子心中总生物碱的提取及特征图谱研究资料

本科毕业设计(论文) 中药莲子心中总生物碱的提取及特征图谱 研究 学院轻工化工学院 专业制药工程 年级班级2011级(3)班 学号3211001806 学生姓名练利芳 指导教师郑俊霞 2015年6 月

中药莲子心中总生物碱的提取及特征图谱研究 练利芳 轻 工 化 工 学 院 梁华杰 轻工化工学院

摘要 目的:本实验是对莲子心药材中的化学成分进行初步分离,并对所得到的总生物碱成分进行HPLC分析,根据特征图谱来确定莲子心总生物碱的种类以及成分。相信随着科学技术的进一步发展,也会有越来越多的相关研究,能够早日实现其最大的药用价值。 方法:经过前期查阅文献从而确定本次实验方案,本实验将莲子心药材(10.5 kg)粉碎,加12倍80%乙醇,回流提取3次,每次2 h。合并提取液,浓缩至无醇味,浓缩液用1%盐酸调至pH = 3,纱布过滤;滤液加氨水调PH至9,二氯甲烷萃取,浓缩萃取液,得到暗黄色沉淀200 g,即为莲子心总生物碱部分。对莲子心总生物碱部分进行HPLC分析,探索总生物碱的HPLC分析条件,确定了最优的分析条件。在最优的分析条件下,建立了HPLC特征图谱。 结果:结合所得的特征图谱发现莲子心中所含生物碱成分远远多于文献报道的十几个化合物。这表明其中包含有大量结构未知的生物碱类化合物,需要进一步系统研究。 结论:通过此次实验所得到的实验数据,可以为莲子心总生物碱成分的探索和技术开发提供理论基础,为日后研究莲子心总生物碱的药理作用奠定基础。 关键词:莲子心,总生物碱,特征图谱。

Abstract Objective:This experiment is to preliminary separate the chemical composition of Plumula,and HPLC analysis the total alkaloids,which make sure the kind and composition of total alkaloids separate from separate. I believe that with the further development of science and technology , there will be more and more relevant research , as early as possible to achieve its maximum medicinal value. Method: After a preliminary literature review to determine this experimental program , This experiment crushed the Plumula(10.5 kg),added 12 times 80% ethanol to the powder,refluxed and extracted them three times,each time two hours.And combined the extract,concentrated it until we could’t smell the taste of alcohol, the concentrate was adjusted to pH=3 with 1% hydrochloric acid, then filtered with gauze. The filtrate was adjusted to pH=9 with ammonia, the solvent extraction with dichloromethane,concentrated the extracts, we got 200g dark yellow precipitate., which was the total alkaloids of plumula. After a HPLC analysis to the total alkaloids, explored the analytical conditions of HPLC, made sure the best of the analytical conditions of HPLC.The characteristic spectrum was bulit in the best of the analytical conditions of HPLC. Results: It was found that the kind of alkaloids in Plumula contained far more than reported in the literature through the result of characteristic spectrum.It indicated that the Plumula contains a large number of unknown structure of alkaloids. Conclusion:The experimental data obtained in this experiment may provided a theoretical basis for the exploration and technology odevelopment of Plumula total alkaloids, and lay the foundation for future study of the pharmacological effects . Keywords : Plumula, total alkaloids, the characteristic spectrum.

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