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doidoi:10.3969/j.issn.1002-2481.2022.04.20山西农业科学2022，50（4）：591-597Journal of Shanxi Agricultural Sciences山西中部4型禽腺病毒遗传进化及其分离毒株致病性分析刘璐，王晨，张丹，高宇，程宇，谭世明，梁立滨，马海利（山西农业大学动物医学学院，山西太谷030801）摘要：为了解山西地区4型禽腺病毒（FAdV-4）的遗传进化情况及其致病性，为山西省FAdV-4的疫苗研发和防控策略制定提供理论依据，收集了山西中部地区太谷、祁县、介休、临汾、长治、交城、柳林等养鸡场11份疑似心包积水-肝炎综合征病鸡的肝脏组织样本，采用PCR方法进行FAdV-4检测，对阳性样品进行FAdV-4的Hexon 和Fiber-2蛋白的全基因序列扩增，将处理后的阳性病料接种于鸡肝癌细胞（LMH）进行病毒分离和PCR鉴定，测定分离毒株的TCID50，研究病毒对SPF鸡胚和SPF鸡的致病性。
结果表明，11份样品的FAdV-4检测均为阳性，经比对，11份样品中FAdV-4的Hexon和Fiber-2基因序列相同，与GenBank中不同FAdV分离株的同源性分别为67.7%~100%和43.2%~100%，其中，与GenBank中的基因C型FAdV-4毒株处于同一个分支，同源性分别为98.4%~100%和95.9%~100%，说明11份疑似样品均存在FAdV-4感染，且为同一毒株。
分离获得的1株FAdV-4（命名为SX2020）可在LMH细胞中良好复制并产生明显的细胞病变，对SPF鸡胚及SPF鸡均有致病性，感染后出现FAdV-4典型病变，并且病毒可以在感染鸡体内持续向外排毒达21~28d。
关键词：4型禽腺病毒；分离与鉴定；遗传进化；致病性中图分类号：S855.3文献标识码：A文章编号：1002-2481（2022）04-0591-07Analysis of Genetic Evolution of Avian Adenovirus Type4from Central Shanxi Province and Pathogenicity of Isolated Strain of the AdenovirusLIU Lu，WANG Chen，ZHANG Dan，GAO Yu，CHENG Yu，TAN Shiming，LIANG Libin，MA Haili（College of Veterinary Medicine，Shanxi Agricultural University，Taigu030801，China）Abstract：In order to understand genetic evolution and pathogenicity of avian adenovirus type4(FAdV-4)in Shanxi province,provide theoretical foundation for research and development of vaccines and prevention-control strategy of FAdV-4in Shanxi province,in this study,11liver samples of chicken suspected of hydropericardium hepatitis syndrome were collected from Taigu,Qixian,Jiexiu,Linfen,Changzhi,Jiaocheng and Liulin in central Shanxi province,and FAdV-4were detected by PCR method.The Hexon of FAdV-4and gene sequence amplification of Fiber-2protein of the positive samples were conducted.The positive samples treated were inoculated into chicken hepatoma cells(LMH)for virus isolation and PCR identification.The TCID50of the isolated strain was determined,and pathogenicity of the isolated virus to SPF chicken embryos and SPF chicken was studied.The results showed that all11samples were positive for FAdV-4,and the sequences of Hexon and Fiber-2genes of FAdV-4in11samples were the same.The homology of Hexon and Fiber-2gene with different FAdV isolates in GenBank was 67.7%-100%and43.2%-100%.They were in the same branch with FAdV-4C strain in GenBank,and the homology with FAdV-4was98.4%-100%and95.9%-100%,indicating that all the11suspected samples were infected by FAdV-4,and they were the same strain.One isolated FAdV-4virus(named SX2020)could replicate well in LMH cells and produce obvious cytopathic changes(CPE).The virus was pathogenic to SPF chicken embryos and SPF chicken,and the typical lesions of FAdV-4appeared after infection.The virus could continuously excrete outward in infected chicken for up to21-28d.Key words：Avian adenovirus type4（FAdv4）;isolation and identification;genetic evolution;pathogenicity禽心包积水-包涵体肝炎综合征（Hydroperica-rdium syndrome-inclusion body hepatitis，HPS-IBH）是一种主要由4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus-4，FAdV-4）引起的高度传染性和高死亡率的新型家禽疾病[1]。
摘要：山东龙口地区某鸡场相继发生以白色水样痢疾、迅速消瘦、采水量增加为主要临床特征的疾病，通过采集病料接种鸡胚传代培养后分离到一株毒株，对该毒株进行血凝试验、NDV 干扰试验、琼脂凝胶扩散试验及雏鸡回归试验研究。
结果表明，经过持续的鸡胚传代，第3代开始形成蜷缩胚，第5代蜷缩的胚胎达到50%；第3代到第5代的尿囊液经过1%胰蛋白酶进行处理后具备了血凝性；该分离株在干扰实验中很大程度影响了NDV 在鸡胚中的增殖；在雏鸡回归试验中，试验雏鸡感染了分离的病毒后，致死率为60%，发病率可以达到100%；感染鸡出现斑驳肾等病理变化，实验结果充分表明分离到的病毒为鸡肾型IBV 。
关键词：鸡；肾型IBV 毒株；分离鉴定鸡肾型传染性支气管炎病毒分离与鉴定于逢强1，王春华2（1.龙口市芦头镇畜牧兽医站山东烟台265700；2.龙口市东江街道畜牧兽医站山东烟台265700）收稿日期：2023-05-25doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.04.059鸡肾型传染性支气管炎（infectious bronchitis ，NIB ）是由嗜肾型传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus ，IBV ）引起的鸡的一种急性、高致死性、接触传染的呼吸道传染病[1]，该病血清型多，主要分为呼吸型、肾型、肠型、肌型，以鸡肾型IBV 最为常见[2]。
所有年龄的鸡均易感IBV ，6周龄以下雏鸡中更为明显，主要感染途径是空气传播。
该病发病急，潜伏期较短，约为1~2d ，病鸡主要表现为反复咳嗽、频繁打喷嚏，大量流鼻液，鸡肾型IBV 疾病的鸡由于肾脏肿胀，还会产生尿酸浓度高的沉淀症状[3-4]。
鸡肾型IBV 毒力的强弱、免疫抗体效价高低、鸡舍内的日常饲养及管理方法等因素影响该病鸡同时表现了不同严重程度上的多种临诊和症状，有表现的程度比较的严重，有出现的则比较轻微[5-6]。
IBV 频繁发生对养鸡业造成了极大的损害，它已成为我国和世界其他地区养鸡业中最严重的家禽传染病之一，通过分离鉴定IBV 不仅是确诊该病的有效方法，也为该毒株在该地区的流行病学调查提供数据监测[7]。
火鸡常见疾病的诊断防治随着养殖业的发展，现在火鸡在我国各个地区均有养殖，而在火鸡的养殖中，要取得成功，不仅要进行科学的饲养管理，对疾病的诊断、防治也应有了解，做到“以防为主，防治结合”，提高火鸡的抗病力，促进火鸡的健康成长，现专业人士将火鸡常见疾病的诊断与防治介绍如下：一、疾病预防1、鸡舍卫生：火鸡在进入室内饲养时，应在地面上铺设2寸厚的沙子或锯木屑或切过的稻草，并定期更换，经常打扫鸡舍，搞好清洁卫生，栏舍、笼及食饮器具要经常进行消毒，鸡舍消毒要制度化。
此外，还应钉好纱罩、纱窗、纱门，以防蚊防鼠。
2、疫苗防病：7日龄时，用鸡新城疫Ⅰ系滴鼻，每只雏鸡滴2～3滴;30日龄时，用鸡新城疫Ⅱ系疫苗滴鼻或胸部肌肉注射;60日龄时，再用Ⅰ系疫苗注射1次，平时定期喂一些白酒浸过的大米，以后不会得鸡瘟病。
3、驱虫防病：育雏期结束进入场地圈养或散放后，要用灭滴灵和肠虫清拌料投喂，每月喂3天，每天2次，每次每鸡各2粒，碾碎拌入精料中喂，也可将过期的青霉素、链霉素进行废物利用，不要丢弃，适量放入水盆中让其饮之，以防火鸡盲肠肝炎病和肠道寄生虫病的发生。
二、常见疾病防治火鸡的常见病有蓝冠病、新城疫、传染性喉气管炎、出血性肠炎、鼻气管炎、沙门氏菌病、丹毒、支原体病、黑头病(盲肠肝炎)、球虫病、火鸡瘟、嗉囊下垂、心肌炎、腱炎等等。
(一)支原体病火鸡支原体病又被称为“1日龄型气囊炎”、“气囊炎缺陷症候群”或“火鸡症候群-65”。
本病是一种广泛存在于世界各地、各种日龄火鸡均可发生的传染性疾病。
既可经种蛋直接传播，也可通过异性交配、空气、人员、设备等一些直接和间接接触而水平传播。
1.病原火鸡支原体肉汤培养物经姬姆萨染色表现为球状体，可单在、成双或成小丛。
不同株支原体抗原性稍有差异，其致病力也各不相同。
2.症状成年火鸡往往是带菌鸡群，感染而不表现明显症状，但其生长速度、产蛋率、受精率、孵化率和健雏率都比支原体阳性率较低或无支原体的火鸡群低。
新城疫①新城疫（ND），又称亚洲鸡瘟，伪鸡瘟等，是一种急性、高度接触性传染病。
典型新城疫特征为发病急，呼吸困难，头冠紫黑，下痢，泄殖腔出血、坏死，腺胃、腺胃和肌胃交界处以及十二指肠出血，慢性病例常有呼吸道症状或神经症状。
虽然已经广泛接种疫苗预防，但该病仍不时在养禽业中造成巨大的损失，目前仍是最主要和最危险的禽病之一。
历史与分布一般认为，新城疫1926年首次暴发于印度尼西亚的爪哇和英国的新城，但也有资料认为，此前朝鲜已有类似的疾病发生。
Doyle（1927）首次证实该病由病毒引起，命名为鸡新城疫，以便与当时欧洲流行的禽流感相区别。
自那以后，新城疫不断传播，至今世界上大多数国家和地区均有暴发该病的记载或道。
目前，新城疫仍广泛存在于亚洲、非洲、美洲的许多国家。
亚洲，尤其是东南亚，该病时有暴发，使养禽业蒙受巨大的经济损失。
我国新城疫的报道最早见于1935年，但估计在此之前已有新城疫的流行。
自改革开放以来，我国养鸡业迅速发展，对新城疫的防制水平也有了很大的提高，绝大部分鸡群均进行了新城疫的免疫接种，所以在大中型鸡场已很少有急性新城疫的暴发。
但是，这些鸡场中仍有非典型的新城疫或鸡群带毒现象，而在农村散养鸡中，尤其是在冬季，仍时有急性新城疫的发生。
新城疫病毒（newcastlediseasevirus，NDV）属RNA病毒中的单股负链病毒目，副粘病毒科，副粘病毒亚科，腮腺炎病毒属的禽副粘病毒。
禽副粘病毒目前已鉴定了9个血清型，新城疫病毒属Ⅰ型禽副粘病毒，而其他血清型的禽副粘病毒中，Ⅱ型和Ⅲ型病毒也侵害家禽并造成经济损失。
新城疫病毒一般呈球形，直径100nm～500nm，核衣壳呈螺旋对称，有囊膜，基因组为单分子负链单股RNA，大小为15kb～16kb，病毒表面有纤突，内含血凝素神经氨酸酶（HN）和融合蛋白（F）。
病毒有血凝特性，能凝集两栖动物、爬行动物、禽类、豚鼠和人的O型红细胞。
病毒还有神经氨酸酶活性，能使已凝集的红细胞缓慢释放等。
第二单元人畜共患病第一节牛海绵状脑病1.能引起人的新型克一雅氏症的疫病是——牛海绵状脑病2.牛海绵状脑病又称——疯牛病3.疯牛病的病原目前已被列入下列哪种病毒——朊病毒4.确诊疯牛病，需要的病理组织是——脑组织切片5.防制疯牛病最关键、最根本的措施是——杜绝该病传染人6.一牛场患牛多为3～5岁，无性别差异。
发病后主要表现为神经错乱，对声音、触摸敏感，恐惧，烦躁不安，有攻击性；肌肉抽搐，步态不稳，呼吸加快，体重下降，继后痴呆，衰竭死亡，病死率100％。
尸检见神经细胞皱缩和大小空泡形成，无发炎现象。
根据上述症状和尸体解剖，该牛场牛所患疾病是——牛海绵状脑病（7～11题共用题干）一牛场患牛多为3～5岁，无性别差异。
发病后主要表现为神经错乱，对声音、触摸敏感，恐惧，烦躁不安，有攻击性；肌肉抽搐，步态不稳，呼吸加快，体重下降，继后痴呆，衰竭死亡，病死率100％。
尸检见神经细胞皱缩和大小空泡形成，无发炎现象。
7.根据上述症状和尸体解剖，该牛场牛所患疾病是——牛海绵状脑病8.进一步确诊该病，需要的病理组织是——脑组织切片9.该病俗称——疯牛病10.该病的病原目前已被列入下列哪种病毒——朊病毒11.防制此病最关键、最根本的措施是——杜绝该病传染人【真题归纳】1.怀疑奶牛发生疯牛病，实验室确诊的方法是【2010年真题】——脑组织病理学检查2.牛海绵状脑病俗称【2013年真题】A.库鲁病B.痒病C.疯牛病D.克-雅病E.蓝舌病第二节高致病性禽流感1.高致病性禽流感病毒属于——正黏病毒科2.高致病性禽流感病的流行特点是——流行范围大且致死率高3.对患高致病禽流感病鸡采取病毒分离与鉴定应取病鸡的——泄殖腔或口腔拭子4.目前诊断高致病禽流感最常用的分子生物学诊断方法是——RT-PCR5.我国对高致病性禽流感实施强制免疫，要求免疫密度必须达到——100%6.我国要求对高致病性禽流感预防后的抗体合格率应达到——70%以上7.15000只蛋鸡场，突然发病；体温升高、呆立、闭目昏睡。
