Bcr／Ab1融合基因阳性、Flk1+CD34-慢性粒细胞白血病细胞体内生物学特性的研究

Bcr／abl融合基因在慢性粒细胞白血病中的检测方法及意义bcr/abl 融合基因是慢性粒细胞白血病（CML）发病的分子生物学基础，通过灵敏的检验方法检测此基因对CML的诊断、治疗和预测疾病复发等具有重要临床意义。

标签：bcr/abl 融合基因；慢性粒细胞白血病慢性粒细胞白血病（CML）是一种发生在造血干细胞的以粒系细胞慢性增殖为主要特征的恶性克隆性疾病，分子学水平上形成bcr/abl融合基因。

bcr/abl 融合基因的表达水平反映了患者体内白血病细胞的负荷量。

因此，精确检测bcr/abl融合基因的表达水平，对白血病的临床分型诊断、个体化治疗方案的制定、治疗效果监测、缓解后复发风险的估计和预防、干细胞移植后残留细胞的检测和早期干预治疗等方面具有重要的指导作用。

本文对bcr/abl融合基因的检测方法及意义进行综述。

1 Bcr/abl融合基因的检测方法1.1 Southern Blot和Western BlotSouthern 印迹即DNA印迹，可以对bcr/abl融合基因DNA重排进行分子生物学检测。

Southern Blot可使用从外周血或骨髓细胞提取的DNA对bcr/abl融合基因进行检测，不需要保持细胞的活力和所处周期，灵敏度约1～5%，多适用于科研而不是临床诊断[1]。

Western 印迹的原理类似Southern印迹，它是从混合蛋白质中区分并定量分析某种特殊蛋白质的重要手段[2-3]。

但由于不同蛋白质的电转移效率以及单抗的结合能力不同，Western印迹的敏感性和可重复性较差，其敏感性为0.5%～1%[4]。

另外该法操作繁琐、检测时间长，限制了其在临床上的应用。

1.2 常规RT-PCR1988年RT-PCR被首次应用于CML的bcr/abl基因的检测[5]。

在RT-PCR中，应用随机引物或abl特异引物，mRNA被反转录为cDNA，随后应用针对M-bcr 的bl或b2和abl的a2或a3的引物进行扩增，扩增产物在琼脂糖或聚内烯酰胺凝胶电泳中出现特异的条带，在典型的CML病例中，b3a2和b2a2扩增产物条带相差75bp。

慢性粒细胞白血病治疗的研究进展摘要】慢性粒细胞白血病是起源于多能干细胞的克隆增殖性疾病，CML发病是由于导致异常增高的酪氨酸激酶活性的BCR-ABL融合蛋白所致。

近年来，CML有许多治疗方法可以选择，α-干扰素治疗使CML-CP患者能够取得较好的完全细胞遗传学缓解率(CGR)和分子生物学缓解；甚至可能治愈。

格列卫对CML的治疗在血液学和细胞遗传学方面取得良好的疗效，但很少会导致分子生物学的完全缓解，少数患者都存在着复发的危险和相关的克隆异常，因而格列卫是不能治愈CML的。

同异基因造血干细胞移植（HSCT）是目前治疗CML最好的方法,可以提高患者的生存期而且可以治愈。

【关键词】慢性粒细胞白血病干扰素格列卫造血干细胞移植慢性粒细胞白血病（CML）根据自然病程可分为慢性期(CML-CP)、加速期(CML-AP)和急变期(CML-BP)。

85％的患者处于慢性期，一般经3-5年后发展为加速期，6-18个月进入急变期。

近年来的研究表明，异基因造血干细胞移植（allo-HSCT），α-干扰素、BCR-ABL酪氨酸酶抑制剂如格列卫等的治疗明显地提高了慢性粒细胞白血病的预后[1]。

本文拟就这三种方法治疗CML进展作一综述。

1 α-干扰素1.1临床资料1.1.1干扰素最适剂量[2] 一般认为其始剂量为5MU/m²•d，或达到获显著血液学疗效的最大耐受量及患者出现毒性症状需减量，根据WHO毒性反应调整剂量。

临床治疗剂量5×106U/m²时，毒副作用即可出现。

1.1.2疗效临床观察表明CML患者α-干扰素治疗比马利兰和羟基脲有更长的生存期，大部分患者应用干扰素单药治疗取得很好的血液学缓解和长期生存。

长期随访发现干扰素治疗使慢性期CML患者能够取得15-25%的完全细胞遗传学缓解率(CGR),其中部分患者可取得分子生物学缓解；少部分患者获得CCR也获得了长期无病生存，也可能已治愈。

近来的研究表明CML的特异细胞毒性T细胞与α-干扰素治疗发生疗效有关。

Bcr／abl阳性慢性粒细胞白血病中ASB2和Jak3基因mRNA表达的研究邓亚云;吴薇;张平安【摘要】目的：研究 Bcr／abl 阳性慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓中单个核细胞 ASB2和 Jak3基因mR‐NA 的表达，探讨 Bcr／abl 阳性 CML 中蛋白泛素化与Jak‐STAT 信号通路的相关性。

方法收集初诊确诊为 Bcr／abl 阳性 CML 的患者32例（CML 组）及34例非白血病和健康人（对照组）作为研究对象，采集骨髓标本，采用实时荧光定量 PCR（RT‐PCR）检测 ASB2 mRNA 和 Jak3 mRNA 表达情况。

结果 CML 组骨髓细胞中 ASB2 mRNA 、Jak3 mRNA 表达量相对于对照组分别升高了29．9、548．7倍，两组 ASB2 mRNA 、Jak3 mRNA 表达量差异有统计学意义（P＜0．01），且在 Bcr／abl 阳性 CML 患者中二者呈正相关（r ＝0．571，P＜0．01）。

结论 Bcr／abl 阳性 CML 患者骨髓细胞中ASB2与 Jak3有异常表达，蛋白泛素化与Jak‐STAT 信号通路的交联可能与白血病的发生、发展有关，并且初次在人体骨髓细胞中证明 ASB2与 Jak3共同升高具有相关性。

%Objective To study the expression level of ASB2 and Jak3 gene mRNA in bone marrow mononu‐clear cells of the patients with Bcr/abl positive chronic myeloid leukemia(CML) and to investigate the correlation be‐tween ubiquitination with Jak‐STAT signaling pathway in CML .Methods The bone marrow sample was collected from 32 patients with newly diagnosed Bcr/abl positive CML(CML group) and 34 cases of non‐leukemia and healthy individuals(control group) ,respectively .The expression levels of ASB2 mRNA and Jak3 mRNA were detected by re‐al‐time quantitative PCR .Results The expression amounts of ASB2 mRNA and Jak3 mRNA inthe bone marrow cells of the CML group were significantly increased by 29 .9 and 548 .7 times as compared with the control group(t=19 .4 ,38 .6 ,P < 0 .01) ,and the expression amounts of ASB2 mRNA and Jak3 mRNA had statistical difference be‐tween the two groups (P < 0 .01) ,moreover ASB2 mRNA and Jak3 mRNA had positive correlation in the patients with Bcr/abl positive CML(r= 0 .571 ,P< 0 .01) .Conclusion ASB2 and Jak3 have the abnormal expression in bone marrow cells of Bcr/abl positive CML patients ,suggesting that the crossing‐linking between ubiquitination and Jak‐STAT signaling pathway may be related with deve lopment and progression of leukemiamoreover .Besides ,it is pre‐liminarily proved that the common increase of ASB2 and Jak3 has correlation .【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2015(000)019【总页数】3页(P2814-2816)【关键词】Bcr/abl;慢性粒细胞白血病;骨髓;单个核细胞;ASB2;Jak3【作者】邓亚云;吴薇;张平安【作者单位】武汉大学人民医院检验科 430060;武汉大学人民医院检验科 430060;武汉大学人民医院检验科 430060【正文语种】中文P210是一种由Bcr/abl基因编码的具有持续活性的酪氨酸激酶，被认为与慢性粒细胞白血病(CML)的发生有关，但人们对疾病进展中的分子机制仍然不明[1-2]。

临床医学检验考试技术(中级)(习题卷22)第1部分：单项选择题，共100题，每题只有一个正确答案,多选或少选均不得分。

1.[单选题]近代社会以来，使医医关系发生重大变化的主要因素是( )A)科学技术的进步B)医学模式的变化C)医院的出现D)病人权利意识的增强答案:C解析:2.[单选题]骨髓原始细胞过氧化物酶染色阴性反应的是A)急性髓细胞白血病M2型B)急性淋巴细胞白血病C)急性单核细胞白血病D)慢性粒细胞白血病E)急性髓细胞白血病M3型答案:B解析:考点：骨髓过氧化物酶染色的意义。

过氧化物酶(POX)染色是临床上辅助判断急性白血病细胞类型首选、最重要的细胞化学染色。

白血病性原始粒细胞可呈阳性反应；急性淋巴细胞白血病时，原始淋巴细胞和幼稚淋巴细胞均呈阴性反应；急性单核细胞白血病时，少数可呈弱阳性反应。

3.[单选题]男性，50岁，左上腹包块3年余，近半个月高热，脾大平脐。

红细胞计数为2.0×10／L，白细胞计数为350×10／L，分类为原始粒细胞14％，早幼粒细胞26％，杆状核粒细胞为14％，分叶粒细胞为42％，血小板计数为35×10／L，NAP轻度增高。

下列出现在本类疾病中的是A)PML／RARA融合基因B)BCR／ABL融合基因C)t(9；11)D)t(15；17)E)t(8;21)答案:B解析:1.慢性粒细胞平均发病年龄50岁左右，起病隐匿，病程缓慢，粒细胞显著增生，脾常明显肿大，90％以上的患者可检出特异性的费城染色体及其分子标志BCR／ABL融合基因。

急变期的诊断标准有：原始粒细胞在血中或（和）骨髓中＞10％，外周血中原早幼粒细胞＞30％等。

2.慢性粒细胞平均发病年龄50岁左右，起病隐匿，病程缓慢，粒细胞显著增生，脾常明显肿大，90％以上的患者可检出特异性的费城染色体及其分子标志BCR／ABL融合基因。

急变期的诊断标准有：原始粒细胞在血中或（和）骨髓中＞10％，外周血中原早幼粒细胞＞30％等。