【精品】PPT课件 实验三 细胞化学成分的显示

大家还记得细菌的结构吗？
请大家来观察一下洋葱表皮细胞
细菌与细胞有什么不同之处呢？
• 细菌没有细胞核，细胞有细胞核
交流一下课 前搜集到的
资料吧！
我知道：细胞是英国科 学家罗伯特·虎克1665 年发现的。
请观察其他动植物、人体的细胞
动物细胞
细胞膜 细胞核 细胞质
植 物 细 胞
细胞壁 细胞膜 叶绿体 细胞核 液泡
分化
细胞分化是同一来源的细胞逐渐发生各 自特有的形态结构、生理功能和生化特 征的过程。
温馨提示
要想清楚地看清细胞， 需要通过显微镜来观察。
显微镜使用方法
一、取镜和安放 1．右手握住镜臂，左手托住镜座。 2．把显微镜放在实验台上，略偏左（显微镜放在距实验台
边缘7厘米左右处）。安装好目镜和物镜。 二、对光 3．转动转换器，使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物
（2） 教学方程的意义，突出概念的内涵与外延。 “含有未知数”与“等式”是方程意义的两点最重要的内涵。“含有未知数”也是方程区别于其他等式的关键特征。在第1页的两道例题里，学生陆续写出了等式，也写出了不等式；写出了不含未知数的等式，也写出了含有未知数的等式。这些都为教学方程的意义提供了鲜明的感知材料。教材首先告诉学生： 像x+50=150、2x=200这样含有未知数的等式叫做方程，让他们理解x+50=150、2x=200的共同特点是“含有未知数”，也是“等式”。这时，如果让学生对两道例题里写出的50+50=100、x+50＞100和x+50＜200不能称为方程的原因作出合理的解释，那么学生对方程是等式的理解会更深刻。教材接着安排讨论“等式和方程有什么关系”，并通过“练一练”第1题让学生先找出等式，再找出方

❖ 显示脂类的基本原理 ：用易溶于脂类的染料, 使之溶于所检的脂质(如脂滴)中,使组织内的 脂类着色.
❖ 常用方法： 苏丹黑B法、油红O法、硫酸尼 罗蓝法 、苏丹Ⅲ染色法等
❖ 基本要求 ⑴ 不用石蜡切片. ⑵ 固定剂一般用Formalin保存磷脂较好. ⑶ 方法: ① 物理法:脂溶性染料,不溶于水,属 偶 氮染料.常用苏丹Ⅲ,Ⅳ,苏 丹黑 ,油红O等. ② 化学方法:硫酸尼罗蓝显示脂肪酸. ③ 选择 性提取法(对照)
❖ 差不多与此同时(1900-1935年)，发现疾病组织中出 现的物质变化，更促进了化学技术在病理学染色方法 中的应用，也丰富了在显微镜下显示无机物、色素、 脂类、糖类、蛋白质、核酸等物质的组织化学内容， 此后又出现了酶的组织化学等。由此可见，“组织化 学”一词的含意是随时代而变化的，由定位趋向于与 定量相结合的研究。
❖ 3、灌注固定法：从心血管途径将固定剂灌注到全 身或某一个器官，使细胞保持生活时的状态而不发 生移位，固定后再迅速取材。
三、制 片
❖ 涂片法、石蜡切片法、冰冻切片法 ❖ 最常使用的为恒冷箱冰冻切片法。
四、注意事项
❖ 1、实验所用的器械、器皿都必须清洁无污染。 ❖ 2、配制试剂时应使用双蒸馏水。 ❖ 3、固定、取材都应在冷的环境下进行。 ❖ 4、各种试剂的pH值都要调准，否则影响反应结果。 ❖ 5、所用试剂要纯，都必须达到分析纯(A·R级)。 ❖ 6、同时、同条件情况下做阴性和阳性对照。 ❖ 7、了解和掌握被检组织中所要测定的化学物质或
❖ 以下介绍McGee-Ruseell核固红法。 ❖ 1、操作步骤 ❖ (1) 石蜡切片常规脱蜡至水。 ❖ (2)核固红染液染色2一10分钟。 ❖ 核固红染液的配制：核固红2g，蒸馏水100ml洗涤2次，剩

nuclei
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四、作业
1．绘制口腔上皮细胞(点线绘图法) 2．低倍镜、高倍镜下测微尺的标定方法及结果 3．计算核质比
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镜台测微尺
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目镜测微尺（200小格）
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实验二、细胞生理活 动的实验观察
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实验目的
通过制片与观察加深理解细胞吞噬等生理活动 掌握死活细胞鉴别的原理及方法
许多酸性染料不易穿过活细胞的质 膜进入细胞内，却能渗入死亡的细胞 内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
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(一)临时制片——口腔上皮细胞标本的制备
取载玻片一张(揩净)→加一滴生理盐水→取材(口腔内颊 部上皮细胞)→涂于生理盐水中→盖盖玻片→染色(甲基 蓝)1’→观察
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(二)显微测量
1．显微测量计
目镜测微尺 镜台测微尺
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(1) 目镜测微尺
1.外形是一圆形玻片，装入目镜镜筒中。 用于测量标本用。 2.刻度标记0~100，实际分为200等份，每一个格的长
度需用镜台测微尺标定。
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(2) 镜台测微尺
1.外形是一载玻片，上有一带精细刻度的标尺。 2.总长度为1mm，分为100等份，每一个格的长度为
0.01mm(10μm)。
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(3)标定方法
①将镜台测微尺置镜台上。 ②低倍下找到镜台测微尺，使之与目镜测微尺平行且
左端对齐(0刻度重合)。
using of the microscope
(I) Use of low objective lens (II) Use of high objective lens
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Structure of the microscope Mechanical part Optics part Lighting part

骨髓细胞
红细胞 淋巴细胞 粒细胞 非造血细胞 巨核细胞
中性粒细胞 （绝大部分的粒细 胞是性粒细胞） 嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
过氧化物显色反应主要染中 性粒细胞和嗜酸性粒细胞
小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。
1．捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后 拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头 顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
就是过氧化物酶的部位。
骨髓细胞内可见蓝色或者棕色的颗粒，即过氧化物酶所在的部位
洋葱鳞片表皮细胞内可见蓝色或者棕色的颗粒， 即过氧化物酶所在的部位
实验三、细胞内过氧化物酶的显示
『目的要求』 1、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 2、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。
『实验用品』 光学显微镜、解剖盘、染色缸、微量注射器、解剖 器械、0.5%CuSO4、 0.2%联苯胺、1%番红、生理盐 水、小白鼠
『实验原理』
细胞内存在的过氧化物酶能把许多胺类氧化成 有色化合物，联苯胺可被细胞内的过氧化物酶氧化 成蓝色或棕色产物（蓝色物质为中间产物联苯胺 蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙）， 因而显示出细胞内过氧化物酶的分布。
2．给药方法：
小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、 尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱 和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿 腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。 针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或 肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／ 10克体重。

1、检查显微镜
2、清点检查器材
3、清洁公共实验区、打扫卫生
镜检后作业与工作
1. 完成实验报告；
4、送交动物尸体 5、检查水电门窗安全
2. 将动物尸体送到实验室门口动物尸体篓；
3. 清洗并检查自己桌面上的器材（弯盘、镊子等是否齐全）；
4. 做好显微镜使用登记，盖好防尘罩；
5. 将用过的载玻片刷洗干净后放入回收盆中;
pp碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内的 分布情况；
2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应的 原理和方法。
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[实验原理]
1. 由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性 基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质 带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则 为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色， 即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。 核酸的存在会影响实验结果 用三氯醋酸处理
6. 盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。
（弃入水槽中会引起下水道堵塞）
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核酸的存在会影响实验结果用三氯醋酸处理甲基绿和派洛宁是互不混淆互不影响的两种染色剂由于其自身分子结构的特点它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合从而同时显示细胞内dna和rna的分布部位
细胞生物学与遗传学教研室
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第二次实验
Ⅰ 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 Ⅱ 细胞内DNA和RNA的原位显示
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[小结]
• 评价本次实验的得失 • 本次实验需要巩固的概念
细胞化学法 • 本次实验需要掌握的实验技能
1. 血涂片制作方法 2. 染色的规范操作方法 3. 洗涤方法（流水冲洗） 4. 正确的镜检方法（显微观察技术）
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二、核糖体的化学组成
核糖体蛋白：
适当条件下，CsCL离心，可将核糖体各成分分离出来
蛋白质成分按照一定的顺序一组一组地被分离出来 大部分蛋白质均含有丰富的碱性氨基酸 组成核糖体的蛋白质， 在大小亚单位中均有一定的空间分布 利用专一性抗体， 在电镜下可对各种蛋白质做定位测定
三、核糖体的功能
合成蛋白质的场所 由核糖体、mRNA和tRNA三者密切配合共同完成 肽链合成的起始、延伸和终止三个阶段的反应 (一)核糖体与tRNA相互识别的分子机制 Paul Schimmel等(2019)提出一个模型，该模型认为： 1.带有反密码子的呈”L”型的tRNA具有两个不同的臂： 一个臂：其3’端的通用CCA单链序列为氨基酸的结合 位点 氨基酸通过酯化作用可连接到末端的A上；
三、粗面内质网的功能
RER合成的蛋白质：主要为分泌蛋白 及装配内膜系统和质膜所需要的蛋白质 当活跃合成蛋白质：内质网扁平囊扩大， 里面充满了浓密的大分子物质 当细胞内必需营养物缺乏、能源不足或受毒素刺激： ER具有降低蛋白质合成起始速率的调控作用
三、粗面内质网的功能
2．合成蛋白质的修饰与加工
修饰、加工：多肽链的糖基化和羟基化等
酰基化、羟化、二硫键的形成等修饰， 使新生多肽链折叠成正确的三维结构
三、粗面内质网的功能
3．膜的生成 RER能不断地进行自身装配和生成
实验：蛋白质和脂类前体物用14C-亮氨酸和14C-甘油标记 发现：标记前体物掺入到RER数量要比掺入到SER大得多 表明：膜的生成方向由RER到SER
膜的生成： 首先合成基本膜脂和整合膜蛋白 然后按顺序依次添加酶、专一性糖和脂类 膜分化过程： 膜的生成要经过化学和结构上的改造， 逐步转变为内膜系统中各种膜，以至质膜

【实验步骤】
A. 人口腔上皮细胞线粒体的超活染色与观察
B. 用牙签刮取口腔颊部粘膜的上皮细胞，在洁净的 载玻片上与1d JGB染液混匀，染色15min以上。盖 上盖玻片，光镜下观察线粒体的形态和分布。
C. B. 小鼠肝脏细胞线粒体的超活染色与观察
D. 取小鼠肝脏边缘较簿组织，置于含Ringer液平皿 中挤压洗涤2-3次，吸去Ringer液，加JGB染液染 色30min， Ringer液洗涤1次后转移至载玻片，将 组织拉碎，去稍大的组织块，盖上盖玻片，镜检。
洋葱根尖细胞的有丝分裂（40×）
C 蝗虫精巢切片的观察
蝗虫精巢是由多条棒状的精巢小管组成，从游离端到 附着端依次分布了不同发育阶段的生精细胞。低倍镜 下选择一纵切的棒状精巢小管，换高倍后仔细辨别各 类型生精细胞及减数分裂各时相特征。
【作业】
绘图：大蒜根尖有丝分裂各时相
实验六 细胞膜的通透性
【实验目的】
掌握光镜下多种细胞的形态和结构特征； 掌握显微测微尺的使用和测量细胞大小的方法。
【实验原理】
动物各种不同组织的细胞具有不同的 形态大小等特征
上皮组织：
单层扁平上皮 单层立方上皮 单层柱状上皮 复层扁平上皮 ……
神经组织
结缔组织：
骨 软骨 血液 ……
肌组织：
骨骼肌 心肌 平滑肌
单层柱状上皮与复层扁平上皮
是否溶血 溶血时间 结果分析
实验五
植物细胞骨架的光学显微镜观察
【实验目的】
掌握考马斯亮蓝法检测细胞骨架的方法
【实验原理】
A. 细胞化学染色与DNA和RNA的定位
核酸分为DNA和RNA，呈酸性可与碱性染料 反应而显色和定位。由于两类核酸分子聚合程 度不同，对不同的碱性染料亲和力不同，甲基 绿-哌洛宁染料的两种组分分别对DNA和RNA 有高亲和力，并分别将二者染成蓝绿色和红色。

制造碱性环境
砖红色沉淀 可溶性还原糖
蓝色 淀粉
橘黄色 脂肪
紫色 蛋白质
例题：
1. 下列各项中，能与斐林试剂反应产生砖红色沉
淀的是（ B） A．淀粉 B．果糖 C．蔗糖 D．纤维素
2.下列有关检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白
C 质三个实验的叙述中，不正确的是( )
A．只有脂肪的检测需要使用显微镜 B．只有还原糖的检测需要加热到50 ℃～65 ℃ C．检测还原糖、蛋白质所用试剂相同 D．三个实验的显色反应均不相同
二、组成细胞的元素
组成人体细胞的主要元素（占细 胞鲜重的百分比）
组成人体细胞的主要元素（占细 胞干重的百分比）
在人体细胞中，干重时含量最多的元素
是 C ，最多的四种元素按多到少排列是
C_＞_ O__＞N；＞H 鲜重时含量最多的元素
是 O ，最多的四种元素按多到少排列是
O__＞_。C＞H＞N
碳为什么是构成细
乙液：0.05g/mL C象： 砖红色沉淀
6、注意事项：
①斐林试剂的使用方法：现用现配， 等量混合均匀后使用
②还原糖检测需要的条件：50~65℃ 水浴加热
实验二：脂肪的检测
1、选材：等①花①等生量混种合，子现配或现用花量混生合，种现配子现用匀浆
2、实验原理：脂肪+苏丹Ⅲ试
3．现有无标签的稀蛋清、葡萄糖、淀粉和淀粉酶溶液各 一瓶，可用双缩脲试剂、斐林试剂和淀粉溶液将它们鉴 定检测生出物组来织中。的糖类请、脂回肪和答蛋白质：（淀粉酶的化学本质是蛋白质）
能不能选甜菜、甘蔗来检测还原糖？为什么？
(1)用一种试剂将上述4种溶液区分为两组，这种试剂是 (3)将淀粉溶液分别与发生显色反应的两种溶液混合，一段时间后，用斐林试剂分别处理上述两种混合液，观察到无颜色变化的溶液是

新知探究(一) 细胞核功能的探究实验 【探究·深化】 [问题驱动]
实验1 美西螈胚胎细胞的核移植实验
该实验说明美西螈的皮肤颜色是由 细胞核 控制的。
实验2 蝾螈受精卵的横缢实验
(1)甲组实验中，A部分_无___(填“有”或“无”)细胞核， 停止 (填“停止”或 “不停止”)分裂；B部分_有___(填“有”或“无”)细胞核，__能__(填“能”或“不 能”)分裂。
四、建构模型 1．概念：模型是人们为了某种特定的目的而对认识对象所作的一种 简__化__的__概___括__性_的描述。
3．举例：沃森和克里克制作的著名的DNA双螺旋结构模型就是 物理 模型。
【教材微点发掘】 1．连线细胞核的功能探究实验(教材第54页《思考·讨论》)
2.世界上首个体细胞克隆猴“中中”和 “华华”在我国培育 成功(教材第58页《生物科技进展》)。请思考：体细胞克隆 技术(体细胞核移植)体现了细胞核的什么功能？ 提示：细胞核是细胞代谢和遗传的控制中心。
4．伞藻的形态结构特点取决于细胞核。 5．克隆牛是由重组的卵细胞发育成的，重组细胞包含了母牛乙的细胞核和 母牛甲的细胞质，由这一重组细胞发育成的克隆牛性状几乎与母牛乙一模一样， 这说明性状是由细胞核决定的。克隆牛所有的细胞都来自重组细胞的细胞分裂， 其细胞核中的遗传物质与母牛乙的遗传物质相同。 6．细胞核具有控制细胞代谢与遗传的功能。 (二)旁栏思考(教材第56页) 同一生物体内的所有细胞都来自受精卵的分裂，细胞内的“蓝图”都是一样 的。体内细胞的形态、结构和功能多样，是细胞分化的结果。
②伞藻核移植实验 (2)结论：生物体形态结构的建成主要与 细胞核 有关。
[重难点拨] 1．探究实验分析 (1)实验1中缺乏对照实验，可增加“将白色美西螈胚胎细胞的细胞核移植到 黑色美西螈的去核卵细胞中”的对照组，以增强结论的说服力。 (2)实验2、3、4均遵循了对照原则。 (3)伞藻核移植实验可排除假根中其他物质的影响，是对伞藻嫁接实验的补充， 进一步验证了细胞核的功能。 (4)由实验2、3还说明细胞只有保持结构的完整性，才能完成正常的生命活动。

组成地壳与组成生物体的部分元
明什么？
素含量（％）表
元素 地壳 细胞
没有，这说明生物界和非生物界具 有统一性。
O 48.60 65.0
Si
26.没30有，极这少说明生物2的界.生含和物量非体有生中区物的别 0.0一87性。 18.0
N 0.03 3.0
含量有区别，说明生物界和非生物 界还具有差异性。
二、细胞中的无机化合物
无机物
水 无机盐
组成细胞 的化合物
糖类
有机物
脂质 蛋白质
核酸
细胞内含量最多的化合物
干重最多的化合物
细胞内含量最多的有机物
细胞鲜重（活细胞）时，含量最多的化合物
是水
；含量最多的有机化合物是 蛋白质 。
细胞干重时，含量最多的化合物是 蛋白质 ；含量 最多的有机化合物是 蛋白质 。
紫色络合物
（2）选材：黄豆、鸡蛋清（稀释）、牛奶、豆浆
（3）检测过程：
A液： NaOH0.1g/mL创造 碱性条件
B液：提供Cu2+，如 果B过量， Cu2＋的 蓝色就会遮盖生成的 紫色
三、蛋白质的检测：
制备组织样液
黄豆
浸泡 去皮、切片
研磨
过滤
黄豆组织样液
鸡蛋
蛋清液 稀释 鸡蛋清稀释液
显色反应
向试管中注 入2ml样液
生石花
生石花
石头
细胞和石头都是由分子组成的，为什么细胞能表现出生命的特 征呢？是因为细胞里含有特殊的生命元素吗？是组成细胞的分 子有什么特殊之处吗？
第2章 组成细胞的分子 第1节 细胞中的元素和化合物
一、组成细胞的元素
分析表中数据解答问题：
1.组成生物体的所有元素中，有没有 哪一些元素是生物体所特有的？这说