hplc常用的流动相

简述高效液相色谱法中流动相的要求高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种用于分离和分析化学、生物和制药样品的色谱技术。

在高效液相色谱过程中，流动相的选择和性能对分析的准确性和分离效果有着重要的影响。

下面将详细介绍高效液相色谱法中流动相的要求。

1.基础流动相特性：流动相应具有一定的极性和溶解性能。

常用的流动相包括水和有机溶剂，如甲醇、乙醇和乙腈等。

流动相的选择应考虑到待分离组分的性质和分析目的，要保证样品能够溶解并很好的分离。

常用的流动相配比为水/有机溶剂（如乙腈）的比例，比如常见的70:30、50:50等。

2.pH值调节：根据待分离物和色谱柱的性质，适当调节流动相的pH值可以改变待分离物的电离状态，从而影响它们在色谱柱上的分配行为。

比如，对于具有酸性基团的分析物，可以通过酸或碱的加入来调节流动相的pH值，以影响它们与色谱固定相之间的相互作用。

3.离子强度调节：有些样品中可能存在电解质，其离子强度会对分离产生影响。

在这种情况下，可以通过添加相应的盐来调节流动相的离子强度，以改变分析物与色谱固定相的相互作用。

常用的盐有甲酸铵、硫酸铵、三氟乙酸等。

4.流速控制：流动相的流速也对色谱分离的效果有着重要的影响。

流速过快可能导致分离不充分，流速过慢则会增加分析时间。

流速的选择需根据待分离物的性质、色谱柱的尺寸和色谱仪的性能等因素综合考虑。

5.除气和过滤：流动相中的气泡和杂质会影响液相的流动性和检测信号的稳定性。

因此，在使用前应对流动相进行除气处理，以减小气泡对色谱分离的干扰。

同时，对流动相进行过滤处理，可以去除其中的固体颗粒和微生物等。

通常使用0.45μm的滤膜进行过滤。

6.流动相稳定性：流动相应具有良好的稳定性，以保证分析结果的准确性和重复性。

一般来说，流动相中的溶液成分要充分溶解，不发生相分离和析出现象。

所以，流动相的配制要求严格，要遵循相应的配方和混合方法，并在使用前进行充分的搅拌和均匀。

关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生命科学、化学、医药、环境等多个领域。

其中，流动相的选择对于色谱分离性能和分析结果的准确性有着重要的影响。

一、流动相的组成流动相是指用于在高效液相色谱仪中运载样品溶液，推动样品通过固定相柱的溶剂体系。

一般情况下，流动相由溶剂和缓冲剂组成。

溶剂用于将样品带入色谱柱，而缓冲剂则用于调整流动相的pH值。

在选择流动相的溶剂时，主要要考虑以下因素：1.溶剂极性：色谱柱的固定相特性和待分析的样品特性决定了所需的溶剂极性。

一般来说，溶剂可以选择非极性溶剂、极性溶剂或者两者的混合物，以适应不同的分析要求。

2.溶剂选择：常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，以及水。

甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂，由于它们的极性较低，因此溶解性广泛。

水是最常用的极性溶剂，可以提供更好的分离效果。

3.透过性：一些样品需要在其中一种溶剂中分离，因此选择适当的溶剂对于分析结果的准确性至关重要。

在选择缓冲剂时，需要考虑以下因素：1.pH值的调整：一些分析需要在特定的pH值下进行，需选择合适的缓冲剂，以维持所需的pH值。

2.缓冲能力：缓冲剂应具有良好的缓冲能力，以维持流动相的pH值的稳定性，避免pH值对分离效果的干扰。

3.溶解度：缓冲剂应具有较高的溶解度，以便在高浓度下使用，从而提供稳定的pH值。

二、常用的流动相系统1.等相流动相系统（Isocratic elution）：等相流动相系统是指流动相组成在整个分析过程中保持不变。

这种系统适用于分离度较差的样品，具有简单、稳定、易操作的特点。

2. 梯度流动相系统（Gradient elution）：梯度流动相系统是指在分析过程中，通过改变流动相组成来实现样品的分离。

这种系统适用于需要分离程度较高的样品，提供了更好的分离效果。

hplc用磷酸盐缓冲液流动相
HPLC（高效液相色谱）是一种分离和分析化合物的技术，是现代化学分析中的重要方法之一。

在HPLC中，流动相是非常重要的组成部分，它决定了分离效果和灵敏度。

磷酸盐缓冲液是HPLC中常用的一种流动相。

磷酸盐缓冲液是一种适用于中性和碱性物质的缓冲液。

它可以调节溶液的pH值，使其保持在稳定的范围内。

在HPLC中，磷酸盐缓冲液通常用于分离中性和碱性物质。

磷酸盐缓冲液的制备方法如下：
1. 准备0.1M的磷酸二氢钾（KH2PO4）和0.1M的磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液。

2. 将KH2PO4和Na2HPO4溶液混合，用NaOH或HCl调节pH值至所需范围内。

3. 最后用纯水调节溶液的体积至所需的浓度。

在使用磷酸盐缓冲液作为HPLC流动相时，需要注意以下几点：
1. pH值的选择：磷酸盐缓冲液可以在不同的pH范围内使用。

在选择pH值时，需要考虑待分离物质的性质和分离效果。

2. 流速的选择：流速对分离效果和灵敏度有着很大的影响。

一般来说，流速越慢，分离效果越好，但灵敏度会降低。

3. 溶剂的选择：通常情况下，磷酸盐缓冲液需要与有机溶剂混合使用。

常用的有机溶剂包括甲醇、乙腈等。

4. 温度的控制：温度对于分离效果和灵敏度也有很大的影响。

一般来说，温度越高，流动相的粘度越低，流速越快，但分离效果会降低。

总之，磷酸盐缓冲液是一种常用的HPLC流动相，在HPLC
分析中起到了重要的作用。

在使用时需要注意上述几点，以获得最佳的分离效果和灵敏度。

HPLC中固定相和流动相在色谱分析中，如何选择最佳的色谱条件以实现最理想分离，是色谱工作者的重要工作，也是用计算机实现HPLC分析方法建立和优化的任务之一。

以下是填料基质、化学键合固定相和流动相的性质及其选择。

一、基质（担体）HPLC填料可以是陶瓷性质的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。

无机物基质主要是硅胶和氧化铝，无机物基质刚性大，在溶剂中不容易膨胀；有机聚合物基质主要有交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯，有机聚合物基质刚性小、易压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。

1、基质的种类：1）硅胶硅胶是HPLC填料中最普遍的基质。

除具有高强度外，还提供一个表面，可以通过成熟的硅烷化技术键合上各种配基，制成反相、离子交换、疏水作用、亲水作用或分子排阻色谱用填料。

硅胶基质填料适用于广泛的极性和非极性溶剂。

缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定。

通常，硅胶基质的填料推荐的常规分析pH范围为2～8。

硅胶的主要性能参数有：①平均粒度及其分布。

②平均孔径及其分布，与比表面积成反比。

③比表面积：在液固吸附色谱法中，硅胶的比表面积越大，溶质的k值越大。

④含碳量及表面覆盖度（率）：在反相色谱法中，含碳量越大，溶质的k值越大。

⑤含水量及表面活性：在液固吸附色谱法中，硅胶的含水量越小，其表面硅醇基的活性越强，对溶质的吸附作用越大。

⑥端基封尾：在反相色谱法中，主要影响碱性化合物的峰形。

⑦几何形状：硅胶可分为无定形全多孔硅胶和球形全多孔硅胶，前者价格较便宜，缺点是涡流扩散项及柱渗透性差，后者无此缺点。

⑧硅胶纯度：对称柱填料使用高纯度硅胶，柱效高，寿命长，碱性成份不拖尾。

2）氧化铝具有与硅胶相同的良好物理性质，也能耐较大的pH范围。

它也是刚性的，不会在溶剂中收缩或膨胀。

但与硅胶不同的是，氧化铝键合相在水性流动相中不稳定。

不过现在已经出现了在水相中稳定的氧化铝键合相，并显示出优秀的pH稳定性。

HPLC使用指南第一部分使用前准备1. 流动相1.1 常用的溶剂体系1.1.1 中性体系甲醇-水乙腈-水异丙醇-水（质谱常用，HPLC使用较少）1.1.2 酸性体系0.08% (v/v) TFA（三氟乙酸） in water - 0.08% (v/v) TFA in acetonitrile（乙腈）0.1% (v/v) TFA in water - 0.1% (v/v) TFA in acetonitrile*HPLC常用的酸有：三氟乙酸，甲酸。

三氟乙酸：最常用。

对体系（基线）的稳定性好。

但配置好的流动相溶液不稳定，不能长时间放置。

沸点低，容易除去。

酸性较强。

甲酸：常用。

沸点较低，较易除去。

但对体系（基线）的稳定性较差。

**酸性体系会减少色谱柱的使用寿命。

因此在使用不同的色谱柱之前，需要注意填料可耐受的酸碱度。

一般C18的填料的耐受范围是pH3-8。

1.1.3 缓冲体系0.05M TEAB（溴化四乙铵） - acetonitrile0.1M TEAB - acetonitrile*HPLC常用的缓冲溶液体系有：三乙胺-碳酸缓冲液 (TEAB)，三乙胺-醋酸缓冲液 (TEAA)，三乙胺-磷酸缓冲液 (TEAP)三乙胺-碳酸缓冲液 (TEAB)：沸点较低，容易除去。

常用。

三乙胺-醋酸缓冲液 (TEAA)：沸点较高，不易除去。

多用TEAB替代。

三乙胺-磷酸缓冲液 (TEAP)：根据需要使用。

**摩尔浓度指TEA的摩尔浓度，酸用来调节pH值。

根据需要调节所需要的pH值。

例如：pH7.5的TEAB (0.05M) 水溶液。

1.2 溶剂过滤及过滤设备1.2.1 溶剂过滤必须过滤的流动相：经过配置的酸性体系及缓冲体系可以不过滤的流动相：中性体系，即纯水，纯乙腈，纯甲醇*所有接触过非色谱纯的容器的溶液，都需要过滤。

过滤之后需要用标签注明过滤的日期。

**已过滤的溶液，经过长时间放置，需要重新过滤。

1.2.2 溶剂过滤器*由过滤杯，过滤头，接收瓶及铝合金夹子组成。

三氟乙酸在HPLC中的应用高效液相色谱(High-performance liquid chromatography, HPLC)是一种分离、检测化合物的分析方法。

在实际的分析过程中，选择合适的流动相对于样品的分离效率和分离速度都十分重要。

三氟乙酸(trifluoroacetic acid, TFA)是HPLC中常用的流动相溶剂，下面将探讨一下其在HPLC分析中的应用。

三氟乙酸的性质三氟乙酸是一种无色透明的液体，水溶性良好，熔点-15.3 ℃，沸点71.8 ℃，密度为1.49 g/mL。

三氟乙酸对很多有机物有很好的溶解度，同时可以降低溶剂极性，因此在HPLC中被广泛使用。

三氟乙酸在HPLC中的应用三氟乙酸在HPLC中通常用于两种流动相，即水和乙腈溶液。

对于非极性或中性化合物，首选使用乙腈流动相；对于极性化合物，可以使用水流动相。

当使用中性或稍微极性的流动相时，使用0.1%~0.5%的三氟乙酸作为缓冲剂，则可以提高分离效率。

三氟乙酸在HPLC中的应用主要表现在以下两个方面：提高分离效率三氟乙酸作为缓冲剂在HPLC中使用时，可以提高极性化合物的分离效率。

这是因为三氟乙酸可以降低溶剂极性，使得芳香族化合物等极性化合物能够在相同的流动相下快速分离。

解决峰形状异常问题在HPLC分析中经常会出现峰形状异常问题，如峰前扁平化、畸变等问题。

这些问题通常是由于试剂等因素所引起。

三氟乙酸可以作为一种试剂混入流动相中，来解决这些异常问题。

除此之外，三氟乙酸还可以增加HPLC柱的使用寿命。

，三氟乙酸在HPLC中有着广泛的应用。

作为一种优良的缓冲剂，它不仅可以提高极性化合物的分离效率，还可以解决峰形状异常问题。

因此，合理地应用三氟乙酸，可以提高样品分离效率和提高HPLC的使用寿命。

西交《药物分析》在线作业
试卷总分:100 得分:100
一、单选题 (共 41 道试题,共 82 分)
1.RP-HPLC法中最常用的流动相是
A.乙醇-缓冲液
B.乙醇-水
C.四氢呋喃-冰醋酸
D.甲醇-水
E.正己烷-异丙醇
答案:D
2.重金属检查法的第一法使用的试剂有( )
A.硝酸银试液和稀硝酸
B.25%氯化钡溶液和稀盐酸
C.锌粒和盐酸
D.硫代乙酰胺试液和醋酸盐缓冲液（pH3.5）
E.硫化钠试液和氢氧化钠试液
答案:D
3.用高氯酸滴定液直接滴定硫酸奎宁,1mol硫酸奎宁消耗几摩尔高氯酸( )。

A.1/3
B.1/4
C.2
D.1/2
E.3
答案:E
4.盐酸普鲁卡因含量测定选用的滴定液是
A.碘滴定液
B.高氯酸滴定液
C.硝酸银滴定液
D.氢氧化钠滴定液
E.亚硝酸钠滴定液
答案:E
5.醋酸地塞米松中有关物质的检查方法
A.紫外分光光度法
B.红外分光光度法
C.气相色谱法
D.薄层色谱法
E.高效液相色谱法
答案:E
6.以下药物中有关物质的检查方法黄体酮。

高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种常用的分析方法，主要用于分离和分析混合物。

高效液相色谱系统一般由以下几个部分组成：
1. 流动相：流动相是液相色谱中的溶剂，用于将样品分离成不同的组分。

常见的流动相包括水、甲醇、乙腈等。

2. 泵：泵是整个系统的核心部件，负责抽取流动相并推动其在系统中流动。

泵通常包括高压输液泵、过滤器和脱气装置等。

3. 进样系统：进样系统用于将样品注入到流动相中。

常见的进样方式有手动进样和自动进样。

4. 色谱柱：色谱柱是分离混合物的主要部件，样品在色谱柱中通过固定相和流动相之间的相互作用进行分离。

常见的色谱柱类型有反相色谱柱、正相色谱柱等。

5. 检测器：检测器用于检测分离后的样品组分。

常见的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。

6. 数据处理系统：数据处理系统用于收集和处理检测器产生的信号，以便分析和识别样品中的成分。

数据处理系统可以包括计算机、工作站和相应的软件。

7. 控制系统：控制系统用于监控和调节整个液相色谱系统的运行参数，如流速、温度、压力等。

8. 辅助设备：辅助设备包括如压缩空气、冷却装置、真空泵等，用于支持整个系统的正常运行。

HPLC上岗培训考试试题HPLC（高效液相色谱）是一种常用的分析技术，广泛应用于制药、化工、环境监测等领域。

为了提高分析人员的技能水平，许多实验室都会组织HPLC上岗培训考试，以确保操作人员掌握相关知识和技能。

本文将针对HPLC上岗培训考试试题展开讨论。

一、基础知识篇1. HPLC的英文全称是什么？HPLC的英文全称是High Performance Liquid Chromatography，即高效液相色谱。

2. HPLC的工作原理是什么？HPLC利用固定相和流动相之间的相互作用，通过样品在固定相上的分配和再分配，实现对样品成分的分离和定量分析。

3. HPLC中常用的固定相有哪些？常用的固定相有反相、离子交换、凝胶、亲水性等。

4. HPLC中常用的流动相有哪些？常用的流动相有水、有机溶剂、缓冲液等。

5. HPLC中常用的检测器有哪些？常用的检测器有紫外检测器、荧光检测器、电导检测器等。

二、方法开发与优化篇1. 在HPLC方法开发中，如何选择合适的固定相？选择固定相时需要考虑样品的性质、分离目标和分析条件等因素。

一般来说，反相固定相适用于非极性或弱极性化合物的分离，离子交换固定相适用于离子化合物的分离。

2. 在HPLC方法开发中，如何选择合适的流动相？选择流动相时需要考虑样品的性质、分离目标和分析条件等因素。

一般来说，水和有机溶剂的组合常用于非极性或弱极性化合物的分离，而缓冲液常用于离子化合物的分离。

3. 在HPLC方法开发中，如何选择合适的检测器？选择检测器时需要考虑样品的性质、分离目标和分析条件等因素。

紫外检测器适用于吸收性化合物的检测，荧光检测器适用于荧光性化合物的检测，电导检测器适用于离子化合物的检测。

4. 在HPLC方法开发中，如何优化分离条件？优化分离条件可以通过调整流速、温度、pH值、固定相类型等参数来实现。

一般来说，较高的流速可以缩短分析时间，适当的温度可以提高分离效果，合适的pH值可以影响离子化合物的分离。

高效液相色谱法常用的流动相
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，其流动相的选择对分离效果至关重要。

常用的流动相分为以下几种：
1. 甲醇：甲醇是一种常用的有机溶剂，具有良好的溶解性和极性。

在反相色谱中，甲醇常与水混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。

2. 乙腈：乙腈是一种有机溶剂，具有较高的极性。

与甲醇类似，乙腈也可以与水混合作为流动相，用于反相色谱中对极性物质的分离。

3. 水：水是一种无机溶剂，具有良好的极性。

在正相色谱中，水常与有机溶剂（如甲醇、乙腈等）混合作为流动相，以实现对极性物质的分离。

4. 乙酸乙酯：乙酸乙酯是一种有机溶剂，具有较弱的极性。

在正相色谱中，乙酸乙酯可以与水混合作为流动相，用于分离弱极性物质。

5. 庚烷：庚烷是一种非极性有机溶剂，适用于分离非极性物质。

在反相色谱中，庚烷可以与甲醇或乙腈混合作为流动相。

6. 混合溶剂：根据被测物的极性和分离需求，可以选用两种或多种溶剂混合作为流动相。

例如，甲醇与水混合用于反相色谱，乙腈与水混合用于正相色谱等。

流动相的选择应考虑以下因素：
1. 被测物的极性：根据被测物的极性选择相应的流动相，以实现良好的分离效果。

2. 固定相的选择：根据固定相的极性，选择与之匹配的流动相。

3. 检测器的要求：某些检测器对流动相的极性有要求，需根据检测器类型选择合适的流动相。

4. 实验条件：如流速、柱温等实验条件，也会影响流动相的选择。

在高效液相色谱法中，常用的流动相包括甲醇、乙腈、水、乙酸乙酯、庚烷等，具体选择需根据被测物的极性、固定相、检测器要求等因素综合考虑。