20种水产养殖常用中草药体外抑菌试验研究

22种中草药体外抗菌作用的研究中草药自古以来就被广泛应用于中医中草药体外抗菌学研究，近年来，越来越多的研究报告显示，许多中草药具有广谱抗菌活性。

本文将介绍22种中草药的体外抗菌作用研究。

1. 黄芩(Huang Qin)：黄芩具有对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等多种常见细菌的抑制作用。

2. 当归(Dang Gui)：当归可抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌等多种细菌的生长。

3. 莪术(E Zhu)：莪术对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌等具有显著的抗菌活性。

4. 丹参(Dan Shen)：丹参对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。

5. 白芍(Bai Shao)：白芍可抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长。

6. 当归(Dang Shen)：当归对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长具有抑制作用。

7. 山楂(Shan Zha)：山楂具有对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑制作用。

8. 牛蒡子(Niu Bang Zi)：牛蒡子对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌等具有抗菌活性。

9. 郁郁葱葱(Yu Yu Cong Cong)：郁郁葱葱对白色念珠菌和大肠杆菌有明显的抑制作用。

10. 菊花(Ju Hua)：菊花可抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长。

11. 蓝根(Lan Gen)：蓝根对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。

12. 萝卜(Ruo Bo)：萝卜具有对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用。

13. 桂皮(Gui Pi)：桂皮对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑制作用。

14. 钩藤(Gou Teng)：钩藤可抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的生长。

15. 红景天(Hong Jing Tian)：红景天对白色念珠菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用。

16. 金银花(Jin Yin Hua)：金银花具有对链球菌和大肠杆菌的抑制作用。

17. 藏红花(Zang Hong Hua)：藏红花对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抗菌活性。

浅谈中草药在水产养殖病害防治的研究与应用1. 中草药的种类与功效中草药是指经过鉴定，并具有一定药用价值的植物药材。

在水产养殖中，常用的中草药有枳实、苦参、连翘、黄连等。

这些中草药具有抗菌、抗病毒、抗炎等多种功效，可以用于预防和治疗水产养殖中的细菌、病毒等病害。

2. 中草药的提取与应用中草药的有效成分主要存在于其根、茎、叶等部位，常用的提取方法有水煎、浸泡、蒸馏等。

提取得到的中草药提取液，可以直接添加到养殖水中进行预防和治疗。

还可以制成中草药浸泡剂、水剂、粉剂等不同形式的药剂，便于养殖户的使用。

3. 中草药在水产养殖中的应用研究目前，国内外对中草药在水产养殖中的应用研究逐渐增多。

一些专家学者通过实验研究，发现了中草药对水产养殖中的常见病害具有一定的预防和治疗效果。

也探讨了中草药在水产养殖中的使用方法、用药浓度、用药时机等方面的问题，为中草药在水产养殖中的应用提供了理论依据和实践经验。

1. 中草药在鱼类细菌性病害防治中的应用细菌性病害是水产养殖中常见的病害之一，严重影响了养殖效益。

一些研究发现，枳实、苦参等中草药的提取液对鱼类细菌性病害具有一定的抑制作用，可以有效地减少病害的发生和传播。

虾蟹类病毒性病害对水产养殖业造成了严重的损失。

研究表明，连翘、黄连等中草药提取液中的有效成分具有抗病毒作用，可以显著降低虾蟹类的感染率，为虾蟹类养殖提供了新的防治方法。

1. 应用前景中草药在水产养殖病害防治中的应用前景十分广阔。

中草药具有天然、安全的特点，对水产养殖环境和生态没有负面影响。

中草药的提取方法简单，成本较低，适合于水产养殖户自行制剂使用。

中草药的多样性和多功性，为水产养殖中不同病害的治疗提供了多种选择。

2. 存在的问题中草药在水产养殖中的应用也存在一些问题。

中草药的抗菌、抗病毒机制尚不完全清楚，其有效成分的提取和利用还需要进一步研究。

中草药的质量和用药方法的标准化问题亟待解决。

中草药在长期使用中可能会出现一些副作用和毒性问题，需要进一步的临床试验和安全评估。

16种中草药提取物对2株草鱼致病菌的体外抑杀菌作用李赫;胡宗云;张健;宋文华;富丽静【摘要】用纸片扩散法测定受试物的抑菌作用和二倍稀释法测定受试物最小抑菌质量浓度(MIC)及最小杀菌质量浓度(MBC)的方法,研究地肤子、小茴香、茯苓、蛇床子、牡丹皮、黄芪、陈皮、藿香、猪苓、高良姜、黄柏、苦参、昆布、肉桂、姜黄和丁香16种中草药提取物对2株草鱼致病性嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和类志贺邻单胞菌Plesiomonas shigelloides的体外抑菌作用.结果显示,茯苓对嗜水气单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径达20mm以上,MIC为15.63 mg/mL,小茴香、昆布和姜黄次之,MIC均为31.25mg/mL;丁香对类志贺邻单胞菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径为(18.93±0.37)mm,其MIC为31.25 mg/mL,黄芪次之,其MIC为62.5 mg/mL.%The bacteriostatic effects of 16 Chinese herbal medicines including fructus kochiae,Foeniculum vulgare,Poria cocos,fructus cnidii,Cortex moutan,astragalus root,tangerinepeel,patchouli,polyporus,galangal,phellodendron bark,flavescent sophora root,kelp,cinnamon,Curcuma longa and clove against two pathogenic bacteria Aeromonas hydrophila and Plesiomonas shigelloides from grass carp (Ctenopharyngodon idellus) in vitro were detected through disc diffusion method and via determination of minimal inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) by double dilution method.The results showed that Poria cocos had the best inhibitory effect on Aeromonas hydrophila,with the maximal inhibitory circle of over 20 mm,and MIC of 15.63 mg/mL,followed by Foenieulum vulgare,kelp and Curcuma longa,with MIC of 31.25 mg/mL.Flos caryophyllihad the best inhibitory effect on Ples iomonas shigelloides,with the maximal MIC of (18.93 ± 0.37) mm,and MIC of 31.25 mg/mL,followed by Astragalus,with MIC of 62.5 mg/mL.【期刊名称】《水产学杂志》【年(卷),期】2018(031)002【总页数】5页(P41-45)【关键词】中草药;草鱼;致病菌;最小抑菌浓度;最小杀菌浓度【作者】李赫;胡宗云;张健;宋文华;富丽静【作者单位】辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000;辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000;辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000;辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000;辽宁省淡水水产科学研究院,辽宁省水生动物病害防治重点实验室,辽宁辽阳 111000【正文语种】中文【中图分类】S948;S853.72草鱼肉质细嫩、营养价值高，倍受人们的青睐，已成为池塘高密度集约化养殖的主要种类之一。

几种常见淡水鱼致病菌的药敏试验摘要研究了强力霉素、盐酸左氧氟沙星、诺氟沙星、红霉素、甲硝唑、土霉素、氟苯尼考、氟强先锋、呋喃妥因9种抗生素和五倍子、大黄、金银花、黄芩、陈皮、黄连、板蓝根、黄柏、连翘、黄梅10种中草药对迟缓爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌5种常见淡水鱼类致病菌的体外抑菌效果。

结果显示：抗生素中氟苯尼考、诺氟沙星、红霉素、呋喃妥因对这几种致病菌抑菌效果明显；中草药中五倍子、大黄、黄芩的抑菌效果较好。

关键词淡水鱼致病菌；中草药；抗生素；药敏试验近年来，随着水产养殖规模的扩大和集约化程度的提高，养殖环境日益恶化，近年来水产养殖病害发病率越来越高。

细菌性疾病是水产养殖动物最重要的疾病之一，2005年以来暴发的生物源性疾病中，细菌性疾病所占比例超过55%，严重制约了水产业的发展[1]。

由于渔民缺乏基本的药理知识，存在滥用抗生素类药物的现象，导致耐药菌株的产生，给细菌病的防治带来了很大的困难。

选取了迟缓爱德华氏菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌5种常见淡水鱼的致病菌进行体外中西药抑菌试验，旨在为淡水鱼细菌病防治提供依据，减少致病菌耐药菌株的产生。

金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、迟缓爱德华氏菌、嗜麦芽寡养单胞菌和藤黄微球菌，均是淡水养殖动物最常见的致病菌，它们的大量繁殖给淡水鱼类养殖业带来巨大威胁。

其中金黄色葡萄球菌是毒力最强的引起化脓性疾病的化脓菌，可以产生溶血毒素、肠毒素、血浆凝固酶等毒素和酶，引起水生动物外伤化脓死亡[2]。

嗜水气单胞菌通常能够引起的疾病多为暴发性传染病，患病水生动物死亡率较高，通常导致鱼、鳖、鳗、牛蛙及蚌等水生动物的败血症及局部感染[3]。

藤黄微球菌是黄鳝出血病的主要病原，黄鳝感染后出现体表弥散性出血、肛门红肿外翻、肝脏肿大出血等症状并造成高死亡率[4]。

嗜麦芽寡养单胞菌是近年来引起斑点叉尾鮰高致死性、传染性疾病的主要病原之一，发病鱼主要出现体表褪色斑、脱肛、严重肠炎和腹水等病征，并以肠套叠为主要病理特征，其发病率和死亡率均在90%以上，造成的经济损失极其严重[5]。

100种中草药对溶藻弧菌的体外抑菌实验陈辉;张其中【摘要】为筛选有效控制水产养殖动物弧菌病的中草药,本研究采用琼脂扩散法测定100种常见中草药提取液对溶藻弧菌的抑制作用.采用t检验对其中24种有明显抑菌效果的药液pH值调至中性前后的抑菌效果进行分析比较,结果表明它们的抑菌效果下降极显著(p＜0.01).采用双倍试管稀释法测定7种中草药在pH值调至中性后的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).结果表明,在药液pH值调至中性后,五倍子、公丁香和石榴皮能够有效抑杀溶藻弧菌.五倍子的MIC和MBC值均为7.813 mg/mL;石榴皮的MIC和MBC值均为15.625 mg/mL;公丁香的MIC和MBC值均为125mg/mL;黄连、黄精和大黄的MIC和MBC值均为500 mg/mL;五味子的MIC和MBC均为1 000mg/mL.%The inhibitory effects of 100 Chinese herbal medicines on Vibrio alginolyticus were tested with disc diffusion method and 24 herbs showed the antibacteria effects. However, the antibacterial effect dropped down very significantly (p<0.01) when the extract solution pH values of the herbs were regulated to about 7.0 from acid primary medicine solutions. The tube dilution method was used to measure the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal bactericidal concentration (MBC) of seven Chinese herbal medicines which were able to inhibit the growth of V. alginolyticus. The results showed that Rhus chinensis, Flos caiyophylli and Punica granatum had inhibitory and bactericidal effects against V. alginolyticus when the extract solution pH values were regulated to approximate 7.0, and the MIC and MBC were 7.813 mg/mL for R. cbinensis, 15.625 mg/mL for P. granatum, 125 mg/mLfor F. caryophylli, 500 mg/mL for Coptis chinensis, Polygonatum sibiricum and Rheum officinale, and 1 000 mg/mL for Schisandra chinensis, respectively.【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2012(034)006【总页数】4页(P452-455)【关键词】溶藻弧菌;中草药;抑菌试验【作者】陈辉;张其中【作者单位】暨南大学水生生物研究所热带亚热带水生态工程教育部工程研究中心/广东省高校水体富营养化与赤潮防治重点实验室,广东广州510632;暨南大学水生生物研究所热带亚热带水生态工程教育部工程研究中心/广东省高校水体富营养化与赤潮防治重点实验室,广东广州510632【正文语种】中文【中图分类】S852.61溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus）为海水养殖动物的常见致病菌，具有较强的致病性，能够引起海水鱼类、虾类、贝类的大量死亡[1]。

29种中草药在水产养殖上的应用水产动物机体免疫力下降、阴阳失衡导致多种疾病的发生，免疫功能紊乱从而导致其体内各种疾病的多发难治性，也只有从根本上调整心、肝、肾阴阳平衡，亦即机体免疫平衡，才能达到真正治疗疾病的效果。

抗病毒（或抗细菌）的中草药，从中药药理来讲，可提高免疫细胞的活力、激活水产动物体内免疫细胞，并迅速提高机体的抵抗力，其优势是对病毒（或细菌）的复制有极强的抑制、阻断和直接杀死等作用，可有效地降低肝损伤，很快改善肝功能，在短期内提高其非特异性和特异性免疫功能，对肝纤维素化有显著的抵抗作用，且无毒副作用，可提高水产动物免疫力，重建机体免疫功能，能有效的帮助病体祛邪扶正和固本，对已经损伤的机体进行修补，调节好自身的阴阳平衡，迅速恢复健康，达到治病的目的，临床研究也证明了中草药对水产动物的细菌性疾病、病毒性疾病等有特效。

各地养殖单位在实际应用中草药后，已表现出对水产动物的安神、镇静、健胃促消化、理气、活血、养精补益、驱虫、杀虫、保健、解毒排毒、抗肿瘤、治肝炎、收敛、抗创伤、抗菌、抑菌、杀灭病毒等多种药理作用，并已研制出增强水产动物免疫功能、抗应激能力、抗有害微生物、驱虫杀虫、保健健胃、促进和帮助消化、促生长、增体重、改善肉质、改进品质和风味等多种中草药营养保健剂。

现将水产鱼病预防中常用的几种中草药介绍如下：1、大黄又名锦纹、黄良，别名将军、生军、马蹄黄等，蒙科多年生草本植物。

以根及根茎入药，其有效成分为蒽醌衍生物、其中以大黄酸、大黄素及芦荟大黄素的抗菌作用最好，抗菌作用强，抗菌谱广，有收敛、泻下、清热、解毒、破积、去瘀、增加血小板、促进血液凝固等作用。

用于烂鳃病、肠炎病、出血病及白头白嘴病等。

使用方法：全池泼洒，常用量为2.5～3.75PPM，使用前、先将大黄用0.3％的氨水按1：20比例。

室温下浸泡12～24小时，使蒽醌衍生物游离出来，以提高疗效，将药液均匀地洒入水中。

可防治鱼粘细菌病。

使用大黄时加上0.5PPM硫酸铜，疗效更好。

华南农业大学学报2014，35（4）：22-25Journal of South China Agricultural University http ：∥xuebao．scau．edu．cndoi ：10．7671/j．issn．1001-411X．2014．04．005收稿日期：2013-10-03优先出版时间：2014-06-03优先出版网址：http ：∥www．cnki．net /kcms /doi /10．7671/j．issn．1001-411X．2014．04．005．html作者简介：彭练慈（1990—），女，硕士研究生，E-mail ：penglianci@163．com ；通信作者：殷中琼（1968—），女，教授，博士，E-mail ：yinzhongq@163．com基金项目：四川省青年科技创新研究团队（2013TD0015）；“十二五”农村领域国家科技计划项目（2011BAD34B03）彭练慈，殷中琼，贾仁勇，等．20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究［J ］．华南农业大学学报，2014，35（4）：22-25．20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究彭练慈1，殷中琼1，贾仁勇1，2，李莉1，代如意1，曲径1，刘明辉1，陈萍1（1四川农业大学动物医学院，四川雅安625014；2四川农业大学预防兽医研究所，四川雅安625014）摘要：【目的】筛选对无乳链球菌Streptococcus agalactiae 具有良好体外抑菌效果的中药．【方法】通过乙醇回流、超声波方法提取20味中药的抗菌活性部位，采用试管二倍稀释法测定黄连Coptis chinensis 等20味中药提取物对无乳链球菌的最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration ，MIC ）和最低杀菌浓度（Minimal bactericidal concentration ，MBC ），并评价抗菌活性较强的几味中药的体外联合抑菌效果．【结果和结论】乌梅Prunus mume 、黄连、黄芩Scutel-laria baicalensis 、虎杖Polygonum cuspidatum 和地榆Sanguisorba officinalis 5味中药提取物对无乳链球菌的MIC 范围为7.80 31.25mg /mL．蒲公英Taraxacum mongolicum 、茵陈Artemisia scoparia 、秦皮Fraxinus rhynchophylla 、艾叶Arte-misia argyi 、黄柏Phellodendron chinense 、鱼腥草Houttuynia cordata 、紫花地丁Violae yedoensis 和白头翁Pulsatilla chinensis 8味中药提取物的MIC 范围为62.50 125.00mg /mL．何首乌Po．multiflorum 、苦参Sophora flavescens 、穿心莲Andrographis paniculata 、杜仲Eucommia ulmoides 、连翘Forsythia suspensa 、金银花Lonicera japonica 和夏枯草Prunel-la vulgaris 7味中药提取物的MIC 范围为250.00 500.00mg /mL．联合抑菌试验结果表明，黄芩、虎杖、地榆和黄连的联合抑菌指数（FICI ）≤1，虎杖、黄芩和地榆的FICI ＞2．黄连、黄芩、虎杖和地榆对无乳链球菌均具有很强的体外抗菌活性，地榆、黄连为相加作用，黄连、黄芩和虎杖为协同作用，地榆与黄芩、虎杖为拮抗作用．关键词：无乳链球菌；中药提取物；抗菌活性中图分类号：S825．6文献标志码：A文章编号：1001-411X （2014）04-0022-04Effects of twenty traditional Chinese medicine extractsagainst Streptococcus agalactiae in vitroPENG Lianci 1，YIN Zhongqiong 1，JIA Ｒenyong 1，2，LI li 1，DAI Ｒuyi 1，QU Jing 1，LIU Minghui 1，CHEN Ping 1（1College of Veterinary Medicine ，Sichuan Agricultural University ，Ya ’an 625014，China ；2Preventive Veterinary Ｒesearch Institute ，Sichuan Agricultural University ，Ya ’an 625014，China ）Abstract ：【Objective 】Screening for the traditional Chinese medicines which have good antibacterialeffects on Streptococcus agalactiae in vitro ．【Method 】Using ethanol reflux and ultrasonic method ，ex-tracts of 20different traditional Chinese medicines were obtained．Minimal inhibitory concentration （MIC ）and minimal bactericidal concentration （MBC ）of Coptis chinensis and other 19extracts of tradi-tional Chinese medicines on St．agalactiae were detected by macrodilution broth method ，and combined antibacterial effects in vitro of them were also observed．【Ｒesult and conclusion 】The MICs of the ex-tracts obtained from Prunus mume ，Coptis chinensis ，Scutellaria baicalensis ，Polygonum cuspidatum and Sanguisorba officinalis against St．agalactiae ranged from 7.80to 31.25mg /mL．The MICs of the ex-tracts obtained from Taraxacum mongolicum ，Artemisia scoparia ，Fraxinus rhynchophylla ，Artemisia arg-yi，Phellodendron chinense，Houttuynia cordata，Violae yedoensis and Pulsatilla chinensis ranged from 62.50to125.00mg/mL．The MICs of the extracts obtained from Po．multiflorum，Sophora flavescens，Andrographis paniculata，Eucommia ulmoides，Forsythia suspensa，Lonicera japonica and Prunella vul-garis ranged from250.00to500.00mg/mL．The results of joint bacteriostatic test showed that the frac-tional inhibitory concentration index（FICI）of the extracts obtained from Sc．baicalensis，Po．cuspida-tum，Sa．officinalis and C．chinensis was less than or equal to1．The FICI of Po．cuspidatum，Sc．ba-icalensis and Sa．officinalis was more than2．C．chinensis，Sc．baicalensis，Po．cuspidatum and Sa．offi-cinalis showed a good antibacterial effect against St．agalactiae in vitro．The combination of Sa．officina-lis and C．chinensis was characterized by a additive effect，whereas the combination of C．chinensis，Sc．baicalensis and Po．cuspidatum was characterized by a synergism effect．The combination of Sa．officina-lis and Sc．baicalensis，Po．cuspidatum showed antagonism effect．Key words：Streptococcus agalactiae；traditional Chinese medicine extract；antimicrobial activity无乳链球菌Streptococcus agalactiae又称B群链球菌（GBS），可引起奶牛乳房炎，我国因无乳链球菌引起的奶牛乳房炎占总发病率的20% 40%．目前，对于奶牛乳房炎的治疗主要依赖抗生素，由于反复大量使用，造成乳汁中抗生素残留日益严重，耐药菌株不断出现，使乳房炎的治疗效果不断下降［1-2］．中草药具有调节畜禽机体免疫力、杀灭或抑制细菌和病毒等作用，并因其低毒、低残留、不易产生耐药性等特点越来越受到人们的重视［3］，从传统中草药中筛选出有效的抗无乳链球菌药物符合食品安全和公共卫生需要．本研究选取黄连Coptis chinensis 等20味中药作为研究对象，以水和乙醇对其有效成分进行提取．通过测定黄连等20味中药提取物对无乳链球菌的最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concen-tration，MIC）和最低杀菌浓度（Minimal bactericidal concentration，MBC），筛选得到具有良好体外抗菌活性的中药提取物，然后通过棋盘稀释法［4-5］研究不同中药提取物两两联合对无乳链球菌的体外抑制效果，为进一步研制治疗奶牛乳房炎的中药组方制剂提供参考．1材料与方法1．1材料1．1．1菌株无乳链球菌编号为CVCC1886，购自中国兽药监察所．1．1．2药材黄连（产地四川，批次：080406）、黄芩Scutellaria baicalensis（产地陕西，批次：040824）、乌梅Prunus mume（产地四川，批次：120315）、虎杖Polygo-num cuspidatum（产地四川，批次：081102）、地榆San-guisorba officinalis（产地陕西，批次：040827）、蒲公英Taraxacum mongolicum（产地贵州，批次：100217）、苦参Sophora flavescens（产地云南，批次：081121）、何首乌Po．multiflorum（产地甘肃，批次：080301）、茵陈Artemisia scoparia（产地河北，批次：080923）、秦皮Fraxinus rhynchophylla（产地山西，批次：100330）、金银花Lonicera japonica（产地四川，批次：080919）、穿心莲Andrographis paniculata（产地四川，批次：100310）、黄柏Phellodendron chinense（产地四川，批次：080923）、艾叶Ar．argyi（产地甘肃，批次：080921）、鱼腥草Houttuynia cordata（产地四川，批次：100310）、杜仲Eucommia ulmoides（产地云南，批次：080916）、连翘Forsythia suspensa（产地四川，批次：100310）、白头翁Pulsatilla chinensis（产地四川，批次：100310）、夏枯草Prunella vu lg aris（产地河南，批次：101114）、紫花地丁Violae yedoensis（产地四川，批次：100310）20味中药均购于四川雅安惠民堂药业连锁有限责任公司，由四川农业大学药学系副教授范巧佳鉴定为正品．1．1．3培养基加有5%小牛血清的营养肉汤，鲜血营养琼脂培养基按照常规方法制作，用于无乳链球菌的培养．1．1．4仪器设备和试剂电热恒温培养箱、超净工作台、旋转蒸发仪、索氏提取器、微量进样器、二甲亚砜、无水乙醇、T型涂布棒、90mm玻璃培养皿．1．2方法1．2．1有效成分的提取按照文献［6-16］的方法提取黄连等20味中药的有效成分，乌梅、黄连、黄芩、虎杖、蒲公英、茵陈、秦皮、黄柏、鱼腥草、紫花地丁、白头翁、何首乌、苦参、穿心莲、杜仲、连翘、金银花和夏枯草采用乙醇回流提取法，地榆和艾叶采用超声波提取法．各自合并滤液，浓缩制成浸膏，并计算浸膏得率．使用前将浸膏用适量二甲亚砜溶解，制成生药质量浓度为1g/mL的药液，100ħ流通蒸汽灭菌30min，置于4ħ冰箱备用．32第4期彭练慈，等：20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性研究1．2．2细菌菌悬液的制备挑取新鲜培养无乳链球菌的2个菌落接种于3mL的肉汤培养基中，置于37ħ恒温摇床中培养18 24h后取出．吸取菌液0.5mL，用生理盐水作10－1梯度稀释，取10－7、10－8、10－93个梯度的菌液0.1mL分别在6个鲜血琼脂培养基上均匀摊开，放入37ħ恒温培养箱中培养18 24h．计算出原液的细菌个数为1.6ˑ1011CFU/mL．临用前将菌原液用肉汤培养基稀释成菌液浓度为1.6ˑ109CFU/mL．1．2．3体外抑菌试验测定MIC：采用试管2倍稀释法，取18支灭菌试管，将其中16支分为试验组和阴性对照组，每组8支．18支试管分别加营养肉汤1 mL．在2组的第1管中分别加1mL药液，混匀后吸取1mL至第2管中，依次类推，直至第8管，第8管吸取1mL弃去．然后，向试验组的8支试管中加0.1 mL的稀释菌液，阴性对照组8支试管不加菌液，加0.1mL生理盐水．第17管不加药液加0.1mL菌液作为阳性对照，第18管不加药液和菌液作为空白对照．则试验组和阴性对照组的第1管至第8管的药液浓度依次为500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.60、7.80、3.90mg/mL．置于37ħ恒温摇床中培养18 24h．以无菌生长的最低稀释度为MIC．测定MBC：观察药物MIC以上未见细菌生长的各管培养物，分别各取0.1mL移种至不含药物的鲜血营养琼脂平皿上，轻轻推开药液，置37ħ培养过夜，观察有无细菌生长．平皿培养基中，计数少于5个菌落者作为该药的MBC［17］．1．2．4体外联合抑菌试验根据单味中药的体外抑菌结果，选择其中抑菌活性较强的中药分别以其中2种药的4MIC，2MIC，MIC，1/2MIC，1/4MIC分别进行联合．以黄连与黄芩为例：用灭菌后的2mL EP 管50个，分为试验组和对照组．在第1 6行沿X轴（从左到右）每管中依次加入用肉汤稀释好的4MIC、2MIC、MIC、1/2MIC、1/4MIC的黄连药液各0.2mL．以同样的方法在第1 6列沿Y轴方向（从上到下）每管中依次加入用肉汤稀释好的1/4MIC、1/2MIC、MIC、2MIC、4MIC的黄芩药液各0.2mL，将两药混合均匀后加入制备好的菌液40μL，对照组加入等量的营养肉汤，其他操作同试验组．37ħ培养18 24h，观察结果．结果判断依据：联合抑菌指数（Fraction inhibito-ry concentration index，FICI）=甲药联合时的MIC/甲药单独时的MIC+乙药联合时的MIC/乙药单独时的MIC．FICI≤0．5时为协同作用，0．5＜FICI≤1时为相加作用，1＜FICI≤2时为无关作用，FICI＞2时为拮抗作用．2结果与分析2．120味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性20味中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌结果见表1．由表1可知，黄连、黄芩、乌梅、虎杖和地榆5味中药提取物的MIC的范围为7.80 31.25mg/mL，MBC≤31.25mg/mL抑菌效果最好．蒲公英、茵陈、秦皮、艾叶和紫花地丁5味中药提取物的MIC均为62.50 mg/mL，抑菌效果较好．黄柏等10味中药提取物的MIC 均大于或等于125.00mg/mL，抑菌效果较差．表120种中药提取物对无乳链球菌的体外抑菌活性Tab．1Antimicrobial activities of active ingredients extracts of twenty tradition Chinese medicines to Streptococ-cus agalactiae in vitro mg·mL－1中药提取物MIC MBC黄连31．2531．25黄芩7．807．80乌梅31．2531．25虎杖15．6015．60地榆15．6015．60蒲公英62．5062．50苦参250．00250．00何首乌250．00250．00茵陈62．5062．50秦皮62．50125．00金银花500．00500．00穿心莲500．00500．00黄柏125．00125．00艾叶62．50125．00鱼腥草125．00125．00杜仲500．00500．00连翘250．00250．00白头翁125．00125．00夏枯草500．00500．00紫花地丁62．50125．002．2黄连等4味中药提取物对无乳链球菌的体外联合抑菌活性通过单味药的体外抑菌结果，选择黄连、黄芩、虎杖和地榆进行体外联合抑菌试验，联合抑菌结果见表2．根据FICI值的判定依据，黄芩提取物与虎杖提取物、黄芩提取物与黄连提取物及黄连提取物与虎杖提取物对无乳链球菌的FICI≤0.50，为协同作用．地榆提取物与虎杖提取物及地榆提取物与黄芩提取物对无乳链球菌的FICI＞2，为拮抗作用．地榆提取物与黄连提取物对无乳链球菌的FICI=1，为相加作用（表2）．42华南农业大学学报第35卷表24味中药两两联合用药对无乳链球菌的FICI1）Tab．2The FICI to pairwise combination of four herbs against Streptococcus agalactiae联合药物黄芩虎杖黄连地榆MICAMICCMICAMICCMICAMICCMICAMICCFICI作用效应黄芩+虎杖7．800．9615．601．950．25协同黄芩+黄连7．801．9531．257．800．50协同黄芩+地榆7．8015．6015．6031．254．00拮抗虎杖+黄连15．601．9531．253．900．50协同虎杖+地榆15．6015．6015．6031．253．00拮抗黄连+地榆31．2515．6015．607．801．00相加1）MICA 、MICC分别为单药、联合用药的MIC，单位均为mg·mL－1．3讨论中药成分复杂，提取其中的有效成分对于提高其药效具有重要作用．中药提取方法众多，其中乙醇回流法、超声波提取法因操作简单方便，适合试验操作而被广泛使用．本研究根据20味中药的不同有效成分，分别采用乙醇回流法和超声波提取法对20味中药的有效成分进行提取［6-16］，沿用文献报道筛选的最佳工艺条件，使有效成分得到了极大的提取，从而保证了药效．20味中药提取物的体外抑菌活性试验结果表明，虎杖、黄连和黄芩的MIC分别为15.60、31.25、7.80mg/mL，其MBC≤31.25mg/mL说明黄连、黄芩和虎杖具有很强的抑菌作用．该结果与王庆玲等［17］和金建玲等［18］报道结果一致．抑菌活性好的地榆及抑菌活性较好的紫花地丁和蒲公英比金建玲等［18］报道的抑菌效果更优．本研究选取文献报道中筛选出的最佳提取工艺条件对黄连［6］、黄芩［7］、虎杖［8］等20味中药的有效成分进行提取，使提取物中的有效成分尽可能地多，从而达到了较好的抑菌效果．陈微等［19］报道夏枯草和黄柏对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌有很好的抑菌活性，但在本研究中对无乳链球菌的抑菌效果并不好，可能因为不同的提取方法以及中药提取物的pH不同，对不同的细菌产生不同的抑菌效果，且提取物中不溶成分偏多，对中草药抗菌活性成分有一定的影响，使得抑菌效果不那么理想．联合抑菌试验显示，黄连和黄芩、虎杖联合都产生协同作用，具有良好的抗菌作用．地榆和黄芩、虎杖联合都产生拮抗作用．地榆的有效成分是鞣质，具有大分子多元酚类结构，容易发生缩合反应或沉淀反应而失去相应的抗菌活性，与黄芩、虎杖联合后，3种有效成分发生化学反应，可能使药物的有效结构发生改变，导致联合后产生拮抗作用．本研究表明，黄连、黄芩和虎杖联合产生协同作用，增强了抑菌效果，可以组成一个复方．本研究为抗无乳链球菌的中药组方提供参考．参考文献：［1］倪春霞，蒲万霞，胡永浩，等．奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析［J］．西北农业学报，2010，19（2）：20-24．［2］杨锐，李英伦，李金良，等．四川雅安临床型奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及耐药性分析［J］．中国兽医杂志，2009，45（4）：41-42．［3］闫丽霞．中药制剂技术［M］．北京：化学工业出版社，2004．［4］MAＲCHETTI O，MOＲEILLON 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