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ELIspot技术检测结核分枝杆菌感染检测原理检测原理是：机体感染结核分枝杆菌后，存在于血液中的特异性效应T淋巴细胞会在再次接触结核分枝杆菌特异抗原时，产生和分泌IFN-γ，通过检测能够释放IFN-γ的T淋巴细胞数量，用于结核分枝杆菌感染及结核病的辅助诊断。
该检测方法相对于结核菌素试验，具有更高的特异性。
由于结核菌素试验中用的结核菌素是从结核分枝杆菌中提取的非种属特异的性分子，因此存在与卡介苗（BCG）的交叉，接种过BCG的人群即使没有感染结核也可能会出现结核菌素试验阳性。
而ELIspot检测所用的结核分枝杆菌特异抗原与BCG抗原无交叉，不受BCG接种的影响，未接种BCG和接种BCG的人群均可用该法进行结核病感染的筛查和结核病的辅助诊断。
目前应用的ELIspot检测试剂盒是由英国Oxford Immunotec公司生产的T-SPOT®TB试剂盒。
其检测方法如下：1.抗体包被将适量人IFN-γ抗体预先包被于96孔ELIspot板上。
2.标本采集及准备采集8小时内的肝素抗凝血，用Ficol离心分离外周血单核细胞（PBMC），用细胞培养液洗涤2次后，重悬于细胞培养液中。
3.细胞计数及稀释用台盼蓝染色计数法对PBMC细胞悬液计数，将细胞悬液浓度调整至2.5×105个细胞/100μl。
4.抗原刺激及孵育每个待检样本均需设阳性对照孔、阴性对照孔和检测孔。
阳性对照孔加入植物血凝素（PHA）作为阳性刺激抗原，阴性对照孔不加任何抗原刺激，检测孔加入结核特异性抗原。
若有几个特异性抗原进行分别刺激，检测孔可根据需要设置多个孔。
向阳性、阴性对照孔及检测孔内各加入100μl的PBMC细胞悬液，将ELIspot板置于37℃5%CO2培养箱内静置孵育16～20小时。
孵育期间不能移动ELIspot板，必须保证板静置不动。
5.斑点显色及计数弃除板内的细胞培养液，每孔加入200μl的PBS缓冲液洗涤3～5次，弃净板内的液体，向每孔加入100μl稀释好的生物素标记抗体，37℃孵育1小时。
一、实验目的1. 了解结核分枝杆菌的生物学特性及致病机理；2. 掌握结核分枝杆菌的培养、分离、鉴定及检测方法；3. 增强实验室操作技能，提高对结核病的防控能力。
二、实验原理结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性细菌，是引起结核病的病原体。
本实验通过培养、分离、鉴定及检测结核分枝杆菌，了解其生物学特性及致病机理。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）结核分枝杆菌菌种；（2）牛肉浸液；（3）鸡蛋；（4）石炭酸复红染液；（5）无菌生理盐水；（6）无菌试管；（7）酒精灯；（8）高压蒸汽灭菌器；（9）显微镜；（10）生物安全柜。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）电热恒温水浴锅；（3）无菌操作台；（4）超净工作台；（5）显微镜。
四、实验方法与步骤1. 菌种复苏（1）将冷冻保存的结核分枝杆菌菌种复苏于牛肉浸液中，37℃恒温培养24小时；（2）观察菌落生长情况，记录结果。
2. 分离纯化（1）将复苏后的菌液涂布于牛肉浸液琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（2）挑取单菌落进行纯化，重复涂布、培养，直至获得纯化菌落。
3. 鉴定（1）挑取纯化菌落，用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于石炭酸复红染液中，37℃恒温染色30分钟；（3）用无菌生理盐水冲洗，观察菌体形态及染色特性；（4）挑取染色阳性菌落，进行生化试验，如氧化酶试验、触酶试验等，以鉴定结核分枝杆菌。
4. 检测（1）挑取纯化菌落，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于含有药物的琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（3）观察药物对菌落的抑制作用，判断药物对结核分枝杆菌的敏感性。
五、实验结果与分析1. 菌种复苏：复苏后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
2. 分离纯化：纯化后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
3. 鉴定：挑取染色阳性菌落，进行生化试验，结果显示氧化酶试验、触酶试验均为阳性，符合结核分枝杆菌的生物学特性。
TB的实验室检查进展发表时间：2009-06-08T16:15:41.107Z 来源：《中外健康文摘》2009年1月第3期供稿作者：刘韧[导读] 在我国，根据2000年第4次全国结核病调查估算，全国现有 5.5亿结核病病例，将近全国人口的一半，疫情相当严重，形势非常严峻。
1882年3月24日郭霍氏首次发现结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，以下简称结核杆菌）为人类治疗结核病带来了希望。
自20世纪50年代以来不断发现有效的抗结核药物，使疾病的流行得到了一定的控制，但近年来由于不少国家对结核病的忽视，再加上人口的流动和增长、艾滋病的传播等因素，使疾病疫情下降缓慢，有的国家和地区甚至还有所回升，结核病已成为仅次于艾滋病的第二大致死性疾病。
人类已进人了21世纪，生存质量正在进一步提高，然而，作为一种古老的传染病，结核病的疫情却呈全球性上升趋势。
据WHO估计，目前全球约有20亿人感染结核杆菌，每年有800万新发病例和300万人死亡。
尤其是结核杆菌多重耐药菌株的出现，给结核病防治工作带来了一定的难度。
在我国，根据2000年第4次全国结核病调查估算，全国现有 5.5亿结核病病例，将近全国人口的一半，疫情相当严重，形势非常严峻。
由流行病学资料显示，我国结核病呈高患病率、高耐药率、高死亡率、高感染率、低递降率、病例发现率低等特点 [1]。
结核病是危害人民身体健康的重要传染病之一，也是当前农村因病致贫、因病返贫的主要传染病。
为此，人们迫切需要解决这些问题的方法企图建立先进的诊断方法和治疗措施，以减少结核病对人类健康所造成的危害。
一个世纪以来，人类对结核病的诊断学上做了大量的工作，从形态学到分子生物学技术的不断发展，医学工作者对结核分枝杆菌的生物学特性、致病性、耐药性、诊断、抗结核药物的研制等都取得了巨大的成就。
现对结核病实验室诊断技术方面的进展情况做个概述。
1 细菌学检测1.1 涂片镜检法为各国结核病实验室都在使用的最基本的细菌学检查方法，具有快速简便且价廉等优点，缺点是无法判别细菌是死还是活，而且敏感性较低；特异性差，各种抗酸杆菌均可着色，同时受到染色剂质量的影响，因此往往抗酸染色法的误诊率高[2]。
T细胞检测和荧光PCR检测在结核分枝杆菌检测中的比较杨玉前【摘要】Objective To compare the sensitivity and specificity between T cell assay and fluorescent PCR assay for the detection of Mycobacterium tuberculosis, and the application prospect in grassroot work of tuberculosis control and prevention. Methods Fluorescent PCR assay was used to detect the Mycobacterium tuberculosis in 194 fasting sputum specimens of suspected or con-firmed active tuberculosis collected from October the first 2013 to October the first 2014, and the results were compared with those of blood T cell assay. Results The positive rate of fluorescent PCR assay and T cell assay for the detection of Mycobacterium tu-berculosis was 12.9% and 7.7%, respectively, the diagnosis rate was 56% and 93.3%, respectively. Conclusion The specificity of T cell assay is higher while the sensitivity is poorer compared to the fluorescent PCR assay for the detection of Mycobacterium tu-berculosis. As there are various interfering factors existing in the clinical practice, combinative application of the two methods can improve the early diagnosis rate of tuberculosis.%目的：比较T细胞检测和荧光PCR检测两种方法对结核分枝杆菌检测的敏感性、特异性，及在基层结核病防治工作中的应用前景。
RNA恒温扩增技术快速检测（ＴＢ－ＳＡＴ）痰结核杆菌在鉴别肺部感染性疾病的临床观察结核病是由结核分枝杆菌引起的肺部疾病。
由于肺结核病的症状，体征和X线表现同许多胸部疾病相似肺，因此在诊断时常需鉴别。
肺结核病确诊目前我们在临床主要靠痰涂片和痰结核菌培养阳性来定诊。
但是依据常规痰涂片阳性率低，痰培养时间长需45天，这些原因给快速诊断病情带来困难。
2014年我院引进RNA恒温扩增技术快速检测痰结核分枝杆菌给临床带来希望。
一种利用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒。
目的用RNA恒温扩增实时检测（SAT—TB）快速检测临床痰标本中的MTB，并对检测效果进行评估。
方法痰标本取自哈尔滨市肺科医院的肺部感染性疾病与肺结核鉴别的患者资料和方法1.研究对象；2014年7月至2015年1月就诊于哈尔滨市胸科医院的患者76例，男43例，女76例。
年龄最高89岁，最少7岁。
平均年龄48岁。
咳嗽46例，胸闷23，咳痰31，低热19.，高热3例。
咳血6例，体检发现肺阴影3例。
盗汗8例。
消瘦10例。
76例病人肺CT显示肺部阴影不能除外肺结核2.方法，以上病例全部留取痰结核菌涂片，痰结核菌培养，及ＴＢ－ＳＡＴ结核菌。
ＴＢ－ＳＡＴ原理；同一温度下，首先通过M-MLV反转录酶产生靶标核酸（RNA）的一个双链DNA 拷贝，然后利用T7 RNA多聚酶从该DNA拷贝上产生多个（100～1000个）RNA拷贝；每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环；同时，带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合，产生荧光。
该荧光信号可由荧光检测仪器实时捕获，实时反映扩增循环情况。
3.结果；痰结核培养阳性4例，痰涂片阳性6例，ＴＢ－ＳＡＴ阳性5例。
诊断明确肺结核6例，临床诊断30例。
肺癌7例。
肺炎18，声带结核2例，间质肺2例支气管扩张2例，肺化脓2例，淋巴瘤1例讨论；结核病是由结核分枝杆菌引起的肺部疾病。
由于肺结核病的症状，体征和X线表现同许多胸部疾病相似肺，因此在诊断时常需鉴别。
结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析快速准确地诊断出结核分枝杆菌感染是控制和治疗结核病的前提和关键。
多年来，结核杆菌的诊断技术在不断地发展和创新，近年来，一些针对结核杆菌检测的新方法陆续被报道，一些新型的诊断技术产品也陆续上市。
本资料综述了结核杆菌的主要诊断方法，并对目前国际市场上广泛应用的商业化诊断技术产品进行了简要分析。
标签：结核分枝杆菌；诊断技术；分析Advance in diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis and analysis of new diagnostic technologies and products in clinical applicationFENG?Meimei1??SU?Wenqin21.Haikou VTI Biological Institute,Haikou 570311,China;2.Department of Pharmacy,Hainan Medical College,Haikou 571199,China[Abstract] Fast and accurate diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection is the key and prerequisite to control and treatment tuberculosis.For many years,the diagnostic techniques of Mycobacterium tuberculosis have been developing and innovating.In recent years,some new techniques for Mycobacterium tuberculosis detection were reported and some new diagnostic products have been listed.This paper reviewed the main diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis,and analysed briefly the commercialized diagnostic products which are used widely in the international market now.[Key words] Mycobacterium tuberculosis;Diagnosis;Analysis结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）是引起结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，以肺结核最多见。
