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ANAlySIS & TEST分析与检测在线净化LC-MS/MS系统对动物组织中克伦特罗残留的检测分析□ 赵孔祥 天津出入境检验检疫局食检中心王海鉴 赛默飞世尔科技（中国）有限公司克伦特罗俗称瘦肉精，常被用作饲料添加剂以提高家畜的瘦肉含量，但由于其严重的毒副作用，欧盟于1988年1月1日起禁止盐酸克伦特罗物质当饲料添加剂使用。
美国食品药品管理局（FDA）也于1991年被禁止了其作为饲料添加剂的用途。
1997年，中华人民共和国农业部下文，严禁β-肾上腺素类激素在饲料和畜牧生产中使用，盐酸克伦特罗被列为第一位。
2009年7月，为应对日、韩从我国食品中检出盐酸克伦特罗事件，质检系统确定制定了更严格的出口判定标准（0.05µg/kg），自此食品检测已经进入了超痕量时代。
在此背景下，仪器工作者需要开发一种更有效的前处理手段，以便检测工作者得到浓缩度和纯净度更高的样品，从而提高检测信号、降低检测噪音，提高工作效率和检测的精确度。
基于色谱原理的创新样品制备方法——Turbo Flow技术就是一种不错的选择，它为客户检测盐酸克伦特罗提供了新的前处理思路。
这种在线自动过程处理技术结合了扩散、化学和体积排除的原理，在捕获感兴趣分析物的同时，能够快速消除基质干扰。
本实验旨在建立一个前处理简单、选择性灵敏度高的克伦特罗Turbo Flow实用在线净化方法，并确定该方法的检出限。
实验仪器与方法样品制备取5g动物组织样品与10mL乙腈，10%乙酸铵（1：3）混合溶液混匀，匀浆10分钟，5000r/min离心10分钟，取1mL上清液经过0.22µm注射过膜，上机。
Turbo Flow条件系统：Thermo Scientific AriaTLX-1co ntrolled by Aria晣software在线净化柱：Turbo Flow CycloneMCX 0.5x50mm（方法参数见图1）进样体积： 50µL上样溶剂： 0.1%的甲酸水溶剂上样流速： 2mL/min洗脱溶剂： 1%的氨水甲醇溶液洗脱体积： 50µLHPLC 方法条件色谱柱：Hypersil GOLD aQ 3µm100×2.1mm；流路A：0.1%的甲酸水溶液；流路B：甲醇；质谱条件调谐参数：系统 TSQ Ultra AM离子源极性：正离子模式喷雾电压：4500V鞘气压(N2)：50arb辅助气压(N2)：16arb毛细管柱温度：350℃图1 Turbo Flow在线净化与HPLC联用方法参数Copyright©博看网 . All Rights Reserved.44 食品安全导刊 2011年5月刊May 2011 CHINA FOOD SAFETY 45分析与检测 ANAlySIS & TEST表1 克伦特罗不同添加水平回收率*为六平行水平下RSD值碰撞气体（Ar）：1.5mTorr Skimmer offset：10VQ1/Q3峰分辨度：0.7u(单位质量)SRM反应参数：结果与讨论食物样品本身基质比较复杂，在进行检测之前往往需要一个较长的样品预处理过程。
猪粪便沼液中多种抗生素残留量的LC—MSMS检测【摘要】猪粪便沼液中抗生素残留量的检测在环境保护和食品安全中具有重要意义。
本文利用LC-MSMS技术对猪粪便沼液中多种抗生素残留量进行分析，探讨不同抗生素残留量之间的关系，并对环境风险进行评估。
结果显示，猪粪便沼液中存在多种抗生素残留，部分抗生素残留量超标，可能对环境造成影响。
本研究为抗生素残留问题提供了重要数据支持，拓展了抗生素残留在环境中的研究范围。
进一步研究应加强对抗生素残留的监测和控制，减少其对环境的负面影响。
通过本研究，可为未来制定更加合理的抗生素管理政策提供科学依据。
【关键词】猪粪便沼液, 抗生素残留量, LC-MSMS检测, 样品处理方法, 分析技术, 环境风险评估, 环境影响, 进一步研究, 结论总结1. 引言1.1 研究背景猪粪便沼液是一种常见的有机肥料，其在农业生产中被广泛应用。
随着现代养殖业的发展，猪粪便中残留的抗生素问题也日益突出。
抗生素残留不仅对环境、土壤和水质造成污染，还可能对人类健康造成潜在风险。
目前，关于猪粪便沼液中抗生素残留的研究还比较有限。
已有的研究主要是通过传统的化学分析方法来检测抗生素残留量，然而这种方法存在检测灵敏度低、准确性差等缺点。
开展本研究将采用高效的LC-MSMS分析技术，能够更准确、快速地检测多种抗生素的残留量。
通过对猪粪便沼液中多种抗生素残留量的分析，可以更全面地了解抗生素在农场环境中的分布情况，为有效防控抗生素残留提供科学依据。
本研究的开展将有助于加深对抗生素在农业生产中的环墋深度认识，为农业生产的可持续发展提供重要参考。
1.2 研究目的研究目的：本研究旨在通过LC-MSMS检测方法，对猪粪便沼液中多种抗生素残留量进行分析，探究其在环境中的存在情况和潜在风险。
具体目的包括：1. 确定猪粪便沼液中多种常见抗生素（如青霉素、四环素、利福平等）的残留量；2. 探究不同抗生素之间的相互影响和积累情况；3. 评估猪粪便沼液中抗生素残留对环境的潜在影响；4. 为制定相关环境保护政策和农业生产措施提供科学依据。
氟甲砜霉素2.净化方法选用Q u E C h E R S方法进行样品的净化。
本实验比较了吸附剂1（P S A 50m g，中性氧化铝50m g，无水硫酸镁500m g），吸附剂2（P S A 100m g，无水硫酸镁500mg），吸附剂3（PSA 50mg，C18 50mg，无水硫酸镁500mg）在三种不同基质1.0μg/kg水平加标时的平均回收率和精密度。
吸附剂1的回收率最佳（回收率详情见表3）。
3. 线性范围，检出限与定量限将氯霉素类药物混合标准溶液稀释成浓度为0.1n g/m l，0.5ng/ml，1.0ng/ml，5.0ng/ml，10n g/m l，内标浓度为1.0n g/m l 的系列标准溶液，得到线性回归方程在0.1~1.0n g/m l的浓度范围内线性关系良好，氯霉素：Y=1.427X+0.001943，R2=0.9979；甲砜霉素:Y=275X-0.02534，R2=0.9982；氟甲砜霉素：Y=12560X-0.08704，R2=0.9973，平行测定20次空白样品，得到空白值的标准偏差S b，仪器的测定低限为C L=3S b/b（b为标准曲线的斜率），方法的测定低限为C L乘以稀释倍数除以样品质量，确定本方法中三种氯霉素类药物的检出限均为0.1μg/kg，定量限均为0.3μg/kg（详见表4）。
4. 回收率与精密度向阴性基质样品中添加3个浓度水平的混合标准溶液，按照本试验优化所得的样品前处理方法及仪器条件进行试验（n=6）。
氯霉素类药物的回收率为95.7%~101%，相对标准偏差为4.38%~7.33%，符合相关国家标准和法律法规的要求（详情见表5）。
三、结论QuEChERS方法与传统方法相比，处理步骤简单快速，提取溶剂与净化吸附剂接触充分，回收率较好，通过调整提取溶剂和净化吸附剂的比例，优化了动物源性食品中的氯霉素类药物残留测定方法。
定性分析和定量分析都满足要求。
[参考文献][1]李俊锁, 邱月明, 王超. 兽药残留分析[M].上海：上海科学技术出版社, 2002.[2] 赵汉取, 王雨晨, 韦肖杭，等. 新一代抗生素——氟苯尼考及其在水产养殖中的应用[J]. 水产科技情报, 2007, 34(4):165-168.[3] 李鹏, 邱月明, 蔡慧霞，等. 气相色谱-质谱联用法测定动物组织中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素的残留量[J]. 色谱, 2006,24(1)：2.[4] 王志杰, 冷凯良, 孙伟红，等. 水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留量高效液相色谱-串联质谱内标测定方法的研究[J].渔业科学进展, 2009，30(2):115-119.（作者单位：中检科（上海）测试技术有限公司）提取溶剂猪肉鸡肉鱼肉平均回收率%96.495.798.1平均回收率%84.188.793.5平均回收率%10194.396.7精密度%6.536.174.38精密度%7.315.025.31精密度%6.113.374.26乙腈（1%氨水）丙酮（1%氨水）乙酸乙酯（1%氨水）表2 不同提取溶剂回收率（n=6）表3 不同吸附剂回收率（n=6）提取溶剂猪肉鸡肉鱼肉平均回收率%96.495.798.1平均回收率%92.190.495.2平均回收率%93.188.790.6精密度%6.536.174.38精密度%8.146.223.82精密度%4.173.662.83吸附剂1吸附剂2吸附剂3表5 氯霉素类药物的回收率和相对标准偏差样品添加水平μg/kg 平均回收率% RSD%猪肉0.10.21.097.696.096.46.956.336.53鸡肉0.10.21.096.796.295.77.336.56.17鱼肉0.10.21.0101.097.998.15.715.324.38表4 三种氯霉素类化合物的线性方程和测定低限氯霉素甲砜霉素氟甲砜霉素线性方程Y=1.427X+0.001943Y=275X-0.02534Y=12560X-0.08704LODμg/kg0.1μg/kg0.1μg/kg0.1μg/kgLOQμg/kg0.3μg/kg0.3μg/kg0.3μg/kgR20.99790.99820.9973《质量与认证》2020 ·11 79。
固相萃取-UPLC-MS MS法测定猪肉中11种喹诺酮类兽药残留作者：何瑞雪来源：《现代食品》 2019年第1期在畜牧业生产、禽类饲养以及水产品养殖中,经常会使用大量兽药,主要有喹诺酮类、青霉素类等。
这些药物违规会通过食物链在人体内蓄积,从而在人体内产生耐药性和抗药性,严重的还会致突变、致畸和致癌[1]。
喹诺酮类药物具有广谱抗菌作用,大量用于人和的动物医疗以及饲料添加剂,以提高饲料利用率和促进动物生长[2-3]。
从1962 年萘啶酸问世以来,已经合成了数以千计的喹诺酮类化合物[4]。
近年来,喹诺酮类药物已在水、土壤和畜禽中均有不同程度的检出,因此要加强对此类药物残留的监控。
目前,用于喹诺酮类药物残留的检测方法有微生物法[5]、酶联免疫分析法[6]、高效液相色谱法[7]、高效液相色谱/ 质谱联用法[8]、毛细管电泳法[9-10] 和荧光分光光度法[11]等。
其中,高效液相色谱/ 质谱联用法定性更准确,灵敏度更高,国家标准检测方法中也其为主,但国标方法样品前处理复杂,耗时长,且干扰物净化效率低,因此对样品前处理方法的简化及提升净化效率,可大大缩短检验时长,提高检测的准确性。
1 材料与方法1.1 材料与试剂甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯,购自默克公司;喹诺酮类兽药标准品,包括诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、双氟沙星,购自上海安谱实验科技股份有限公司和农业部环境保护科研监测所。
1.2 仪器与设备XEVO-TQ-S Micro 三重四级杆质谱仪( 配有AcquityUPLC 超高效液相色谱仪及电喷雾离子源),Oasis Prime HLB 200mg/6mL 固相萃取柱(美国Waters公司);SIGMA 高速冷冻离心机(美国SIGMA);Milli Q 超纯水系统(美国Millipore 公司);IKA 刀式研磨仪(美国IKA);IKA 旋转蒸发仪(美国IKA)。
利用LC-MS/MS 定量检测猪复合预混合饲料中25轻基维生素D '方法的建立王 博，张亦菲，张 嬪，吴剑平，严 凤**作者简介：王博(1991 — ),男，硕士，助理畜牧师，主要从事兽药残留分析工作。
* 通信作者，E-mail ： yan5O8@(上海市兽药饲料检测所,上海201103)摘 要：建立一种液相色谱-串联四极杆质谱(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)检测分析方法，以填补国内猪复合预混合饲料中25(OH)D 3较低质量占比(2 mg/kg )检测的空白。
饲料样品加适量水混 匀，溶解环糊精包囊后，再加入叔丁基甲"进行振荡提取，离心，适量上清液经氮气吹干后，用初始流动相［0. 1%甲酸甲醇溶液：0.1%甲酸水溶液= 85： 15(0 V )溶解，过膜后上机测定。
实验使用反相色谱进行分离，梯度程序洗脱，流动相为0.1%甲醇和0.1%甲酸，三重四极杆质谱进行定量定性分析，内标法计算。
实验结果表明，该方法的25(OH)>3检测限和定量限分别为50 "g/kg 和100 "g/kg,线性良好，批内回收率和标准偏差(Relative standard de viation, RSD )分别为84. 83%〜99. 78%和16%〜3. 7%，批间回收率和RSD 分别为85. 1%〜99. 2%和2. 0%〜3.4% ；利用所建立的方法检测9批从市场采集的预混饲料样品，25(OH)D 3检测值为292.66 "g/kg 〜849. 97 "g/ kg ，实测值占标示量的91.05%〜103.32%。
本方法具有良好的准确度与精密度，可准确检测猪复合预混合饲料中低于2 mg/kg 的25(OH)>3质量。
关键词：液相色谱-串联质谱；猪复合预混合饲料；25 0基维生素>3维生素D 是动物体内必需的一种脂溶性的维 生素，能促进动物骨骼正常发育，维持机体正常生 长⑴。
专利名称：利用高效液相色谱同时检测畜禽粪便中多种抗生素的方法
专利类型：发明专利
发明人：李兆君,冯瑶,张文娟
申请号：CN201510921060.1
申请日：20151211
公开号：CN105548392A
公开日：
20160504
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种抗生素检测方法，具体为利用高效液相色谱同时检测畜禽粪便中多种抗生素的方法，对畜禽粪便样品进行预处理，得到待测液，将待测液通过高效液相色谱仪进行分析物的分离，计算分离出的残留抗生素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算，得出残留的含量。
该方法应用于畜禽粪便中11种残留抗生素的检测，与高效液相色谱仪—质谱联用技术相比，检测成本较低；检测效率高，可以同时分离11种抗生素；分析物无主要干扰物干扰，基本不影响分析物定性和定量。
申请人：中国农业科学院农业资源与农业区划研究所
地址：100081 北京市海淀区中关村南大街12号
国籍：CN
代理机构：北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司
代理人：董芙蓉
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QuEChERS-LC-MS/MS法测定猪肉中44种兽药残留■ 张 清1 冯 序1 房翠兰1 郭丽菊2*（1. 重庆市九龙坡区疾病预防控制中心；2. 昆明医科大学 海源学院）摘 要：本文建立了高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定猪肉中44种兽药残留的检测方法。
样品中的4种四环素类、16种喹诺酮类、24种磺胺类化合物用1%甲酸乙腈溶液提取后，经QuEChERS净化，氮吹浓缩后通过C18色谱柱分离，并采用基质标准曲线法定量。
结果表明44种化合物在2.0~100.0μg/kg范围内线性关系良好，相关系数R均大于0.995，加标回收率在70.8%~106.2%之间，相对标准偏差为1.1%~8.1%（n=6）。
该方法操作简便、经济快速、灵敏准确，适用于猪肉中多种兽药残留的快速筛查。
关键词：QuEChERS，高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS），兽药残留DOI编码：10.3969/j.issn.1002-5944.2023.15.041Determination of 44 Veterinary Drugs Residues in Pork by QuEChERS-LC-MS/MS MethodZHANG Qing1 FENG Xu1 FANG Cui-lan1 GUO Li-ju2*（1. Chongqing Jiulongpo District Center for Disease Control and Prevention;2. Haiyuan College, Kunming Medical University）Abstract:A high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was developed for the simultaneous determination of 44 veterinary drug residues in pork. Four tetracyclines, 16 quinolones and 24 sulfonamides in the sample were extracted with 1% formic acid acetonitrile solution and purifi ed by QuEChERS method. The concentrated solution after nitrogen blowing was separated by C18 chromatographic column and quantified by matrix standard curve method. The results showed that the linear range was from 2.0 μg/kg to 100.0 μg/kg and the correlation coefficient was greater than 0.995. The recoveries were 70.8%~106.2% , and the relative standard deviations (RSD, n=6) were 1.1%~8.1%. The method is simple, economical, rapid, sensitive and accurate, which can be applied to rapid screening of veterinary drug residues in pork.Keywords: QuEChERS, high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), veterinary drug residues0 引 言我国是猪肉生产和消费大国，为防治生猪疫病、促进生长和繁殖，兽药被普遍使用在养殖中。
modern journal of animal husbandry and veterinary medicine 2019年第3期万古霉素（CAS号：1404-90-6，分子式：C 66H76Cl3N9O24）属于糖肽类抗生素，其药力强，常在其他抗生素对病菌无效时会被使用。
主要用于葡萄球菌（耐青霉素和耐新青霉素株）等感染。
作为人类现阶段抗感染一线药物最后一线防线，对其的使用应慎重。
由于抗生素的滥用，出现了抗万古霉素的细菌，如万古霉素抗药性肠球菌（VRE），为人类敲响了警钟。
为此，欧盟已在2006年1月全面禁止在饲料中添加任何抗生素，这是全世界范围内为保障食品安全采取的最为严厉的措施，杜绝了抗生素残留物从食品源头传入人体的可能。
美国从1997年起禁止在畜禽养殖中使用万古霉素。
我国农业部2005年11月《兽药地方标准废止目录》禁止生产、经营万古霉素。
2010年万古霉素被列UPLC/MS/MS法测定猪肉中万古霉素残留量张明（辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心，辽宁沈阳110016）摘要：建立了快速、准确、灵敏的猪肉中万古霉素的超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）检测方法。
样品经0.1%甲酸-乙腈（1:1，体积比）溶液提取，scx固相萃取柱净化，洗脱液蒸干后正己烷除脂，采用乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱，ESI+正离子模式电离，多反应监测模式（MRM）监测，用UPLC-MS/MS检测和确证，外标法定量。
结果表明，万古霉素在5.0～200.0μg/L范围内具有良好的线性，相关系数r=0.9989，检测限（S/N=3）为1.0μg/kg，定量限为3.0μg/kg，方法平均回收率为82.4%～101.4%，相对标准偏差在5.3%～17.3%。
试验结果表明，该方法准确、灵敏，适用于猪肉中万古霉素残留量的测定。
关键词：超高效液相色谱-串联质谱法；万古霉素；猪肉中图分类号：O657.63文献标识码：B文章编号：1672-9692(2019)03-0007-05 Determination of Vancomycin in meat by Ultra Performance Liquidchromatography-tandem mass spectrometryZhang Ming（Animal feed quality and safety of venterinary testing centre in Liaoning province,Liaoning Shenyang110016）Abstract:A simple,rapid and sensitive method was developed for determination of vancomycin in pork by Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS).The sample was extracted with a mixture of0.1%formic acid–acetonitrile(1:1),and cleaned up with SCX sol‐id phase extraction cartridge.The separation of the target was carried out on a UPLC BEH C18col‐umn by gradient elution with0.1%formic acid-acetonitrile as mobile phase.With positive elec‐trospray ionization(ESI+)and multiple reaction monitoring(MRM),the results showed that correla‐tion coefficient was0.9989.The LOD and LOQ of vancomycin were 1.0µg/kg and 3.0µg/kg.The av‐erage recoveries were between82.4%～101.4%at spiked levels of5～15µg/kg.The RSD were 5.3%～17.3%.The real sample tests showed this method can be used for the sensitive and accurate deter‐mination of Vancomycin residues in meat.Key words:UPLC/MS/MS;Vancomycin;Meat收稿日期：2018-12-15作者简介：张明（1963-），男，本科，高级兽医师，主要从事兽药饲料畜产品残留检验检测工作。
猪粪便沼液中多种抗生素残留量的LC—MSMS检测
作者：王光杰徐丽娜杨玲
来源：《农产品加工·下》2019年第03期
摘要：采用固相萃取-超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法同时检测猪粪便、尿液和沼液中磺胺二甲嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、单诺沙星、红霉素等12种抗生素，优化了前处理和分离检测条件，12种目标物在10 min内完成分析，在质量浓度1.00～100 μg/L范围内线性良好，方法检出限为0.05～3.00 ng/mL，实际水样加标回收率为62.5%～105.2%。
关键词：抗生素；粪便；沼液；固相萃取；超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法
中图分类号：TS254 文献标志码：A doi：10.16693/ki.1671-9646（X）.2019.03.045
Determination of Residual Antibiotics in Pig Manure and
Biogas Slurry by LC-MSMS
WANG Guangjie，XU Li'na，YANG Ling，JIANG Jielu，LI Jun，QU Jiejing
（Shandong Tongji Testing Technology Co.，Ltd.，Yantai，Shandong 264004，China）
Abstract：Simultaneous determination of pig feces，urine and biogas slurry by solid phase extraction ultra performance liquid chromatography with three heavy four stage mass spectrometry sulfamethazine，sulfa-chloropyridazine etc. twelve antibiotics. The pretreatment and separation detection conditions were optimized. Twelve targets were analyzed within 10 minutes. The linearity of the method was good in the range of 1.00～100 μg/L. The detection limit was 0.05～3.00 ng/mL. The recoveries of the actual water samples was 62.5%～105.2%.
Key words：antibiotics；feces；biogas liquid；solid phase extraction；LC-MSMS
在最近几十年中，兽用抗生素使用量惊人，大量的饲用抗生素作为饲料添加剂长期使用，动物经排泄进入粪便、沼液中，造成药物残留和耐药基因的产生，包括动物致病菌和内在微生物菌群，进而对人类染病的医治和微生态环境构成潜在威胁，同时兽用抗生素在肉、蛋、乳等动物产品中残留通过一般的食品烹饪方法不能完全使其分解，从而对人产生毒副作用和耐药性。
据研究报道，对可食用动物使用的抗生素有25%～75%以母体药物的形式从粪尿中排出体外，并且在土壤中长期滞留[1]。
有相当比例的兽药抗生素以母体药物或代谢产物的形式通过禽畜粪尿进入水体和土壤中，从而对环境造成了潜在威胁。
目前，抗生素的含量测定方法有微生物法、高效毛细管区带电泳法、薄层色谱法、酶联免疫法及高效液相色谱法[2-3]等。
试验选择独特的样品处理方法，建立了一种快速、准确、分离度好的高效液相色谱质谱法。
1 材料与方法
1.1 主要仪器
Waters H-class型与AB SCIEX API 4000 Plus型液相色谱质谱联用仪，配有电喷雾离子源（ESI源）；SPE固相萃取装置；氮吹仪；分析天平：感量分别为0.001 g和0.000 01 g；高速冷冻离心机：转速≥10 000 r/min；冷冻干燥机等。
1.2 主要试剂耗材
标准物质均为有证标准物质，购于坛墨质检、Sigma等，纯度≥98%；乙腈（色谱纯），德国Merck公司提供；EDTA（分析纯），国药集团化学试剂有限公司提供；其他试剂均为分析纯；试验用水为蒸馏水或去离子水；HLB固相萃取柱（200 g/6 L），美国Waters公司提供。
1.3 仪器分析条件
1.3.1 色谱条件
色谱柱为BEH C18型（1.7 μm，2.1 mm×50 mm），柱温40 ℃，进样体积5 μL；流动相：A为0.1%甲酸水，B为乙腈；流速0.3 mL/min。
梯度洗脱程序见表1。
1.3.2 质谱条件
電离方式采用电喷雾离子源正离子模式（ESI+），多反应监测（MRM）检测，雾化气为N2。
6种抗生素主要质谱参数见表2。
1.4 样品分析步骤
1.4.1 试样制备
样品采自当地个体养猪场粪便水，静置后取上层尿液和沼液的水样加入3 g Na2EDTA，调节pH值至3～4后过小柱，过柱后若水样较为浑浊或悬浮杂质较多应过滤处理，水样采集后3 d内完成检测。
下层粪便经-60 ℃冻干，准确称取0.2 g干燥脱水样品于10 mL离心管中，加入10 mL 50%的1 mmol/L EDTA甲醇溶液（pH值2），涡旋混匀1 min，超声10 min后，以转速4 000
r/min离心5 min，转移上清液，再重复萃取2次，合并所有上清液，摇匀。
1.4.2 净化浓缩
HLB固相萃取小柱依次用6 mL二氯甲烷、6 mL甲醇、6 mL Na2EDTA溶液活化，合并提取后水样以1～2 mL/min流速过柱，富集完成后用10 mL水淋洗，氮吹20 min，用10 mL 3%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干后用1 mL初始流动相定容，过0.2 μm有机滤膜后进样分析。
2 结果与分析
2.1 标准品色谱图
12种抗生素MRM扫描質谱图见图1。
12种标准物质保留时间分别为3.09，3.48，1.60， 3.25，2.00，3.24，3.26，2.99，3.14，3.01，3.22， 3.63 min。
在猪粪便、猪尿和沼液水样中分别添加12种药物，以10倍信噪比
（S/N）计算，在进样量10 μL时，得到此方法最低检测质量浓度为0.05～3.00 ng/mL。
2.2 工作曲线
将12种标准物质稀释至1～100 μg/L，按上述仪器条件进行分析，以定量离子对的相应峰面积和对应质量浓度进行线性回归得到标准曲线。
12种抗生素线性回归曲线及检出限见表3。
2.3 实际样品分析
在猪粪便、猪尿和沼液水样中添加10 ng/mL的标准溶液进行加标回收，采用外标法定量，结果显示12种标准物质在水样中的回收率为62.5%～105.2%。
12种抗生素加标回收率见表4。
3 结论
建立了多种抗生素一次处理进样快速有效的检测方法，在实际样品猪粪便、猪尿和沼液水样中添加多种抗生素平均回收率为62.5%～105.2%。
该法具有快速、稳定、灵敏、高效等特点，适用于环保行业对多种抗生素的检测，可广泛推广于企业作为常规检测的方法。
参考文献：
李兆君，姚志鹏，张杰，等. 兽用抗生素在土壤环境中的行为及其生态毒理效应研究进展[J]. 生态毒理学报，2008（1）：15-20.
胡莹莹，李爱，叶赛，等. 高效液相色谱与酶联免疫试剂盒测试海水中痕量氯霉素[J]. 分析试验室，2006， 25（3）：112-114.
蔡玉娥，蔡亚岐，牟世芬，等. 亲水性C16硅胶反相色谱柱分离测定芳香胺类化合物[J]. 分析化学，2006， 34（6）：745-748. ◇。
