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doi:10.19369/j. cnki. 2095 — 9737.2021.04.043牛奶中抗生素残留的检测方法范松阳(黑龙江省地质矿产实验测试研究中心，黑龙江哈尔滨150000)摘要：牛奶等乳制品中如果残留抗生素既会导致品质变差，严重时还会对发酵乳制品的生产造成影响，使其产量降低，并导致后期产品风味变差，损害生产者的经济效益，同时人们摄入后会 严重危害健康，如导致人体发生过敏反应（过敏性休克、皮疹等），使肠道中有益菌的生长被抑制，而致病菌、念珠菌等大量增殖，引起局部或者全身感染，还会使人体对抗生素形成抗药性，明显加大临床治疗难度。
现概述奶牛中抗生素残留的检测方法，供参考。
关键词：牛奶；抗生素残留；检测方法中图分类号：T S252. 7 文献标识码：B文章编号2095—9737(2021)04 —0074 —021理化检测法1.1检测原理该法主要是根据抗生素分子的性质，使用相 关实验仪器对其进行分离检测。
分离时常用的实 验技术为电泳检测或者色谱检测等，检测时常用 的实验技术为紫外检测、化学发光检测、荧光检测 或者质谱检测等。
1.2优缺点该法具有精确可靠、重复性好、检测灵敏、分 离效率高、结果稳定的特点，属于检测抗生素残留 的一种精确方法。
2微生物检测法该法是检测牛奶抗生素残留时应用比较广泛 的经典方法，主要有氯化三苯基四氮唑法（T TC 法）、纸片法、管蝶法以及试剂盒法等。
2.1检测原理主要是根据抗生素对微生物的机能、生理代 谢产生的抑制作用来对样品中残留抗微生物药物 进行定性。
2.2优缺点这种检测方法具有费用低、操作简单、结果可 靠、不需使用高级实验设备的优点，可应用于普通 养殖场及实验室。
但由于需要进行微生物培养，因此有相对较长的检测时间，无法实现定量检测，不可检测出某些抗生素的最低限。
2.3常用方法2.3. 1T TC 法将9m L灭菌脱脂乳中接种提前制备好的嗜热链球菌菌种，放人3 6±1C恒温培养箱中经过15 h活化，然后对脱脂乳按1 〇 1比例进行稀释制 成测试菌液。
抗生素残留现状及检测方法随着我国经济的快速发展，人们追求效益最大化，抗生素的使用越来越普遍，如用抗生素治疗奶牛的乳腺炎；畜禽养殖户在饲料中添加抗生素和激素，提高种畜的抗病能力和食欲；水产养殖用户为了让大闸蟹加快脱壳过程、长得肥大生猛，给蟹喂食大量抗生素和激素等。
我国是抗生素生产和使用大国，据统计每年约有6000吨抗生素用于饲料添加剂，占全球抗生素饲料添加剂的50%。
抗生素的大量滥用已经严重威胁到人们的身体健康，专家指出，经常食用含有抗生素的食品，即使是微量的，也能使人出现荨麻疹或造成过敏性休克。
时常摄入含有抗生素的食品，可使某些菌株产生耐药性，从而带来预防与治疗某些人畜疾病的困难。
如果长期食用抗生素残留的食物，可造成人体中一些非致病菌的死亡，使菌群平衡失调或引起核黄素缺乏症和紫癜性损伤。
特别是氯霉素的滥用，极易损害人类骨髓的造血功能，并由此导致再生障碍性贫血的发生。
两年前，四川资阳地区曾暴发猪链球菌疫情，微生物专家李明远教授认为，很可能是养殖业者长期在猪饲料里滥用抗生素导致的。
常用抗生素包括β-内酰胺类、四环素类，氨基糖苷类，大环内酯类，磺胺类等，世界各国均对抗生素的使用量提出严格标准，欧盟的标准比日本和美国的标准更加严格，限量值更低，我国要想保障本国食品安全并出口产品到上述国家，就必须加强我国的自身的检测能力。
一般来说，肉类（畜禽），鱼虾（水产），蛋类，奶类，饲料、蜂蜜等产品需要进行抗生素检测，常用方法包括：液相色谱或液相色谱与质谱联用，微生物抑制法和酶联免疫方法。
色谱方法是一种理化检测方法,一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤，能检测抗生素的具体含量，敏感性较高，但检测程序复杂，费用较高，需购买色谱仪等检测设备，不适合小型检验室。
微生物抑制法和酶联免疫方法属于筛选方法，操作简便、快速，消耗成本低，不需要购买大型仪器，但阳性结果需要其他方法进行确认。
酶联免疫方法存在一定的假阳性，下面针对微生物方法进行详细介绍。
利描分析与检测牛奶中抗生素残留的微生物检测方法应用分析□朱建恩广东产品质量监督检验研究院摘要：牛奶因其高营养价值得到了人们的青睐，但牛奶抗生素残留问题受到了社会各界的广泛关注。
本文使用微生 物检测方式分析牛奶内抗生素的残留，旨在强化原料、产品质量检测，为保护居民身体健康提供有效参考意见。
关键词：牛奶；抗生素残留；微生物检测；应用牛奶属于老少皆宜的营养品，若 是牛奶中含有抗生素，在长期饮用中 会导致服用者产生a敏反应，对服用 者的健康造成影响。
我国相关政策明 确规定，禁止抗生素残留a量的牛奶 在市场上销售，但就实际情况而言，政策未能得到有效落实[11。
1微生物检测法的原理微生物检测法主要依据抗生素对微生物的生理机能、代谢作用、抑制 作用等定性、定量确定出样品内的抗 生素残留。
通a在被检测牛奶内培养 出抗生素敏感微生物，若是牛奶内的 样品不存在抗生素，在微生物的生长 繁殖中，能够观察到培养基变得浑浊、不透明，且各种指示剂的颜色也 会发生相应的变化P]。
微生物检测法 在应用中，具有检测可靠性高、操作 便捷、成本低的特点，并且存在着一 定的特异性，微生物检测法原理如图1所示。
由于抗生素对人体会产生较大的危害，主要包括：破坏人体菌种平衡，极易造成“二重感染”；使得a敏体 质的人产生a敏反应，危机其健康；促使人体产生耐药菌株，对后期患病 的抗生素治疗产生影响，因此，微生 物检测法的应用十分重要。
2牛奶中的抗生素残留的微生物检测方法应用牛奶抗生素残留微生物检测方式常用的包括：TTC检测法、纸片法、牛乳活性检测法等，其应用主要如下。
2.1纸片检测法纸片检测法也称之为“PD检测 法”，常用的纸片检测法，需要枯草 杆菌纸片、嗜热脂肪菌纸片，如图2 所示。
通过应用两类检测方式，可以 检测牛奶中的抗生素，检测过程与TTC基本一致，在菌种选择上有着较 大的差异性[3]。
枯草杆菌纸片法检测 的结果呈假阳性，为了确定阳性物质 是否为青霉素、>8-内酰胺类，针对加 热后的乳样需要使用青霉素酰处理，核酸提取9>体系配制分装加疆反应液+8st酶反应体系图1微生物检测法原理示意图图2纸片检测法试纸图将牛奶内的青霉素处理掉，接着开展 抗生素检测。
第１７期 收稿日期：２０２０－０６－１３作者简介：马 娅（１９８７—），女，甘肃定西人，兰州石化职业技术学院讲师，硕士研究生，主要研究方向为化学与生物传感器。
牛奶中抗生素残留检测的研究现状马 娅，马丽娜，史俊杰，焦林宏，王红玉（兰州石化职业技术学院，甘肃兰州 ７３００６０）摘要：牛奶在人们饮食中占有重要地位，但是种种原因使得抗生素残留于牛奶中，严重影响奶品品质及人体安全，乳品中抗生素残留的检测和管理尤为重要。
本文主要介绍牛奶中抗生素残留的三种检测方法：微生物检测法、理化检测法和免疫法。
而我国在生产管理上常用的筛查检测方法有ＴＴＣ法和ＳＮＡＰ法，两种方法各有优劣，而基于ＴＴＣ法的试纸检测法是一种正在研发的有潜力的筛查分析方法。
关键词：牛乳；抗生素；残留；检测方法中图分类号：Ｏ６５７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０２１Ｘ（２０２０）１７－００８３－０２ 牛奶因其营养成分齐全、营养价值高、易消化吸收等特点，被誉为“食品之王”，逐渐成为人们生活中不可或缺的一种食品。
然而，奶牛饲养中为预防疾病常在饲料中添加抗生素，服用大剂量抗生素药物，获得的奶品中添加抗生素防止其腐坏［１］，这些因素均会导致抗生素在牛奶中残留，长期饮用含抗生素残留的牛奶不仅危害人类的健康，同时由于抗生素对发酵乳中发酵菌种的繁殖产生抑制作用使其发酵异常从而影响奶制品的品质［２］。
世界卫生组织（ＷＨＯ）在１９７９年就已经将抗生素列为污染物，之后各个国家都开始关注牛奶中抗生素残留检测，提出了不应检出抗生素的要求。
２００１年中华人民共和国农业行业标准也规定了无公害食品－生鲜牛乳中不能检出抗生素。
我国农业部在２００１年１０月发布实施了《无公害食品生鲜牛乳行业标准》，明确规定“新鲜牛乳中抗生素不得检出”。
２００２年发布的《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定，奶中最高允许残留量（单位ｎｇ／Ｌ）标准是：新霉素为５００；庆大霉素为２００；林可霉素为１５０；四环素、土霉素、磺胺类等均为１００［３］。
抗生素残留量检查法标准操作规程目录1 目的 (2)2 范围 (2)3 职责 (2)4 依据 (2)5 定义 (2)6 内容 (2)6.1 说明............................................................................................... 错误！未定义书签。
6.2 原理 (2)6.3 实验材料 (2)6.4 操作步骤 (3)6.5 判定标准 (3)6.6 注意事项 (4)7 相关文件 (4)8 附件 (4)9 变更历史记录 (4)1目的1.1本规程规范了抗生素残留量检查法的操作过程。
2范围2.1本规程适用于供试品中氨苄西林的残留量检查。
3职责3.1质量检验人员：应严格执行本规程的规定。
3.2质量保证人员：负责对本程序的执行进行监督、检查。
4依据4.1《中国药典》2010年版三部，附录ⅨA，“抗生素残留量检查法”P59~P60。
5定义N/A6内容6.1原理6.1.1抗生素残留量检查法是依据在琼脂培养基内抗生素对微生物的抑制作用，比较对照品与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小，检查供试品中抗生素的残留量。
6.2实验材料6.2.1仪器6.2.1.1生物安全柜6.2.1.2恒温培养箱6.2.1.3恒温水浴锅6.2.1.4游标卡尺6.2.2器具6.2.2.1牛津杯规格：内径6mm、外径8mm、高10mm 6.2.2.2玻璃平皿规格：直径约90mm6.2.2.3试管及硅胶塞规格：18×180mm6.2.2.4吸管规格：10ml6.2.3标准物质6.2.3.1取氨苄西林对照品适量，用0.01mol/L的盐酸溶解，并稀释成每1ml中含氨苄西林10mg的溶液，作为氨苄西林对照品储备液，200ul/支无菌分装，-20℃保存，备用。
6.2.4试剂、试液6.2.4.1磷酸盐缓冲液（pH6.0）●称取磷酸二氢钾8.0g、磷酸氢二钾2.0g，加水溶解并稀释至1000ml，经121℃灭菌30分钟。
抗生素微生物检定法work Information Technology Company.2020YEAR抗生素微生物检定法本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验（标准曲线法除外）。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
（一）基本设备、用具、试验材料及标准品1. 基本设备（1）抗生素效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。
该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。
（2）超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。
（3）抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。
2. 用具（1）玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16~17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。
新购的双碟应按上述要求进行检查。
检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟底反映的颜色深浅是否一致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140~160 ℃干热灭菌2小时后备用。
（2）陶瓦圆盖：应平，无凹凸现象。
（3）不锈钢小管：外径7.8±0.1mm，内径6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，重量差异不超过±25mg，钢管内外壁要求光洁，管壁厚薄要一致，两端面要平坦光洁。
（4）小钢管放置器：四孔和六孔各一台。
（5）游标卡尺：精密度0.02mm。
（6）滴管：管口应细长平滑，不得有缺口。
