灭菌与无菌操作

实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！食品论坛昨天消毒和灭菌是微生物实验技术中最基本的操作技术，因此从事药品生产、检验的人员均应了解消毒和灭菌的基本概念、两者的关系，各自的应用方法及其意义，操作时应严格执行相关的操作规程，一方面确保生产与检验工作的效果，另一方面也是对自身安全的保护。

消毒和灭菌的概念：1、消毒：指对病原微生物的繁殖体的致死作用，但不能杀死芽孢等全部微生物，因此消毒是不彻底的，不能代替灭菌。

凡用于消毒的化学药品称为消毒剂，因此人们也常称消毒剂为化学消毒剂。

2、灭菌：杀灭物体中所有活的微生物（含芽孢）的作用，灭菌是采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。

通常用物理方法来达到灭菌的目的。

二、消毒和灭菌的关系1、共性：杀灭微生物以控制其污染和防止传播。

2、区别：消毒灭菌方法目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。

1.干热灭菌法干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120ºC~150ºC的高热，并保持90~120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。

主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。

用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。

酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一。

在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。

2.湿热灭菌法压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。

它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。

适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。

高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0～1.1kg/cm2，维持20～30min即可达到灭菌效果。

无菌操作的定义和注意事项1. 无菌操作的定义无菌操作是指在无菌条件下进行的一系列操作，以防止微生物的污染和传播。

它是实验室、医疗机构和生物制药等领域中必不可少的技术，用于保证实验结果的准确性和产品的质量安全。

无菌操作主要包括以下几个方面：1.1 空气质量控制空气中存在大量的微生物，因此在无菌操作中需要对空气进行控制。

通常采用层流洁净工作台、无尘车间或无菌室来提供洁净环境。

这些设备能够过滤空气中的微生物，并保持洁净区域内的正压，防止外界空气进入。

1.2 消毒与灭菌在进行无菌操作之前，需要对实验器具、工作表面和人员手部进行消毒或灭菌处理。

常用的消毒方法包括酒精擦拭、紫外线照射和高温蒸汽灭菌等。

消毒处理能够有效地杀灭细菌、真菌和病毒等微生物。

1.3 无菌操作技术无菌操作技术包括接种、传递和分离微生物等操作。

在进行这些操作时，需要采取一系列的预防措施，以防止微生物的污染。

使用无菌培养皿和试管、穿戴无菌手套、避免开启培养皿或试管的口部接触空气等。

2. 注意事项在进行无菌操作时，需要注意以下几个方面：2.1 个人卫生在进入洁净区域之前，必须进行充分的个人卫生措施。

这包括洗手、穿戴干净的工作服和佩戴无菌手套等。

还应注意避免打喷嚏、咳嗽或触摸脸部等可能导致微生物传播的行为。

2.2 工作区域清洁工作区域应保持干净整洁，并定期进行清洁和消毒处理。

工作表面应经常擦拭，并使用消毒剂进行处理。

还要定期更换工作台面上的纸巾或吸水垫，以避免积累过多的细菌。

2.3 器具消毒在使用实验器具之前，必须进行消毒处理。

常用的方法包括高温蒸汽灭菌、紫外线照射和化学消毒等。

消毒处理后，要确保器具表面干燥，并在无菌环境下存放，以防止再次受到污染。

2.4 避免交叉污染在进行无菌操作时，要避免不同微生物之间的交叉污染。

这可以通过合理安排实验步骤、使用专用工具和设备等方式来实现。

还要定期更换培养基和试剂的批号，以避免批次间的差异导致的结果误差。

2.5 注意操作技巧在进行无菌操作时，要注意正确的操作技巧。

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文件制修订记录1、目的：规范无菌室中检验工作的质量控制，确保检测结果准确可靠。

2、适用范围：无菌室3、操作规范：3.1 无菌室日常消毒灭菌无菌室无固定程序，但按一般操作应遵循如下规程：3.1.1 操作间和缓冲室使用打开紫外线灯，照射杀菌。

3.1.2 穿上工作服及无菌工作帽、鞋，然后用消毒液洗手。

3.1.3每次无菌操作前，均用用75％的酒精棉球擦拭操作台及可能污染的死角，每次实验前应开启净化系统使运转至少1h以上，开启净化台，用紫外灯照射30分钟以上。

3.1.4如有菌液洒在桌上或地上，立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再进行高压蒸汽灭菌。

工作衣帽等受到菌液污染时，立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。

3.1.5每次工作完毕，生物安全柜或超净台内用75%酒精擦拭台面后，开启紫外线灯照射30min。

对用过的污染物品进行高压灭菌。

然后逐一关闭实验室送风和通风设备。

3.2无菌室定期消毒灭菌3.2.1每两周用经过0.1%新洁尔灭或84消毒液（1:50）浸泡的纱布擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面等，两种消毒剂相互交替使用，然后用5%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后用紫外灯杀菌半小时。

3.2.2如果无菌室长期不用，再使用前需用乳酸熏蒸1～2小时消毒，最后紫外灯杀菌半小时。

3.3无菌室的消毒灭菌，可采取以下几种方法：3. 3.1用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40％甲醛10毫升、高锰酸钾8毫升，进行熏蒸。

使用时，先密闭门窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开无菌室，关紧房门，熏蒸20—30分钟即可。

3. 3.2 乳酸熏蒸：乳酸4～5ml加等量水，使用酒精灯加热蒸发，密闭2～3h。

消毒时最适相对湿度60～80%，低于60%效果下降。

3.3.3 0.1％升汞水消毒：用0.1％升汞水浸过的纱布或海绵进行擦拭，或用喷雾器喷雾灭菌，使箱内的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起来。

无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物学研究和实验的重要场所，其操作规程对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。

本文将详细介绍无菌实验室操作规程的五个部分。

一、实验室准备1.1 清洁与消毒：无菌实验室应定期进行清洁和消毒，确保实验环境的无菌状态。

清洁应使用无菌纱布和无菌溶液，消毒则应选择适当的消毒剂，如酒精或过氧化氢。

1.2 实验器材准备：在进行实验前，必须确保实验器材的无菌状态。

实验器材应经过高温高压灭菌或使用无菌过滤器过滤，确保无菌操作的可靠性。

1.3 个人防护：进入无菌实验室前，实验人员应穿戴适当的个人防护装备，包括无菌手套、口罩和实验服。

这些装备能有效减少外界微生物的污染，保证实验的无菌性。

二、无菌技术操作2.1 消毒操作：在进行无菌实验前，必须进行适当的消毒操作。

这包括用酒精或火焰对实验台面、实验器材和手术刀进行消毒处理，以杀灭表面的微生物。

2.2 灭菌操作：在进行培养基、培养皿等实验材料的制备时，必须进行灭菌操作。

常见的灭菌方法包括高温高压灭菌、紫外线辐射灭菌等，确保实验材料的无菌性。

2.3 采样操作：在进行微生物采样时，必须采取严格的无菌操作。

这包括用无菌棉签或无菌吸管进行采样，避免外界微生物的污染。

三、培养基制备与使用3.1 培养基配制：在制备培养基时，必须按照一定比例将培养基粉末与无菌蒸馏水混合，并进行高温高压灭菌，以确保培养基的无菌性。

3.2 培养基使用：使用培养基时，必须采取无菌技术进行操作。

这包括使用无菌吸管或无菌移液器取出适量的培养基，并将其均匀涂布在培养皿上。

3.3 培养基保存：未使用完的培养基应保存在冰箱或低温冷藏室中，避免细菌的生长和污染。

同时，应定期检查培养基的无菌性，确保其质量。

四、细胞培养操作4.1 细胞传代：在进行细胞培养时，必须进行细胞传代操作。

这包括将细胞从旧培养皿中取出，用无菌吸管或无菌移液器转移到新的培养皿中，以保持细胞的健康和纯度。

4.2 细胞培养液更换：细胞培养液应定期更换，以保持培养液的无菌性和营养成分的充足。

医院清洁消毒与灭菌管理制度内容为了确保医院环境的安全与卫生，预防医院感染的发生，保障患者和医务人员的健康与安全，根据《中华人民共和国传染病防治法》、《医疗机构管理条例》等相关法律法规，结合我院实际情况，特制定本制度。

一、清洁与消毒1. 清洁与消毒是医院感染管理的重要组成部分，各科室应严格执行清洁与消毒管理制度。

2. 各科室应建立清洁与消毒工作责任制，明确清洁与消毒工作的责任人，并定期对责任人进行培训和考核。

3. 清洁与消毒工作应按照规定的程序和标准进行，包括地面、墙壁、家具、医疗设备等的清洁与消毒。

4. 清洁与消毒工作应采用合格的清洁剂和消毒剂，并按照说明书使用，确保消毒效果。

5. 清洁与消毒工作应定期进行，并做好记录，包括清洁与消毒的时间、地点、责任人等。

6. 清洁与消毒工作应遵循安全原则，避免对患者和医务人员造成伤害。

二、灭菌与无菌操作1. 灭菌与无菌操作是医院感染管理的关键环节，各科室应严格执行灭菌与无菌操作制度。

2. 灭菌与无菌操作应由经过专业培训的医务人员执行，并定期对医务人员进行培训和考核。

3. 灭菌与无菌操作应按照规定的程序和标准进行，包括器械的清洗、消毒、灭菌、包装、储存等。

4. 灭菌与无菌操作应使用合格的灭菌设备和方法，并按照说明书使用，确保灭菌效果。

5. 灭菌与无菌操作应定期进行监测，并做好记录，包括灭菌设备的校准、灭菌效果的监测等。

6. 灭菌与无菌操作应遵循安全原则，避免对患者和医务人员造成伤害。

三、清洁与消毒的监督与检查1. 医院感染管理部门应定期对各科室的清洁与消毒工作进行监督与检查。

2. 监督与检查应包括对清洁与消毒工作的程序、标准、记录等的检查，以及对清洁与消毒效果的评估。

3. 监督与检查应做好记录，包括检查的时间、地点、责任人、检查结果等。

4. 对于检查中发现的问题，应及时通知相关科室进行整改，并跟踪整改情况。

5. 医院感染管理部门应定期对灭菌与无菌操作进行监督与检查，确保灭菌与无菌操作的质量和安全。