灭菌、无菌操作技术

无菌操作技术操作步骤无菌操作技术操作步骤无菌操作技术是在实验室研究、制药和医疗领域中至关重要的一项技术。

它的目的是确保实验或制造过程中的杂菌不会污染实验样品或生产产品。

无菌操作技术严格遵循一系列步骤和原则，以确保实验环境和操作器材的无菌状态。

在本文中，我们将介绍无菌操作技术的几个关键步骤，并分享一些附加的实用建议。

1. 清洁工作区域清洁是无菌操作的基础。

在进行无菌操作之前，必须仔细清洁操作台面、实验器具和实验人员所需的材料。

使用消毒剂擦拭工作区域，确保杀灭表面上的细菌和其他微生物。

2. 穿戴无菌实验衣在进行无菌操作之前，所有从事实验的人员都必须穿戴无菌实验衣。

这包括无菌手套、无菌口罩、无菌帽子和无菌长袖护臂套。

这些装备旨在防止人员身上的细菌进入实验环境，同时也保护实验人员免受外界细菌的污染。

3. 灭菌操作器具接下来，必须对将用于实验的仪器、培养基瓶和其他耗材进行灭菌处理。

可以使用高压蒸汽灭菌器（如常见的高压锅）或自动灭菌器进行灭菌。

将操作器具放入灭菌器中，并按照灭菌器的使用说明进行操作。

确保灭菌器将物品完全灭菌。

4. 注意操作手法无菌操作要求操作者对手法非常细致和规范。

在操作过程中，操作者应注意以下几点：a. 尽量避免打开或触摸非无菌区域，避免将细菌带到无菌区域。

b. 打开培养基瓶或实验设备时，应尽量避免与瓶口或设备表面接触。

c. 仅在无菌操作台上进行实验。

台面上的防护膜会防止空气中的微生物进入试验样品。

d. 当操作液体时，注意快速且轻柔地移动容器，以减少空气中的微生物进入。

5. 使用 Bunsen 灯在无菌操作期间，使用 Bunsen 灯是常见的实践，旨在提供一个无菌操作区域。

燃烧 Bunsen 灯会产生上升的气流，将空气中的微生物带走，并创造出一片相对干净的无菌区域。

将 Bunsen 灯置于操作台一侧，并将黄色火焰保持在最适宜的高度。

6. 完成操作后的处理无菌操作完成后，需要对实验区域进行适当的处理。

无菌室消毒灭菌操作规程1、目的：规范无菌室中检验工作的质量控制，确保检测结果准确可靠。

2、适用范围：无菌室3、操作规范：3.1无菌室日常消毒灭菌无菌室无固定程序，但按一般操作应遵循如下规程：3.1.1操作间和缓冲室使用打开紫外线灯，照射杀菌。

3.1.2穿上工作服及无菌工作帽、鞋，然后用消毒液洗手。

3.1.3每次无菌操作前，均用用75%的酒精棉球擦拭操作台及可能污染的死角，每次实验前应开启净化系统使运转至少Ih以上，开启净化台，用紫外灯照射30分钟以上。

3.1.4如有菌液洒在桌上或地上，立即用5%石碳酸溶液或3%的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再进行高压蒸汽灭菌。

工作衣帽等受到菌液污染时，立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。

3.1.5 1.5每次工作完毕，生物安全柜或超净台内用75%酒精擦拭台面后，开启紫外线灯照射30min.对用过的污染物品进行高压灭菌。

然后逐一关闭实验室送风和通风设备。

3.2无菌室定期消毒灭菌1.2.1每两周用经过0.1%新洁尔灭或84消毒液(1:50)浸泡的纱布擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面等，两种消毒剂相互交替使用，然后用5%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后用紫外灯杀菌半小时。

2.2.2如果无菌室长期不用，再使用前需用乳酸熏蒸1〜2小时消毒，最后紫外灯杀菌半小时。

3.3无菌室的消毒灭菌，可采取以下几种方法：4.3.1用甲醛和高锌酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40%甲醛10毫升、高锌酸钾8毫升，进行熏蒸。

使用时•，先密闭门窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锌酸钾，人员随之离开无菌室，关紧房门，熏蒸20—30分钟即可。

3.3.2乳酸熏蒸：乳酸4〜5ml加等量水，使用酒精灯加热蒸发，密闭2〜3ho 消毒时最适相对湿度60〜80乐低于60%效果下降。

3.3.30.1%升汞水消毒：用0.1%升汞水浸过的纱布或海绵进行擦拭，或用喷雾器喷雾灭菌，使箱内的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起来。

无菌操作的定义和注意事项1. 无菌操作的定义无菌操作是指在无菌条件下进行的一系列操作，以防止微生物的污染和传播。

它是实验室、医疗机构和生物制药等领域中必不可少的技术，用于保证实验结果的准确性和产品的质量安全。

无菌操作主要包括以下几个方面：1.1 空气质量控制空气中存在大量的微生物，因此在无菌操作中需要对空气进行控制。

通常采用层流洁净工作台、无尘车间或无菌室来提供洁净环境。

这些设备能够过滤空气中的微生物，并保持洁净区域内的正压，防止外界空气进入。

1.2 消毒与灭菌在进行无菌操作之前，需要对实验器具、工作表面和人员手部进行消毒或灭菌处理。

常用的消毒方法包括酒精擦拭、紫外线照射和高温蒸汽灭菌等。

消毒处理能够有效地杀灭细菌、真菌和病毒等微生物。

1.3 无菌操作技术无菌操作技术包括接种、传递和分离微生物等操作。

在进行这些操作时，需要采取一系列的预防措施，以防止微生物的污染。

使用无菌培养皿和试管、穿戴无菌手套、避免开启培养皿或试管的口部接触空气等。

2. 注意事项在进行无菌操作时，需要注意以下几个方面：2.1 个人卫生在进入洁净区域之前，必须进行充分的个人卫生措施。

这包括洗手、穿戴干净的工作服和佩戴无菌手套等。

还应注意避免打喷嚏、咳嗽或触摸脸部等可能导致微生物传播的行为。

2.2 工作区域清洁工作区域应保持干净整洁，并定期进行清洁和消毒处理。

工作表面应经常擦拭，并使用消毒剂进行处理。

还要定期更换工作台面上的纸巾或吸水垫，以避免积累过多的细菌。

2.3 器具消毒在使用实验器具之前，必须进行消毒处理。

常用的方法包括高温蒸汽灭菌、紫外线照射和化学消毒等。

消毒处理后，要确保器具表面干燥，并在无菌环境下存放，以防止再次受到污染。

2.4 避免交叉污染在进行无菌操作时，要避免不同微生物之间的交叉污染。

这可以通过合理安排实验步骤、使用专用工具和设备等方式来实现。

还要定期更换培养基和试剂的批号，以避免批次间的差异导致的结果误差。

2.5 注意操作技巧在进行无菌操作时，要注意正确的操作技巧。

无菌技术一、目标：1、无菌持物钳：取用或传输无菌敷料、器械等。

2、无菌容器：保持已经灭菌物品处于无菌状态。

3、取无菌溶液法：保持无菌溶液无菌状态。

4、铺无菌盘法：将无菌巾铺在清洁干燥诊疗盘内，形成无菌区，放置无菌物品，以供实施诊疗时使用。

5、戴无菌手套法：实施无菌操作或接触无菌物品时戴无菌手套，以保护患者，预防感染。

6、使用无菌包法：用无菌包布包裹无菌物品用以保持物品无菌状态，供无菌操作用。

二、用物：无菌溶液、无菌手套、无菌诊疗碗包、无菌诊疗巾包、无菌持物钳包、无菌敷料容器、消毒溶液、棉签、弯盘、诊疗盘、另备小标签三、操作步骤：评定环境（环境清洁、宽大、光线充足、定时消毒，适合操作），操作前室内停止清扫，降低走动避免尘埃飞扬，操作台面清洁、干燥、平坦，物品布局合理（操作前用消毒毛巾擦拭诊疗台面及诊疗盘）——无菌操作前着装整齐，修剪指甲，洗手，戴口罩（必需时戴无菌手套及穿隔离衣）——检验用物（1、无菌溶液对光照射无浑浊、变色、无絮状物，瓶口无松动，瓶身无裂痕，在使用期内能够使用。

2、无菌手套包装完好、干燥、在使用期内，型号适宜。

3、无菌诊疗碗包无破损、无潮湿，消毒条码变色，在使用期内。

4、无菌诊疗巾包无破损、无潮湿，消毒条码变色，在使用期内。

5、无菌持物钳包无破损、无潮湿，消毒条码变色，在使用期内。

6、无菌敷料容器消毒条码变色，在使用期内。

7、消毒溶液在使用期内。

8棉签在开包时间内，能够使用。

9、弯盘清洁干燥.9诊疗盘清洁干燥。

10、另备小标签）——打开无菌持物钳包，取出无菌持物筒直立于桌面，将包布折好放于桌面下层，检验消毒试纸变色，弃于医疗垃圾桶，统计开包时间、日期并署名，将持物筒放于适宜位置——打开无菌诊疗巾包，打开存放无菌持物钳容器盖，手持无菌持物钳上1/3处，闭合钳断，垂直取出，关闭容器盖，保持钳端向下，在腰部以上视线范围内活动，用无菌持物钳打开内层包布，检验消毒试纸变色，取一块诊疗巾置于诊疗盘内，用后闭合持物钳钳端，快速垂直放回容器内，将包布折好放于桌面下层——铺无菌盘，双手捏住无菌诊疗巾外面，轻轻抖开，双层平铺于诊疗盘上，将上层呈扇形折于对侧，开口向外——打开无菌诊疗碗外包布，用持物钳打开内包布，检验消毒试纸变色，用无菌持物钳夹取诊疗碗放在诊疗盘内，将包布折叠放妥于桌面下层——取出无菌敷料：去持物钳，打开无菌敷料容器盖，内面向上置于稳妥处或拿手中，用无菌持物钳在无菌容器内夹取无菌敷料防于诊疗碗中——倒取无菌溶液前消毒瓶塞，待干后打开瓶塞，手持溶液瓶，瓶签朝下于掌心，倒出少许溶液旋转冲洗瓶口，再由原处倒出溶液致无菌容器中，倒好溶液后立即盖好瓶塞，再次消毒瓶塞——覆盖无菌盘，双手捏住扇形折叠诊疗巾外面，遮盖于物品上，对折上下层边缘，将开口处向上折叠两次，两侧边缘分别向下折叠一次，露出诊疗盘边缘，在小标签上注明铺盘日期、时间、签全名，放于无菌盘左上方——在无菌溶液瓶上注明开瓶日期、时间、使用方法并署名——将无菌盘置于诊疗车上，携至病房——戴无菌手套：将无菌手套袋平放于诊疗车上，打开外包装，两手同时掀开手套袋开口处，用一手拇指和食指同时捏住手套反折面部位取出手套，将两手套拇指对准，先戴一只手，再以带好手套手插入另一手套反折面内面，戴好另一只手套，若操作者工作服为长袖，应将手套翻边扣在工作服衣袖外面，双手对合交叉检验是否漏气，调整手套位置——脱手套，戴手套手捏住另一手套腕部外面，翻转脱下，再将脱下手套手伸入另一手套内捏住内面边缘，将手套翻转脱下，放入医疗垃圾桶内——洗手。

哪些技术是无菌操作方法无菌操作是一种用于处理和制备无菌条件下的实验样品或制造无菌产品的技术方法。

它可以有效地防止微生物的污染和传播，确保实验结果的准确性和产品的安全性。

以下是一些常见的无菌操作技术：1. 灭菌：灭菌是无菌操作的基础。

它是使实验室设备、培养基、介质等无菌的过程。

灭菌的方法包括高温灭菌、化学灭菌和辐射灭菌。

高温灭菌是通过加热到高温杀灭微生物，常用的方法有干热灭菌和湿热灭菌。

化学灭菌可以使用消毒剂如酒精、过氧化氢和醋酸进行杀灭微生物。

辐射灭菌则利用紫外线、X射线或γ射线辐射杀灭微生物。

2. 空气过滤：空气过滤是一种通过过滤器将空气中的微生物去除的无菌操作方法。

常见的过滤器有HEPA过滤器和微生物过滤器。

空气过滤可以应用于实验室环境中，以保持操作区域的洁净无菌，还可以应用于工业生产过程中，用于防止空气中的微生物污染。

3. 无菌技术柜：无菌技术柜是一种密闭且通过高效过滤器供给无菌气流的设备。

它可以提供无菌操作区域，有效阻止微生物的进入和传播。

无菌技术柜常用于微生物学实验室和制药工厂中，用于处理和制备无菌条件下的试样和产品。

4. 手部消毒：手部是微生物最容易滋生和传播的部位，因此手部消毒是无菌操作中非常重要的步骤。

手部消毒一般可以通过洗手液进行常规清洁，再用含酒精的手消毒剂进行消毒。

在无菌操作过程中，操作人员需要经常进行手部消毒，以保持无菌条件。

5. 工作台消毒：无菌操作中的工作台也需要进行定期的消毒。

消毒可以使用含有酒精或其他消毒剂的湿纸巾或棉球进行，以彻底清除表面的微生物污染。

6. 无菌培养：无菌培养是一种在无菌条件下进行细菌培养的技术。

它可以通过提供无菌的培养基和无菌的操作环境，使细菌在无菌状态下生长。

无菌培养常用于微生物学实验室中研究微生物的生长和代谢特性。

7. 无菌包装：无菌操作在制造无菌产品中也起着至关重要的作用。

无菌包装是将产品包装在无菌条件下，以防止微生物污染。

常见的无菌包装方法包括热灭菌包装和接触无菌包装。

灭菌与无菌操作技术概述采用灭菌与无菌操作技术的主要目的是：杀灭或除去所有微生物繁殖体和芽孢，最大限度地提高药物制剂的安全性，保护药物制剂的稳定性，保证制剂的临床疗效。

因此，有效的灭菌方法和正确的操作方式对药品的质量至关重要。

灭菌与无菌操作技术是注射剂、输液剂、滴眼剂、创面用制剂、手术用制剂等灭菌与无菌制剂质量控制的重要保证，也是制备这些制剂必不可少的单元操作。

根据各种制剂或生产环境对微生物的限定要求不同，可采取不同措施，如灭菌、无菌操作、消毒、防腐等。

1）灭菌和灭菌法①灭菌。

是指用适当物理或化学等方法杀灭或除去所有致病和非致病微生物繁殖体和芽孢的手段。

②灭菌法。

是指杀灭或除去所有致病和非致病微生物繁殖体和芽孢的方法或技术。

2）无菌和无菌操作技术①无菌。

是指在指定物体、介质或环境中，不得存在任何活的微生物。

②无菌操作技术。

是指在整个操作过程中利用或控制制剂避免被微生物污染的操作方法或技术。

3）灭菌制剂、无菌制剂和非无菌制剂（限菌制剂）根据人体对环境微生物的耐受程度，《中国药典》（2015版）将制剂分为无菌制剂、灭菌制剂和非无菌制剂（限菌制剂）。

灭菌制剂与无菌制剂主要用于注射给药、手术时使用或外伤患部的局部给药，因此在生产过程中需要采用一系列的特殊技术对工艺过程进行严格控制，最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。

目前主要应用的技术有：生产用水的处理技术、液体过滤技术、微生物和热原去除技术、生产环境的洁净度控制技术等。

①无菌制剂。

是指在无菌环境中采用无菌操作法或无菌技术制备的不含任何活的微生物繁殖体和芽孢的一类药物制剂。

②灭菌制剂。

是指采用某一物理、化学方法杀灭或除去所有活的微生物繁殖体和芽孢的一类药物制剂。

③非无菌制剂。

（限菌制剂）是指允许一定限度的微生物存在，但不得有规定控制菌存在的一类药物制剂。

药剂学中灭菌法可分为物理灭菌法、化学灭菌法。

物理灭菌法利用蛋白质与核酸具有遇热、射线不稳定的特性，采用加热、射线和过滤方法，杀灭或除去微生物的技术称为物理灭菌法，也称物理灭菌技术。