Na+K+- ATP酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号Kinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0150S Kinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂盒 1000次 S0150MKinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂盒10000次产品简介：Kinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Luminescent Kinase Assay Kit )，是一种通过化学发光法测定激酶反应后溶液中ATP 的剩余量(最高可达10μM)来定量检测激酶活性的试剂盒。

本试剂盒也可用于检测任何消耗ATP 的酶，例如ATPase 。

本试剂盒可以检测反应体系中浓度最高为10μM 的ATP ，并在0-10μM 范围内有良好的线性关系。

对于更高浓度的ATP ，可以选购检测浓度上限为50μM 的Kinase-Lumi™增强型化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Plus Luminescent Kinase Assay Kit )或上限为200μM 的Kinase-Lumi™超强型化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Max Luminescent Kinase Assay Kit )，或者需要适当稀释后再进行检测。

另外两个试剂盒分别在0-50μM 和0-200μM 范围内有良好的线性关系。

本试剂盒应用范围广，适用于各类消耗ATP 的激酶，包括以蛋白或多肽为底物的蛋白激酶和以糖、脂、醇等为底物的非蛋白激酶。

本试剂盒也同样适用于检测消耗ATP 的ATPase 。

本试剂盒的检测激酶活性的原理参考图1。

激酶在反应过程中催化ATP 上的磷酸基团转移到底物的羟基上，从而使ATP 转变为ADP ，这样就可以根据ATP 的减少量来定量激酶的活性。

ATP 含量测定试剂盒简化说明书一、所需仪器可见分光光度计、恒温水浴锅、漩涡混匀器 样本前处理：○ 红细胞：抗凝全血取下层压积红细胞，一般按1：4的体积比加双蒸水进行稀释，再混匀使溶血完全，制备成溶血液。

将制好的溶血液加入玻璃试管中沸水加热煮10分钟，流水冷却后，4000转离心10分钟，取出混匀抽提1分钟，取上清液待测。

○ 组织样本：称重后，剪碎，按重量体积比（W/V）1：9加入沸双蒸水，在沸水中匀浆，制成10%的匀浆液，再置于沸水浴中煮10分钟，取出混匀抽提1分钟，4000转/分离心10分钟，取上清液待测。

○ 培养细胞：先离心处理将细胞核培养上清分离，除去培养上清，得到下层沉淀细胞（一般细胞数量达到106），将收集好的细胞加入300-500μl热双蒸水，置于热水浴（90-100℃）中匀浆破碎，后将细胞悬液于沸水浴中加热10分钟，取出混匀抽提1分钟，即可用于测定。

注：混匀抽提1分钟即为漩涡混匀1分钟。

二、操作步骤：旋涡混匀，37°C 水浴30分钟试剂四：蛋白沉淀剂 50 50 50 50 充分混匀后， 4000rmp/min 离心5分钟，取上清液210ul 进行测定试剂五：显色液500500500500混匀，室温静置2分钟试剂六：终止剂 500 500 500 500室温静置5分钟，在636nm 处0.5cm 光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值。

注：在比色前比色皿用自来水洗10余次，再用蒸馏水洗4～5次，以免磷污染。

五、计算公式及举例：① 红细胞中ATP 含量计算公式：(/)0.05/BBATP mmol gHb U U mmol L S S −=××÷−−=×××÷−浓度测定管对照管标准浓度样本测定前稀释倍数血红蛋白含量（Hbg/L)标准管标准空白管 样本测定前稀释倍数血红蛋白含量（Hbg/L)② 组织中ATP 含量计算公式：(/gprot)0.05/BBATP mmol U U mmol L S S −=××÷−−=×××÷−浓度测定管对照管标准浓度样本测定前稀释倍数蛋白含量（gprot/L)标准管标准空白管 样本测定前稀释倍数蛋白含量（gprot/L)。

（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®ATP含量比色法测试盒ATP Colorimetric Assay Kit产品货号：E-BC-K157-S产品规格：50 assays(24 samples)/100 assays(48 samples)检测仪器：紫外-可见光分光光度计(636 nm)使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。

请在保质期内使用试剂盒。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。

用途本试剂盒适用于检测动物组织样本中A TP的含量。

检测原理肌酸激酶催化肌酸和A TP 反应生成磷酸肌酸，通过比色法检测磷酸肌酸的含量，以此反应出A TP的含量。

提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。

对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。

所需自备物品仪器：紫外-可见光分光光度计(636 nm)、水浴锅(100°C )试剂：双蒸水、生理盐水(0.9% NaCl)试剂准备①检测前，所有的试剂平衡至室温。

②试剂二工作液的配制向试剂二中加入6 mL双蒸水，拧紧瓶盖，放入沸水中水浴使其完全溶解；使用前观察到有结晶析出，可沸水浴溶解后，放置37℃保存待用。

使用完后2-8℃保存7天。

③试剂四工作液的配制：取1.8mL双蒸水加入到试剂四中，充分溶解后放置冰盒上待用。

使用完后-20℃保存7天。

④对照工作液的配制：按试剂二工作液：试剂三：双蒸水=100：200：30的比例配制，现用现配，按需配制。

测定工作液的配制：按试剂二工作液：试剂三：试剂四工作液=100：200：30的比例配制，现用现配，按需配制。

⑤显色剂工作液配制：按试剂六：试剂七=3：1配制，37℃放置1小时，现用现配，按需配制。

ATP酶活性检测试剂盒（样本无需高速离心样本无需高速离心，，可测Na+k+、Ca2+Mg2+、Ca2+、Mg2+_ATPase)说明书修订日期：2019.01.22 Cat number：KGT026Store at -20 for for 6 months℃For Research Use Only（科研专用）一、试剂盒介绍ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用。

本试剂盒的测定原理是依据ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。

本试剂盒可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATPase。

二、试剂组份组份名称KGT02650tests保存条件试剂A 10mL×3试剂B 10mL×1试剂C 10mL×12-8℃试剂D 粉剂×3 -20℃试剂E 粉剂×1试剂F 粉剂×12-8℃试剂G 10mL×2 RT试剂H 粉剂×3试剂I 粉剂×12-8℃试剂J：2.5 mol/L 硫酸100mL×1 RT 试剂K：10 m mol/L 标准磷储液10mL×1 2-8℃试剂D：-20℃以下保存6个月。

用时每支加双蒸水至5ml，现用现配。

余下的-20℃以下可保存一周。

试剂E：用时每支加双蒸水至5ml，适当加热溶解，4℃保存3个月。

试剂F：用时每支加双蒸水至10ml[注1]，充分加热使其完全溶解，室温保存。

试剂H：用时每瓶加双蒸水至40ml溶解，（溶解后避光4℃可保存一周）。

试剂I：用时加水至100ml溶解，室温保存3个月。

0.5umol/ml标准磷工作液配制：用时将试剂K作20倍稀释: 取0.5ml加蒸馏水定容至10ml。

定磷剂的配制：按双蒸水：2.5mol/L硫酸：试剂H：试剂I=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书分光光度法50管/24样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。

AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。

测定原理：在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。

自备仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。

标准品：液体×1支（EP管中），2 μ mol/mL酚标准液，4℃保存。

粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g离心10min，取上清液待测。

2. 细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。

测定步骤：1. 分光光度计预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。

3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A空白管。

ATP含量试剂盒使用说明一、试剂盒的组成1.ATP酶：可催化ATP与啶酮核苷酸底物反应，产生荧光发射。

2.底物液：包含啶酮核苷酸底物、辅酶CoA、磷酸化底物和缓冲液等成分。

3.酶反应终止液：用于停止ATP酶的活性，停止荧光信号的产生。

4.荧光标准品：已知浓度的ATP溶液，用于绘制标准曲线。

5.读取缓冲液：用于在荧光分析仪上读取荧光信号。

二、使用步骤1.试剂室温平衡：将试剂盒中的所有试剂恢复到室温，并确保所有试剂充分均匀混合。

2.样品预处理：根据实验需要，选择合适的方法提取细胞或组织中的ATP，并计算样品的蛋白质含量。

3.准备标准曲线：取不同浓度的荧光标准品，并用读取缓冲液稀释到一系列已知浓度的溶液。

每个浓度至少重复3次。

将这些标准品稀释到试管中。

4.样品处理：将不同待测样品分别加入到试管中，各样品至少重复3次。

同时加入空白对照组，只加读取缓冲液而无待测样品。

5.加入试剂：将相应体积的底物液加入到每个试管中，充分混合。

立即向每个试管中加入适量的ATP酶，同时进行混合。

6.反应：将试管密封，并在37℃下孵育一段时间，一般为10-30分钟。

7.停止反应：向每个试管中加入相应体积的酶反应终止液，停止ATP酶的活性，停止荧光信号的产生。

8.读取荧光：将每个试管置于荧光分析仪上，使用适当的激发波长和发射波长对荧光信号进行测量，记录下荧光单位值。

9.绘制标准曲线：将标准曲线上的荧光单位值与标准品的ATP浓度进行对应，绘制标准曲线。

10.计算样品ATP含量：根据样品荧光单位值和标准曲线，计算出样品中的ATP含量。

三、注意事项1.所有试剂的操作应按照试剂盒说明进行，不同品牌可能有些许差异，应严格按照相应说明进行操作。

2.手术操作时应采取无菌操作，避免对样品的污染。

3.混合试剂时需充分振荡，确保试剂均匀混合。

4.在实验过程中，所有试管、吸头等实验用具应标注清楚，避免混淆和误操作。

5.反应时间会影响结果，不同实验目的可根据需要进行时间的调整，一般30分钟内可得到稳定的信号。

过氧化氢酶（CAT ）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0200规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一液体60 mL×1瓶4℃保存试剂二液体320 μL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：液体置于试剂瓶内EP 管中，使用前需先离心。

2、检测工作液的配制：取100μL 试剂二加入20mL 试剂一，充分混匀（约20T ），作为工作液，现用现配；或者根据比例配制。

产品说明：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H 2O 2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H 2O 2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备a 、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（功率200w ，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

b 、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积（mL ）为1：5-10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

ATP酶测试盒说明书（简化版）（可测Na+-k+、Ca2+-Mg2+、Ca2+、Mg2+-ATPase）此试剂盒可测不需要高速离心的红细胞膜以及不需要高速离心的组织匀浆中的ATPase。

100管/96样一、测定原理：ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。

二、试剂组成与配制：试剂一：液体10ml×3瓶，4℃保存6个月。

试剂二：液体10ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂三：液体10ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂四：粉剂×3支，-20℃以下保存6个月。

用时每支加蒸馏水至5ml，现用现配。

余下的-20℃以下可保存一周。

试剂五：粉剂×1支，4℃保存6个月。

用时加蒸馏水至5ml，适当加热溶解，4℃保存3个月。

试剂六：粉剂×1支，4℃保存6个月。

用时加蒸馏水至10ml，充分加热使其完全溶解，室温保存。

试剂七：液体10ml×2瓶，室温保存6个月。

试剂八：粉剂×3瓶，4℃保存6个月。

用时每瓶加水至40ml溶解。

（溶解后避光4℃可保存一周）。

试剂九：粉剂×1瓶，4℃保存6个月。

用时加水至100ml溶解，室温保存3个月。

试剂十：液体100ml×1瓶，室温保存6个月。

试剂十一：10mmol/L标准磷贮备液10ml×1瓶，4℃保存6个月。

0.5μmol/ml标准磷应用液配制：用时将贮备液20倍稀释，即取0.5ml加蒸馏水定容至10ml。

定磷剂的配制：按试剂八：试剂九：蒸馏水：试剂十=1：1：2：1的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

三、试剂组成与配制：试剂一：液体10ml×6瓶，4℃保存6个月。

试剂二：液体10ml×2瓶，4℃保存6个月。

试剂三：液体10ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂四：粉剂×5支，-20℃以下保存6个月。

过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0200规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一液体60 mL×1瓶4℃保存试剂二液体320 μL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前需先离心。

2、检测工作液的配制：取50μL试剂二加入13mL试剂一，充分混匀（约13T），作为工作液，现用现配；或者根据比例配制。

产品说明：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能够分解H2O2，使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备a、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（功率200w，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

b、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC0190规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存粉剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂一液体40 mL×1瓶4℃保存试剂二液体10 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：临用前将粉剂一倒入提取液中，溶液为悬浊液，使用前需摇匀。

产品简介：PPO主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在410nm有特征光吸收。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

2.称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

3.血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管对照管试剂一600600试剂二150150样本150煮沸的样本15037℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，迅速放入沸水中加热10min。

冷却后，5000g，常温离心10min，收集上清，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。

ATP含量检测试剂盒（可见分光光度法）使用说明注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0300规格：100T/48S产品内容：组分规格保存试剂一底物液Ⅰ粉剂×1瓶室温保存底物液Ⅰ配制：用时加10mL煮沸双蒸水溶解，并沸水浴使溶解完全；临用前观察如有结晶，可沸水浴溶解后置于37℃保存待测。

试剂二底物液Ⅱ20mL×1瓶4℃保存试剂三促进剂粉剂×2支-20℃保存稀释液760μL×2瓶4℃保存试剂三应用液（促进剂）配制：临用前取1支试剂三稀释液加入1支试剂三粉剂中，充分溶解备用。

试剂四沉淀剂液体 5.5mL×1瓶4℃保存试剂五显色剂甲液7mL×4瓶4℃保存乙液6mL×4瓶4℃保存显色应用液的配制：用时取一瓶显色剂甲液加入一瓶显色剂乙液中，充分混匀4℃待用，现用现配。

试剂六终止剂50mL×1瓶室温保存试剂七ATP标准品粉剂×2支4℃保存5mmol/L ATP标准品贮备液配制：用时加双蒸水定容至1mL，制备5mmol/L ATP标准品贮备液。

1mmol/L ATP标准品应用液配制：将标准品贮备液与双蒸水1:4稀释，即5倍稀释。

产品说明：三磷酸腺苷（adenosine5'-triphosphate，ATP）是生物体内能量转换最基本的载体,其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。

ATP作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。

ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。

通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。

通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生状态。

ATP含量测定试剂盒可以用于检测红细胞或组织内的ATP水平。

自备仪器和用品：分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、台式离心机、研钵和蒸馏水。

ATP含量测试盒说明书化学发光法一、测定意义：三磷酸腺苷（Adenosine 5'-triphosphate，ATP）是生物体内能量转换最基本的载体, 其含量的变化直接关系到各器官的能量代谢。

ATP作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。

ATP水平的改变，会影响许多细胞的功能。

通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下，ATP水平会下降，而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。

通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降，在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。

二、测试原理：本试剂盒根据萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)催化荧光素产生荧光时需要ATP提供能量研制而成。

当萤火虫荧光素酶和荧光素都过量时，在一定的浓度范围内荧光的产生和ATP的浓度成正比。

这样就可以高灵敏地检测溶液中的ATP浓度。

本试剂盒在样品体积为100μl时可以检测浓度低达1nmol/L的ATP。

而常规的细胞或组织裂解液中ATP的浓度仅为0.1- 1μmol/L，一些常见细胞的细胞内ATP水平约为10nmol/mg 蛋白。

三、试剂组成及配制：（200T）试剂组成试剂名称包装规格R1 裂解液 100mlR2 底物酶贮备液 0.5ml×4支R3 底物酶稀释液 20ml临用前，取适量的酶贮备液，用酶稀释液按照1:9的比例稀释，配制成酶工作液。

现用现配。

R4 标准品 0.1ml 四、保存条件：-20℃保存6个月。

-80℃可保存一年。

底物酶贮备液需避光保存。

五、样本前处理：1、贴壁细胞：吸除培养液，按照6孔板每孔加入200μl裂解液裂解细胞。

裂解细胞时为了裂解充分，可以使用移液器进行反复吹打，或晃动培养板使裂解液充分接触并裂解细胞。

通常细胞在接触裂解液后会立即裂解。

裂解后4℃,12000g离心5分钟，取上清，用于后续的测定。

2、悬浮细胞：用离心管离心沉淀细胞，弃上清，轻轻弹散细胞，按照6孔板每孔加入200μl裂解液裂解细胞。

可见分光光度法辅酶ⅠNAD(H)含量检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号:UPLC-MS-4338规格:50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件酸性提取液液体15mL×1瓶4℃保存碱性提取液液体15mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二液体6mL×1瓶4℃保存试剂三液体16mL×1瓶4℃保存试剂四液体3mL×1瓶-20℃保存试剂五液体40mL×1瓶4℃保存试剂六液体75mL×1瓶（自备）常温保存NAD标准品粉剂×1支-20℃保存NADH标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂三：需要严格避光；2、试剂六：72mL乙醇和3mL蒸馏水混合，备用；3、NAD标准品：临用前加入1.5mL蒸馏水，即2µmol/mL，将其稀释为1.25nmol/mL的NAD标准溶液备用；4、NADH标准品：临用前加入1.4mL蒸馏水，即2µmol/mL，将其稀释为1.25nmol/mL的NADH标准溶液备用。

产品说明：辅酶I包括还原型和氧化型两种形式，在生物氧化中起传递氢的作用。

氧化型辅酶I又称烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）是脱氢酶的辅酶，它在糖酵解、糖异生、三羧酸循环和呼吸链中发挥着不可替代的作用。

中间产物会将脱下的氢递给NAD，使之成为NADH（还原型辅酶I）。

而NADH则会作为氢的载体，在呼吸链中通过化学渗透偶联的方式，合成ATP。

NAD(H)在机体内有重要的生理意义，与物质代谢、能量代谢、抗细胞衰老、抗氧化以及一些疾病的发生密切相关。

体内辅酶I含量降低会导致细胞损伤或衰亡。

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值，NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。

ATP-柠檬酸裂解酶（ACL）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC4240规格:50T/48S产品简介：ATP-柠檬酸裂解酶（ATP-citrate lyase，ACL）是催化柠檬酸生成乙酰辅酶A的关键胞质酶，其催化产生的乙酰辅酶A是合成脂肪酸与胆固醇等脂类物质的主要原料，并可参与相关重要蛋白的修饰作用，是体内能源物质代谢的枢纽性物质。

在ATP和辅酶A存在的情况下，ACL能将柠檬酸催化裂解为乙酰辅酶A、草酰乙酸、ADP和磷酸盐，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，导致340nm处光吸收下降。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、天平、台式低温离心机、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、水浴锅、冰盒。

产品内容：提取液一：液体50mL×1瓶，4℃保存；提取液二：液体0.5mL×1支，-20℃避光保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃避光保存。

临用前加入1mL试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。

临用前加入5mL试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂四：粉剂×1支，-20℃避光保存。

临用前加入1mL试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；试剂五：液体30μL×1支，4℃避光保存。

临用前加入1mL试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；提取液的配制：按提取液一︰提取液二=990︰10（V︰V）的比例配制，根据样本量现配现用，禁止将提取液二一次性全部加入提取液一混匀分装待用。

操作步骤：一、粗酶液的提取：组织：按照质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。