第六章免疫比浊分析
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透射比浊法的基本原理是测定一定体积的溶液通过的光线量,当光线通过时,由于溶液中存在的抗原抗体复合物粒子对光线的反射和吸收,引起透射光的减少,测定的光通量和抗原抗体复合物的量成反比。
(一)原理抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物(IC),当光线透过反应溶液时,由于溶液内复合物粒子对光线的反射和吸收,引起透射光减少,免疫复合物量越多,透射光越少,即光线吸收越多,可用吸光度表示。
吸光度和复合物的量成正比,当抗体量固定时,与待检抗原量成正比。
用抗原标准品建立标准曲线,可测出待检抗原含量。
(二)实验要求 1.溶液中存在的抗原抗体复合物分子应足够大,分子太小则阻挡不了光线的通过。
2.溶液中抗原抗体复合物的数量要足够多,如果数量太少,溶液浊度变化不大,对光通量的影响不大。
3.透射比浊是依据溶液中颗粒形成或增加而使透射光减弱的原理来定量检测抗原,检测仍需抗原抗体反应的温育时问,检测时间较长。
4.检测用抗体一般应选择高亲和力的抗体,在检测中要保证抗体过量。
应制备标准曲线。
免疫比浊法原理
免疫比浊法是一种常用于生物化学和免疫学领域的实验方法,它通过测定抗原
与抗体结合后形成的免疫复合物的光学密度来定量分析抗原或抗体的含量。
这种方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,因此在医学诊断、生物学研究等领域得到了广泛应用。
免疫比浊法的原理主要是利用抗原与抗体结合后形成的免疫复合物对光的散射
或吸收产生影响,从而实现对抗原或抗体含量的测定。
具体来说,当抗原与抗体结合形成免疫复合物后,会使溶液中的颗粒浓度增加,导致溶液的浊度增加,从而使溶液对光的散射或吸收增强。
通过测定溶液的光学密度,就可以间接地反映出抗原或抗体的含量。
在进行免疫比浊法实验时,首先需要将待测样品与相应的抗体进行反应,形成
免疫复合物。
然后利用光度计或比色皿等设备,测定样品溶液的光学密度。
通过比较待测样品与标准曲线的关系,就可以计算出样品中抗原或抗体的含量。
免疫比浊法在实际应用中具有广泛的适用性。
例如,在医学诊断中,可以利用
免疫比浊法来检测血清中特定蛋白质的含量,从而辅助诊断各种疾病。
在生物学研究中,可以利用免疫比浊法来分析细胞表面分子的表达情况,研究免疫应答过程等。
此外,免疫比浊法还可以用于药物的药效学研究、环境监测等领域。
总之,免疫比浊法作为一种常用的免疫学实验方法,具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,适用于各种领域的抗原或抗体含量的定量分析。
通过对免疫复合物对光的散射或吸收进行测定,可以实现对抗原或抗体含量的准确测定,为医学诊断、生物学研究等领域提供了重要的实验手段。
免疫比浊法伪浊度的原因和处理方法做分析和总结。
免疫浊度分析法包括透射免疫比浊法、散射免疫比浊法、免疫乳胶浊度测定法等。
免疫浊度分析由于其反应的特殊性,决定了该方法容易受到抗体性质和质量、抗原抗体的比例以及检测体系等一系列因素的影响。
1、抗体质量免疫比浊测定法要求抗体的特异性强、效价高,亲和力强。
特异性差的抗血清,由于含有大量杂抗体,反应后可形成非特异性浊度(“伪浊度”),出现假性升高。
使用低效价(<1:20)抗体会使试剂消耗增多,同时也可增加“伪浊度”的产生。
2、抗体类型根据抗血清来源的动物种类不同,抗体可分为R型 (rabbit type)和H 型(horse type)。
R型抗体亲和力较强,与抗原结合后不易解离,在抗体过剩时易形成大而稳定的复合物;但抗原过剩时,则形成可溶性复合物。
H型抗体亲和力弱,抗原、抗体结合后极易解离,而且抗原或抗体过剩易形成可溶性复合物。
R型抗体是用于免疫比浊测定的较为理想的试剂。
R型 H型抗体的定义总结1、用沉淀反应对不同来源的免疫血清进行比较后,可将抗体按等价带范围大小分为两种类型,即R型抗体和H型抗体。
R型抗体的等价带较宽,具有较大的抗原、抗体合适比例范围,与相应抗原结合易出现可见的抗原-抗体复合物,仅在抗原过量时,才出现小分子的可溶性抗原-抗体复合物,如兔、羊的免疫血清。
H型抗体的等价带较窄,其抗体与抗原的合适比例范围较窄,抗原或抗体过量,均可形成可溶性免疫复合物,如马、人的免疫血清。
2、抗原、抗体比例抗原和抗体的比例是浊度形成的关键因素,抗原和抗体必须在一个适当的浓度才会出现最高结合率。
当抗原过量时,形成的免疫复合物分子小,而且会发生解离,使浊度下降,光散射减少;当反应液中抗体过量时,免疫复合物的形成随着抗原量的增加而递增,光散射的强度也随之递增。
因此,免疫浊度测定的反应体系中必须始终保持抗体过量,以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一致,这是免疫浊度测定的基本原则。