黑果枸杞类黄酮的提取和精制工艺研究

《生物技术制药》实验报告学院生命科学技术学院班级：13级生物技术制品方向姓名：梁生电话：188********同组姓名 : 李旭斌指导教师：栗孟飞副教授日期：16年10月31日——16年11月2日黑枸杞果实总黄酮、酚类以及抗氧化能力的测定摘要：为了探明黑枸杞成熟果实中总黄酮、酚类的提取的最佳方案，以及抗氧化能力强弱，以成熟的黑枸杞为材料，采用分光光度法对 10%和 70%乙醇不同提取时间的提取液中总黄酮和酚类以及抗氧化能力进行测定。

结果表明，黑枸杞在10%乙醇提取液中总黄酮量几乎一样，在70%的乙醇提取液中总黄酮含量波动较大，初步推测是实验误差所致。

此外在70%乙醇提取液中总黄酮量微高于10%。

由图2可知，10%和70%乙醇提取液中总酚的含量几乎一样。

在利用DPPH和FRAP法测得的10%和70%乙醇提取液抗氧化能力结果中，随着时间的推移，黑枸杞提取液的抗氧化女人哪能力几乎无明显变化，同时黑枸杞70%乙醇提取液的抗氧化能力均分别高于10%乙醇提取液。

该研究结果将对黑枸杞的药用价值的合理开发与利用提供主要依据和参考价值。

关键词：黑枸杞；黄酮；抗氧化能力；酚类宁夏枸杞的果实枸杞子是名贵的中药，历代《本草》对枸杞的功效均有论述[1]。

中国药典记载枸杞子有滋肝补肾、益精明目的作用，近代中医临床将它作为滋补强壮剂[2]，其还具有促进造血、降血脂及治疗神经衰弱等多种药理作用[3]。

藏医用于治疗心热病、心脏病、降低胆固醇、兴奋大脑神经、增强免疫功能、防治癌症、抗衰老、美容养颜、月经不调、停经等且药效显著。

1 材料与方法1.1 实验材料成熟黑枸杞果实采自宁夏回族自治区中卫县。

1.2 实验方法1.2.1 提取液的制备取干燥的实验材料，粉碎过 80 目筛；准确称取 1.0 g 粉末，分别用 35mL 10%和 70%乙醇在室温条件下提取 2 h、4h、8h、12h；每次吸取上清液 2ml 于10ml 离心管中，获得 2 ml 提取液用于总黄酮、总酚类以及抗氧化能力测定。

黑果枸杞色素最佳提取工艺研究目的研究黑果枸杞色素的最佳提取工艺条件。

方法通过单因素和多因素正交试验，对影响提取物中色素含量的各因素进行了研究。

结果影响黑果枸杞色素提取率的因素大小依次为：固液比>溶剂比>浸提温度>浸提时间。

黑果枸杞色素的最佳提取工艺条件为5%盐酸和85%乙醇混合溶剂做浸提剂，溶剂比1∶1，提取温度70 ℃，提取时间4 h，固液比1∶20。

结论优选的工艺稳定可行。

标签：黑果枸杞；色素；提取；正交试验黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr）为茄科（Solanaceae）枸杞属（Lycium L.）植物，药用部位为干燥的果实。

黑果枸杞分布于我国西北地区，具有补肾益精、养肝明目、补血安神、生津止渴、润肺止咳等功效[1]。

黑果枸杞含有人体必须的脂肪酸和8种人体必须的氨基酸，还有一定量的维生素C[2]。

其成熟浆果富含紫红色素，是一种珍稀的天然花色苷类色素资源，该色素含量达387.9 mg/100 g[3]，对环境无污染，有望成为化妆品、制药、饮料和食品的着色剂，具有很高的开发利用价值和前景[4]。

现代药物学研究认为，枸杞色素是枸杞中的重要生物活性成分之一，主要包括类胡萝卜素和少量叶黄素及其他有色物质[5]。

有关黑果枸杞各因素最佳提取工艺的研究报道较少，本研究通过单因素试验优选了最佳提取溶剂，同时研究了黑果枸杞色素提取过程中温度、时间、溶剂配比、料液配比等多种因子对提取率的影响，旨在选择各个影响因素的最佳提取条件，确定最佳的提取工艺参数，为黑果枸杞色素的开发利用提供理论和技术支撑。

1 仪器与试药752型紫外可见分光光度计（上海色谱仪器有限公司），粉碎机，电子分析天平，恒温水浴锅，50 mL量筒，25 mL具塞试管，60 mm口径漏斗等。

黑果枸杞（购于兰州复兴厚中药材有限公司，经甘肃农业大学中草药系陈垣教授鉴定为黑果枸杞Lycium ruthenicum Murr）的干燥成熟果皮，粉碎成40目后备用。

专利名称：一种黑枸杞总黄酮的提取方法专利类型：发明专利
发明人：杨鑫
申请号：CN201811028506.8
申请日：20180905
公开号：CN109010504A
公开日：
20181218
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于生物与新医药中轻工和化工生物技术的天然产物有效成份的分离提取技术，涉及植物提取物领域，具体为一种黑枸杞总黄酮的提取方法。

该方法首先采用超微粉碎技术制备得到黑枸杞微粉后，利用微波对微粉进行处理；然后利用超声辅助的离子液体‑盐双水相体系对黑枸杞微粉中的总黄酮进行萃取；最后依次采用超滤，柱层析谱以及超临界流体萃取对黑枸杞总黄酮进行纯化。

该方法制备的黑枸杞总黄酮纯度高，抗菌作用明显，可以直接作为食品保健品的功能添加剂。

申请人：杨鑫
地址：361000 福建省厦门市集美区集美大道668号
国籍：CN
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黑果枸杞多糖的分离纯化及抗氧化活性研究黑果枸杞是一种传统的药用和保健植物，被广泛应用于中药制剂、健康食品和保健品等领域。

它富含多种成分，其中黑果枸杞多糖是其重要的活性成分之一。

本文将重点探讨黑果枸杞多糖的分离纯化方法以及其抗氧化活性。

首先，本研究选取优质的黑果枸杞作为研究对象。

经过采摘、清洗、晾干等处理步骤后，将黑果枸杞粉碎并进行提取。

采用常规的水煮法提取方法，将黑果枸杞与适量的水混合煮沸，然后过滤得到提取液。

接下来，采用酒精沉淀法将提取液中的多糖沉淀得到多糖样品。

随后，使用超滤和凝胶渗透色谱等技术对多糖样品进行分离纯化。

首先，采用超滤技术将大分子的杂质去除，得到较为纯净的多糖样品。

然后，将多糖样品经过经典的凝胶渗透色谱技术进行进一步分离。

通过调节填料和溶剂体系，可以分离出多种不同大小和结构的多糖组分。

分离纯化得到黑果枸杞多糖后，使用一系列的物化性质和化学分析方法对其进行表征。

例如，使用紫外光谱和红外光谱技术分析黑果枸杞多糖的吸收峰和波谱特征，以确定其结构和功能基团。

同时，还可以采用高效液相色谱技术对多糖的组成单糖和链长进行分析。

这些分析方法可以为黑果枸杞多糖的结构特性提供重要的信息。

最后，对黑果枸杞多糖的抗氧化活性进行评估。

采用自由基清除试验和金属离子螯合试验等方法，测定黑果枸杞多糖对超氧阴离子自由基、羟基自由基以及金属离子的清除能力。

实验结果表明，黑果枸杞多糖具有显著的抗氧化活性，具有一定的自由基清除和金属离子螯合能力。

这种抗氧化活性可能与多糖中的多糖结构和官能团有关。

综上所述，本研究通过合理的分离纯化方法，成功得到黑果枸杞多糖样品，并对其进行了结构表征和抗氧化活性评估。

研究结果表明，黑果枸杞多糖具有良好的抗氧化活性，有望成为一种重要的天然抗氧化剂和保健品原料。

然而，还需要进一步深入研究黑果枸杞多糖的生物活性、药理特性和机制等方面，以更好地利用其在医药和保健品领域的潜力综上所述，本研究成功得到了黑果枸杞多糖样品，并对其进行了结构表征和抗氧化活性评估。

新疆师范大学硕士学位论文黑果枸杞总黄酮制备工艺优化和抗氧化、降血脂活性及成分研究姓名：李淑珍申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：李进2009-06-06中文摘要黄酮类化合物属植物次级代谢产物，天然无毒，具有多种生物活性。

部分黄酮类化合物兼有抗氧化和降血脂作用，对预防动脉粥样硬化具有广阔的应用前景。

本研究选用新疆地产黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.），从其叶中提取总黄酮，对总黄酮抗氧化和降血脂生物功效进行研究，为预防动脉粥样硬化提供新药来源，为黑果枸杞开发利用提供理论依据。

主要研究内容及结果如下：1．采用显色反应和紫外光谱法对黑果枸杞叶浸提液总黄酮进行鉴定。

用分光光度法测定总黄酮含量，通过单因素最佳值筛选和多因素正交试验，得出从黑果枸杞叶中提取总黄酮的最佳工艺条件为：用60%的乙醇作溶剂，固液比为1:25，70℃下提取40min，提取率达0.23%，粗制品总黄酮含量达0.14%。

2．通过6种大孔树脂静态吸附和解吸附试验比较，结果表明AB-8型大孔树脂较适合于精制黑果枸杞总黄酮。

选用该树脂精制黑果枸杞总黄酮的最佳条件为0.20mg/mL、pH=5.0的黑果枸杞总黄酮溶液上柱，流速为2.0mL/min，用95%乙醇洗脱，流速4.0mL/min、用量为5倍柱床体积，总黄酮回收率达79.82%。

采用该工艺分离精制的黑果枸杞总黄酮含量为2.80%，比粗制品提高了20倍，说明该工艺切实可行，可以推广。

3．通过体外化学反应体系得出黑果枸杞总黄酮具有还原能力、清除·OH的能力和抗脂质体过氧化反应的活性。

与生物大分子相结合反应得出黑果枸杞总黄酮可以抑制红细胞溶血、增强小鼠血清清除·OH的能力，降低小鼠肝脏MDA 含量。

4．通过高脂血症模型小鼠体内试验得出，黑果枸杞总黄酮可以降低高脂血症小鼠血浆TC、TG和LDL-C含量，升高HDL-C含量，说明其具有降血脂功效。

黑果枸杞总黄酮还可以提高小鼠血浆T-AOC、肝脏GSH-Px、SOD活力，降低MDA含量，说明其也具有体内抗氧化生物活性，可以作为预防AS的新药来源。

枸杞黄酮的提取工艺研究作者：吴啸来源：《健康必读·下旬刊》2012年第07期【中图分类号】R284.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2012)07－0376－01【摘要】枸杞隶属于茄科（Solanaceae)枸杞族枸杞属（Lycieae L．)植物的果实，是一种驰名中外的名贵中药材。

随着枸杞药理研究的深入，新的药理作用不断被发现。

现代医学表明：枸杞具有免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗疲劳、降血压、降血糖、补肾、保肝、名目、抗辐射等功效。

研究结果如下: 采用乙醇回流浸提法提取枸杞中黄酮类化合物，研究了不同乙醇浓度、提取温度、固液比、提取时间、提取次数对黄酮类化合物的提取效果影响。

实验结果表明：最佳的提取工艺条件为A1B3C3D3，即：乙醇浓度为60%、固液比为20:1、温度为70℃、提取时间为三小时，在此条件下，黄酮的提取率为1．058％ .【关键词】：枸杞黄酮、回流提取1.1 枸杞概述1.1.1 枸杞属植物的介绍枸杞子是一味传统常用中药长6–15mm，直径5–8mm,表面鲜红或暗红色，质柔软，气微、味甜、微酸。

枸杞分布全国各地，主产宁夏、甘肃、青海、新疆、河北、山东、江苏、浙江、江西、湖北、四川、云南、福建等地。

枸杞生态习性为喜光，稍耐阴，喜干燥凉爽天气，较耐寒，适应性强，耐干旱、耐碱性土壤，喜疏松排水良好的沙质土壤。

1．1. 2 枸杞的功效、药理药效作用枸杞是历史悠久、药食同源、驰名中外的名贵中药材。

中医学认为，枸杞性平、味甘、微苦、无毒，具有滋补肝肺、益精明目、强健筋骨的功效。

枸杞的果、叶、苗、根都可入药，皆有滋补作用。

果实滋补肝肾，叶以止渴、消烦、解毒见长，根(地骨皮)有清热，凉血、降压的功效。

随着枸杞药理研究的深人进行，新的药理作用不断被发现。

现代医学研究证明：柯杞有免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗疲劳、降血脂、降血糖降血压、补肾、保肝、明目、养颜、健脑、排毒、保护生殖系统、抗辐射损伤十六项功能。

枸杞叶片中类黄酮的提取工艺研究作者：李强来源：《现代农业科技》2016年第14期摘要利用浓度为95%的酒精提取枸杞叶片中的类黄酮，通过常温提取法、加热提取法、微波提取法、超声波提取法4种不同的提取方法来比较提取效果。

结果表明：加热法提取类黄酮效果最佳，耗时较少；微波法时间最短，但溶剂损失较多，超声波也能缩短类黄酮的提取时间，但其类黄酮的提取率难以提高，常温法效果最差且时间最长。

最佳工艺条件参数为固液比为1∶10、温度为90 ℃，提取2 h可以得到较多的类黄酮物质。

建议综合运用上述进行类黄酮提取，效果较好。

关键词枸杞；叶片；类黄酮；提取工艺；研究中图分类号 TQ461 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）14-0282-02Research on Extraction Technology of Flavonoids from Lycium barbaruml LeavesLI Qiang（Agricultural School of Ningxia，Yinchuan Ningxia 750021）Abstract Using concentration for 95% of the alcohol extraction of flavonoids in leaves of Lycium barbarum，through the room temperature extraction，heating extraction，microwave extraction，ultrasonic extraction method，4 kinds of different extraction methods were used to compare the effect of extraction. Results showed that，the heating extraction flavonoids had the best effect and less time-consuming，microwave method had the shortest time，but more solvent loss. Ultrasound could also shorten the extraction of flavonoids in time，but its flavonoids extraction rate was difficult to improve，normal temperature method effect was the worst and the longest. Optimum process condition parameters was solid-liquid ratio in 1∶10，the temperature of 90 ℃，extracting 2 h，which could get more flavonoids. It is suggested that the effect is good when using the comprehensive methods of the flavonoids extraction.Key words Lycium barbaruml；leaves；flavonoids；extraction technology；research类黄酮物质是植物组织中一种重要的次生代谢物质，医学研究证明这类物质具有抗癌、抗氧化、增强免疫力及吸收紫外线等多种功效，具有很好的食用价值及保健作用，也是近些年来的研究热点。