9 微生物的稀释分离技术.

微生物分离纯化方法微生物的分离纯化是微生物学研究中的一项重要工作，也是微生物学实验的基础。

微生物的分离纯化方法主要包括：传代分离、菌落接种法、涂布法、稀释法、摇瓶分离法等。

下面将详细介绍这些方法。

1. 传代分离传代分离法是指将微生物涂布于固体培养基上，通过连续传代的方式分离纯化目标微生物。

这种方法适用于真菌和细菌的分离纯化。

首先，选择适当的固体培养基，可以是含有特定培养物质的普通富养基或特定选择性培养基。

然后，将待分离的微生物悬浮液均匀涂布在固体培养基表面。

在培养过程中，单个微生物菌落会逐渐生长并形成纯化菌落。

最后，将纯化菌落挑取至新的培养基上进行进一步培养和鉴定。

2. 菌落接种法菌落接种法是指以微生物营养琼脂平板为基础，在平板表面单独培养微生物，通过菌落形态和特征来分离纯化目标微生物。

首先，将待分离的微生物悬浮液均匀涂布在营养琼脂平板表面。

在培养过程中，微生物会形成单个菌落，每个菌落代表着一个细胞或一组具有相同基因型的细胞。

通过观察和鉴定菌落形态、色素、质地等特征来筛选出目标微生物的纯化菌落。

3. 涂布法涂布法是指将待分离的微生物悬浮液均匀涂布于特定培养基固体表面，通过菌落形态和特征来分离纯化目标微生物。

这种方法适用于分离纯化微生物群落中的特定微生物。

首先，选择适当的富养基或选择性培养基，将待分离的微生物悬浮液均匀涂布于固体培养基表面。

在培养过程中，微生物会形成不同的菌落，其中包含目标微生物。

通过观察和鉴定菌落形态、色素、质地等特征来筛选出目标微生物的纯化菌落。

4. 稀释法稀释法是指将待分离的微生物悬浮液通过连续稀释的方式进行纯化。

首先，将待分离的微生物悬浮液进行适当稀释，然后取一定体积的稀释液均匀涂布在固体培养基表面。

在稀释过程中，微生物会逐渐被稀释至单个细胞的数量，从而使目标微生物单独生长并形成纯化菌落。

5. 摇瓶分离法摇瓶分离法是指将待分离的微生物悬浮液均匀地放置在摇瓶中，并通过不同时间和速度的连续摇动来分离纯化微生物。

微生物稀释分离微生物稀释分离是一种常用的实验方法，用于研究和分离微生物。

本文将从实验原理、实验步骤和应用三个方面介绍微生物稀释分离的相关知识。

一、实验原理微生物稀释分离是利用稀释液中的微生物数量与菌落数呈反比关系的原理进行的。

在一定条件下，将含有微生物的样品逐级稀释，然后将稀释液平铺在培养基上，使微生物落在培养基上并繁殖。

最终，通过观察菌落的形态、颜色和大小等特征，可以分离出不同的微生物种类。

二、实验步骤1. 准备培养基：选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、选择性培养基等。

根据需要添加抗生素或其他抑制剂。

2. 样品处理：将待检样品进行预处理，如稀释、研磨、搅拌等，以获得均匀的微生物分布。

3. 稀释液的制备：取一系列不同浓度的试管，分别加入适量的稀释液。

通常采用10倍稀释法，即每次从前一级的稀释液中取出1mL加入到下一级的稀释液中。

4. 取样：将样品分别取出一定体积加入到各级稀释液中，充分混合后可得到一系列不同浓度的稀释液。

5. 平铺培养：将每个稀释液均匀平铺在培养基上，用铅笔标明每个培养皿的稀释倍数。

6. 培养：将平铺好的培养皿在适当的环境温度下进行培养，一般为37摄氏度。

根据不同的微生物种类和培养基的要求，培养时间可在24小时至数天之间。

7. 菌落观察：观察培养皿上的菌落形态、颜色、大小等特征，并记录下来。

通过菌落的特征，可以初步判断出不同的微生物种类。

三、应用微生物稀释分离广泛应用于微生物学研究和实验室诊断中。

具体应用如下：1. 分离纯种菌株：通过微生物稀释分离的方法，可以将混合菌群中的不同种类的微生物分离出来，得到纯种菌株，为后续的研究提供基础。

2. 药敏试验：微生物稀释分离可以用于药敏试验，即将不同抗生素加入到培养基中，观察菌落的生长情况，判断微生物对抗生素的敏感性和耐药性。

3. 食品安全检测：微生物稀释分离可以用于食品中微生物的检测和分离，判断食品是否受到污染，以保障食品安全。

4. 环境监测：微生物稀释分离可以用于环境中微生物的监测，如水源、土壤、空气等。

实验五微生物的分离和纯化
实验目的：
掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。

实验原理：
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

常用的方法有简易单细胞挑取法；平板分离法。

本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，包括两个方面
1．选择适合于待分离微生物的生长条件等要求或者加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物；2．微生物在固体培养基生长形成的单个菌落可以是一个细胞繁殖而成的集合体，因此可通
过挑取单菌落而获得一种纯培养。

获得单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术来完成的。

单个菌落并不一定保证是纯培养，纯培养的确定除观察其菌落特征外还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。

实验器材：
1．菌种米曲霉 (Aspergillus oryzae)。

2．培养基高氏Ⅰ号培养基，牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏琼脂培养基，查氏琼脂培养基。

3．溶液或试剂 10%酚，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，4%水琼脂。

4．仪器或者其他用具无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环，无菌培养皿，链霉素和土样，显微镜，血细胞计数板等。

环境中微生物的检测和分离纯化一．实验原理1.微生物的分离与纯化土壤中含有丰富的微生物，可以从中分离纯化得到很多有价值的菌株。

微生物常用的分离方法是平板分离法，根据某种微生物对生长条件的不同要求供给它适宜的培养环境，再用稀释涂布平板法或稀释后平板划线分离，纯化该微生物，直到得到纯菌株。

2.平板菌落计数法将待测样品经适当稀释后，其中微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。

统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中含的菌落数。

二．实验材料与试剂1.土壤稀释溶液2.取液器（1000ml 1支），培养箱，培养皿（12个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，1000ml无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架。

三．实验步骤（一）.无菌平板制备1.采用叠皿法把牛肉冻蛋白膏培养基倒入灭好菌的培养皿中，制作无菌平板（二）.周围环境中微生物的检测2.取一平板，分成6个区，做好标记。

同一个人同一根手指头按如下要求用力一致进行操作：分别用未洗过的手指头，自来水打湿的手指头，自来水认真洗过的手指头，洗手液洗过一遍的手指头，洗过两遍的，洗手液洗过又用酒精棉球消毒后的手指头在六个区上涂抹。

（平板1）3.取一平板，分区，分别用使用过的纸巾，硬币，旧纸币，餐卡在不同区拖动。

（平板2）4.在培养基上方抖动头发数次。

（平板3）5.取一平板，分区，用无菌接种环分别蘸一滴自来水，河水，豆浆在不同区划线。

（平板4）6.用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线。

（平板5）7.取两个平板，一个打开在实验台上放置30分钟，另一个在酒精灯火焰边打开皿盖1分钟。

（平板6）8.取一平板，打开盖，咳几下。

（平板7）（三）.从土壤中分离微生物1.采土样2.制备土壤稀溶液3.涂布吸取100ml稀释好的土壤稀溶液，较均匀地滴在平板上，再用无菌涂棒涂布均匀，涂1—2分钟4.培养将培养基平板倒置于37℃下培养24小时5.菌落计数四．实验结果1.平板1：从未洗到用酒精消毒总体趋势是菌落数越来越少，用自来水洗过和用洗手液洗过一遍的菌落数差不多；平板2：旧纸币和硬币的菌落数要多；平板3：抖头发的地方附近长出许多菌落；平板4：自来水菌落最多，其次是河水，河水的菌落分布成“牛”字形，和当时划线的形状一样，再其次是豆浆；平板5：划线的地方长出许多菌落；平板6：放在试验台上的平板长出各种形状的菌斑菌块，在酒精灯旁的基本没有菌落；平板7：咳几下的基本没有菌落。

微生物的分离纯化：平板分离法基本原理分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。

平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。

即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上，然后培养。

其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

包括稀释涂布平板法稀释混合平板法平板划线法土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方，所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的，因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地。

本实验采用三种不同的培养基和方法从土壤中分离细菌、放线菌、酵母菌和霉菌。

操作步骤采样：选取校园内或校园附近地点，用无菌药匙，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样约30g，装入事先准备好的无菌瓶内并盖好。

编号并记录地点、时间及其他环境条件。

一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。

制备土壤稀释液土壤稀释液的制备和稀释液的取样（建议稀释到10-即可）无菌操作1.取三只无菌培养皿，在皿底用记号笔写上稀释度、组别观察分离出的真菌菌落形态。

稀释混合平板法土壤稀释液的制备和稀释液的取样倒平板的无菌操作将融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准)，在酒精灯火焰旁，右手掌心握住三角瓶的底部，左手拿平皿并松动试管塞或瓶塞，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出，灼烧瓶口。

用左手的大拇子将皿盖掀开一缝，至瓶口刚好伸入，向皿内注入培养基（约15 mL,铺满皿底），迅速盖好皿盖。

左手持培养皿稍加旋转摇动，使培养基均匀分布于整个培养皿底部，然后平置于桌面水平位置,待凝后即为平板。

也可将平皿放在火焰附近的桌面上，用左手的食指和中指夹住管塞并打开培养皿，再注入培养基，摇匀后制成平板。

如何从土壤（污水）中分离出微生物把污水加蒸馏水分别稀释10，100，1000倍，然后加入培养基中培养，如果培养出来菌落重合，菌非常多，无法分离，就加大稀释倍数，直至获得清晰可分离的菌落，有时甚至是非常小的菌落，要用倒置显微镜操作。

而培养基则根据要分离的菌的营养类型进行配置，若要获得多种微生物就要配置多种培养基进行如上操作。

对于土壤加水溶解，对溶解液进行如上操作，不溶的部分就不用管了1.取以少许土壤（一地表以下10cm处为宜）与适量无菌水混匀备用2.做浸出液的梯度稀释3 .涂平板4.划线分离5.接平板，接斜面6.检测从土壤中分离微生物环境工程（1）班一、试验目的1..学会土壤微生物的检测方法，了解土壤中微生物的数量和组成。

2初步掌握从土壤中分离细菌的基本技术。

二、实验原理土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物所需要为一切营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件．所以土壤中微生物的数量和种类都很多。

它们参与土壤的氮、碳、硫、磷等元素的循环作用。

此外，土壤中微生物的活动对土壤形成、土壤肥力和作物生产都有非常重要的作用。

因此，查明土壤中微生物的数量和组成情况，对发掘土壤微生物资源和对土壤微生物实行定向控制无疑是十分必要的。

三、实验器材(—)培养基肉膏蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）高氏一号琼脂培养基（培养放线菌）查氏培养基（培养霉菌）(二)灭菌稀释水、灭菌吸管、灭菌培养皿。

(三)土壤样品、天平、称旦纸。

（四）恒温箱、气体流量计四、试验程序1、倒平板将培养基加热融化，待冷至55—60℃时，混合均匀后倒平板；2、制备土壤稀释液准确称取土样10g，加入装有90ml 无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振荡约20min，使土样与水充分混匀，将细胞分散。

用一支无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、等一系列稀释菌液3、涂布将无菌平板编上10-4、10-5、10-6号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-6稀释液各1ml放入编号10-6的3个平板中，同法吸取10-5稀释液各lml放入编号10-5的3个平板中，再吸取10-4稀释液各lml放入编号10-4的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。

微生物的分离与培养技术原理及其应用-文档资料
微生物的分离与培养技术是微生物学实验室中最基本、最重要的实验技术之一。

其主要原理是将混合微生物群落分离为单一的微生物菌落，并在适宜的环境条件下使其生长繁殖形成单一菌种培养物，以便进行鉴定和研究。

1.微生物的分离技术
（1）稀释涂布法：将微生物混合液逐渐稀释，然后取一定量的稀释液涂布在富养基平板上，待菌落形成后，挑取单一菌落进行培养和研究。

（2）过滤法：利用微孔膜或滤纸将混合液过滤，将过滤后留在微孔膜或滤纸上的微生物进行培养和研究。

（1）液体培养：将微生物接种在富足的液体富养基中，置于适当的温度、光照和通气条件下进行培养。

（3）混合培养：将两种或以上的微生物同时接种在同一富养基上进行培养，这一技术可同时培养多种微生物，缩短实验时间。

3.技术应用
微生物的分离与培养技术在微生物学研究、医学诊断、生物工程和食品工业等领域都得到广泛应用。

（1）微生物学研究：分离单一菌种进行研究，为微生物学研究提供基础。

（2）医学诊断：从临床样品中分离出致病微生物进行培养与鉴定，有助于快速准确地诊断、鉴定和治疗病原微生物感染。

（3）生物工程：在微生物培养基中添加营养物质，用微生物进行合成、代谢和分泌等反应。

（4）食品工业：将微生物培养在富有营养的富养基中进行发酵，生产出发酵食品。

稀释涂布平板法是微生物分离纯化的常用方法，其基本原理包括两个方面：
1. 选择适合微生物生长的条件：选择适合待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、湿度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

2. 形成单个菌落：微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。

因此，可以通过挑取单菌落而获得一种纯培养。

获取单个菌落的方法可以通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。

操作步骤主要包括：将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释，然后分别取不同稀释液少量，与已溶化并冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保培养一定时间即可出现菌落。

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