高效液相色谱法测定粮食中玉米赤霉烯酮及其代谢物

免疫亲和净化－超高效液相色谱－串联质谱法测定食品中玉米赤霉烯酮类真菌毒素作者：宁阳阳来源：《中国食品》2021年第21期当前在玉米赤霉烯酮类的真菌毒素检测中，使用液相色谱和液相色谱-质谱的方法较多，本文则构建了一种针对食品中6种玉米赤霉烯酮类真菌毒素的免疫亲和净化-超高效液相色谱-串联质谱检测法，包括玉米赤霉酮、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮。

本检测方法的前处理工序非常简便，利用免疫亲和柱进行净化及液标法进行定量，能够同时测定6种玉米赤霉烯酮类真菌毒素。

除了谷物以外，本检测方法还能应用于肉、蛋、乳等食品的检测。

一、材料和仪器1.材料和试剂。

（1）样品：在市场购买大米、麦片、牛肉、猪肉脯、鸡蛋、牛奶等当作样品，大米和麦片研磨成粉，牛肉和猪肉脯捣碎，鸡蛋和牛奶混匀。

（2）试剂：乙腈，色谱纯;乙酸钠，分析纯;玉米赤霉酮标准品、α-玉米赤霉烯醇标准品、β-玉米赤霉醇标准品、α-玉米赤霉醇标准品、β-玉米赤霉烯醇标准品、玉米赤霉烯酮标准品;玉米赤霉烯酮类免疫亲和柱;β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯。

（3）标准储备溶液：称取10mg玉米赤霉烯酮类的各种标准品，置于10mL棕色容量瓶中，利用乙腈进行溶解后定容，制成1mg/mL的标准储备溶液，在-18℃的条件下避光保存。

（4）混合标准溶液：取100μL上述制成的各类标准储备溶液，利用乙腈定容至10mL，制作成10μg/mL的混合标准溶液，在-18℃的条件下避光保存。

2.仪器。

GM200型刀式研磨仪;ACQUITYTM超高效液相色谱-TQS质谱仪;组织捣碎机;T18均质器。

二、实验和方法1.样品处理方法。

（1）谷物。

取粉碎样品25g，添加氯化钠5g，再添加体积分数为80%的乙腈溶液100mL，搅拌提取2min，然后放于离心管（50mL）中，4000r/min离心5min。

取10mL上层提取液，加水40mL并混匀，10000r/min离心5min。

高效液相色谱—串联质谱法测定玉米油中的玉米赤霉烯酮摘要：实验建立了玉米油中检测玉米赤霉烯酮的方法，用5 mL正己烷溶解后，10 mL乙腈提取，高效液相色谱-串联质谱法测。

外标法定量，在1-50 μg/L范围内，玉米赤霉烯酮的线性方程相关系数r2 >0.999，方法的检出限和定量限，分别为5.0 μg/kg和10.0 μg/kg，平均回收率为88.7 %~90.4 %，日内精密度为5.0 %~6.4 %，日间精密度为6.1 %~8.1 %。

该方法简便、快捷、准确，可用于玉米油中玉米赤霉烯酮的测定。

关键词：正己烷；乙腈；高效液相色谱-串联质谱；玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN），也称为F2毒素，是由镰刀菌产生的一种具有类雌性激素活性的一类真菌毒素[1]。

它广泛存在于霉变的玉米、高粱、小麦、大麦等粮食谷物中，是污染范围最广的一种镰刀菌毒素[2]。

玉米赤霉烯酮具有很大的毒性作用，可损伤DNA、诱发肿瘤、对免疫功能方面造成影响[3-4]。

玉米油作为最常见的植物性食用油之一，具有很高的营养价值，是我国主要食用油品之一，但在其收获加工过程中很容易产生玉米赤霉烯酮，食用后会对人体产生一定危害。

GB 2761-2017《食品中真菌毒素限量》中规定谷物及其制品的玉米赤霉烯酮限量值为60 μg/kg，而对玉米油中的含量暂无要求，只是做为风险监测的一项指标。

目前用于粮谷和植物性油脂中玉米赤霉烯酮的检测方法主要有薄层色谱法、酶联免疫吸附法、液相色谱法和液相色谱-串联质谱法[5-9]等。

但是，由于薄层色谱和免疫分析法准确度较低且存在干扰，很容易出现假阳性，只适合于定性或初筛，现在已较少使用；液相色谱法被广泛使用，能满足日常检测需要；而高效液相色谱—串联质谱法抗干扰能力强，准确度和精密度更高，可用于定性定量分析。

对于样品的前处理方法主要有直接稀释法[10]、免疫亲和柱[11]、固相萃取柱净化[12]等方法，稀释法的前处理存在净化不彻底、基质干扰大的问题，而免疫亲和柱虽使用范围广、特异性强，适用于处理复杂基质的样品，但价格昂贵，批量检测成本高，且前处理较为复杂。

《粮油检测粮食中玉米赤霉烯酮的测定超高效液相色谱方法》行业标准制定编制说明玉米赤霉烯酮(Zearalenone) 又称F-2毒素，主要由木贼镰刀菌（）、尖孢镰刀菌（）、禾谷镰刀菌、三线镰刀菌（）、茄病镰刀菌（）、串珠镰刀菌（Fusarium. moniliforme）等产生。

ZEN是一种生殖系统毒素（雌性激素），有强烈的致畸作用,被国际癌症研究中心归类为3类致癌物,主要污染小麦、大麦、水稻、玉米、小米和燕麦等谷物。

面粉、啤酒等农产品加工品中也常能检测到该毒素的存在。

阿根廷报道新收获玉米的含量在未检出到83 mg/kg之间, 储存玉米的含量在未检出到17 mg/kg之间。

我国小麦和玉米中也经常发生玉米赤霉烯酮的污染，危害消费者健康。

研究表明：我国成人通过玉米制品暴露ZEN 的量超过每日允许限量（TDI），部分儿童通过玉米制品暴露ZEN 的量也超过了TDI。

我国食品安全国家标准《GB2761-2011 食品中真菌毒素限量》中规定谷物及其制品中玉米赤霉烯酮限量为60 μg/kg。

目前报道用于检测玉米赤霉烯酮的分析方法有酶联免疫法、免疫胶体金试纸法、气相色谱质谱联用法、高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法、多不对称波形离子迁移谱质谱、间接竞争免疫分辨荧光免疫分析、薄层色谱法等。

薄层色谱法由于操作复杂，目前应用较少；胶体金和酶联免疫方法用于快速筛查;普通液相色谱方法目前应用较多，但分析速度较慢，耗费溶剂较多，成本增加；液质联用仪检测需要高端的质谱仪。

当前急需建立一种更加灵敏、高效、低溶剂量的玉米赤霉烯酮微量快速定量方法。

为了满足当前我国粮食绿色检测、监测定量分析的需要，通过查阅文献，根据范德米特(van Deemeter)方程理论，结合免疫亲和净化手段，基于UPLC分离技术，建立了一种进样量小、分离度高、快速准确、环保的玉米赤霉烯酮定量分析方法。

本标准项目的研究有助于提高粮食样品检测、监测效率，降低成本，保护环境，保障从业人员健康安全。

玉米赤霉烯酮检测方法玉米赤霉烯酮是一种由产自赤霉菌的黄曲霉烯酮合成的毒素。

该毒素在玉米和其他谷物中广泛存在，对人和动物的健康有害。

因此，玉米赤霉烯酮的检测方法至关重要，以保障食品安全和质量。

目前，市场上常用的玉米赤霉烯酮检测方法主要有以下几种：1. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法是将样品溶解后经过净化处理，然后使用高效液相色谱仪进行分析。

这种方法可以测定不同类型的赤霉烯酮类毒素，但是需要较复杂的样品预处理过程。

2. 气相色谱法（GC）：这种方法是将样品中的赤霉烯酮蒸发，然后通过气相色谱进行定量分析。

该方法对于特定类型的赤霉烯酮类毒素的测定较为准确，但需要耗费较多的时间和资源。

3. 免疫分析法：这种方法利用特殊的抗体与赤霉烯酮结合，产生可见的信号，从而测定样品中的赤霉烯酮含量。

这种方法操作简便，结果可即时获得，但是对样品中的干扰物较为敏感。

4. 毛细管电泳法（CE）：这种方法利用样品在毛细管中的化学性质差异，通过分离电泳来测定赤霉烯酮的含量。

该方法适用于复杂的样品矩阵，并且可同时测定多种赤霉烯酮。

除了以上主流的检测方法，还有一些新兴的检测技术被应用到玉米赤霉烯酮的检测中：1. 生物传感器：利用生物分子与赤霉烯酮的特异性结合，通过传感器产生的电信号来测定赤霉烯酮含量。

这种方法具有灵敏度高、响应速度快的优势，但是需要对传感器进行特定设计和构建。

2. 分子印迹技术：利用功能单体与赤霉烯酮形成特异的相互作用，构建具有特异性识别能力的分子印迹聚合物。

该方法具有高选择性和较好的再生性，但是制备分子印迹聚合物需要较长的时间和较高的成本。

以上只是介绍了部分常用的玉米赤霉烯酮检测方法，每种方法都有其优缺点和适用范围。

在实际应用中，可以根据实验室条件、检测要求和经济成本等方面考虑选择合适的方法。

同时，需要注意的是，不同国家和地区可能存在不同的食品安全标准和监管要求，因此在检测过程中也需要遵循相应的法规和指南。

分析检测HPLC法测定玉米中的玉米赤霉烯酮王晨箐（湖南农业大学，湖南长沙 410128）摘 要：本文采用高效液相色谱法对玉米中的玉米赤霉烯酮进行检测。

优化的提取液为乙腈、水、甲醇，比例为46∶46∶8。

得出标准曲线方程y=0.043 4x+0.011 8，相关系数R2=0.999 93。

玉米赤霉烯酮的检出限为0.12 μg·kg-1，回收率为84.0%～92.4%，偏差为-1.5%，在PBS缓冲液样品中，检测值为254.1 μg·kg-1，回收率为95.6%。

通过优化样品前处理方法和色谱条件，实现了对玉米中玉米赤霉烯酮的准确、快速的定量分析。

关键词：高效液相色谱法；玉米；玉米赤霉烯酮Determination of Zearalenone in Maize by HPLCWANG Chenqing(Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China)Abstract: High performance liquid chromatography was used to detect zearalenone in corn. The optimized extract was acetonitrile, water and methanol in a ratio of 46∶46∶8. The standard curve equation y= 0.043 4x+0.011 8 is obtained, and the correlation coefficient R2=0.999 93. The detection limit of zearalenone was 0.12 μg · kg-1, the recovery rate was 84.0 %～92.4 %, and the relative standard deviation was -1.5 %. In the sample of PBS bu ff er, the detection value was 254.1 μg·kg-1, and the recovery was 95.6%. The accurate and rapid quantitative analysis of zearalenone in corn was realized by optimizing the sample pretreatment method and chromatographic conditions.Keywords: high performance liquid chromatography; corn; zearalenone高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用且成熟的技术，具有准确性高、分离效果好、操作简便等优点[1]。

高效液相色谱法测定饲用玉米中玉米赤霉烯酮的不确定度评定作者：王露李晓伟冯培培赵素勤王继美来源：《食品安全导刊·中旬刊》2022年第10期摘要：本文按照GB/T 28716—2012檢测饲用玉米中玉米赤霉烯酮的含量，按照CNAS—GL 006：2019的要求，建立数学模型，分析检测过程中的不确定度分量的来源，并进行量化评定。

结果表明，饲用玉米中玉米赤霉烯酮的含量为76.23 μg·kg-1，扩展不确定度为8.55μg·kg-1（k=2）。

本实验中不确定度的主要来源是标准物质溶液配制和高效液相色谱仪操作引入的相对不确定度。

关键词：高效液相色谱；玉米赤霉烯酮；不确定度Uncertainty Evaluation on Determination of Zearalenone in Feed Corn by High Performance Liquid ChromatographyWANG Lu， LI Xiaowei， FENG Peipei， ZHAO Suqin， WANG Jimei（Henan Zhongbiao Testing Service Co.， Ltd.， Zhengzhou 450000， China）Abstract： In this paper，the content of zearalenone in forage maize was determined according toGB/T 28716—2012. And according to CNAS—GL 006：2019， a mathematical model was established， and the sources of the uncertainty components in the determination process were analyzed for quantitative evaluation. The results showed that the content of zearalenone in feed corn was 76.23 μg·kg-1， and the expanded un certainty was 8.55 μg·kg-1 （k=2）. The main sources of uncertainty in this paper are the relative uncertainty caused by the preparation of standard substance solution and the relative uncertainty caused by the operation of HPLC.Keywords： high performance liquid chromatography; zearalenone; uncertainty玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEA），又称F-2毒素，是由镰刀菌属菌株产生的代谢产物，广泛存在于霉变玉米等谷物作物中，会导致畜禽出现生殖、免疫疾病，造成畜牧企业的经济损失。