玉米赤霉烯酮 (ZEN) ELISA 快速检测试剂盒操作说明书

玉米赤霉烯酮ELISA快速检测试剂盒操作说明书1、简介本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附ELISA原理快速定量检测谷物、饲料中的玉米赤霉烯酮（ZearaLenone,ZEN）。

谷物/饲料的前处理包括：提取、过滤、稀释，处理时间大约为20-40分钟。

本试剂盒的检测限为：10 ppb；谷物/饲料中ZEN的回收率≥80%；批内、批间变异系数<15% 。

2、试剂盒组成A. 24/48/96孔ZEN酶标板: 3/6/12条×8孔B. 20×浓缩洗涤液：25mL (用蒸馏水稀释20倍使用) 1瓶C. ZEN抗体: 3/6/12mL 1瓶(红盖)D. 酶标二抗：3/6/12 mL 1瓶(绿盖)E. 显色液：3/6/12 mL 1瓶(蓝盖)F. 终止液:3/6 mL 1瓶(黄盖)G. ZEN标准品:1.5/2mL/瓶（0、30、60、200、500ppb）各1瓶H. 操作说明书1份注意：标准品含有低浓度ZEN、终止液含2 N H2SO4，需小心取用；勿在有效期外使用本试剂盒。

3、贮存条件与有效期2-8℃避光贮存，忌0℃以下冻存，有效期见试剂盒内盖。

4、样品处理程序●实验准备：配制60%甲醇水溶液（v/v，60:40）和20%甲醇水溶液（v/v，20:80）。

注意：请精确配制上述溶液，以免影响检测的准确性。

●称取5 g 具有代表性的粉碎样品于100 mL带塞三角瓶内，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液。

●将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡3分钟后，用whatman 1号滤纸过滤，收集滤液。

●取滤液2mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。

注意：某些样品待检液(如花生等)久置影响检测结果的准确性，为保证检测的准确性，样品提取后请即时检测。

若样品待检液不立即检测，请将其存储于棕色玻璃瓶内，2-8℃避光保存。

试剂盒在使用前，请将试剂盒内所有试剂放到室温（20-25℃）进行温度平衡。

饲料中玉米赤霉烯酮快速定量检测方法的研究王 雄 王 津 （北京中检维康技术有限公司）程宗佳 博士 （美国大豆协会北京办事处饲料技术主任）摘要：利用免疫亲和柱荧光光度法测定了饲料中玉米赤霉烯酮，检测灵敏度为0.1mg/kg，检测范围为：0～5mg/kg，变异系数为3.3%～13.3%，在其检测范围内的回收率为97%～106%，分析1个样品的时间只需25min。

关键词：玉米赤霉烯酮；饲料；检测玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN），又称F2毒素，是由禾谷镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物，是一种雌激素真菌毒素，化学名为6-（10羟基-6氧基-1-炭稀基）β-雷琐酸-μ-内脂，是一种白色的结晶，分子式为C18H22O5，分子量为318；熔点为164～165℃；紫外线光谱最大吸收236nm、274nm和316nm；红外线光谱最大吸收为970nm。

纯的玉米赤霉烯酮不溶于水、二硫化碳和四氯化碳；溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、醋酸乙酯、乙腈和乙醇；微溶于石油醚（b.p.30～60℃），在紫外线照射下呈蓝绿色（刘继业，2001）。

米赤霉烯酮最初是从赤霉病玉米中分离出来的，有15种以上的衍生物，其主要存在于玉米和玉米制品中，小麦、大麦、高粱、大米中也有一定程度的分布，ZEN主要污染玉米、麦类、谷物等，在世界各地各种粮谷与饲料中均有存在。

玉米赤霉烯酮具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物不孕或流产，对家禽、猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来很大的经济损失。

目前玉米赤霉烯酮的测定方法有薄层色谱法（Quiroga等，1994；杨曙明等，1994）、气相色谱法-质谱（Bennett等，1994）、酶联免疫吸附法（Bagnati 等，1991）等。

Fazekas等(2001)和Visconti等(1998)利用免疫亲和柱-HPLC法测定了玉米样品中的玉米赤霉烯酮，Scott等(1999)利用免疫亲和柱-荧光法和免疫亲和柱-HPLC法快速测定了玉米样品中的玉米赤霉烯酮。

玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案--10min快速定量一、玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN污染情况玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是由镰刀菌产生的一种霉菌毒素，属于二羟基苯甲酸内酯类化合物，具有雌激素活性，分子式为C18H2205，相对分子量318.4。

玉米赤霉烯酮ZEN主要污染玉米、小麦、大米、棉籽等粮谷作物，可引起动物和人的雌激素过多综合征，还具有生殖毒性、免疫毒性、基因毒性及可疑致癌性等。

2003年止，根据世界粮农组织公布已有19个国家制定了食物中玉米赤霉烯酮ZENDE 限量标准，欧盟规定精炼玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN不得超过200μg/kg。

中国标准规定，玉米、小麦及其制品中玉米赤霉烯酮ZEN不得超过60μg/kg，但没有规定植物油中玉米赤霉烯酮的限量标准。

但农作物特别是玉米种的玉米赤霉烯酮ZEN检出率很高，而植物油均是以这些农作物为基本原料，因此非常有必要对玉米及玉米油中的玉米赤霉烯酮ZEN进行检测与控制。

二、玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN国家残留限量标准食品类别 限量标准（μg/kg）玉米、玉米面（渣、片） 60大麦、小麦、麦片、小麦粉（面粉） 60引自：《GB 2761-2011 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》三、飞测生物玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案--10min快速定量上海飞测生物基于全球领先的荧光定量POCT技术平台，在国内率先推出了玉米赤霉烯酮荧光定量检测试纸条，本产品可在10min快速定量的检测出玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮的残留含量，样品前处理简单（仅需8min），检测操作简便，采用荧光免疫定量分析仪读数，结果准确可靠且可现场打印，准确性符合HPLC法的检测结果，适用于各类玉米及玉米油加工企业及检测机构。

3.1. 玉米赤霉烯酮荧光定量检测试◆ 检测灵敏度：5μg/kg；◆ 定量线性范围：10.0μg/kg ◆ 样品前处理时间：8min； ◆ 检测时间：10min；◆ 准确度：回收率为80%-125%◆特异性：在1000μg/kg 浓度3.2. 检测所需配备的仪器和耗材编 号 1 荧光免疫定2 20-2003 100-1004 1-5ml 5 粉碎机6 旋转摇床或者漩涡7 4000转低速离8检测试纸条性能 /kg - 500.0μg/kg； 125%；浓度水平下与其它真菌毒素无交叉反应；耗材 名称配备 免疫定量分析仪 飞测生物配备 200ul 移液器 用户配备 1000ul 移液器 用户配备 5ml 移液器 用户配备 碎机（500g）用户配备 者漩涡振荡器（选配） 用户配备 低速离心机（选配）用户配备 10ml 离心管用户配备数量 1台 1把 1把 1把 1台 1台 1台若干93.3. 样品前处理过程3.4. 检测操作过程3.5. 结果判读和输出所有产品均采用便携式荧光误判。

玉米赤霉烯酮检测方法玉米赤霉烯酮是一种由产自赤霉菌的黄曲霉烯酮合成的毒素。

该毒素在玉米和其他谷物中广泛存在，对人和动物的健康有害。

因此，玉米赤霉烯酮的检测方法至关重要，以保障食品安全和质量。

目前，市场上常用的玉米赤霉烯酮检测方法主要有以下几种：1. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法是将样品溶解后经过净化处理，然后使用高效液相色谱仪进行分析。

这种方法可以测定不同类型的赤霉烯酮类毒素，但是需要较复杂的样品预处理过程。

2. 气相色谱法（GC）：这种方法是将样品中的赤霉烯酮蒸发，然后通过气相色谱进行定量分析。

该方法对于特定类型的赤霉烯酮类毒素的测定较为准确，但需要耗费较多的时间和资源。

3. 免疫分析法：这种方法利用特殊的抗体与赤霉烯酮结合，产生可见的信号，从而测定样品中的赤霉烯酮含量。

这种方法操作简便，结果可即时获得，但是对样品中的干扰物较为敏感。

4. 毛细管电泳法（CE）：这种方法利用样品在毛细管中的化学性质差异，通过分离电泳来测定赤霉烯酮的含量。

该方法适用于复杂的样品矩阵，并且可同时测定多种赤霉烯酮。

除了以上主流的检测方法，还有一些新兴的检测技术被应用到玉米赤霉烯酮的检测中：1. 生物传感器：利用生物分子与赤霉烯酮的特异性结合，通过传感器产生的电信号来测定赤霉烯酮含量。

这种方法具有灵敏度高、响应速度快的优势，但是需要对传感器进行特定设计和构建。

2. 分子印迹技术：利用功能单体与赤霉烯酮形成特异的相互作用，构建具有特异性识别能力的分子印迹聚合物。

该方法具有高选择性和较好的再生性，但是制备分子印迹聚合物需要较长的时间和较高的成本。

以上只是介绍了部分常用的玉米赤霉烯酮检测方法，每种方法都有其优缺点和适用范围。

在实际应用中，可以根据实验室条件、检测要求和经济成本等方面考虑选择合适的方法。

同时，需要注意的是，不同国家和地区可能存在不同的食品安全标准和监管要求，因此在检测过程中也需要遵循相应的法规和指南。

养殖与饲料2020年第09期玉米赤霉烯酮（zearalenone ，ZEA ）又名F-2毒素，是一种主要由镰刀菌产生的高毒性、低分子质量的次级代谢产物，它广泛存在于玉米、大麦、小麦、燕麦、高粱和其他谷物中，其化学结构性质较稳定，在高温下不易分解，在食品或饲料的加工过程中均不易被破坏，且难溶于水，易溶于甲醇。

玉米赤霉烯酮对人类健康有巨大威胁，主要表现在具有类雌激素的作用，影响生殖系统[1]、损害肝脏系统[1]、引起氧化损伤[2]和破坏免疫系统[3]。

朱风华等[4]对山东省2018年饲料中玉米赤霉烯酮污染状况调查显示玉米污染率为34.99%，超标率为20.22%，猪配合饲料中生长及育肥猪配合饲料ZEN 污染率最高，为48.78%。

陈丽媛[5]对全国2018年1-6月饲料及原料霉菌毒素分析报告中显示，饲料原料中ZEN 检出率为99.7%，平均含量为190.20μg/kg 。

众多的研究课题、调查报告表明，饲料原料及成品料均存在不同程度玉米赤霉烯酮污染和超标的情况，由于玉米赤霉烯酮能引起母猪出现经常性的假孕现象，导致配种失败次数增加。

阻碍母猪妊娠阶段胎盘正常发育，胎猪重量减轻，大大降低分娩出生重和存活率，易出现死胎、木乃伊胎，导致初生仔母猪阴户红肿，仔公猪乳腺增大等一系列繁殖功能性问题。

因此，在现今畜牧业生产中，提高原料品控意识，防止饲料中玉米赤霉烯酮污染，提高母猪的繁殖性能和产仔壮仔率，增强养殖场的竞争能力已成为广大养殖户最关注的问题之一。

1玉米赤霉烯酮的检测随着科学技术的发展，高、精、尖仪器设备的广泛应用，检测技术和能力水平上升到了一个更高的台阶。

玉米赤霉烯酮的检测技术多样，周妍等[6]在玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展中详细介绍了气相色谱法对饲料以及肉中ZEN 检出限为50μg/kg ，该法对饲料或食品中ZEN 的定量定性分析具有灵敏度高、回收率高等特点，但该方法对设备要求较高。

薄层色谱法测定谷物中的ZEN 含量，检出限为200ng/kg ，但该法灵敏度稍差、易被主观因素影响。

养殖与饲料2017年第6期摘要玉米赤霉烯酮（Zearalenone ，简称ZEN ）亦称F-2毒素，其来源于赤霉病的玉米。

ZEN 产毒菌有三线镰刀菌（）、禾谷镰刀菌（）等。

玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，可致使畜禽急性、慢性中毒，造成畜禽繁殖机能异常，严重者引起死亡，给畜牧业带来严重的经济损失。

本文阐述当前饲料中玉米赤霉烯酮的检测方法。

关键词玉米赤霉烯酮；气相色谱法；高效液相色谱法；生物学检测法；免疫学检测方法；薄层层析法动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测方法代荣逵1吕刚2王亮21.湛江中科技术服务有限公司，广东湛江524043；2.渔仁堂生物科技（湛江）有限公司，广东湛江524043收稿日期：2017-03-29代荣逵，男，1988年生。

1气相色谱法（Gas Chromatography ，简称GC ）气相色谱法一般用MS 检测器，能够对不同的镰刀菌毒素进行同时检测，灵敏度也相对较高。

相关学者在检测饲料中玉米赤霉烯酮时采用GC 法，结果显示在50～600ng/L 玉米赤霉烯酮浓度范围内，与峰面积响应值的线性关系较为良好，最低检出限为50ng ；饲料中毒素在添加浓度100～500ng/L 范围内，回收率达80%以上。

利用气相色谱法检测饲料中玉米赤霉烯酮具有较高的应用范围和回收率，能够应用于定性、定量分析饲料中玉米赤霉烯酮，但是值得提出的是由于设备的实用性问题，该方法并不能作为常规方法进行饲料中玉米赤霉烯酮的检测。

2高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ，简称HPLC ）高效液相色谱法作为当前国内外最常用和最权威的一种真菌毒素检测方法，是一种以液体为流动相的新型色谱技术，可以同时实现定性、定量检测毒素；然而因真菌的毒素不同，其性质不同，需对已达到最佳的分析条件进行综合考虑，以期实现较为理想的分离效果。

高效液相色谱法（HPLC ）原理如下，基于适当的流动相条件，利用适宜的色谱柱，对样品中毒素通过色谱柱柱层分离后，采用一些设备诸如突光检测器（FLD ）、紫外检测器等进行检测，对出色谱峰的面积进行测量计算含量。

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。

ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装，包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。

本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，以帮助用户顺利进行ELISA实验。

1.准备实验材料：-ELISA检测试剂盒：根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒，确保其在储存和运输过程中无损坏。

-样本：准备需要检测的样本，如血清、尿液、组织提取物等。

确保样本的质量和浓度满足实验要求。

-微孔板：根据试剂盒的要求选择合适的微孔板，同时注意其质量有无污染。

-基本实验设备：如计量器、洗板机、显微镜等。

2.实验步骤：-取出储存在4℃的试剂，确保其达到室温（一般为20-25℃），再根据实验步骤进行下一步操作。

-预处理样本：根据试剂盒的说明书，进行样本的预处理，包括稀释、纯化、稳定化等步骤。

-加样：将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中，通常每个孔需要加入100-200μL的样品。

-洗板：使用洗板机或手工操作，将孔中的杂质洗净。

洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。

-加入特异性抗体：根据试剂盒的说明书，将稀释好的特异性抗体加入各孔中，确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。

-洗板：重复第4步的操作，将未结合的抗体洗净。

-加入酶标记物：根据试剂盒的说明书，将稀释好的酶标记物加入各孔中，确保加入的量准确无误。

-洗板：重复第4步的操作，将未结合的酶标记物洗净。

-加入底物：将稀释好的底物加入各孔中，使其与酶标记物反应，生成可视化的颜色。

-终止反应：根据试剂盒的要求，在一定的反应时间后，加入终止剂停止反应。

终止剂的选择需符合试剂盒的要求。

-检测结果：使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化，通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。

3.数据分析：-计算样本的结果：根据试剂盒的说明书，根据吸光度或颜色强度测量结果，计算样本中目标物的浓度。

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。

它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。

本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。

一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。

2.样本准备：根据实验要求，准备样本。

如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。

3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。

例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。

4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。

5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。

确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。

二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。

确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。

2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。

标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。

3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。

孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。

4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。

洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。

5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。

6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。

7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human Human））17-17-羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

【关键字】测试玉米赤霉烯酮（ZEN）ELISA检测试剂盒产品描述：一、概要玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）又称F-2 毒素，主要成分为禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等产生的2，4-二羟基苯甲酸内酯类化合物。

ZEN 主要污染玉米、麦类、谷物等作物，具有很强的雌性激素作用，可引起猪、大鼠、小鼠、家禽等动物的雌激素过多症和严重的生殖道症状及不孕症，还具有免疫毒性、基因毒性等，对人也有雌激素作用。

玉米赤霉烯酮一般用薄层色谱、高效液相色谱法检测, 但因其操作繁杂、费用昂贵而影响实际应用。

而使用玉米赤霉烯酮ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中玉米赤霉烯酮残留。

本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品，操作时间低于60min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被玉米赤霉烯酮抗原，样本中玉米赤霉烯酮和此抗原竞争玉米赤霉烯酮的抗体，酶标二抗催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的玉米赤霉烯酮成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中玉米赤霉烯酮的含量。

三、适用范围可定性、定量检测玉米及玉米制品、饲料等样本中的玉米赤霉烯酮。

四、交叉反应率玉米赤霉烯酮……………………………………………100%玉米赤霉酮…………………………………………13%玉米赤霉醇 (1)五、检测步骤测定前应须知：1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。

2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。

3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。

4、在所有恒温孵育过程中，躲免光线照射，用盖板膜封住微孔板。

5、标品里含有玉米赤霉烯酮，操作时应戴手套操作，躲免皮肤接触。

操作步骤：1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

1.；2. 1-6号孔分别按次序由小到大加入浓度为0--2ppb 标准品溶液各50ul ，剩余孔从7号开始分别加入要测定的样品的稀释液；然后从1号开始的所有孔分别加入50ul 稀释后的酶标抗原溶液，加盖后放入37℃培养箱，进行30分钟温育；3. 孵育完成后，倒掉孔内所有试剂，每孔加入约250ul 洗涤液，洗板5次；4. 5次洗板后拍干酶标孔（拍干后残留的气泡可用吸头戳破），按照先后顺序，所有孔先加入50ul 底物a ，然后所有孔再加入50ul 底物b ，加盖后放入37℃培养箱，进行15分钟温育；显色反应后每个孔基本都会呈现出不同程度的蓝色，肉眼能明显的看到1-6号孔的蓝色是由深到浅的（毒素含量越低，蓝色越深；反之亦然。

），样品孔则由于毒素含量的不同，呈现出显色示意图5. 显色反应完成后，在每个孔中加入50ul 的终止液，蓝色变成黄色，混匀后上450nm 波长的酶标仪读取吸光度值。

1.；2. 1-6号孔分别按次序由小到大加入浓度为0--360ppb 标准品溶液各50ul ，剩余孔从7号开始分别加入稀释好的样品液；然后从1号开始的所有孔分别加入50ul 酶标记物溶液，最后在每孔加入50ul 抗试剂，加盖后放入37℃培养箱，进行20分钟温育；3. 孵育完成后，倒掉孔内所有试剂，每孔加入约250ul 洗涤液，洗板5次；4. 5次洗板后拍干酶标孔（拍干后残留的气泡可用吸头戳破），按照先后顺序，所有孔先加入50ul 底物液，然后所有孔再加入50ul 显色液，加盖后放入37℃培养箱，进行15分钟温育；显色反应后每个孔基本都会呈现出不同程度的蓝色，肉眼能明显的看到1-6号孔的蓝色是由深到浅的（毒素含量越低，蓝色越深；反之亦然。

），样品孔则由于毒素含量的不同，呈现出显色示意图5.显色反应完成后，在每个孔中加入50ul 的终止液，蓝色变成黄色，混匀后上450nm 波长的酶标仪读取吸光度值。

玉米赤霉烯酮毒素试剂盒操作流程示意图1.；2. 1-6号孔分别按次序由小到大加入浓度为0—2.4ppb 标准品溶液各50ul ，剩余孔从7号开始分别加入稀释好的样品液；然后从1号开始的所有孔分别加入50ul 酶标记物溶液，最后在每孔加入50ul 抗试剂，加盖后放入37℃培养箱，进行20分钟温育；3. 孵育完成后，倒掉孔内所有试剂，每孔加入约250ul 洗涤液，洗板5次；4. 5次洗板后拍干酶标孔（拍干后残留的气泡可用吸头戳破），按照先后顺序，所有孔先加入50ul 底物液，然后所有孔再加入50ul 显色液，加盖后放入37℃培养箱，进行15分钟温育；显色反应后每个孔基本都会呈现出不同程度的蓝色，肉眼能明显的看到1-6号孔的蓝色是由深到浅的（毒素含量越低，蓝色越深；反之亦然。

ELISA kit for quantitative detection of Zearalenone一、概要玉米赤霉烯酮从有赤霉病的玉米中分离得到，其产毒菌主要是镰刀菌属(Fusarium)的菌侏，如禾谷镰刀菌(F.graminearum)和三线镰刀菌(F.tricinctum)。

玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物, 玉米赤霉烯酮的耐热性较强,110℃下处理1 h才被完全破坏。

人食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产，死胎和畸胎。

食用含赤霉病麦面粉制作的各种面食也可引起中枢神经系统的中毒症状，如恶心，发冷，头痛，神智抑郁和共济失调等.本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物及其制品中的ZEN含量进行快速、定量检测。

二、原理本试剂盒是利用间接酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达1 µg/kg（ppb）。

样品或标准品中游离的玉米赤霉烯酮与包被在微孔中的抗原竞争结合游离的玉米赤霉烯酮抗体上的结合位点，形成抗原抗体结合物，经洗板洗去多余的抗体与玉米赤霉烯酮后，加入酶标记的二抗与玉米赤霉烯酮抗体结合，经再次洗板后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明呕吐毒素越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的玉米赤霉烯酮污染水平。

三、试剂盒构成1、反应板支架…………………………………………………………………………1块2、玉米赤霉烯酮抗原包被反应板……………………………………………………….36孔3、玉米赤霉烯酮标准品溶液（0 ppb，1 ppb，2.5 ppb，5 ppb，10 ppb，20 ppb）…1套4、玉米赤霉烯酮抗体………………………………………………………1瓶5、样品稀释液……………………………………………………………………1瓶6、抗体稀释液……………………………………………………………………1瓶7、酶标二抗溶液………………………………………………………………1瓶8、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶9、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶10、终止液………………………………………………………………………………1瓶11、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA检测试剂盒使用指南1.简介：1.1 本文档旨在提供ELISA检测试剂盒的详细使用指南，以帮助用户正确、高效地进行ELISA检测。

1.2 ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫测定方法，用于检测体液中特定抗原或抗体的存在与浓度。

1.3 本文档将涵盖ELISA检测试剂盒的准备、样本处理、试剂操作、结果读取等详细步骤。

2.准备：2.1 确保实验室环境整洁，无污染。

2.2 检查所需试剂、仪器和设备是否完整，并检查有效期和储存条件。

2.3 根据实验需要，准备所需样本和质控品，并储存于适当的条件下。

3.样本处理：3.1 根据实验目的选择合适的样本类型，如血清、血浆、尿液等。

3.2 根据试剂盒说明书的要求，对样本进行适当的稀释和预处理。

3.3 严格控制操作条件，避免样本污染和交叉污染。

4.试剂操作：4.1 根据试剂盒说明书，将所需试剂从冰箱中取出，并在室温下适当恢复。

4.2 严格按照说明书的要求，对试剂进行稀释和混合。

4.3 操作过程中注意洁净实验台面，避免试剂交叉污染。

5.检测步骤：5.1 将适量的稀释后的样本、质控品和标准品分别装入试管中。

5.2 添加适量的酶标记抗体或底物，并充分混匀。

5.3 按照试剂盒说明书的要求，进行孵育和洗涤步骤。

5.4 添加底物并进行反应，控制反应时间。

5.5 停止反应，并使用酶标仪测量吸光度。

6.结果读取：6.1 根据试剂盒说明书，根据吸光度值和标准曲线，计算样本中目标物质的浓度。

6.2 将测量结果记录，并进行统计和分析。

6.3 评估实验结果的可靠性，并进行结果的解释和报告。

7.注意事项：7.1 严格按照试剂盒说明书的要求进行操作，避免任何操作步骤的误差和误操作。

7.2 注意实验室安全，避免接触有害化学物质，正确使用防护设备。

7.3 在实验过程中遵循生物安全操作规范，避免潜在的感染风险。

此外，本文档涉及附件，请在附件部分查看相关详细信息。

《饲料及饲料原料中玉米赤霉烯酮的快速筛查胶体金快速定量法》江西省地方标准编制说明一、标准制定意义（一）介绍玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)为一种白色结晶，又称F-2毒素，是由禾谷镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物。

1962年Stob等首先从发霉的玉米中分离得到了该毒素，命名为玉米赤霉烯酮；1966年Urry首次阐明了该毒素的结构，并将此结构命名为F-2毒素，后又被改称为ZEN。

ZEN为白色晶体，分子式C18H22O5，化学名为6-(10-羟基-6氧基-1-碳烯基)β-雷琐酸-μ-内酯[6-(10-hydroxy-6-OXO-trans-1-undeceny)β-resorcylicacid lactone]，熔点164~165℃，紫外线光谱最大吸收为236nm、274nm和316nm。

红外线光谱最大吸收为970nm，其甲醇溶液在254nm短紫外光照射下呈明亮的绿-蓝色荧光。

ZEN不溶于水，溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇及乙醇等。

在植物体内，ZEN主要代谢产生α-玉米赤霉烯醇(α-Zearalenol，a-ZOL)。

在动物及人体内，除了可以代谢产生α-ZOL外，ZEN还可代谢产生β-玉米赤霉烯醇(β-zearalenol，β-ZOL)，α-ZOL和β-ZOL又可以相互转化并进一步代谢产生α-玉米赤霉醇(zeranol，α-zearalanol，ZAL)及β-玉米赤霉醇(Taleranol，β-Zearalanol，TAL)，而ZAL、TAL以及玉米赤霉醇(zearalanone，ZAN)又可相互转化。

ZEN主要污染玉米、高粱、小麦、大麦等粮谷类作物及其制品。

Toshitsugu对19个国家和地区的谷物、食品及饲料中所含的ZEN进行了调查发现，包括中国、阿根廷、加拿大、波兰及也门等众多国家和地区的样品均有不同程度的污染。

借助被污染的乳制品、肉制品等动物源性食品，ZEN及其代谢产物可以进入人体，给人类的健康造成威胁。