玉米赤霉烯酮 (ZEN) ELISA 快速检测试剂盒操作说明书

玉米赤霉烯酮ELISA快速检测试剂盒操作说明书1、简介本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附ELISA原理快速定量检测谷物、饲料中的玉米赤霉烯酮（ZearaLenone,ZEN）。

谷物/饲料的前处理包括：提取、过滤、稀释，处理时间大约为20-40分钟。

本试剂盒的检测限为：10 ppb；谷物/饲料中ZEN的回收率≥80%；批内、批间变异系数<15% 。

2、试剂盒组成A. 24/48/96孔ZEN酶标板: 3/6/12条×8孔B. 20×浓缩洗涤液：25mL (用蒸馏水稀释20倍使用) 1瓶C. ZEN抗体: 3/6/12mL 1瓶(红盖)D. 酶标二抗：3/6/12 mL 1瓶(绿盖)E. 显色液：3/6/12 mL 1瓶(蓝盖)F. 终止液:3/6 mL 1瓶(黄盖)G. ZEN标准品:1.5/2mL/瓶（0、30、60、200、500ppb）各1瓶H. 操作说明书1份注意：标准品含有低浓度ZEN、终止液含2 N H2SO4，需小心取用；勿在有效期外使用本试剂盒。

3、贮存条件与有效期2-8℃避光贮存，忌0℃以下冻存，有效期见试剂盒内盖。

4、样品处理程序●实验准备：配制60%甲醇水溶液（v/v，60:40）和20%甲醇水溶液（v/v，20:80）。

注意：请精确配制上述溶液，以免影响检测的准确性。

●称取5 g 具有代表性的粉碎样品于100 mL带塞三角瓶内，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液。

●将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡3分钟后，用whatman 1号滤纸过滤，收集滤液。

●取滤液2mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。

注意：某些样品待检液(如花生等)久置影响检测结果的准确性，为保证检测的准确性，样品提取后请即时检测。

若样品待检液不立即检测，请将其存储于棕色玻璃瓶内，2-8℃避光保存。

试剂盒在使用前，请将试剂盒内所有试剂放到室温（20-25℃）进行温度平衡。

饲料中玉米赤霉烯酮快速定量检测方法的研究王 雄 王 津 （北京中检维康技术有限公司）程宗佳 博士 （美国大豆协会北京办事处饲料技术主任）摘要：利用免疫亲和柱荧光光度法测定了饲料中玉米赤霉烯酮，检测灵敏度为0.1mg/kg，检测范围为：0～5mg/kg，变异系数为3.3%～13.3%，在其检测范围内的回收率为97%～106%，分析1个样品的时间只需25min。

关键词：玉米赤霉烯酮；饲料；检测玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEN），又称F2毒素，是由禾谷镰刀菌等菌种产生的有毒代谢产物，是一种雌激素真菌毒素，化学名为6-（10羟基-6氧基-1-炭稀基）β-雷琐酸-μ-内脂，是一种白色的结晶，分子式为C18H22O5，分子量为318；熔点为164～165℃；紫外线光谱最大吸收236nm、274nm和316nm；红外线光谱最大吸收为970nm。

纯的玉米赤霉烯酮不溶于水、二硫化碳和四氯化碳；溶于碱性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、醋酸乙酯、乙腈和乙醇；微溶于石油醚（b.p.30～60℃），在紫外线照射下呈蓝绿色（刘继业，2001）。

米赤霉烯酮最初是从赤霉病玉米中分离出来的，有15种以上的衍生物，其主要存在于玉米和玉米制品中，小麦、大麦、高粱、大米中也有一定程度的分布，ZEN主要污染玉米、麦类、谷物等，在世界各地各种粮谷与饲料中均有存在。

玉米赤霉烯酮具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物不孕或流产，对家禽、猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来很大的经济损失。

目前玉米赤霉烯酮的测定方法有薄层色谱法（Quiroga等，1994；杨曙明等，1994）、气相色谱法-质谱（Bennett等，1994）、酶联免疫吸附法（Bagnati 等，1991）等。

Fazekas等(2001)和Visconti等(1998)利用免疫亲和柱-HPLC法测定了玉米样品中的玉米赤霉烯酮，Scott等(1999)利用免疫亲和柱-荧光法和免疫亲和柱-HPLC法快速测定了玉米样品中的玉米赤霉烯酮。

玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案--10min快速定量一、玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN污染情况玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是由镰刀菌产生的一种霉菌毒素，属于二羟基苯甲酸内酯类化合物，具有雌激素活性，分子式为C18H2205，相对分子量318.4。

玉米赤霉烯酮ZEN主要污染玉米、小麦、大米、棉籽等粮谷作物，可引起动物和人的雌激素过多综合征，还具有生殖毒性、免疫毒性、基因毒性及可疑致癌性等。

2003年止，根据世界粮农组织公布已有19个国家制定了食物中玉米赤霉烯酮ZENDE 限量标准，欧盟规定精炼玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN不得超过200μg/kg。

中国标准规定，玉米、小麦及其制品中玉米赤霉烯酮ZEN不得超过60μg/kg，但没有规定植物油中玉米赤霉烯酮的限量标准。

但农作物特别是玉米种的玉米赤霉烯酮ZEN检出率很高，而植物油均是以这些农作物为基本原料，因此非常有必要对玉米及玉米油中的玉米赤霉烯酮ZEN进行检测与控制。

二、玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮ZEN国家残留限量标准食品类别 限量标准（μg/kg）玉米、玉米面（渣、片） 60大麦、小麦、麦片、小麦粉（面粉） 60引自：《GB 2761-2011 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》三、飞测生物玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮快速定量检测方案--10min快速定量上海飞测生物基于全球领先的荧光定量POCT技术平台，在国内率先推出了玉米赤霉烯酮荧光定量检测试纸条，本产品可在10min快速定量的检测出玉米和玉米油中玉米赤霉烯酮的残留含量，样品前处理简单（仅需8min），检测操作简便，采用荧光免疫定量分析仪读数，结果准确可靠且可现场打印，准确性符合HPLC法的检测结果，适用于各类玉米及玉米油加工企业及检测机构。

3.1. 玉米赤霉烯酮荧光定量检测试◆ 检测灵敏度：5μg/kg；◆ 定量线性范围：10.0μg/kg ◆ 样品前处理时间：8min； ◆ 检测时间：10min；◆ 准确度：回收率为80%-125%◆特异性：在1000μg/kg 浓度3.2. 检测所需配备的仪器和耗材编 号 1 荧光免疫定2 20-2003 100-1004 1-5ml 5 粉碎机6 旋转摇床或者漩涡7 4000转低速离8检测试纸条性能 /kg - 500.0μg/kg； 125%；浓度水平下与其它真菌毒素无交叉反应；耗材 名称配备 免疫定量分析仪 飞测生物配备 200ul 移液器 用户配备 1000ul 移液器 用户配备 5ml 移液器 用户配备 碎机（500g）用户配备 者漩涡振荡器（选配） 用户配备 低速离心机（选配）用户配备 10ml 离心管用户配备数量 1台 1把 1把 1把 1台 1台 1台若干93.3. 样品前处理过程3.4. 检测操作过程3.5. 结果判读和输出所有产品均采用便携式荧光误判。

玉米赤霉烯酮检测方法玉米赤霉烯酮是一种由产自赤霉菌的黄曲霉烯酮合成的毒素。

该毒素在玉米和其他谷物中广泛存在，对人和动物的健康有害。

因此，玉米赤霉烯酮的检测方法至关重要，以保障食品安全和质量。

目前，市场上常用的玉米赤霉烯酮检测方法主要有以下几种：1. 高效液相色谱法（HPLC）：该方法是将样品溶解后经过净化处理，然后使用高效液相色谱仪进行分析。

这种方法可以测定不同类型的赤霉烯酮类毒素，但是需要较复杂的样品预处理过程。

2. 气相色谱法（GC）：这种方法是将样品中的赤霉烯酮蒸发，然后通过气相色谱进行定量分析。

该方法对于特定类型的赤霉烯酮类毒素的测定较为准确，但需要耗费较多的时间和资源。

3. 免疫分析法：这种方法利用特殊的抗体与赤霉烯酮结合，产生可见的信号，从而测定样品中的赤霉烯酮含量。

这种方法操作简便，结果可即时获得，但是对样品中的干扰物较为敏感。

4. 毛细管电泳法（CE）：这种方法利用样品在毛细管中的化学性质差异，通过分离电泳来测定赤霉烯酮的含量。

该方法适用于复杂的样品矩阵，并且可同时测定多种赤霉烯酮。

除了以上主流的检测方法，还有一些新兴的检测技术被应用到玉米赤霉烯酮的检测中：1. 生物传感器：利用生物分子与赤霉烯酮的特异性结合，通过传感器产生的电信号来测定赤霉烯酮含量。

这种方法具有灵敏度高、响应速度快的优势，但是需要对传感器进行特定设计和构建。

2. 分子印迹技术：利用功能单体与赤霉烯酮形成特异的相互作用，构建具有特异性识别能力的分子印迹聚合物。

该方法具有高选择性和较好的再生性，但是制备分子印迹聚合物需要较长的时间和较高的成本。

以上只是介绍了部分常用的玉米赤霉烯酮检测方法，每种方法都有其优缺点和适用范围。

在实际应用中，可以根据实验室条件、检测要求和经济成本等方面考虑选择合适的方法。

同时，需要注意的是，不同国家和地区可能存在不同的食品安全标准和监管要求，因此在检测过程中也需要遵循相应的法规和指南。

养殖与饲料2020年第09期玉米赤霉烯酮（zearalenone ，ZEA ）又名F-2毒素，是一种主要由镰刀菌产生的高毒性、低分子质量的次级代谢产物，它广泛存在于玉米、大麦、小麦、燕麦、高粱和其他谷物中，其化学结构性质较稳定，在高温下不易分解，在食品或饲料的加工过程中均不易被破坏，且难溶于水，易溶于甲醇。

玉米赤霉烯酮对人类健康有巨大威胁，主要表现在具有类雌激素的作用，影响生殖系统[1]、损害肝脏系统[1]、引起氧化损伤[2]和破坏免疫系统[3]。

朱风华等[4]对山东省2018年饲料中玉米赤霉烯酮污染状况调查显示玉米污染率为34.99%，超标率为20.22%，猪配合饲料中生长及育肥猪配合饲料ZEN 污染率最高，为48.78%。

陈丽媛[5]对全国2018年1-6月饲料及原料霉菌毒素分析报告中显示，饲料原料中ZEN 检出率为99.7%，平均含量为190.20μg/kg 。

众多的研究课题、调查报告表明，饲料原料及成品料均存在不同程度玉米赤霉烯酮污染和超标的情况，由于玉米赤霉烯酮能引起母猪出现经常性的假孕现象，导致配种失败次数增加。

阻碍母猪妊娠阶段胎盘正常发育，胎猪重量减轻，大大降低分娩出生重和存活率，易出现死胎、木乃伊胎，导致初生仔母猪阴户红肿，仔公猪乳腺增大等一系列繁殖功能性问题。

因此，在现今畜牧业生产中，提高原料品控意识，防止饲料中玉米赤霉烯酮污染，提高母猪的繁殖性能和产仔壮仔率，增强养殖场的竞争能力已成为广大养殖户最关注的问题之一。

1玉米赤霉烯酮的检测随着科学技术的发展，高、精、尖仪器设备的广泛应用，检测技术和能力水平上升到了一个更高的台阶。

玉米赤霉烯酮的检测技术多样，周妍等[6]在玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展中详细介绍了气相色谱法对饲料以及肉中ZEN 检出限为50μg/kg ，该法对饲料或食品中ZEN 的定量定性分析具有灵敏度高、回收率高等特点，但该方法对设备要求较高。

薄层色谱法测定谷物中的ZEN 含量，检出限为200ng/kg ，但该法灵敏度稍差、易被主观因素影响。

养殖与饲料2017年第6期摘要玉米赤霉烯酮（Zearalenone ，简称ZEN ）亦称F-2毒素，其来源于赤霉病的玉米。

ZEN 产毒菌有三线镰刀菌（）、禾谷镰刀菌（）等。

玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，可致使畜禽急性、慢性中毒，造成畜禽繁殖机能异常，严重者引起死亡，给畜牧业带来严重的经济损失。

本文阐述当前饲料中玉米赤霉烯酮的检测方法。

关键词玉米赤霉烯酮；气相色谱法；高效液相色谱法；生物学检测法；免疫学检测方法；薄层层析法动物饲料中玉米赤霉烯酮的检测方法代荣逵1吕刚2王亮21.湛江中科技术服务有限公司，广东湛江524043；2.渔仁堂生物科技（湛江）有限公司，广东湛江524043收稿日期：2017-03-29代荣逵，男，1988年生。

1气相色谱法（Gas Chromatography ，简称GC ）气相色谱法一般用MS 检测器，能够对不同的镰刀菌毒素进行同时检测，灵敏度也相对较高。

相关学者在检测饲料中玉米赤霉烯酮时采用GC 法，结果显示在50～600ng/L 玉米赤霉烯酮浓度范围内，与峰面积响应值的线性关系较为良好，最低检出限为50ng ；饲料中毒素在添加浓度100～500ng/L 范围内，回收率达80%以上。

利用气相色谱法检测饲料中玉米赤霉烯酮具有较高的应用范围和回收率，能够应用于定性、定量分析饲料中玉米赤霉烯酮，但是值得提出的是由于设备的实用性问题，该方法并不能作为常规方法进行饲料中玉米赤霉烯酮的检测。

2高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ，简称HPLC ）高效液相色谱法作为当前国内外最常用和最权威的一种真菌毒素检测方法，是一种以液体为流动相的新型色谱技术，可以同时实现定性、定量检测毒素；然而因真菌的毒素不同，其性质不同，需对已达到最佳的分析条件进行综合考虑，以期实现较为理想的分离效果。

高效液相色谱法（HPLC ）原理如下，基于适当的流动相条件，利用适宜的色谱柱，对样品中毒素通过色谱柱柱层分离后，采用一些设备诸如突光检测器（FLD ）、紫外检测器等进行检测，对出色谱峰的面积进行测量计算含量。

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。

ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装，包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。

本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，以帮助用户顺利进行ELISA实验。

1.准备实验材料：-ELISA检测试剂盒：根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒，确保其在储存和运输过程中无损坏。

-样本：准备需要检测的样本，如血清、尿液、组织提取物等。

确保样本的质量和浓度满足实验要求。

-微孔板：根据试剂盒的要求选择合适的微孔板，同时注意其质量有无污染。

-基本实验设备：如计量器、洗板机、显微镜等。

2.实验步骤：-取出储存在4℃的试剂，确保其达到室温（一般为20-25℃），再根据实验步骤进行下一步操作。

-预处理样本：根据试剂盒的说明书，进行样本的预处理，包括稀释、纯化、稳定化等步骤。

-加样：将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中，通常每个孔需要加入100-200μL的样品。

-洗板：使用洗板机或手工操作，将孔中的杂质洗净。

洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。

-加入特异性抗体：根据试剂盒的说明书，将稀释好的特异性抗体加入各孔中，确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。

-洗板：重复第4步的操作，将未结合的抗体洗净。

-加入酶标记物：根据试剂盒的说明书，将稀释好的酶标记物加入各孔中，确保加入的量准确无误。

-洗板：重复第4步的操作，将未结合的酶标记物洗净。

-加入底物：将稀释好的底物加入各孔中，使其与酶标记物反应，生成可视化的颜色。

-终止反应：根据试剂盒的要求，在一定的反应时间后，加入终止剂停止反应。

终止剂的选择需符合试剂盒的要求。

-检测结果：使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化，通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。

3.数据分析：-计算样本的结果：根据试剂盒的说明书，根据吸光度或颜色强度测量结果，计算样本中目标物的浓度。

ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。

它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。

本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。

一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。

2.样本准备：根据实验要求，准备样本。

如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。

3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。

例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。

4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。

5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。

确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。

二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。

确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。

2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。

标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。

3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。

孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。

4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。

洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。

5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。

6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。

7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。