实验一 质粒DNA的提取

质粒dna的提取实验报告质粒DNA的提取实验报告引言：DNA提取是分子生物学研究中的基础实验之一，通过提取DNA可以进一步进行PCR扩增、基因克隆等实验。

本实验旨在提取质粒DNA，质粒DNA是存在于细菌细胞质中的环状DNA分子，具有重要的研究价值。

本文将详细介绍实验的步骤、原理以及结果分析。

材料与方法：1. 细菌培养液：选择含有目标质粒的细菌进行培养，如大肠杆菌。

2. 细菌培养基：选择适宜的培养基，如LB培养基。

3. 细菌培养器具：如培养皿、离心管等。

4. DNA提取试剂盒：选择适合的DNA提取试剂盒，如酚/氯仿法或硅胶柱法。

5. 离心机：用于离心细菌培养液以获取细菌沉淀。

6. 紫外可见分光光度计：用于检测DNA的纯度和浓度。

实验步骤：1. 细菌培养：将含有目标质粒的细菌接种于LB培养基中，培养过夜，使细菌充分繁殖。

2. 收集细菌：将培养液离心，以12000转/分钟离心10分钟，将细菌沉淀收集。

3. 细胞裂解：加入适量的细胞裂解缓冲液，使细菌细胞裂解，释放DNA。

4. 蛋白质沉淀：加入酚/氯仿混合液，离心分离上层的DNA溶液和下层的蛋白质。

5. DNA沉淀：将DNA溶液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，轻轻倒置离心管，使DNA沉淀出来。

6. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除残余的盐和杂质。

7. DNA溶解：用适量的去离子水溶解DNA沉淀，得到纯净的DNA溶液。

8. DNA浓度检测：用紫外可见分光光度计检测DNA的浓度和纯度。

结果与分析：通过实验，成功提取了质粒DNA，并进行了浓度检测。

根据实验结果，我们可以得到DNA的浓度和纯度信息，这对于后续的实验设计和操作非常重要。

此外，实验中还可以通过凝胶电泳等方法对提取的DNA进行进一步的分析，如确定DNA的大小和完整性。

结论：本实验成功提取了质粒DNA，并获得了纯净的DNA溶液。

通过浓度检测和进一步的分析，我们可以进一步了解DNA的特性和应用。

质粒dna提取及电泳检测实验报告(一)质粒DNA提取及电泳检测实验报告实验目的•提取质粒DNA并检测其纯度和浓度•进行电泳检测，分析质粒DNA的大小和完整性实验材料•培养基含有质粒DNA的细菌培养物•高纯度DNA提取试剂盒•离心管、移液器、显微镜等常规实验仪器设备实验步骤1.收取 mL培养基含有细菌的培养物样品，放入离心管中。

2.将离心管置于高速离心机中，以12000 rpm离心5分钟，使细菌沉淀于离心管底部。

3.弃掉上清液，轻轻地加入合适的缓冲溶液悬浮沉淀的细菌细胞。

4.加入适量的裂解液使细菌细胞裂解，使质粒DNA释放到溶液中。

5.加入蛋白酶K进行蛋白质降解，使DNA更易提取。

6.加入冷乙醇混合液，沉淀DNA。

7.使用离心机离心，将沉淀的DNA分离出来。

8.用缓冲液洗涤提取的DNA，去除杂质。

9.使用专门的仪器或试剂盒检测提取的质粒DNA的浓度和纯度。

10.备取质粒DNA样品，进行电泳检测。

结果与分析•通过电泳检测，可以观察到质粒DNA的带状图案。

•根据带状图案的迁移距离，可以初步判断质粒DNA的大小。

•如果带状图案清晰且没有模糊的杂带，说明质粒DNA的完整性良好。

•通过测量提取的质粒DNA的浓度和纯度，可以进一步评估实验结果的可靠性。

结论•本实验成功提取并检测了质粒DNA，并通过电泳检测初步分析了其大小和完整性。

•经测量，质粒DNA的浓度和纯度符合实验要求。

•本实验结果可应用于后续实验或研究中，为进一步分析质粒DNA 的功能提供了基础。

实验注意事项•操作过程需严格遵守实验室安全规范，避免接触有毒或有害物质。

•仪器设备使用前需检查并确保正常工作。

•实验室内要保持清洁，避免污染样品。

•测量和记录数据时，要仔细操作，确保准确性和可重复性。

参考文献（如果有的话，请列出相关参考资料）。

质粒dna提取实验报告实验目的：本实验旨在通过提取细菌质粒DNA，了解细菌质粒的结构、基因组成和使用纯度较高的质粒DNA的重要性，为后续分子生物学实验打下基础。

实验器材：- 细菌- LB液体培养基- 1.5mL微量离心管- 离心机- 动态温度水浴仪- 恒温振荡器- 超声波清洗器- 洁净平台和无菌技术用品- 始终细切割刀和取样刷- 蒸馏水、2% SDS、醋酸铵、90%乙醇、异丙醇和干燥机实验步骤：1. 制备细菌：在LB液体培养基中培养要提取质粒DNA的细菌，由于质粒DNA在对数生长期达到最高含量，因此在显微镜下观察到对数生长期的细菌时进行取样。

2. 细胞打破和溶解质粒：离心细胞，倒去培养基，加入10mL蒸馏水，用振荡器在4℃下以300rpm摇晃3小时。

然后沉淀细胞，在70℃下干燥30分钟。

随后加入150μL1%SDS和其他化学试剂混合物，使用至少15次的起始细切割刀切成绒毛状的颗粒，浸泡在低盐度醋酸铵中2小时以上。

3. 质粒DNA纯化：将浸泡了细菌绒毛颗粒的混合物离心，抽取上清液，将其加入2x体积的异丙醇与等体积的75%，然后用再生明胶抑制蛋白质在异丙醇中凝聚。

离心，除去异丙醇上清液，加入70%乙醇洗涤。

最后用干燥机吸干。

4. 质量分析：分析提取到的质粒DNA的浓度和纯度，使用分光光度计对其进行光谱分析，以检测质粒DNA的A260/A280比例和A260/A230比例。

通过比较纯度，然后将质粒DNA冻保存至-20℃或-80℃。

实验结论：本实验成功提取了细菌的质粒DNA，并进行了纯化和分析。

质粒DNA的提取和纯化是基于一系列物理和化学方法和技术的，实际操作中需要仔细操作，耐心等待，严格注意洁净操作，才能达到最佳的提取和纯化效果。

通过本实验，我进一步了解了在分子生物学和遗传学中质粒DNA的重要性，它可适用于多种研究项目和应用，例如质粒克隆、基因编辑、基因表达、和质粒蛋白质互作等。

实验一、质粒DNA的提取及检测【实验目的】1、掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤2、掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术3、学会PCR操作的基本技术第一部分质粒DNA的提取一、实验原理：碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。

在pH值介于～这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。

当加入的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。

二、仪器与试剂1、仪器恒温摇床、台式离心机2、试剂溶液I、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、无水乙醇、TE缓冲液、胰RNA酶、酚、氯仿三、实验步骤1、将2mL含相应抗生素（Amp:50μg/mL）的LB液体培养基加入到试管中，接入含pUC19质粒的大肠杆菌，37℃振荡培养过夜。

2、取培养物倒入微量离心管中，4000r/min离心2min。

3、吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。

4、将细菌沉淀悬浮于100μL溶液I中，充分混匀，室温放置10 min。

5、加200μL溶液Ⅱ（新鲜配制），盖紧管皿，混匀内容物，将离心管放冰上5min。

6、加入150μL溶液Ⅲ（冰上预冷），盖紧管口，颠倒数次使混匀。

冰上放置15min。

7、12000r/min，离心15min，将上清转至另一离心管中。

8、向上清中加入等体积酚：氯仿（1：1）（去蛋白），反复混匀，12000r/min，离心5min，将上清转移到另一离心管中。

9、向上清加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5～10min。

12000r/min，离心5min。

质粒DNA的提取一、实验方法碱裂解法抽提质粒DNA二、实验原理基于质粒DNA与染色体DNA变性与复性的差异。

三、实验步骤1）质粒提取1. 10,000g,1min离心收集1.5－5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中。

2. 加入100μl溶液1，振荡至彻底悬浮。

3. 加入200μl溶液2，立即轻柔颠倒离心管6次，使菌体充分裂解，随后将离心管冰上放置3分钟4. 加入150μl溶液3，立即温和颠倒离心管数次，冰上放置3分钟，10，000g离心10min。

5. 将步骤4的上清转移至新的离心管（尽量去除杂质），加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇混合均匀10，000g离心5min。

6. 将步骤5的上清转移至新的离心管，加入2倍体积的无水乙醇，室温放置5－10min，沉降DNA7. 10，000g离心10分钟,弃乙醇，保留沉淀，加入1ml 70％的乙醇洗涤沉淀，10，000g离心5分钟8. 倒掉乙醇溶液，用吸水纸吸净管壁上的水珠，室温蒸发痕量乙醇9. 加入适量含RNase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA2）质粒鉴定→琼脂糖凝胶电泳灌胶：胶中加入荧光染料(SYBR Green I)加样：质粒+上样缓冲液→混匀电泳结果观察：UV灯下四、实验结果五、实验分析裂解细胞中除含有质粒DNA外，还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质，因此用碱裂解法除去杂质1、防止DNA裂解：Solution 11）、所含糖增加溶液黏度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切作用降解2）、所含EDTA抑制酶活性2、溶解与变性：Solution21)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性2）离子型表面活性剂SDS可溶解膜蛋白3、沉降与复性：Solution31)质粒DNA复性2）在钾盐中，染色体DNA形成缠连的不溶性网状结构，和不稳定的大分子RNA以及变性的蛋白质和细菌碎片等一起沉淀预期结果为剩余质粒DNA4、琼脂糖凝胶电泳1）荧光染色染料分子可嵌入双链DNA分子配对碱基之间2）琼脂糖可起到电泳和分子筛的作用，因所带电荷、分子量大小和构型不同，泳动速度不同六、误差分析实验失败，本组实验出现4条带，3明1暗，明亮处应为DNA分子数最多的，为质粒DNA，质粒DNA前有较暗的两条带，推测其中一条为未复性质粒DNA，可能Solution2处变性过长，不易复性，或Solution3处时间过短，复性不充分。

实验8 质粒DNA的提取（碱裂解法）一、实验目的了解碱裂解法提取质粒的基本原理和主要应用，掌握碱裂解法提取质粒的实验方法和各种试剂在提取过程中的作用。

二、实验原理碱裂解法是利用细菌染色体DNA与质粒DNA结构的大小差异来分离质粒DNA的。

碱性（pH 12.0~12.5）条件可以破坏碱基配对，宿主和质粒DNA的碱基之间的氢键被破坏。

当条件恢复正常时（加入酸性试剂中和），共价闭合环状的质粒DNA会迅速准确地恢复配对，重新形成完全天然的超螺旋分子；而较大的细菌染色体DNA分子则难以复性，会交联形成不溶于水的线团结构，缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀下来，而质粒DNA则留在上清液中，用异丙醇沉淀、70 %乙醇洗涤即可获得质粒DNA。

三、仪器设备微量取液器（2 μL；20 μL；200 μL；1 000 μL），tip头，手掌型离心机，1.5 mL离心管, 恒温水浴，制冰机，超净工作台，恒温培养箱。

振荡器，离心机，金属浴，电泳仪，凝胶成像仪。

四、实验试剂（1）溶液Ⅰ：50 mmol/L葡萄糖；20 mmol/L Tris·HCl（pH = 8.0）；10 mmol/L EDTA（pH=8.0），高压蒸汽灭菌（121 ℃，0.105 Mpa）20 min。

4 ℃贮存。

（2）溶液Ⅱ（现用现配）：0.2 mol/L NaOH；1 g / L SDS。

（3）溶液Ⅲ（pH 4.8）：每100 mL溶液中含5 mol/L乙酸钾60 mL；冰乙酸11.5 mL；H2O 28.5 mL。

（4）RNase（10 mg / mL），LB液体培养基，氨苄青霉素，异丙醇，70 %（V / V）乙醇，无菌水。

五、实验方法（1）分装3 mL LB液体培养基和3 μL氨苄青霉素（50 mg/mL）于15 mL玻璃试管中。

（2）用灭菌牙签挑取一白色单克隆，放入玻璃管内，置37 ℃恒温摇床中以200转/min培养，至OD600=2.0。

实验一-碱裂解法提取质粒DNA
碱裂解法是一种常用的质粒DNA提取方法。

下面是进行碱裂
解法提取质粒DNA的实验步骤：
1. 培养细胞：选择所需的质粒含有目标基因的细菌，如大肠杆菌等，并在适当的培养基中培养细菌，使其达到对数生长期。

2. 收集细菌：将培养好的细菌菌液转移到离心管中，并进行离心，以沉淀细菌。

3. 溶解细菌：加入一定浓度的碱液（例如0.2N NaOH）使细
菌溶解。

通常使用细菌菌液总量的1/5体积的碱液，并轻轻摇
晃混合。

4. 添加中和液：将等体积的中和液（例如3M乙酸酸化乙酸钠
溶液）加入到溶解好的细菌溶液中，并迅速而轻轻地混合。

5. 离心：将混合液进行离心，以除去沉淀的细菌残渣和碱液。

6. 提取DNA：将上一步离心得到的上清液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，并轻轻摇晃，使DNA沉淀。

7. 沉淀DNA：进行高速离心，使DNA沉淀。

8. 弃去上清液：弃去上清液，保留沉淀的DNA。

9. 洗涤DNA：使用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除残留的盐类和碱液。

10. 干燥DNA：使用洗涤干净的乙醇或空气干燥DNA沉淀。

11. 溶解DNA：用适当的缓冲液（如TE缓冲液）溶解DNA。

12. 储存DNA：将溶解好的DNA储存于适当的温度和条件下，用于后续实验。

实验一：质粒DNA提取+琼脂糖凝胶电泳*实验目的：1.掌握质粒DNA提取的基本原理和方法2.掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法*实验原理：1.DNA提取原理1）DNA提取要求：①保证DNA一级结构的完整性；②排除其他分子的污染，使其纯度尽可能提高。

2）DNA样品来源：①培养细胞；②组织样本；③血液样本。

3）主要试剂和材料及仪器：试剂和材料：RNA酶A、细胞悬浮液（Buffer P1)、细菌裂解液（Buffer P2）、中和液（Buffer P3）、漂洗液PW1、漂洗液PW2、洗脱液、质粒DNA吸附柱、滤液收集管仪器：微量移液器、台式微量高速离心机、电泳仪、水平电泳槽、紫外透射仪或凝胶成像系统。

2.电泳原理：1）概念：电泳是指带电粒子在电场中向电势降低的方向移动的现象，移动速度与粒子大小及所带电荷多少有关。

在一定pH条件下，核酸及蛋白质等生物分子呈带电状态，可以进行电泳分析。

2）迁移方向：DNA由负极向正极迁移3）影响目标物迁移速率的因素：分子大小、构象、凝胶浓度、琼脂糖种类、电泳缓冲液、嵌入染料的存在和使用电压等。

4）荧光强度（得率）：荧光的强度是同DNA片段的大小或数量成正比的。

5）琼脂糖凝胶电泳原理：(1)关于电泳技术:电泳常用于分离和纯化那些分子大小电荷性状或分个构象有所不同的生物大分子一尤其是蛋白质和核酸。

正因为如此，电泳已成为生物化学和分子生物学中应用最为广泛的技术之一，其中在分子生物学实验中最为常用的是琼脂糖凝胶电泳。

琼脂糖是一种海藻多糖，琼脂糖胶分离范围很大，但其分辨率却相对较低。

通过改变琼脂糖凝胶的浓度,应用标准的电泳技术可以分离200到50,000 bp大小的DNA片断。

一般琼脂糖胶浓度在0.5%到4%之间，琼脂糖凝胶浓度越大,凝胶就越硬。

较高浓度的琼脂糖胶有利于较小的DNA片断分离,而较低浓度的琼脂糖胶则可以分离较大的DNA片断。

(2)琼脂糖凝胶电泳条带的观察:通过观察示踪染料的迁移距离可以判断DNA的迁移距离。

实验一-碱裂解法提取质粒DNA 碱裂解法是一种常用的提取质粒DNA的方法。

质粒是一种裸露的、结构简单的小型环状DNA，它们存在于许多细菌细胞中，可以自主复制和表达。

质粒通常用于克隆和转化实验，是分子生物学实验中常用的工具之一。

一、实验目的通过碱裂解法提取质粒DNA，进一步了解质粒的基本性质和提取过程，为后续的分子生物学实验打下基础。

二、实验原理碱裂解法是一种利用细菌细胞壁和质粒DNA在不同pH值下稳定性的差异，将细胞壁和质粒DNA分离的方法。

在pH值高于7.5的环境下，细菌细胞壁的稳定性降低，而质粒DNA的稳定性相对较高。

通过加入碱液（如NaOH）并加热，可以破坏细菌细胞壁，使细胞内容物释放出来。

在pH值低于7.5的环境下，质粒DNA的稳定性降低，而细菌染色体DNA的稳定性相对较高。

通过加入高浓度的醋酸钾溶液并冰浴，可以沉淀出染色体DNA，而质粒DNA则留在上清液中。

三、实验步骤1.准备所需试剂和器材，包括细菌培养液、NaOH、KAc、冰浴、离心管、移液器等。

2.将细菌培养液倒入离心管中，用移液器加入适量NaOH，搅拌均匀。

3.将离心管放入沸水浴中加热5分钟，使细菌细胞壁破裂，释放出细胞内容物。

4.用移液器加入适量KAc，搅拌均匀，使pH值降低至7.5以下。

5.将离心管放入冰浴中冷却10分钟，使染色体DNA沉淀出来。

6.用离心机将上清液和沉淀物分开，收集上清液。

7.在收集的上清液中加入适量的乙醇，放在-20℃冰箱中冷冻1小时，使质粒DNA沉淀出来。

8.用离心机将沉淀物和上清液分开，收集沉淀物。

9.用适量的TE缓冲液溶解沉淀物，得到质粒DNA溶液。

10.用紫外分光光度计测定质粒DNA溶液的浓度和质量。

四、实验结果与数据分析1.实验结果：通过紫外分光光度计测定，得到质粒DNA溶液的浓度和质量。

通常，提取到的质粒DNA溶液需要有一定的浓度和质量才能进行后续的分子生物学实验。

2.数据分析：根据实验数据可以分析出提取到的质粒DNA溶液的质量和浓度是否符合要求。