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Caveolin_1对KDR信号通路的作用

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小窝蛋白—1在血—脑脊液屏障中作用的研究

小窝蛋白—1在血—脑脊液屏障中作用的研究

小窝蛋白—1在血—脑脊液屏障中作用的研究血-脑脊液屏障是维持中枢神经系统稳定的关键因素。

内皮细胞小窝蛋白（caveolins）的重要标志物小窝蛋白-1（caveolin-1）在血-脑脊液屏障中扮演重要角色。

caveolin-1参与了血-脑脊液屏障受外界侵略和信号转导的过程。

目前对caveolin-1的研究仍然较少，本次的回顾性研究认为caveolin-1对血-脑脊液屏障以及中枢神经系统疾病都具有非常重要的意义。

[Abstract]Blood cerebrospinal fluid barrier is the key factor to maintain the stability of central nervous system.Important marker （caveolin-1）of endothelial cell caveolins plays an important role in the blood brain cerebrospinal fluid barrier.caveolin-1 is involved in the process of blood cerebrospinal fluid barrier by external aggression and signal transduction.At present，the research on caveolin-1 is still few.This retrospective study suggests that caveolin-1 has a very important significance in the blood cerebrospinal fluid barrier and central nervous system diseases.[Key words]Blood cerebrospinal fluid barrier；Cell cellar；Caveolin-1；Tight connection腦微血管内皮细胞是血-脑脊液屏障的重要组成部分，内皮细胞质膜表面有丰富的内陷囊状结构，即为细胞窖（caveolae），也称为小窝。

Caveolin-1在急性肺损伤_急性呼吸窘迫综合征发病机制中的作用进展

Caveolin-1在急性肺损伤_急性呼吸窘迫综合征发病机制中的作用进展

ｄｏｍａｉｎ，ＣＳＤ；氨基酸８２～１０１），该结构域
是窖蛋白寡聚体的形成以及与其他蛋白相互作用所必需的。 信号分子与窖蛋白ＣＳＤ区结合的３种模体为：ＯＸＯＸ４＠、 ∞Ｘ４由Ｘ２①和中ＸｏＸ４０ｘ２∞，其中代表芳香环氨基酸（Ｔｒｐ、 Ｐｈｅ、Ｔｙｒ），Ｘ代表任意氨基酸。胞膜窖为这些信号分子提供 了一个发挥作用的平台，使各信号通路之间的串话（ｃｒｏｓｓ
［４］Ｋｒａｊｅｗｓｋａ ｗＭ，Ｍａｓｌｏｗｓｋａ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓｉｇｎａｌ
ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ
ＭＳ．Ｂｕｄｄｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｍｉｃｒｏｄｏｍａｉｎｓ
Ｒｅｖ Ｅ Ｓｔａｔ Ｎｏｎｌｉｎ Ｓｏｆｔ
ａｓ
２００４，９（２）：１９５．
ｔｅｎｓｉｏｎ
ｒｅｇｕ－
ｒｅ—
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓ
Ｍａｔ—
［５］Ｇａｒｒｅａｎ
Ｓ，Ｇａｏ ＸＰ，Ｂｒｏｖｋｏｖｙｃｈ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ｃａｖｅｏｌｉｎ－１ Ｂ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｕｎｇ
ｔｅｒ
Ｐｈｙｓ，２００６，７３（３Ｐｔｌ）：３１９１８．
ｌａｔｅｓ ＮＦ－ｋａｐｐａ ｓｐｏｎｓｅ
ｔｏ
ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ
１６６０
・综
述・
Ｃａｖｅｏｌｉｎ－１在急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合征发病机制中的作用进展。
吕学军，李玉英，钱桂生 （第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所，重庆４０００３７）
关键词：胞膜窖；窖蛋白；急性肺损伤；急性呼吸窘迫综合征 中图分类号：Ｒ５６３．８
文献标识码：Ａ
文章编号：１６７ｌ一８３４８（２００９）１３—１６６０－０２ 在ＡＬＩ／ＡＲＤＳ发病机制中起重要作用，特别是在肺泡上皮屏 障功能变化中扮演重要角色，主要体现以下方面。

Caveolaecaveolin-1与Wntβ-catenin通路-精选文档

Caveolaecaveolin-1与Wntβ-catenin通路-精选文档

Caveolaecaveolin-1与Wntβ-catenin通路Caveolae（小凹）是一种细胞膜表面特异性的凹陷结构，直径约为50-100nm，外观似囊泡或烧瓶状[1]。

caveolin-1（小凹蛋白）是Caveolae的主要功能蛋白，参与了Caveolae的形成，以及细胞增殖、分化和凋亡的调控，与肿瘤的发生发展有着密切关系。

最近的研究指明Wnt通路的核心分子β-catenin可结合于细胞膜上的Caveolin-1分子，两者相互作用参与体内多种生物学过程，现将其综述如下。

1Caveolae/caveolin-11.1Caveolae/caveolin-1的结构特性Caveolae的构成包括胆固醇、鞘磷脂、糖基鞘磷脂和其主要功能蛋白caveolin等。

caveolin家族至少包括三种亚型：caveolin-1，caveolin-2，caveolin-3。

其中caveolin-1、caveolin-2广泛存在于各种类型的细胞中，而caveolin-3仅在肌肉组织中表达。

Caveolae结构中含有大量受体及信号分子如酪氨酸激酶受体、eNOS、TGF/BMP、FGF和最近研究的热点Wnt 信号系统等。

1.2Caveolae/caveolin-1的生理作用Caveolin-1通过其骨架结构域（CSD）可与Caveolae内许多与细胞增殖分化相关的信号分子结合，使其保持非活性状态，从而抑制多种信号途径的下游激活和转导。

故caveolin-1被认为是信号通道的广泛抑制物，从而抑制细胞的增殖、促进细胞的成熟、分化，影响细胞的凋亡等，维持细胞的稳定。

2Wnt/β-catenin通路2.1WntWnt是一类分泌型糖蛋白，通过自分泌或旁分泌发挥作用。

Wnt作为调控细胞生长、分化和凋亡等各方面的分泌蛋白家族，亦是调节如胚胎发生，形态形成等必需的生物学过程的生长因子大家族。

2.2β-cateninβ-catenin是一种多功能的蛋白质，其主要位于细胞膜，而胞浆中游离量较少。

窖蛋白1在肿瘤及其血管生成中的作用

窖蛋白1在肿瘤及其血管生成中的作用

窖蛋白1在肿瘤及其血管生成中的作用孙园;周慧敏【摘要】Caveolin-1,the marker protein of caveolae, could recognize a variety of signal molecules and might be related to tumor metastasis and angiogenesis.The role of caveolin-1 in tumor angiogenesis has not been ascertained yet.It has been shown that caveolin-1 might play a dual function in tumor angiogenesis:either promoting or inhibiting.Caveolin-1 might act as an early diagnostic marker and therapeutic target in carcinoma.This article will review the effects of caveolin-1 on tumor invasion and angiogenesis and discuss the underlying mechanisms.%窖蛋白1（ caveolin－1）是胞膜窖（ caveolae）上的标志性蛋白，能够识别多种信号分子，与肿瘤的侵袭转移及血管生成等过程密切相关。

而caveolin－1在肿瘤血管生成中的作用尚未定论，目前认为caveolin－1在肿瘤及其血管生成中具有促进及抑制双重作用。

随着研究的不断深入，caveolin－1很可能成为肿瘤的治疗靶点或早期诊断指标。

本文就caveolin－1在肿瘤及其血管生成的作用进行综述。

【期刊名称】《大连医科大学学报》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P293-296)【关键词】窖蛋白1;肿瘤;血管生成【作者】孙园;周慧敏【作者单位】大连医科大学微生物教研室，辽宁大连116044;大连医科大学微生物教研室，辽宁大连116044【正文语种】中文【中图分类】R730.1生物膜是细胞的基础结构，与肿瘤的侵袭和转移息息相关。

CaveolaeCaveolin-1在血管生成中的作用

CaveolaeCaveolin-1在血管生成中的作用

随着人们生活水平的提高以及人口老龄化程度的加剧，以下肢动脉硬化闭塞症、糖尿病下肢血管病变等因下肢动脉管腔狭窄或闭塞而引起的下肢缺血性疾病的发病率逐年升高，国外调查发现，在普通人群中下肢缺血性疾病的发病率为3%～10%[1]。

且资料表明，10%～30%的严重下肢缺血患者于半年内死亡，而有25%～35%的患者将面临截肢[2]。

因此，下肢缺血性疾病是严重影响人类健康以及患者生活质量的主要疾病之一。

而传统的药物治疗、外科手术以及介入治疗只能适当缓解病变，并不能逆转下肢缺血性改变，且其远期疗效都不是很理想。

尤其是对于严重下肢缺血患者，采用外科手术以及介入治后仍然难以避免截肢以及死亡等主要并发症的发生[3]。

因此，对于下肢缺血性疾病的治疗是困扰临床医生的一个重大临床难题。

目前关于治疗缺血性疾病的研究热点是促血管生成。

促血管生成是指通过各种方法诱导缺血组织血管生成或侧支循环的建立，从而达到恢复血流灌注和血管的自我重建[4]。

目前大量的动物实验及临床实验均已证实促血管生成对缺血组织的血流灌注以及血管功能的恢复是非常有益的。

近年来发现小凹/微囊蛋白-1（Caveolae/Caveolin-1）是细胞信号传导的中心，参与细胞的生长、分化、迁移等多种生物学功能。

且有多数研究表明Caveolin-1参与血管生成的多个环节，对血管的生成起重要作用[5]。

本文就Caveolae/Caveolin-1在血管生成过程中的生物学作用进行综述。

1血管生成的发生机制血管生成是指在多个因素的调节下，由原已存在于组织的血管床通过出芽形式或者内填方式形成新的血管分支以及毛细血管丛的过程[6]，并且是累及多种因子、涉及多个环节的复杂反应，是已存在于血管内的内皮细胞经过细胞的增殖、迁移和重塑等过程的结果[7]。

其过程包括早期血管通透性的增加、细胞外基质的降解、内皮细胞的增殖、迁移、分化和血管管腔样结构的形成等多个环节[8]。

在下肢缺血性疾病中，由于动脉血流的减少或完全阻断可引起局部组织缺血、缺氧、组织坏死和炎性反应的发生等一系列病理过程。

Caveolin-1在乳腺癌中的表达及其意义的开题报告

Caveolin-1在乳腺癌中的表达及其意义的开题报告

Caveolin-1在乳腺癌中的表达及其意义的开题报告摘要：乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤，在乳腺癌的发生和发展中，多个分子信号通路参与其中。

其中Caveolin-1是一种与肿瘤发生和转移密切相关的膜结构蛋白，其在多种肿瘤中表达异常，包括乳腺癌。

本文将探讨Caveolin-1在乳腺癌中的表达及其意义，为乳腺癌的诊断和治疗提供参考。

一、研究背景乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率逐年上升。

乳腺癌的发生和发展是一个多因素、多阶段的过程，涉及许多信号通路的异常调节。

Caveolin-1是一种膜结构蛋白，与肿瘤的发生和转移密切相关。

近年来，研究发现Caveolin-1在多种肿瘤中表达异常，包括乳腺癌。

因此，探讨Caveolin-1在乳腺癌中的表达及其意义，对于了解乳腺癌的发生和发展机制具有重要意义。

二、研究目的本文旨在探讨Caveolin-1在乳腺癌中的表达及其意义，分析其在乳腺癌的诊断和治疗中的应用前景。

三、研究内容1. Caveolin-1的结构特点及功能2. Caveolin-1在肿瘤中的表达及其意义3. Caveolin-1在乳腺癌中的表达情况4. Caveolin-1与乳腺癌的关联研究进展5. Caveolin-1在乳腺癌的诊断和治疗中的应用前景四、研究方法本文采用文献综述的方式，对Caveolin-1在肿瘤中的表达及其意义，Caveolin-1在乳腺癌中的表达情况，Caveolin-1与乳腺癌的关联研究进展以及Caveolin-1在乳腺癌的诊断和治疗中的应用前景进行系统性分析。

五、预期成果通过对Caveolin-1在乳腺癌中的表达及其意义的研究，可以深入了解乳腺癌的病理生理机制，探索新的乳腺癌治疗策略。

同时，还可以为临床医生提供乳腺癌的诊断和治疗方案的参考。

六、研究意义Caveolin-1是一种具有重要生物学功能的膜结构蛋白，与肿瘤发生和转移密切相关。

对Caveolin-1在乳腺癌中的表达及其意义进行深入研究，有助于揭示乳腺癌的发生和发展机制，为乳腺癌的诊断和治疗提供新的思路和方法。

肺鳞状细胞癌中Caveolin-1的表达及意义

肺鳞状细胞癌中Caveolin-1的表达及意义韩非;赵兰香;邵晋晨;叶敏;秦钢;张杰【摘要】目的探讨Caveolin-1的表达与肺鳞状细胞癌临床病理特征、EGFR、MMP-9表达及预后的关系.方法采用免疫组化EnVision两步法检测84例肺鳞状细胞癌石蜡标本中Caveolin-1、EGFR、MMP-9的表达.结果 84例肺鳞状细胞癌中Caveolin-1、EGFR及MMP-9的阳性率分别为53.6%、72.6%及65.5%.Caveolin-1的表达与患者年龄、性别、组织学分级、肿瘤T分期无相关性(P>0.05),与肿瘤TNM分期、淋巴结转移具有明显相关性(P=0.000).Caveolin-1的表达与EGFR、MMP-9的表达之间具有明显正相关性(P＜0.05).生存分析结果显示Caveolin-1的高表达对预后有明显影响,可作为影响患者预后的独立因素(P＜0.05).结论 Caveolin-1的表达升高与肺鳞状细胞癌的侵袭转移能力增强密切相关,这其中涉及的机制可能与上调EGFR、MMP-9的表达有关,Caveolin-1阳性表达可作为预测肺鳞状细胞癌患者预后的一个独立指标.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2012(028)012【总页数】4页(P1383-1386)【关键词】肺肿瘤;鳞状细胞癌;Caveolin-1;EGFR;MMP-9【作者】韩非;赵兰香;邵晋晨;叶敏;秦钢;张杰【作者单位】上海市胸科医院病理科,200030;上海市胸科医院病理科,200030;上海市胸科医院病理科,200030;上海市胸科医院病理科,200030;上海市胸科医院病理科,200030;上海市胸科医院病理科,200030【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌是人类发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一，临床上约80%以上的肺癌患者死于肿瘤的侵袭与转移，因此，研究肺癌侵袭转移中相关基因的表达对判断预后及指导临床治疗具有重要意义。

Caveolin-1蛋白对肝细胞癌ERK信号转导通路的影响

ｉ ｍｕｎ ｍ ｏｈｉｔ ｈｅ ｓ ｒ ｎ １ ａ ｅ ｒ ｌｌ ｒ ｔｓ ｕｅ，ａ ｄ ３ ａ ｅ ｆｌｖ ｒ ｃ ｎｃ ｒ ｎｄ ｐ ｒ ｃ ｎｃ ｒ ｌｖ ｒ ｓ ｏｃ ｍｉ ｔ ｙ ｉ ０ ｃ ｓ ｓ ｏｆｎｏ ｍａ ｉ ｉ ｓ ｖｅ ｎ ０ ｃ ｓ ｓ ｏ ｉ ｅ ａ ｅ ｓ ａ ａ ａ ａ ｅ ｉ ｅ
ｔｓ ｕ ．Ｒｅｕ ｔ ：① Ｔｈ ｘ ｒ ｓ ｉｎｒ ｔ ｆ ａ ｅ ｌｎ １ｐ ｏ ｅｎｉ ｏ ｍａ ｉ ｅ ｉｓ ｅ ａ ａ ａ ｃ ｒ１ ｅ ｎ ｉ— ｉｓ ｅ ｓｌ ｓ ｅｅ ｐ ｅ ｓｏ ａ ｅｏ ｖ ｏ ｉ一 ｒ ｔｉ ｎ ｒ １ ｖ ｒｔｓ ｕ ，ｐ ｒ ｃ ｎ ｅ ｉ ｒａ ｄ ｌ ｃ ｎ １ ｖ ｖ ｅ ａ ｃ ｒ ｉｓ ｅ ｗａ ０ ，１ ． ３ ａ ｄ １ ｒｃ ｎ ｅ ｓｔｓｕ ｓ ９ ３ ３ ｎ ０％ （Ｐ ＜ ０ ０ ） ｅ ｐ ｃｉｅｙ Ｔｈ ｘ ｒ ｓｉｎ ｒ ｔ ｆＥＲＫ— ． ５ ，ｒｓ ｅｔｖ ｌ． ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ａ ｅ ｏ ｌ ｐ ｏ ｅｎ ｗａ ０ ，５ ． ７ ０ａ ｄ ８ ． ３ （Ｐ ０ ０ ） ｅ ｐ ｃ ｉｅｙ ｒ ｔ ｉ ｓ３ ６ ６ Ｖ ｎ ３ ３ ｄ ． ５ ，ｒ ｓ ｅ ｔ ｌ ．② Ｔｈ ｘ ｒ ｓｉｎ ｏ ａ ｅ ｌ 一 ｒ ｔ ｉ ｖ ｅｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｃ ｖ ｏ ｉ １ｐ ｏ ｅｎ ｎ
疫组织化学 Ｓ Ｐ法 检测 ３ 肝 细 胞 癌 组 织 、 应 癌 旁 肝 组 织 及 １ 正 常 肝 组 织 中 Ｃ ｖｏｉ－ 白 和 Ｅ 一 蛋 白 的 表 达 。结 Ｏ例 相 Ｏ例 ａｅ ｌ １蛋 ｎ ＲＫ １ 果 ： Ｃ ｖｏｉ一 白在 正 常 肝 组 织 、 旁 肝 组 织 、 细胞 癌 组 织 中 的 阳性 表 达 率 分 别 为 ９ 、３ ３ 、Ｏ 。 Ｅ Ｋ １蛋 白在 ① ａ ｅｌ １蛋 ｎ 癌 肝 Ｏ １． ３ １ Ｒ 一

Caveolin—1在肿瘤中的作用机制的研究进展

Caveolin—1在肿瘤中的作用机制的研究进展小窝蛋白-1（Caveolin-1）是caveolae上的主要结构功能蛋白，通过它的脚手架区（CSD）与多个重要蛋白直接结合，形成信号通路的枢纽中心，在细胞增殖、迁移和分化，肿瘤的发生和转移等生理、病理过程中发挥重要作用。

在正常生理条件下和结肠癌、肝癌、乳腺癌等肿瘤的早期，Caveolin-1-信号分子复合物负性调控各种信号通路。

而在泌尿系肿瘤的各个时期和其他大多数肿瘤的晚期，Caveolin-1异常表达，激活各种生长信号的传导，促进肿瘤细胞生长、增殖和转移。

Caveolin-1在肿瘤中表现出的双重效应与它调控的信号通路相关。

本文将就Caveolin-1在肿瘤细胞中调控的信号通路做具体阐述。

标签：Caveolin-1；肿瘤；信号通路Caveolin-1是细胞膜上重要的结构功能蛋白，其结构中特殊的脚手架区（CSD）能特异性地与多种信号分子结合，抑制这些信号分子的活性，形成多条信号通路的枢纽中心，对细胞的增殖、迁移和分化具有重要的影响[1]。

研究显示，在多种不同肿瘤细胞中Caveolin-1的表达发生了明显的变化，对肿瘤的发生和转移等生理、病理过程可能发挥重要作用，为肿瘤的治疗提供新的靶点。

1 小窝蛋白-1（Caveolin-1）的结构和生物学功能Caveolin-1是细胞膜向内凹陷呈瓶颈状的直径约50～100 nm的囊泡结构（caveolae）上的主要结构蛋白和标志蛋白。

根据其免疫性特征可分为Caveolin-1、Caveolin-2、Caveolae-3。

Cacveolin-1广泛存在于多种细胞中，对细胞的生物学功能发挥重要的作用。

它主要由位于两边的N端、C端和中间高度保守的疏水区构成，在N端存在含有与多种信号分子活化中心相似的氨基酸序列的脚手架区，通过该序列它能与多种信号分子（G蛋白亚单位、HA2Ras、Src酪氨酸激酶家族成员（Src、Fyn等）、EGF受体、胰岛素受体、PKC、eNOS等）相连接，引起这些信号分子的变构或共价修饰从而调控这些信号分子的活性状态，对大多数信号分子主要发挥负性调节作用[2-3]。

Caveolin1在乳腺癌中的表达


研究方法
CaveolinCaveolin-1的免疫染色 抗体：用单克隆和多克隆兔、鼠Caveolin-1抗
体，用纯化的兔免疫血清和非特异鼠IgG1抗体 做同型对照
染色强度：Caveolin-1染色在肿瘤中按照染
色强度计分，记为0（阴性表达），1（弱阳性 表达），2（强阳性表达）
实验结果
取自对429例乳腺癌样本肿瘤上皮中 取自对429例乳腺癌样本肿瘤上皮中 429 CaveolinCaveolin-1表达的研究
T1、T2、T3/4的阳性表达率分别为64%、 57.4%、28.6% 肿瘤分化程度高、中、低的阳性表达率分别为 77.1%、56.4%、41.5% 其它单变量如淋巴结受累（N0-N3）、临床分 期（I期-IV期）、ER、PR、年龄等，均不具 显著性差异（P>0.05）
CaveolinCaveolin-1在乳腺癌中表达的单变量分析
研究材料和方法
研究材料
正常人乳腺样本 429例乳腺癌样本的患者组一 173例乳腺癌样本的患者组二 转基因鼠
研究方法
Caveolin-1的免疫染色
研究材料
对429例乳腺癌组织样本芯片的研究 429例乳腺癌组织样本芯片的研究
在最初的612例样本中（取材自美国），有 429 429个样本可以分析，其余样本由于一些原因 而不可用，比如样本没有在载玻片上或在染色 过程中丢失，在样本中没有肿瘤组织，或样本 的质量不够好 患者平均年龄61岁（33-97岁），肿瘤直径平 均23毫米（4-130毫米）
CaveolinCaveolin-1 在小鼠正常 乳腺和乳腺 癌中的表达
CaveolinCaveolin-1三种不同基因型的小鼠
讨论
肿瘤肿块越小、肿瘤分化程度越高， CaveolinCaveolin-1的阳性表达率越高 在越严重的乳腺癌中Caveolin-1阳性表 Caveolin达率越低，说明Caveolin-1在肿瘤发生 Caveolin发展中作为一种抑癌因子存在
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itors differentially regulate caveolin21 exp ression and caveolae for2
mation in vascular endothelial cells. Angiogenesis inhibitors block
vascular endothelial growth factor2induced down2regulation of cave2
新鲜脐带分离内皮细胞 ,于 MCDB 培养液传代 培养 。感染内皮细胞的腺病毒 Ad2Cav21 (Caveolin21 腺病毒重组体 ) 、Ad2GFP ( GFP腺病毒重组体 ) 、辅助 腺病毒 Ad2tTA 由 L isanti 教 授 馈 赠 [ 3 ] 。腺 病 毒 于 AD293细胞内扩增 , C sC l密度梯度离心分离纯化 , 测定 D260 ,计算病毒滴度 。对照组为感染 Ad2GFP和 Ad2tTA (各 200 pfu /孔 )表达 GFP的内皮细胞 ,实验 组为感染 Ad2Cav21 和 Ad2tTA (各 200 pfu /孔 )表达 外源 Caveolin21的内皮细胞 。 1. 3 W estern blotting检测 KDR 和 p42 /44MAPK的 磷酸化水平
血清饥饿内皮细胞 16 h后 ,检测不到 KDR1054 酪氨 酸 残 基 磷 酸 化 信 号 , VEGF 刺 激 10 m in 后 , KDR1054酪氨酸磷酸化水平明显增加 ,与对照组表 达 GFP的脐静脉内皮细胞相比 ,高表达 Caveolin21 使 KDR1054酪氨酸残基磷酸化水平下降 (图 2 ) , KDR1054酪氨酸残基磷酸化检测信号与 GAPDH 检
·81·
·短篇论著 ·
房 凯 ,刘 军 (中国医科大学 基础医学院 生物信息学教研室 ,沈阳 110001)
[摘 要 ] 目的 : 研究 Caveolin21对血管内皮生长因子 ( vascular endothelial grow th factor, VEGF)受体 KDR、p42 /44MAPK的 作用 。方法 :以腺病毒为载体介导在内皮细胞中表达外源 Caveolin21,应用 W estern2blotting检测 KDR、p42 /44MAPK的磷酸化 水平 。结果 : 与对照组相比 ,感染腺病毒表达外源 Caveolin21蛋白的内皮细胞中 KDR1054酪氨酸残基和 p42 /44MAPK磷酸 化水平分别降低了 42. 3%和 43. 5%。结论 : Caveolin21蛋白抑制 KDR信号通路 ,对内皮细胞增殖可能具有抑制作用 。
胞增殖 ,进而抑制血管生成 ,以此控制肿瘤的生长 , 是当今肿瘤研究的热点之一 [ 1 ] 。
V EGF 是 目 前 已 知 最 强 的 促 血 管 内 皮 生 长 因 子 ,其与内皮细胞上受体 Flt21 和 KDR 结合 ,其中 KDR在内皮细胞增殖过程中起主要作用 。Labre2 que[ 4 ]发现 KDR 中可能与 Caveolin21 的结合序列为 1091W SFGVLLW E IT1101,并在 牛动 脉内 皮 细 胞 裂 解液中检测到 KDR 和 Caveolin21 形成的免疫共沉 淀复合物 ,表明 KDR 和 Caveolin21 相结合 。VEGF 与 KDR结合 ,致 KDR 形成二聚体并在多个酪氨酸 残基处发生磷酸化 ,这些位点调节激酶的活性 ,其中 酪氨酸 1 054 的磷酸化是 KDR 活化所必需 [ 5 ] 。本 实验结果显示 ,高表达 Caveolin21抑制 KDR 酪氨酸 1 054残基磷酸化 。因此 , Caveolin21 可能是通过直 接与 KDR 结合来抑制 KDR 的起始活性 。VEGF 诱 导 KDR受体磷酸化 后 , 向 细胞 内传 递信 号 , 激 活 p42 /44MAPK,促进内皮细胞增殖 。本研究应用磷 酸化 p42 /44MAPK抗 体检 测 Caveolin21 的 表达 对 p42 /44 MAPK活性的影响 ,结果表明 ,高表达 Cave2 olin21抑制 p42 /44MAPK的活性 。 目前 ,多种针对 VEGF2KDR 信号通路开发的抗 肿瘤血 管 生 成 药 物 正 处 于 临 床 前 期 和 临 床 试 验 期 [ 6 ] ,其中 ,抗 VEGF 的人源化单克隆抗体 Avastin 已被 FDA 批准临床使用 [ 7 ] 。Caveolin21作为内皮细 胞内源的 KDR活性抑制蛋白 ,有可能成为抗肿瘤血 管生成药用蛋白 。
olin21 [ J ]. J B iol Chem , 1999, 274 ( 22) : 15781215785. [ 3 ] Zhang W , Razani B , A ltschuler Y, et a l. Caveolin21 inhibits ep i2
dermal growth factor2stimulated lamellipod extension and cell m i2
1 材料与方法
1. 1 主要试剂 Caveolin21单克隆抗体购于 BD B ioscience,磷酸
化 p42 /44MAPK 抗 体 和 p42 /44MAPK 抗 体 购 于 Cell Signaling Technology, VEGF 购 于 R&D , KDR1054 酪 氨 酸 磷 酸 化 抗 体 和 GFP 抗 体 购 于 B iosource。 1. 2 腺病毒介导人脐静脉内皮细胞表达外源 Cave2 o lin21 蛋白
[参 考 文 献 ]
[ 1 ] Ferrara N , Kerbel RS. Angiogenesis as a therapeutic target [ J ].
Nature, 2005, 438 ( 7070) : 9672974. [ 2 ] L iu J, Razani B , Tang vators and inhib2
图 1 腺病毒载体介导外源 Caveolin21和 GFP蛋白 在内皮细胞中的表达
M: 未感染腺病毒的内皮细胞 ; C: 感染腺病毒高表达 Caveolin21的内皮细胞 ; G: 感染腺病毒表达 GFP的内皮细胞
图 2 高表达 Caveolin 21抑制 VEGF致 KD R磷酸化 M: 未感染腺病毒的内皮细胞 ; G: 感染腺病毒表达 GFP 的内皮细胞 ; C: 感染腺病毒高表达 Caveolin21的内皮细胞
·82·
中国肿瘤生物治疗杂志
Vol. 14
测信号的灰度值之比下降了 42. 3%。而在血清饥 饿 16 h未加入 VEGF刺激的细胞内 ,仍检测到少量 p42 /44 MAPK处在活性状态 (图 3) ;加入 VEGF刺 激后 ,高 表 达 Caveolin21 蛋 白 的 内 皮 细 胞 磷 酸 化 p42 /44MAPK与内参照非磷酸化 p42 /44MAPK检测 信号灰度值之比下降了 43. 5%。
[作者简介 ] 房 凯 (19702) ,男 ,辽宁省朝阳市人 ,博士 ,主要从事 肿瘤生物治疗方面的研究
[通讯作者 ] 房 凯 , E2mail: fangkai1970@ hotmail. com
© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
Vol. 14 No. 1 Feb. 2007
中国肿瘤生物治疗杂志 Chinese Journal of Cancer B iotherapy
[文章编号 ] 10072385X (2007) 0120081202
Caveolin21对 KD R信号通路的作用
Effects of caveolin 21 on KD R signa l tran sduction pa thway
将感染腺病毒的内皮细胞接种到六孔板 ,每孔
约 9 ×104细胞 ,培养 24 h,用 0. 5% FB S MCDB 培养 16 h,以 10 ng /m l VEGF 刺激细胞 10 m in,弃培养 液 , 裂解细胞 ,收集裂解蛋白 。 SDS2PAGE分离 ,转 移至尼龙膜 。以 5%脱脂奶粉封闭 1 h,加入一抗 (1∶2 000)过夜 , TBST洗膜 2次 ;加二抗 ( 1∶5 000) 1 h, TBST洗膜 3次 , ECL 液孵育膜 2 m in,暗室中压片 显影 。图像分析仪灰度扫描分析 。检测 KDR1054 酪氨酸残基磷酸化水平的一抗是 KDR1054 酪氨酸 残基磷酸化抗体 ,检测 p42 /44MAPK磷酸化水平的 一抗是抗磷酸化 p42 /44MAPK抗体 。
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lar endothelial growth factor recep tor22 activity by caveolin21 and
p lasma membrane cholesterol [ J ]. Mol B iol Cell, 2003, 14 ( 1) :
图 3 高表达 Caveolin21抑制 VEGF致 p42 /44M APK活化 M: 未感染腺病毒的内皮细胞 ; G: 感染腺病毒表达 GFP
的内皮细胞 ; C: 感染腺病毒高表达 Caveolin21的内皮细胞
3 讨 论 在实体肿瘤中 ,血管生成是肿瘤生长的必须前
提之一 。血管生成包括内皮细胞的增殖 、迁移和分 化等过程 ,其中内皮细胞增殖是关键 。正常组织的 血管内皮细胞处于增殖静止状态 ,而肿瘤血管的内 皮细胞则处于持续增殖状态 。因此通过抑制内皮细
gration in metastatic mammary adenocarcinoma cells (MTLn3 ) .
Transformation supp ressor effects of adenovirus2mediated gene de2