全自动尿沉渣分析仪干扰因素分析

全自动尿沉渣分析仪干扰因素分析【关键词】全自动尿沉渣分析仪，干扰因素尿沉渣检查又称尿有形成分检查,由于自动化仪器的使用,去除了繁琐的离心方法,用荧光染色、流式细胞分析或高速摄影,不仅能将各种有形成分(如细胞、管型)定量,还能进一步识别各种颗粒如细菌、霉菌、结晶等,故近来称为尿颗粒分析法[1]，目前已广泛应用于泌尿系统疾病的辅助诊断。

近些年,随着检验医学的迅猛发展,尿沉渣自动化分析技术正在逐步推广,由于全自动尿沉渣分析仪具有操作规范化、检测的自动化、速度快、重复性好、一次可以检测多个参数等优点,被临床广泛应用。

但是不可否认，由于尿液成分的多样性、复杂性以及仪器本身检测的局限性，即尿沉渣分析仪存在着准确性低,不能具体辨认细胞形态,病理管型的类型的缺点,常导致某些检测项目存在一定程度的结果误判，如果不予以及时发现和纠正，将会误导临床对疾病的诊断和治疗[2]。

而由此在自动化尿沉渣检测过程中出现的问题也越来越显著，本文对干扰全自动尿沉渣分析仪正确分析尿液的因素进行综述。

1.尿标本采集、处理对计数的影响不同时段尿主要是指晨尿、随机尿、餐后尿三个时段,陈国强等[3]研究发现同一病人三个时段尿RBC和ＷＢＣ浓度依大小分别为晨尿＞餐后尿＞随机尿,各时段间尿ＲＢＣ和ＷＢＣ值虽有不同,但差异无显著性。

正常人随意尿中有形成分含量低,如干化学法检查尿红细胞和白细胞阴性时,应当结合临床复查其晨尿,以提高阳性检出率;病患者则应采用同一时段尿进行比较。

罗效梅等[4]报道尿液放置时间对尿沉渣检查尤其ＲＢＣ、ＷＢＣ在形态及数量上有明显影响,建议在２h内测完。

陈巧林、顾可梁等[5]实验认为女性病人白带对尿液的污染非常明显,对于女性患者,应取后段尿送检。

标本处理方面,晨尿、后段尿快速检测是保证UF-100尿沉渣分析稳定性、准确性的前提条件。

2.离心对尿液低浓度红细胞镜检定量计数的影响尿沉渣的显微镜检查是识别尿有形成分的“金标准”,主要有离心镜检法和不离心镜检法两种,我国多建议采用离心法[6]。

在实际工作中,当尿液红细胞较多时,离心沉淀反而不利镜检计数,尿沉渣检验实际无需离心,这已为检验人员所公认[7,8,9]。

许多研究显示,在尿红细胞中高浓度时,离心法结果与真实结果存在明显的差异,离心法结果明显低于不离心法,不离心直接计数与真实值更加接近[10,11]。

离心的目的是浓缩有形成分,防止漏检,在尿有形成分浓度较低时,比如在正常参考值的上限9/ul[12]以上,到100/ul这个浓度范围内,将尿液离心,浓缩有形成分后再镜检计数似乎理所当然,但本研究显示即使在低浓度下离心法的计数结果仍然明显低于真实值,而不离心法与真实值较为接近,与丛玉隆等[10]在高浓度下的研究结果一致。

丛玉隆等[10]认为离心使红细胞计数偏低的原因可能有以下几个方面:(1)离心后红细胞沉淀不完全,上清液还有红细胞;(2)离心过程中部分红细胞受到破坏;(3)离心后沉渣是否混匀;(4)计数池分布误差;(5)计数的方格数量少;(6)离心管管壁有细胞的粘附;(7)计算时除于50这个浓缩倍数,放大了上述效应。

为探讨这些原因,姚中华等[13]做了以下实验：将理论定值为50/ul的红细胞尿液分别以1500r/min离心5min、1500r/min离心10min和3000r/m in离心5min，3种离心方法来计数红细胞,均值分别为28.57、30.22、27.46,后两种方法与第一种方法比较无显著性差异。

增加离心时间或者增加离心速度不能减少红细胞偏低现象,说明红细胞沉淀不完全可能不是主要原因,反而提示离心过程中红细胞受到破环现象可能较为普遍,这一点在离心后尿沉渣红细胞的形态比直接计数红细胞形态更多具有变形皱缩、破碎、聚集等现象也能得到推断。

至于是否混匀、分布误差以及计数方格数量等不是红细胞偏低的必然影响因素,因为这三个因素既可以使红细胞计数偏低也可以偏高,所以不做讨论。

离心管管壁有细胞的粘附,这一点应是肯定的,我们将理论定值为50/ul的红细胞尿液10ml(红细胞总量为500000)1500r/min离心5min后倒干尿液,吸弃沉渣,重新加入5ml生理盐水,反复轻轻颠倒以洗脱管壁红细胞,然后直接计数红细胞,计算洗脱的红细胞总量为15555,这表明离心后红细胞在试管管壁的粘附率至少有3.11%。

因此可以初步认为,离心使红细胞计数减少的原因主要有红细胞沉淀过程中的破环、管壁的粘附以及计算因素。

当然,更准确更全面的原因分析需要进一步更深入的实验探讨。

3.尿沉渣分析仪测定管型的影响因素分析管型是一些有机物或无机物如蛋白、细胞或结晶等成分在肾小管和集合管内凝固而成的圆柱状结合物，尿沉渣中管型对肾脏疾病的诊断有重要的临床意义[14]，其数量、种类、组成、大小对肾实质性病变的诊断、治疗观察及预后判断有一定价值[15]。

全自动尿沉渣分析仪采用流式细胞术与粒子成像分析技术，将通过流式细胞分析孔的尿液有形成分粒子聚集于物镜的聚焦平面上，通过APR自动微粒识别软件依据尺寸、外形、对比度、材质等特性将其分为包括管型在内的12种成分。

在多数情况下分类是非常可信的，但是由于尿中有形成分十分复杂，形态变化大，故在管型检测中的影响因素比较多，引起较高的假阳性率。

通过与手工镜检结果对比，发现造成尿沉渣分析仪假阳性的原因有以下几种：尿液中的上皮细胞，尤其是移形上皮细胞，因其形态变化不规则，有些尺寸、对比度、材质与管型相类似而被误认；尿液中含有大量的黏液丝时，包裹了细胞和结晶的粗大黏液丝及黏液丝相互粘连，因外形与管型类似而被误认；尿液中含有真菌的菌丝，由于其形态多样，有时因与管型外形相似而被误认；尿液中含有大量非晶形尿酸盐、磷酸盐等结晶时，常由于相互堆积成类圆柱体而被误认为管型。

尿中管型是蛋白质在肾小管、集合管中凝固而成的圆柱形蛋白聚体。

是在肾小球病变,高蛋白滤出、肾小管浓缩和酸化、蛋白和盐类沉积等多种因素、多种途径下形成的[16]。

病理性管型的出现,常预示着肾实质和肾小球的损害,管型出现的多少,往往与病症的严重程度呈正相关。

UF-100用前向散射光脉冲宽度来检测管型的整体长度及宽度,用荧光脉冲宽度来检测管型内容物的长度,这样就能准确的区分出无内容物的透明管型和有内容物的颗粒管型。

但对于有同样特性的其他物质,UF-100也能错误的识别为管型,如成卷的上皮细胞(特别是移行上皮)、一些粘附有无定型盐类结晶的黏液丝、类圆柱体等,这些必须要通过显微镜检查才能发现鉴别。

对于女性患者,特别是怀疑妊娠高症的患者,应嘱其洗净外阴,留后段尿送检,以避免以上两种因素的影响。

4.细菌、霉菌、及结晶对红细胞计数影响菌尿不仅干扰干化学法测定尿红细胞,而且也影响全自动尿沉渣分析仪对尿红细胞测定。

马俊龙、丛玉隆[17]的结果显示,在菌尿和非菌尿尿液中,尿红细胞UF-100测定15/uL,而镜检法15/uL分别占总检测数的21.5%和6.5%。

两者p<0.001,说明差异有非常显著意义。

在马、丛的实验基础上人工加入细菌实验,尿标本在加入细菌前后的红细胞计数为(32±18)个/uL和(976±211)个/uL,两者差异非常显著,与马、丛的实验相符。

因此,在实验中发现菌尿时,最好使用显微镜检查法或者其他方法来加以分析鉴别,以免出现不必要的误诊。

酵母样霉菌也将影响尿红细胞计数。

UF-100在检测霉菌时会给予相应的阳性提示(YLC+),在霉菌提示阳性的情况下,红细胞的计数应以显微镜计数为准。

特别是在霉菌提示阴性,尿干化学隐血阴性,而UF-100红细胞计数＞10个/uL的情况下,必须进行显微镜检查。

酵母样霉菌是二重感染的重要指标,工作中应避免它被识别为红细胞而导致误诊。

结晶,特别是草酸钙结晶也同样影响尿红细胞的计数。

临床工作中,血尿伴草酸钙结晶的病例与泌尿系结石有关,故大部分病例血尿和草酸钙结晶时同时出现。

部分结晶容易造成血尿假象，故对出现草酸钙结晶的尿标本,显微镜复检是必须的。

5.上皮细胞和滴虫对白细胞计数影响在白细胞检测中，造成假阳性的主要是上皮细胞和滴虫。

尿中上皮细胞增多时,由于受尿液渗透压和pH值的影响,上皮细胞大小和形态都很不一致,部分上皮细胞与白细胞体积和形态相似,荧光强度和散射光强度相同,因此仪器易将其误认为白细胞。

大量滴虫存在时,尿沉渣分析仪的相关参数多与白细胞参数相重叠导致尿白细胞计数不同程度增高[18]。

在假阴性结果中,镜下可见白细胞附着在粘液丝上,仪器虽具有吹打自动混匀功能,但不能彻底混匀附着在粘液丝上的白细胞团,尤其是吸样时只能定量吸取,如未能吸到白细胞团,就造成了白细胞假性减低。

其次,黄疸尿也会造成白细胞假阴性,由于胆红素的颜色与散色光及荧光的抵消作用影响,使白细胞计数随黄疸程度的不同而不同,即黄疸越高,白细胞计数越低,甚至为零[19]。

小圆上皮细胞和滴虫与白细胞相似,因此影响了白细胞的检测。

表层鳞状上皮细胞、移型上皮细胞等大细胞,具有较强的前向散射光强度和荧光强度的特性,分布在高的荧光脉冲宽度区域和低于管型的散射光脉冲宽度区域。

而白细胞小得多,在实际应用中,大量的上皮细胞会使白细胞不同程度增高,可能将上皮细胞核误认为白细胞。

【参考文献】[1]顾可梁.尿沉渣管型检查[J].临床检验杂志,2001,19(1):58.[2]姜文玲．尿液自动分析、尿沉渣及尿常规镜检对尿中有形成分的对比分析[J].中国现代医学志，2002，12（10）：49-53．[3]陈国强,俞晓洁,等.UF-100全自动尿沉渣分析仪测定不同时段尿沉渣[J].现代诊断与治疗,2000,11(1):33-34.[4]罗效梅.尿液放置时间对有形成分检查的影响[J].陕西医学检验,1998,13（1）: 59.[5]陈巧林,顾可梁.UF-100检测前后段尿沉渣差异的探讨[J].江西医学检验杂志,2001,19(4):235.[6]丛玉隆.尿沉渣标准化建议[J]中华检验医学杂志,2002,25(7):249-250.[7]许会彬,张代民,李萍.Fast Read10尿沉渣定量计数板计数非离心法应用探讨[J].临床军医杂志,2001,29(1):79-80.[8]吴润香,何英,刘玢.离心对尿沉渣镜检细胞计数结果的影响[J].广东医学,2006,27(4):573–574.[9]马骏龙,陆玉静,黎晓晖,等.尿液红、白细胞定量不同方法学探讨[J].临床检验杂志,2006,24(5):348-350.[10]丛玉隆,马骏龙,张时民,等.尿液细胞成分定量分析方法学研究[J].中华医学检验杂志,2006,29(3)：211-214.[11]徐腊香,段艺,余小红.离心法尿红细胞计数结果准确性的初探[J].检验医学, 2006,21(5):542-543.[12]丛玉隆,马骏龙,李云莲,等.尿沉渣测定四种方法的参考值范围调查[J].中华医学检验杂志,1997,20(4):229-231.[13]姚中华,吴建清,黄陈君.离心对尿液低浓度红细胞镜检定量计数的影响[J].中国卫生检验杂志,2009,19(8):1913-1914.[14]顾可梁.尿有形成分的识别与检查方法的选择[J].中华检验医学杂志, 2005,28(6):572-575.[15]刘艳.IQ200全自动尿沉渣分析仪与干化学分析仪及尿沉渣镜检的比较和评价[J].当代医学,2008,14(10):41-42.[16]李影林.中华医学检验全书[M].北京:人民卫生出版社,1995:485-486.[17]马俊龙.丛玉隆.菌尿对尿液分析仪测定尿红细胞的影响[J].中华检验医学杂志,1999,22(4):205-206.[18]张改英,赵彩青.UF-100沉渣分析仪和显微镜检测尿中血细胞的比较[J].包头医学院学报,2009,25(2):162-163.[19]秦桂娥,李艳莲,靳岩,等.胆红素对UF-100尿残渣自动分析仪尿白细胞计数的影响[J].大连医科大学学报,2007,29(5):501-502.。