胎儿染色体非整倍体产前诊断中的应用

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新型无创DNA产前检测在诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用

新型无创DNA产前检测在诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用杨湘玲;朱健生;刘贤云【摘要】目的探讨新一代测序技术的新型无创DNA产前检测在诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用价值.方法 2012年8月1日至2013年4月30日在安徽省妇幼保健院接受孕妇外周血中游离胎儿DNA检测者1365例,均为单胎,孕周(19.1±5.8)周,按照孕妇年龄及血清学筛查结果分为唐氏综合征筛查(唐筛)高危组、高龄组和其他原因组3组由北京贝瑞和康生物技术有限公司和湖南湘雅医院产前诊断中心合作开展的“大规模基于新一代测序技术的新型无创DNA产前检测”,对孕妇外周血中游离胎儿DNA进行序列分析,对检测结果阳性者进行羊水穿刺及胎儿染色体核型分析；对检测结果阴性者行电话随访其胎儿出生后情况.结果①3组孕妇共计1365例均成功完成游离胎儿DNA检测,检测结果为阳性者共33例,包括21三体19例、18三体8例、45,X6例.其中唐筛高危组检出21三体8例、18三体7例、45,X4例；高龄组检出21三体9例、18三体1例、45,X2例；超声侧脑室增宽检出21三体1例、鼻骨缺失检出21三体一例.②游离胎儿DNA检测结果异常的33例孕妇中,28例进行了羊膜腔穿刺及染色体核型分析.19例21三体检测阳性者18例进行了羊膜腔穿刺,17例染色体核型均为47,XN,+21,另1例核型为46,XN(70)/47,XN,+21(10),最后经胎儿脐血染色体检测为46,XN,随访新生儿正常.胎儿鼻骨缺失发现时已24周,无创检出21三体,行脐带血检测结果为异位型21三体,核型46,XX,der(21;21)(q10;q10),+21.结果检出率100％,准确率94.4％.8例18三体检测阳性者中有7例进行了羊膜腔穿刺,7例核型为47,XN,+18；两者结果完全一致,另1例拒绝羊水穿刺,引产中发现胎儿全身水肿.③6例45,X检测阳性者中有3例进行了羊膜腔穿刺,2例核型为45,X,1例为46,XX(出现了假阳性),另3例拒绝羊水穿刺,其敏感性和准确性无法统计.④3组孕妇血浆中游离胎儿DNA检测结果阴性者1312例,经电话随访,截止至2012年4月30日,已出生的新生儿经检查均未发现唐氏综合征患儿.结论孕妇外周血中游离胎儿DNA检测对21三体和18三体的检测准确率达96％,对45,X的检出率也达到了很高水准,准确率有待临床配合进一步证实.但是在其他染色体异常的检测中还需要进一步研究.此外该方法不能筛查出染色体结构异常.【期刊名称】《中国产前诊断杂志（电子版）》【年(卷),期】2013(005)002【总页数】3页(P15-17)【关键词】唐氏综合征;大规模基于新一代测序技术;染色体;无创产前诊断【作者】杨湘玲;朱健生;刘贤云【作者单位】安徽省妇幼保健院,安徽医科大学妇幼保健临床学院,安徽合肥230001;安徽省妇幼保健院,安徽医科大学妇幼保健临床学院,安徽合肥230001;安徽省妇幼保健院,安徽医科大学妇幼保健临床学院,安徽合肥230001【正文语种】中文【中图分类】R394.2产前诊断染色体数目的变异—三体、单体，常见的遗传疾病有唐氏综合征（21-三体）、爱德华综合征（18三体）、Patau综合征（13三体）、Turner综合征（45，X）、Klinefelter综合征（45，XXY）占产前遗传疾病的80%～95%，约占新生儿所有染色体异常的65%～80%。

大规模平行测序无创基因检测用于胎儿染色体非整倍体异常产前诊断的临床价值

大规模平行测序无创基因检测用于胎儿染色体非整倍体异常产前诊断的临床价值王海;周蕾;王克义;怀磊【摘要】目的探讨大规模平行测序无创基因检测在胎儿染色体非整倍体异常产前诊断中的临床应用价值.方法选择预约做产前诊断的高危孕妇914例,按危险因素分为唐氏综合征筛查高危组563例,高龄妊娠组245例和其他原因组106例.抽取孕妇外周血,提取血浆DNA,制备测序文库,用高通量测序仪器检测,结果与人类的参考基因组比对;同时采集胎儿羊水,经细胞培养后行羊水细胞染色体核型分析.结果914例孕妇经大规模平行测序技术检出21-三体综合征高风险8例,18-三体综合征高风险3例,13-三体综合征高风险1例;与染色体核型分析相比,产前无创基因检测21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征的阳性预测值均为100％,而假阳性率均为0.914例样本中,检出45,X高风险3例、47,XXX和47,XXY高风险各2例;与染色体核型分析相比,产前无创基因检测45,X的假阳性率为0.11％,阳性预测值为66.7％,47,XXY和47,XXX的假阳性率均为0.22％,阳性预测值均为50％.结论大规模平行测序技术对胎儿常染色体非整倍体疾病的诊断,具有极高的阳性预测值,但对胎儿性染色体非整倍体异常的阳性预测值较低;只能作为一种高级筛查性检测而不是确诊方法.%Objective To assess the clinical value of massively parallel sequencing in diagnosis of fetal chromosomal aneuploidy.Methods Nine hundred and fourteen high-risk pregnant women registered in prenatal diagnostic centers of Hangzhou First People's Hospital were enrolled in the study.The plasma DNA was extracted and sequenced with high-throughput sequencing procedure.The results were compared with the human reference gene-database and statisticallyanalyzed.Simultaneously,the cells isolated from the fetal amniotic fluid were cultured,and chromosomal karyotyping was performed to identify the chromosome aneuploidy.Results Among 914 pregnant women,8 cases of trisomy 21,3 cases of trisomy 18,1 case of trisomy 13 were detected by massively parallel sequencing,which were in full accord with the results of chromosomal karyotype analysis.In addition 3 cases of 45,X,2 cases of 47,XXX and 2 cases of 47,XXY were detected by massively parallel sequencing technology;with chromosomal karyotype analysis as gold standard the positive predictive value of non-invasive prenatal testing was 66.7％ for 45,X,50％ for 47,XXX and 47,XXY,while the false positive rate was 0.11％ for 45X,0.22％ for 47,XXX and 47,XXY.Conclusion Massively parallel sequencing technology is of high positive predictive value for detecting trisomy 21,18,13 and of low positive predictive value for detecting sex chromosome aneuploidies in prenatal diagnosis of the fetus chromosome aneuploidy,indicating that it may be used as an advanced screening test not as diagnostic method.【期刊名称】《浙江医学》【年(卷),期】2018(040)001【总页数】4页(P12-15)【关键词】染色体非整倍体异常;大规模平行测序技术;无创产前检测;无创产前诊断【作者】王海;周蕾;王克义;怀磊【作者单位】310012杭州,浙江省立同德医院检验科;杭州市儿童医院检验科;杭州市第一人民医院中心实验室;杭州市第一人民医院中心实验室【正文语种】中文出生缺陷不仅严重影响婴幼儿的生命和生活质量，而且会给家庭和社会带来沉重的精神和经济负担。

PCR技术在产前诊断胎儿非整倍体的应用

【ｓａｔＴｅｃｒｍｓｍｌｂｏｍｌｉｓｒｓａｙ２，３１ｈｏｏｏｅｎｅｓｘｃｒｍｓｍｅＡｂｔｃ】ｈｈｏｏｏａａｎｒａｉｅａｅｕｕｌ１１，８ｃｒｍｓｍｓａｄｔｅｈｏｏｏｒｔｌｈ
ａｅｐｏｄ．ｈｅｕｔｏｅｕｓｒｅｉｇｉｔａｈｉｈｒｋａｄｔｅａｅｏｅ５ｐｅｎｎｍｅｒｅｕｒｄｎｕｌｉｓＴｅｒｓｌｆｒｍｃｅｎｎｓｈｔｅｈｇ —ｉｎｇｖｒ３ｒｇａｔｓｓｔｓｈｗｏｎａｅｒｑｉｅ
ＤｐｒｅｔｆＯｓｔｃｎｙｅｏｇ，ｉｊｄａＵｉｒｉｅｅａＨｏｉｌＴａｊ００２ＣｉｅａｔｎｏｂｔｒｓｄＧｎｃｌｙＴａｉＭｅｉｌｎｖｓｙＧｎｒｍｅｉａｏｎｎｃｅｔ］ｓｔ，ｉｉ３０５，ｈｎｐａｎｎａ
【ｙｗｒｓｏｍｒｓｈｉａｔｎＡｅｐｏｙＰｅａｌｉｇｏｉ；ｐｌａｏＫｅｏｄ】Ｐｌｅａｅａｎｅｃｉ；ｎｕｌｉ；ｒｔａｎｓＡｐｉｔｎｙｃｒｏｄｎａｄｓｃｉ
（ｌｔｂｔｔｙｅｏ，００３： — ）Ｊｎｓｎｃｌ２１，７５８ＯｅＧ
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无创产前DNA筛查在胎儿染色体非整倍体基因检测中的临床应用

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无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体技术研究及应用进展

无创产前基因检测胎儿染色体非整倍体技术研究及应用进展发布时间：2022-03-10T08:03:03.068Z 来源：《医师在线》2021年11月22期作者：覃雪春[导读]覃雪春（来宾市妇幼保健院；广西来宾 546100）【摘要】染色体非整倍体属于临床中发生率较高的出生缺陷问题，且此种状况的发病率现阶段还在不断增加，明显导致新生儿出生质量呈下降趋势，同时此种疾病严重背离了优生优育的生育理念。

在此发展背景中，强化产前检查对于防止染色体出现非整倍体情况有着不可忽视的关键作用。

无创产前基因检查属于一种新型的临床检查方式，且具有无创伤性、高安全性等特点，当前已被临床所广泛应用，其为临床诊断胎儿染色体非整倍体提供重要的参考依据，有利于改善预后效果。

我国属于出生缺陷发生率较高的国家之一，其中染色体异常是造成出生缺陷情况出现的关键因素，但是在各种各样的染色体异常疾病之中，由于染色体非整倍体而造成的残疾情况以及生活障碍问题较为普遍。

因此，减少染色体非整倍体胎儿的出生概率以及提高我国人口出生质量水平已然是目前大众关注度高的社会问题以及医学方面的重点研究方向。

【关键词】无创产前检测；胎儿染色体非整倍体；技术研究；应用进展现阶段临床对染色体非整体疾病主要采取以血清学与使用超声诊断学为基础的检查方式进行检查，在此基础上开展无创伤性的产前筛查工作与有创性取样的产前诊断方式。

为此，在所得检查结果的基础上对胎儿对应开展选择性的流产措施，有利于降低出生缺陷发生率[1]。

随着母体外周血液中胎儿游离DNA的发现与研究，为无创产前基因检测的研究以及胎儿染色体非整体治疗奠定了良好的研究基础。

但是新型的基因测序检测技术的出现，尤其是大规模的并行测序技术的快速进步，从而为无创产前基因检测技术的发展奠定了稳定的技术支持。

一、母体外周血中胎儿游离DNA临床表现特点在孕妇外周血游离DNA中大约有90%-95%左右是属于母体自然凋亡DNA，但是大约有5%-10%左右的DNA是属于胎儿自身凋亡细胞产生的[2]。

非多态性位点多重荧光定量PCR技术在产前诊断胎儿染色体非整倍体异常中的应用

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｘｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ
ＰＣＲ试ｔＩｌｎｏｎ．ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｅｌｅｃｉｉｎｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆａｎｅｕｐｌｏｉｄｉｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＦｒｏｍＭ８１＂２００６ｔｏＮｏｖ２００７。ａｔｏｔｅｄｏｆ６３ｓａｍｐｌｅｓＷｅｒｅｃｏｌ｜ｅｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，ＡｆｆｉｈａｔｅｄＤｍｍＴｏｗｅｒＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ５４ｖｉｌｌｏｕｓｓａｍｐｌｅｓｏｂｔａｉｎｅｄｆｏｒｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇｂｅｃａｕｓｅｏｆｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓａｂｏｒｔｉｏｎ．８讧ａｍｎｉｏｔｉｃｆｌｕｉｄｓａｍｐｌｅｓｏｆｓｅｃｏｎｄｔｒｉｍｅｓｔｅｒａｎｄｔｈｒｅｅｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｏｆｔｈｉｒｄｔｒｉｍｅｓｔｅｒ．Ｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｏｆ６０ｈｅａｌｔｈｙａｄｕｌｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｔｔＩｌｅ８８ｍｅ
Ｃｈｒｏ蝴ｍｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】
ａｌｘ嘞６咖；Ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ；Ｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ；Ｐｏｌｙｍｅｒｎｓｅｃｈａｉｎ
ｒｅａｃｔｉｏｎ；Ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ
染色体非整倍体异常是胎儿最常见的一类染色体异常，染色体核型分析是最常用的染色体异常诊断方法。然而，由于其检验周期长、人工耗费大、对于没有足够活细胞或污染的标本尚不能检测等问题，临床应用受到一定限制。近２０年来，用分子生物学或分子细胞遗传学技术对染色体非整倍体进行产前诊断取得了长足进展。针对短串联重复序列（ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔｓ，ＳＴＲ）多态性位点设计引物，进行多重荧光定量ＰＣＲ（ＯＦ·ＰＣＲ）扩增，是目前常用的快速诊断染色体异常的方法。但由于多态性位点在不同人群中的频率不同，在某一人群中杂合度高的位点在另一人群中则不一定高，存在诊断盲区…。同时由于ＳＴＲ扩增本身的缺陷，如易出现滑移峰等，常给缺乏经验的医师造成结果判断的困难。为探索更快捷、简便、适用面广的诊断方法，本研究拟通过对功能基因片段（非多态性位点）进行扩增并定量分析，探讨非多态性位点ＱＦ—ＰＣＲ产前诊断染色体非整倍体异常的可能性，为今后研究与功能基因片段缺失或扩增相关的出生缺陷奠定方法学基础。

无创DNA检测在胎儿染色体非整倍体筛查中的应用与治疗指导价值

2021年第5卷第7期2021 Vol.5 No.7现代医学与健康研究Modem Medicine and Health Research □诊疗技术/Diagnostic Technique无创DNA 检测在胎儿染色体非整倍体筛查中的应用与治疗指导价值陈文高，钟杰，申时龙，陆劲(贵州省毕节市妇幼保健院检验科，贵州毕节551700)摘要：目的探讨无创DNA 检测(NIPT)在胎儿染色体非整倍体筛查中的应用与治疗指导价值。

方法选取贵州省毕节市妇幼保健院2019年11月至2020年9月进行无创胎儿染色体非整倍体产前检测的744例孕妇为研究对象，进行前瞻性研究。

统计不同年龄段、孕周孕妇染色体异常风险发生情况，并将NIPT 测定结果与羊水细胞染色核型分析结果(金标准)进行比较；分析NIPT 在胎儿染色体非整倍体异常治疗指导中的效能。

结果744例孕妇中，染色体异常高风险10例；异常的10例孕妇中A35岁的孕妇胎儿21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征、性染色体总异常率为80.00%,高于V35岁的20.00%;孕周13-28周的胎儿染色体非整倍体筛查总异常率为70.00%,高于12周的10.00%、A29周的20.00% (均PV0.05);受试者工作特征(ROC)曲线结果显示，NIPT 在胎儿染色体非整倍体异常治疗指导中AUC 值为0.875,诊断灵敏度为0.88%,特异度为0.64%。

结论NIPT 用于胎儿染色体非整倍体筛查中中能获得较高的检测价值，准确性相对较高，能有效地降低染色体异常患儿出生率，取得较高的治疗指导灵敏度。

关键词：无创DNA 检测；胎儿染色体非整倍体筛查；治疗指导中图分类号：R714.55 文献标识码：A 文章编号：2096-3718.2021.07.0110.03我国新生儿出生缺陷的发生率较高，严重的出生缺陷会对患儿造成严重不利影响，其包括智力发育障碍、器官功能缺损，甚至会引起终生残疾或死亡,给家庭造成巨大的精神和经济压力E 。

QF-PCR技术在产前诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用

QF-PCR技术在产前诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用潘锦梅;梁西岚;黎洛冰;刘沃满;陈小乐【摘要】目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(QF-PCR)在产前诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用效果.方法 1940例产前诊断病例样本,进行QF-PCR技术对样本行21、18、13、X及Y染色体非整倍体诊断,并与核型分析结果进行比较.结果1940例羊水QF-PCR检测结果均在3 d内得出,共有5例染色体核型培养失败,检出97例(5.00％)异常病例,包括21三体综合征62例、18三体综合征16例、13三体综合征4例、衍生Y性染色体异常17例,其中18三体同时性染色体数目异常1例、衍生Y性染色体异常1例、易位型13三体1例、18三体嵌合体1例.漏检23例,均为嵌合体或结构异常.结论 QF-PCR检测染色体非整倍体疾病具有较好的敏感性和特异性,是一种简便、可靠的产前诊断染色体非整倍体分子诊断技术.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2019(013)008【总页数】3页(P59-61)【关键词】荧光定量聚合酶链式反应技术;产前诊断;染色体非整倍体疾病;敏感性【作者】潘锦梅;梁西岚;黎洛冰;刘沃满;陈小乐【作者单位】525000 茂名市妇幼保健院产前诊断中心;525000 茂名市妇幼保健院产前诊断中心;525000 茂名市妇幼保健院产前诊断中心;525000 茂名市妇幼保健院产前诊断中心;525000 茂名市妇幼保健院产前诊断中心【正文语种】中文荧光定量PCR(quantitative fluorescent polymerase chain reaction)是目前临床应用较多的一种产前染色体异常的筛查和诊断方法, 能快速、准确、自动化的进行唐氏综合征及其他染色体非整倍体检测［1］。

本院2016 年3 月～2018 年3月共对1940 例病例样本行21、18、13、X 及Y 染色体非整倍体的QF-PCR 技术诊断, 并将诊断结果与核型分析结果进行比较。

母血浆中游离胎儿DNA检测在染色体非整倍体筛查中的应用

儿进行先天性缺陷或遗传性疾病的宫内诊断。而其中染色体病中的染色体非整倍体是出生缺陷最常见病因之一，２１三体即唐氏综合症在活产婴中发生率为１／８００，１３三体
在活产婴中发生率为１／１００００，而１８三体的发生率为１／６０００。这些染色体病无有效的治疗方法，故及时进行产前诊断，防止缺陷儿出生是最重要的预防措施。本文对２０１２—１０～２０１３—０７孕中期血清学筛查与无创ＤＮＡ检测，结果异常的孕妇采取羊水穿刺、细胞培养、胎儿染色体
常。再行羊膜腔穿刺术进行确诊，与羊水染色体核型分析的结果进行对照，发现ｌ０例２１一三体综合征、３例１８一三
体综合征符合率１００％，９例性染色体异常中，６例符合、３例误诊，说明胎儿性染色体检测准确率较低。见表１。
［关键词］游离胎儿ＤＮＡ；染色体非整倍体；产前诊断［中图分类号］Ｒ４４６［文献标识码］Ｂ
［文章编号］２０９５— １４３４．２０１４．０２．０５５
产前诊断是指在胎儿出生前，通过各种技术手段对胎
２结果
状，近年来我们可以通过检测母体血中胎儿ＤＮＡ进行无创
性产前诊断Ｊ。２１三体综合征胎儿的孕妇血液中染色体２１序列数目
表１染色体核型分析结果
染色体核型异常

QF-PCR技术在快速产前诊断常见非整倍体染色体异常中的应用

QF-PCR技术在快速产前诊断常见非整倍体染色体异常中的应用滕奔琦;章钧;林颖;王青青;林俊伟;叶燕绸;侯红瑛【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2012(28)9【摘要】目的:利用定量荧光PCR(QF-PCR)产前诊断常见非整倍体染色体异常。

方法:对95例羊水样本采用QF-PCR技术检测短串联重复序列(STR)的多态性信息含量(PIC),并将所得实验结果与染色体核型分析结果进行比较。

结果:QF-PCR检测发现95例羊水标本中正常63例,21三体14例(1例嵌合型,1例易位型),18三体4例,(45,X)3例,(47,XXX)8例;检测结果与染色体核型分析结果一致。

QF-PCR检测结果的符合率为96.8%。

结论:QF-PCR可快速检测非整倍体染色体异常,并且结果可靠。

【总页数】7页(P1644-1650)【关键词】非整倍体;短串联重复序列;多态性信息含量【作者】滕奔琦;章钧;林颖;王青青;林俊伟;叶燕绸;侯红瑛【作者单位】中山大学附属第三医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R363【相关文献】1.荧光定量聚合酶链反应技术快速产前诊断常见染色体非整倍体的临床应用 [J], 梁丽;廖灿;潘敏;杨昕;李发涛;易翠兴;李焱;符芳;李东至2.QF-PCR快速产前诊断常见非整倍体病的价值 [J], 纪妍;朱津;卢燕3.多重探针连接依赖式扩增技术在常见非整倍体染色体异常快速产前诊断中的应用研究——附407例检测报告 [J], 滕奔琦;周琳;章钧;王青青;林俊伟;叶燕绸;侯红瑛4.QF-PCR技术在产前诊断胎儿染色体非整倍体疾病中的应用 [J], 潘锦梅;梁西岚;黎洛冰;刘沃满;陈小乐5.QF-PCR技术在胎儿常见染色体非整倍体快速诊断中的临床应用 [J], 刘沃满; 唐玉芬; 黎洛冰; 聂俊玮; 谭满胜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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关键词染色体畸变；原位杂交，荧光；染色体非整倍体；产前诊断；羊水
传统的羊水细胞遗传学诊断具有许多无法克服的局限性，如培养耗时长（１０～１４ｄ），技术稳定性差等，尤其是对染色体的嵌合现象很难作出解释，这是因为中期分裂相的数目较少，往往不能提供足够的分析信息。荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）技术，将分子生物学和细胞遗传学技术相结合，可以很好地克服上述局限性，将其应用于未培养的羊水间期细胞，分析大量的细胞以获得足够的信息，可于羊膜腔穿刺后２４ｈ内快速诊断胎儿染色体数目异常［１］。本研究采用
传统的羊水细胞遗传学诊断有许多无法克服的局限性。核型分析需要经过细胞培养，且制片过程繁杂，存在培养、显带失败等可能；至少要１０～１４ｄ出报告。ＦＩＳＨ只需５ｍＬ羊水，无需培养，２４ｈ即可出结果，步骤操作简便，结果清晰易辨。ＦＩＳＨ对于细胞的分裂周期没有特殊的要求，标本来源丰富，可以用于细胞分裂中期和间期的细胞，无需细胞培养，不存在培养失败的问题。本研究应用ＦＩＳＨ技术，对２７５例未培养的羊水间期细胞进行染色体数目异常的产前诊断，与传统的羊水细胞培养染色体核型分析结果对照，一致性为１００％，这与国内外文献报道的ＦＩＳＨ在染色体非整倍体的检测中有高特异性和灵敏性是相一致的［５］。
实用医学杂志２０１２年第２８卷第１期
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ａｒｔｅｒｙｆｉｓｔｕｌａｓｉｎＴｕｒｋｉｓｈｐａｔｉｅｎｔｓｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｃａｒｄｉａｃａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．ＩｎｔＪＣｌｉｎＰｒａｃｔ，２００３，５７（２）：２８０－２８３．［３］ＩａｄａｎｚａＡ，ｄｅｌＰａｓｑｕａＡ，ＦｉｎｅｓｃｈｉＭ，ｅｔａｌ．Ｔｈｒｅｅ鄄ｖｅｓｓｅｌｌｅｆｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｍｉｃｒｏｆｉｓｔｕｌｉｚａｔｉｏｎｓｙｎｄｒｏｍｅ：ａｒａｒｅｃａｓｅｏｆａｎｇｉｎａ［Ｊ］．ＩｎｔＪＣａｒｄｉｏｌ，２００４，９６（１）：１０９－１１１．［４］ＵｍａｎａＥ，ＭａｓｓｅｙＣＶ，ＰａｉｎｔｅｒＪＡ．Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｓｅｃｏｎｄａｒｙｔｏａｌａｒｇｅｃｏｒｏｎａｒｙ鄄ｐｕｌｍｏｎａｒｙｆｉｓｔｕｌａ［Ｊ］．Ａｎｇｉｏｌｏｇｙ，２００２，５３（３）：３５３－３５７．［５］ＦｕｊｉｍｏｔｏＮ，ＯｎｉｓｈｉＫ，ＴａｎａｂｅＭ，ｅｔａｌ．Ｔｗｏｃａｓｅｓｏｆｇｉａｎｔａｎｅｕｒｙｓｍｉｎｃｏｒｏｎａｒｙｐｕｌｍｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｆｉｓｔｕｌａａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃｃｈａｎｇｅ［Ｊ］．ＩｎｔＪＣａｒｄｉｏｌ，２００４，９７（４）：５７７－５７８．［６］ＧｏｗｄａＲＭ，ＶａｓａｖａｄａＢＣ，ＫｈａｎＩＡ，ｅｔａｌ．Ｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｆｉｓｔｕｌａｓ：ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＩｎｔＪＣａｒｄｉｏｌ，２００６，１０７（１）：７－１０．［７］ＫｒｉｓｈｎａｍｏｏｒｔｈｙＫＭ，ＲａｏＳ．Ｔｒａｎｓｅｓｏｐｈａｇｅａｌｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓｆｉｓｔｕｌａ［Ｊ］．ＩｎｔＪ
胎儿和新生儿最常见的染色体异常为Ｘ、Ｙ染色体以及１３号、１８号和２１号染色体的数目异常（占全部异常的９５％以上），染色体结构异常仅占
万方数据
极少数，故用１８号、Ｘ、Ｙ染色体着丝粒探针以及１３ｑ１４和２１ｑ２２特异性探针，对未培养的羊水间期细胞进行ＦＩＳＨ，即可发现大多数胎儿的染色体异常［３］。目前，国内已广泛开展了孕中期母血清生化标志物筛查唐氏综合征及１８三体综合征，筛查阳性率约为５％左右［４］，对高危孕妇应用上述５种探针进行ＦＩＳＨ检测可以达到确诊的目的，避免患儿出生，对提高人口素质，降低出生缺陷率具有重要意义。
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１５００ｒ／ｍｉｎ离心１１ｍｉｎ，去上清，用５ｍＬ胶原酶Ｂ（０．００５ｇ／５ｍＬＨａｎｋ′ｓＢＳＳ）重新吹打悬浮细胞，３７℃水浴３０ｍｉｎ。常规低渗固定后滴片，５６℃老化玻片３０ｍｉｎ。（２）杂交：采用北京金菩嘉公司的１８号、Ｘ、Ｙ染色体着丝粒探针以及１３ｑ１４和２１ｑ２２特异性探针进行杂交［２］。３７℃水浴中ＲＮａｓｅＡ处理玻片１５ｍｉｎ，２ × ＳＳＣ漂洗２次。０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＨＣｌ中浸泡玻片１０ｍｉｎ，２ × ＳＳＣ漂洗２次。３７℃水浴中胃蛋白酶作用１０ｍｉｎ，２ × ＳＳＣ漂洗２次。－２０℃预冷的７０％乙醇、８５％乙醇中各２ｍｉｎ脱水，１００％乙醇中室温浸泡１０ｍｉｎ，自然干燥玻片后加热至５６℃。将玻片置于７３℃ 变性液中５ｍｉｎ。－２０℃ 预冷的７０％乙醇、８５％乙醇、１００％乙醇中各３ｍｉｎ脱水，自然干燥玻片后加热至４６℃。探针置于７３℃水浴中变性５ｍｉｎ。加探针，盖上盖玻片，胶封片，４２℃湿盒２ｈ。杂交完毕后洗去非特异信号。（３）镜检：加ＤＡＰＩ复染后在ＯｌｙｍｐｕｓＢＸ鄄５１荧光显微镜下观察信号，其中１３ｑ１４和２１ｑ２２两种探针为一组，对应的荧光信号分别为绿色和红色；１８号、Ｘ、Ｙ染色体着丝粒探针为一组，对应的荧光信号分别为蓝色，绿色和红色。１．２．３ＦＩＳＨ结果分析每个ＤＮＡ探针至少随机计数５０个细胞。（１）如果＞９０％的细胞核显示为正常信号则为正常核型；（２）如果＞６０％的细胞核显示为异常信号则为异常核型；（３）如果无法判读，扩大计数１００个细胞，以判断最后结果；（４）如果非整倍体信号为１０％～６０％，则表明可能存在嵌合型，则须扩大计数２００个细胞，且对大量中期分裂相做进一步细胞遗传学分析。１．２．４羊水细胞培养及收获取２０ｍＬ羊水离心，取沉淀物０．５ｍＬ加入４．５ｍＬ张氏培养液，在培养瓶内混匀，放入３７℃，５％ＣＯ２培养箱内培养，５ｄ后隔天观察换液，１０～１２ｄ传代培养，用ＥＤＴＡ胰酶洗脱细胞后再加入培养液培养过夜，按常规收获细胞。羊水细胞Ｇ带染色体制备按常规进行。２结果
２７５例产前诊断者羊水染色体检测中，胎儿染色体数目正常者２６６例（其中４６，ＸＸ１３０例，４６，ＸＹ１３６例），染色体数目异常者９例，其中２１三体７例，４７，ＸＸＸ１例，４７，ＸＹＹ１例。所有ＦＩＳＨ结果均与培养后的羊水染色体核型分析结果吻合，２１三体引产后经脐血细胞染色体核型分析证实。３讨论
Ｃａｒｄｉｏｌ，２００４，９６（２）：２８１－２８３．［８］ＦａｒｏｏｋｉＡＱ，ＮｏｗｌｅｎＴ，ＨａｋｉｍｉＭ，ｅｔａｌ．Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌｃｏｒｏｎａｒｙ
ａｒｔｅｒｙｆｉｓｔｕｌａｅ：ａｒｅｖｉｅｗｏｆ１８ｃａｓｅｓｗｉｔｈｓｐｅｃｉａｌｅｍｐｈａｓｉｓｏｎｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｃｌｏｓｕｒｅ［Ｊ］．ＰｅｄｉａｔｒＣａｒｄｉｏｌ，１９９３，１４（２）：２０８－２１３．［９］ＪａｆｆｅＲＢ，ＧｌａｎｃｙＤＬ，ＥｐｓｔｅｉｎＳＥ，ｅｔａｌ．Ｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｉａｌ鄄ｒｉｇｈｔｈｅａｒｔｆｉｓｔｕｌａｅ．Ｌｏｎｇ鄄ｔｅｒｍｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｉｎｓｅｖｅｎｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９７３，４７（２）：１３３－１４３．［１０］ＫａｍｉｙａＨ，ＹａｓｕｄａＴ，ＮａｇａｍｉｎｅＨ，ｅｔａｌ．Ｓｕｒｇｉｃａｌｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｏｎｇｅｎｉｔａｌｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｆｉｓｔｕｌａｓ：２７ｙｅａｒｓ′ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅａｎｄａｒｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ］．ＪＣａｒｄＳｕｒｇ，２００２，１７（２）：１７３－１７７．［１１］ＳａｉｄＳＡ，ＬａｍＪ，ｖａｎｄｅｒＷｅｒｆＴ．Ｓｏｌｉｔａｒｙｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｆｉｓｔｕｌａｓ：ａｃｏｎｇｅｎｉｔａｌａｎｏｍａｌｙｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎａｎｄａｄｕｌｔｓ．Ａｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．ＣｏｎｇｅｎｉｔＨｅａｒｔＤｉｓ，２００６，１（３）：６３－７６．
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６鄄５７２５.201２.０１．0４７基金项目：湖北省卫生厅青年科技人才基金资助项目（编号：ＱＪＸ２００８－１３）作者单位：４３００７０武汉市，湖北省妇幼保健院产前诊断中心
万方数据
１８号、Ｘ、Ｙ染色体着丝粒探针以及１３ｑ１４和２１ｑ２２特异性探针，将ＦＩＳＨ应用于未培养的羊水间期细胞进行胎儿染色体非整倍体的产前诊断，现报告如下。１对象与方法１．１研究对象选择２００９年１月至２０１０年１２月经我院遗传咨询门诊接诊后认为需进行产前诊断者２７５例，年龄１９～４８岁，孕１８～２３周，产前诊断指征包括孕妇年龄大于３５岁４８例，唐筛高危２０２例，不良孕产史１５例，Ｂ超异常１０例。１．２研究方法１．２．１羊水采集［２］在Ｂ超引导下，用２１ＧＰＴＣ穿刺针经腹抽取羊水２５ｍＬ，置于无菌离心管中，其中５ｍＬ用于ＦＩＳＨ检测，２０ｍＬ用于细胞培养。１．２．２羊水细胞ＦＩＳＨ检测（１）制片：５ｍＬ羊水