结核分枝杆菌耐药分子机制及耐药基因检测方法研究进展
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维普资讯
３８ ３
・
专 家 论述 ・
结 核分 枝杆 菌 耐药 分 子机 制 及耐 药基 因检 测方 法研 究 进展
解放军 ３９医院全军结核病中心研究室（ ０ 北京
关键词 结核分 枝杆菌 ； 耐药 基 因 ； 检测 ； 述 综
１ ０１ ０ ９） ０
辟 了一 条新 的途 径 。
变 导致 过氧化 氢酶 一过 中一 究 室 副 主 任技 师 ， 国 病 研 中
防痨协 套 基 础 （ 细 菌） 业委 台 专 氧 化物 酶活性 降低或 丧 失 ， 止 Ｉ Ｈ转 换 成 活 员会委 员 从 事结 核病 细茵 学、 阻 Ｎ
１ 结核分 棱杆菌 的耐药 分子 机制
ｉ Ａ基 因 ９ ｎ ｈ ４位 密 码 子 ； 队 级 、 家卫 生 部 和 北 京 项 军 国
编码 的氨基酸改变 ， Ｒ Ａ聚合酶分子原有 Ｒ Ｐ结合 使 Ｎ Ｆ 点的构象发生改 变， 失去结合 Ｒ Ｐ的能力 ， Ｆ 而导致耐
ＲＦＰ。
突变使 Ｎ Ｄ Ａ Ｈ与之结合 学挂 术 进 步 二 等 奖 ５面 、 市科 三 降低 ， 抑制 了 ＩＨ活化 Ｎ 等奖 ６面 。参加 专（ ） 编写 ４ 译 著
用。结 核 分 枝 杆 菌 耐
ＩＨ 与过 氧 化氢 酶 一过 Ｎ
氧 化 物 酶 编 码 基 因 Ｋｔ ａ Ｇ和／ 或烯 酰 基 还 原
酶编 码 基 因 ｉ Ａ 突 变 ｎ ｈ
有 关 。 Ｉ ｔ 基 因 的 突 （Ｇ ａ
■
牵 国利 解 放 军 第 ３ ９医 院 垒 军 结 核 ０
的发展 ， 结核分枝杆菌的耐药机制及 耐药 的分子基础 大部分已被阐昵 ， 建立了快速检测结核分枝杆菌耐药 基 因的方法 ， 为结核 分 枝杆 菌快 速 药 物 敏 感性 试验 开
基 还原 酶活性 作用 好像 取 决 于结 合烯 酰基还 原
酶 活性 部 位 的 Ｎ Ｄ Ａ Ｈ，
家卫 生部 医 学科 学 基金 重 点课
题等 ｌ ０余面矸究课题 ， 现参加 国
家 ９ ３ 划 严 重 侍 染 病 防 治 基 ７规
础研 究’ 目中子课 题研 究。曾 面
编 码 烯 酰 基 还 原 酶 的 国家级科 学技 术进 步三等奖 １ 获
作 用。近年来 的研 究 发现 结 核 分 枝 杆 菌 耐 Ｒ Ｐ的发 Ｆ 生 是 由于其 编码 Ｒ Ａ聚合 酶 ８亚基 的 ｒｏ Ｎ ｐＢ基 因突 变 所致 。ｒｏ ｐＢ基 因 含 有 ３３６ ５４ ｐ的开 放 阅 读 框 架 ， 码 编 １７ １８个氨 基 酸 。ｒｏ ｐＢ基 因少 数 密 码 子 突 变 引 起 它 所
重要 。
［ 文章编号］ ０８ ３２ ２ ０ ）４ ． ３８ ． ５ １０ 一 ７ ｛０ ２ ０ ０ ３ —０ １ 菌分枝 菌 酸生化合 成途
径 中的烯 酰 基还原 酶 一 ＮＭ） ． Ｈ复 合 体 结 合 ， 抑 制其 活 性 ， 扰 分 枝 菌 干 酸合 成 ， 挥 抗 菌 的作 发
（ ａ） Ｖ １置换 。
Ｉ 【 因位 于结 核分枝 杆菌染 色 体上 ， ２２ （Ｇ基 ａ 含 ２３个 核苷 酸 ， 耐 ＬＨ结 核 分 枝 杆 菌分 离 菌 株 中 ， ｌ 在 Ｎ 约 Ｏ一 ２ ％分离 株发 生 Ｉ ｔ 全缺 失 ， 氧化 氢 酶 一过 氧化 ４ （Ｇ完 ａ 过 物 酶 阴性 ， 高度 耐 ＩＨ，ｏ ～７ ％出现 点 突变部 份 缺 Ｎ ５％ ０ 失或 插 入 。是 常见 的点 突变 是 ３５位 ｓｒＡ．） ｒ １ ｅ（ Ｃ 一 Ｃ
（ Ｃ ） 天冬 酰胺 （ ｓ ） ＆Ａ ） Ｉｅ Ａ Ｃ 或 Ａ ｇ Ｃ Ｃ） Ａ Ｃ、 Ａｎ （ Ｃ 、 （ Ｔ ） Ｌ ｒ（ Ｃ
置换 ，１ ３５位 Ｓｒ 决 定 酶 活 性 的关 键 部 位 。还 可 见 ｅ是 Ｉ 【 困 １４位 Ａｇ １８位 Ｈｓ பைடு நூலகம்８位 Ａｈ １８ ｅ 、 （ Ｇ基 ａ ０ ｒ、０ ｉ、３ ｓ 、４ Ｌｕ ２０位 Ｈｓ２５位 ｒ３２ ７ ｉ、７ 、１ 位 １３ 链霉 素 （Ｍ） ’ ・ ｓ Ｌ 和 ３ １ Ａｐ密 码 予 ８位 ｓ 突变 ｉｈ ｎＡ基因 突变 主要 见于 ９ ４位 ｓ Ａａ ｅ Ｉ置换 。 ｓ 是一 种 在核 糖体 水 平 干 Ｍ
在临床实验室 ， 目前分枝杆菌药物敏感性检测仍 采 用常 规方法 ， 即绝 对 浓 度法 ， 比例 法 和 抗性 比率 法 。
但 这些方 法均 以细 菌 生长 为终 点 判 断 结 果 ， 由于 结核 分 枝杆 菌生长 缓慢 ， 得到 分离培 养物后 仍 需 １— 在 ２个 月方能 获得结 果 ， 需 建 立快 速 、 确 、 靠 的药 物敏 急 准 可 感性试 验方法 。近 年来 ， 随着 分子 生 物学 理 论 和技 术
ｌ１ 利 福 平 （ Ｆ ） ＿ Ｒ Ｐ Ｒ Ｐ是 通 过 特 异 地 与 Ｒ Ａ Ｆ Ｎ
免疫 学 、 子 生物 学研 完 工作 分 性 形 式 ， 致 耐 药 。恬 导
曾参 八 攻 国 化 ｈＨ形 式 抑 制烯 酰 加 军 队 “ 五 ” 关课 题 、 Ｎ
聚合酶 Ｂ 亚基结台 ， 抑制 Ｒ Ａ聚合酶活性 ， Ｎ 干扰 分枝 杆 菌 Ｒ Ａ的转录及合 成 ， Ｎ 阻碍 蛋 白质 台 成而 发 挥 抗菌
本 发表论文共 ５ ｏ余篇 。 形式 的 结合 率 ， 生 耐 ， 产
药
在结核 分枝杆 菌耐 Ｒ Ｐ分 离 株 中 ， ９％ 一９ ％ Ｆ 约 ５ ８ 检 出 ｒｏ ｐＢ基 因突 变 ， 突变一 般发 生 在一 个 高度 保 守 的 ８ｂ（０ —５３ ２ 个 氢基 酸密码 子 ） 成 的 区域 内 。 １ｐ５７ ３ 位 ７ 组 最 常 见 的 突 变 位 点 是 ５ １位 丝 氢 酸 （ｅ） ４ 氨 酸 ３ Ｓｒ－ 亮 （一） Ｌ 置换 ，２ 位 组 氨酸 （ ｉ） 酪氨 酸 （））天 门冬 ５６ Ｈｓ一 Ｔａ 、 － 氨 酸 （ ｓ） Ａｐ或半胱 氨酸 （ ｙ） 换 ，１ ｃｓ置 ５６位 Ａ 印 缬 氢 酸
李国利
［ 中图分类号 ］ ３８９ １Ｒ ４ ． Ｒ ７ ． ．４６５ １
［ 文献标识码］ Ａ
近年来 ， 在全球范围内， 结核分枝杆菌耐药率不断 上升 ， 高耐药 和多 耐药 菌株不断 出现 和传播 ， 化疗疗 对 效 及结 核病流行 产 生很 大 影 响 ， 物 敏 感 性 检 测更 显 药
３８ ３
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专 家 论述 ・
结 核分 枝杆 菌 耐药 分 子机 制 及耐 药基 因检 测方 法研 究 进展
解放军 ３９医院全军结核病中心研究室（ ０ 北京
关键词 结核分 枝杆菌 ； 耐药 基 因 ； 检测 ； 述 综
１ ０１ ０ ９） ０
辟 了一 条新 的途 径 。
变 导致 过氧化 氢酶 一过 中一 究 室 副 主 任技 师 ， 国 病 研 中
防痨协 套 基 础 （ 细 菌） 业委 台 专 氧 化物 酶活性 降低或 丧 失 ， 止 Ｉ Ｈ转 换 成 活 员会委 员 从 事结 核病 细茵 学、 阻 Ｎ
１ 结核分 棱杆菌 的耐药 分子 机制
ｉ Ａ基 因 ９ ｎ ｈ ４位 密 码 子 ； 队 级 、 家卫 生 部 和 北 京 项 军 国
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突变使 Ｎ Ｄ Ａ Ｈ与之结合 学挂 术 进 步 二 等 奖 ５面 、 市科 三 降低 ， 抑制 了 ＩＨ活化 Ｎ 等奖 ６面 。参加 专（ ） 编写 ４ 译 著
用。结 核 分 枝 杆 菌 耐
ＩＨ 与过 氧 化氢 酶 一过 Ｎ
氧 化 物 酶 编 码 基 因 Ｋｔ ａ Ｇ和／ 或烯 酰 基 还 原
酶编 码 基 因 ｉ Ａ 突 变 ｎ ｈ
有 关 。 Ｉ ｔ 基 因 的 突 （Ｇ ａ
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牵 国利 解 放 军 第 ３ ９医 院 垒 军 结 核 ０
的发展 ， 结核分枝杆菌的耐药机制及 耐药 的分子基础 大部分已被阐昵 ， 建立了快速检测结核分枝杆菌耐药 基 因的方法 ， 为结核 分 枝杆 菌快 速 药 物 敏 感性 试验 开
基 还原 酶活性 作用 好像 取 决 于结 合烯 酰基还 原
酶 活性 部 位 的 Ｎ Ｄ Ａ Ｈ，
家卫 生部 医 学科 学 基金 重 点课
题等 ｌ ０余面矸究课题 ， 现参加 国
家 ９ ３ 划 严 重 侍 染 病 防 治 基 ７规
础研 究’ 目中子课 题研 究。曾 面
编 码 烯 酰 基 还 原 酶 的 国家级科 学技 术进 步三等奖 １ 获
作 用。近年来 的研 究 发现 结 核 分 枝 杆 菌 耐 Ｒ Ｐ的发 Ｆ 生 是 由于其 编码 Ｒ Ａ聚合 酶 ８亚基 的 ｒｏ Ｎ ｐＢ基 因突 变 所致 。ｒｏ ｐＢ基 因 含 有 ３３６ ５４ ｐ的开 放 阅 读 框 架 ， 码 编 １７ １８个氨 基 酸 。ｒｏ ｐＢ基 因少 数 密 码 子 突 变 引 起 它 所
重要 。
［ 文章编号］ ０８ ３２ ２ ０ ）４ ． ３８ ． ５ １０ 一 ７ ｛０ ２ ０ ０ ３ —０ １ 菌分枝 菌 酸生化合 成途
径 中的烯 酰 基还原 酶 一 ＮＭ） ． Ｈ复 合 体 结 合 ， 抑 制其 活 性 ， 扰 分 枝 菌 干 酸合 成 ， 挥 抗 菌 的作 发
（ ａ） Ｖ １置换 。
Ｉ 【 因位 于结 核分枝 杆菌染 色 体上 ， ２２ （Ｇ基 ａ 含 ２３个 核苷 酸 ， 耐 ＬＨ结 核 分 枝 杆 菌分 离 菌 株 中 ， ｌ 在 Ｎ 约 Ｏ一 ２ ％分离 株发 生 Ｉ ｔ 全缺 失 ， 氧化 氢 酶 一过 氧化 ４ （Ｇ完 ａ 过 物 酶 阴性 ， 高度 耐 ＩＨ，ｏ ～７ ％出现 点 突变部 份 缺 Ｎ ５％ ０ 失或 插 入 。是 常见 的点 突变 是 ３５位 ｓｒＡ．） ｒ １ ｅ（ Ｃ 一 Ｃ
（ Ｃ ） 天冬 酰胺 （ ｓ ） ＆Ａ ） Ｉｅ Ａ Ｃ 或 Ａ ｇ Ｃ Ｃ） Ａ Ｃ、 Ａｎ （ Ｃ 、 （ Ｔ ） Ｌ ｒ（ Ｃ
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在临床实验室 ， 目前分枝杆菌药物敏感性检测仍 采 用常 规方法 ， 即绝 对 浓 度法 ， 比例 法 和 抗性 比率 法 。
但 这些方 法均 以细 菌 生长 为终 点 判 断 结 果 ， 由于 结核 分 枝杆 菌生长 缓慢 ， 得到 分离培 养物后 仍 需 １— 在 ２个 月方能 获得结 果 ， 需 建 立快 速 、 确 、 靠 的药 物敏 急 准 可 感性试 验方法 。近 年来 ， 随着 分子 生 物学 理 论 和技 术
ｌ１ 利 福 平 （ Ｆ ） ＿ Ｒ Ｐ Ｒ Ｐ是 通 过 特 异 地 与 Ｒ Ａ Ｆ Ｎ
免疫 学 、 子 生物 学研 完 工作 分 性 形 式 ， 致 耐 药 。恬 导
曾参 八 攻 国 化 ｈＨ形 式 抑 制烯 酰 加 军 队 “ 五 ” 关课 题 、 Ｎ
聚合酶 Ｂ 亚基结台 ， 抑制 Ｒ Ａ聚合酶活性 ， Ｎ 干扰 分枝 杆 菌 Ｒ Ａ的转录及合 成 ， Ｎ 阻碍 蛋 白质 台 成而 发 挥 抗菌
本 发表论文共 ５ ｏ余篇 。 形式 的 结合 率 ， 生 耐 ， 产
药
在结核 分枝杆 菌耐 Ｒ Ｐ分 离 株 中 ， ９％ 一９ ％ Ｆ 约 ５ ８ 检 出 ｒｏ ｐＢ基 因突 变 ， 突变一 般发 生 在一 个 高度 保 守 的 ８ｂ（０ —５３ ２ 个 氢基 酸密码 子 ） 成 的 区域 内 。 １ｐ５７ ３ 位 ７ 组 最 常 见 的 突 变 位 点 是 ５ １位 丝 氢 酸 （ｅ） ４ 氨 酸 ３ Ｓｒ－ 亮 （一） Ｌ 置换 ，２ 位 组 氨酸 （ ｉ） 酪氨 酸 （））天 门冬 ５６ Ｈｓ一 Ｔａ 、 － 氨 酸 （ ｓ） Ａｐ或半胱 氨酸 （ ｙ） 换 ，１ ｃｓ置 ５６位 Ａ 印 缬 氢 酸
李国利
［ 中图分类号 ］ ３８９ １Ｒ ４ ． Ｒ ７ ． ．４６５ １
［ 文献标识码］ Ａ
近年来 ， 在全球范围内， 结核分枝杆菌耐药率不断 上升 ， 高耐药 和多 耐药 菌株不断 出现 和传播 ， 化疗疗 对 效 及结 核病流行 产 生很 大 影 响 ， 物 敏 感 性 检 测更 显 药
