当前位置：文档之家 › siRNA干扰内源性TM9SF1基因对人脐静脉内皮细胞炎症因子及血管紧张素

siRNA干扰内源性TM9SF1基因对人脐静脉内皮细胞炎症因子及血管紧张素

  • 格式：pdf
  • 大小：927.48 KB
  • 文档页数：4
摘 要 目的 ： 探讨 ｓ ｉ Ｒ ＮＡ 干 扰 内源 性 ＴＭ９ Ｓ Ｆ １ 基 因 对 人 脐 静 脉 内皮 细 胞 （ ＨｕＶＥ ｃ） 炎症 因子及血 管紧 张素转化酶 １ （ ＡＣ Ｅ １ ） 表 达 的 影 响 。方 法 ： 将 ＨｕＶＥ Ｃ分 为 阴性 对 照 组 （ ｓ ｉ － ＮＣ 组 ） 和转染组 （ ｓ ｉ ＴＭ９ Ｓ Ｆ １组 ） 。以脂 质体 Ｌ ｉ ｐ ｏ ｆ ｅ ｃ ｔ ａ ｍｉ ｎ ｅ ３ ０ ０ ０将
ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｃｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ，Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｓ ｈ ｉ ｊ ｉ ｔ ａ ｎ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ，Ｃａ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ，Ｂｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ １ ０ ０ ０ ３ ８，
ＴＭ９ Ｓ Ｆ １基 因 特 异 性 ｓ ｉ ＲＮ Ａ 转 染 至 ＨＵ ＶＥ Ｃ细 胞 ， 采用实时荧光定 量 Ｐ Ｃ Ｒ（ ｑ Ｐ Ｃ Ｒ） 方法 检测特 异性 ｓ ｉ ＲＮ Ａ 对 ＴＭ９ Ｓ Ｆ １基 因
的干扰效果 ， 并 比较 两组 白介 素 （ Ｉ Ｌ ） 一 １ Ｇ 、 Ｉ Ｌ 一 ８和 ＡＣ Ｅ １ 基 因 的 相 对 表 达 量 。结 果 ： 转染 Ｔ Ｍ９ Ｓ Ｆ １基 因 特 异 性 ｓ ｉ Ｒ ＮＡ ４ ８ ｈ后 ，
ｓ ｉ — Ｔ Ｍ９ Ｓ Ｆ １组 细 胞 中 Ｔ Ｍ９ Ｓ Ｆ １ 基 因相 对 表 达 量 明显 低 于 ｓ ｉ — ＮＣ组 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 且 ｓ ｉ — Ｔ Ｍ９ Ｓ Ｆ １组 Ｉ Ｌ 一 １ ８ 、 Ｉ Ｌ 一 ８和 Ａ Ｃ Ｅ １基 因 相 对 表 达 量 亦 明显 低 于 ｓ ｉ — ＮＣ组 （ Ｐ ＜Ｏ ． ０ ５或 Ｐ ＜Ｏ ． ０ ０ １ ） 。结 论 ： 干 扰 内源 性 Ｔ Ｍ９ Ｓ Ｆ １可 明 显 抑 制 ＨＵＶＥ Ｃ中 炎 症 因 子 Ｉ Ｌ 一 １ Ｂ 、 Ｉ Ｌ － ８ 及 血 管 收 缩 相 关 基 因 ＡＣ Ｅ １的表 达 。 关 键 词 Ｔ Ｍ９ Ｓ Ｆ １ ； 内皮 细 胞 ； Ｒ ＮＡ 干 扰 ； 炎 症 相关 基 因 ； ＡＣ Ｅ １ 中图分类号 ： Ｒ５ ４ ３ ． ５ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ５ — ９ ３ Ｏ ｘ （ ２ Ｏ １ ７ ） ０ ８ — １ 】 ２ ７ 一 Ｏ ４
Ｊ ＯＵ ＲＮＡＬ ＯＦ ＧＵ ＡＮＧＸ Ｍ Ｉ ＥＤ Ｉ Ｃ ＡＬ Ｕ Ｎ Ｉ ＶＥ Ｓ Ｉ ＴＹ ２ Ｏ １ 一 ７ Ａｕ ｇ； ３ ４（ … ８ ）
Ｉ Ｉ ｃ ｖ学
报
ｓ ｉ ＲＮＡ 干 扰 内源 性 ＴＭ９ Ｓ Ｆ １基 因对 人脐 静 脉 内皮 细 胞 炎症 因子 及 血 管 紧 张 素转 化 酶 １表 达 的影 响
Ｄ０Ｉ ： １ ０ ． １ ６ ｌ ９ ０ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ４ ５ １ ２ １ １ ／ ｒ ． ２ ０ １ ７ ． ０ ８ ． ０ ０ ２
Ｅｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｉ ｎｔ ｅ ｒ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎｃ ｅ ｏ ｆ ｓ ｉ ＲＮ Ａ ｗｉ ｔ ｈ ｅ ｎｄ ｏ ｇ ｅ ｎ ｏ ｕ ｓ ＴＭ ９ Ｓ Ｆ１ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｓ Ｏ ｆ ｉ ｎ ｆ ｌ ａ ｍｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ — ｒ ｅ — ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ Ａ ＣＥ １ ｉ ｎ ｈ ｕ ｍａ ｎ ｕ ｍｂ ｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｌ ｖ ｅ ｉ ｎ ｅ ｎ ｄｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ
ｔ ｈｅ ｉ ｎ ｆ ｌ ａ ｍ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ — ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｇｅ ｎ ｅ ｓ ａ ｎｄ ａ ｎ ｇｉ ｏｔ ｅ ｎｓ ｉ ｎ ｃ ｏｎ ｖｅ ｒ ｔ ｉ ｎｇ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ １（ ＡＣＥ１ ）ｉ ｎ ｈｕ ｍａ ｎ ｕｍｂｉ ｌ ｉ ｃ ａ ｌ ｖ ｅ ｉ ｎ ｅ ｎｄ ｏ —
Ｘｉ ａ ｎｇ ｙａ ｎｇ ４ ４１ ０ ２ １，Ｃｈｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ： Ｔｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｓ ｉ ＲＮＡ ｗｉ ｔ ｈ ｅ ｎ ｄ ｏ ｇ ｅ ｎ ｏ ｕ ｓ ＴＭ９ Ｓ Ｆ１ ｇ ｅ ｎ ｅ ｏ ｎ
Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｇｕ ｏ ｙ ｉ ｎ ｇ ，Ｙａ ｎ ｇ Ｄｕ ｏ ，Ｇａ ｏ Ｎａ ｎ ａ ，Ｔａ ｎ ｇ Ｚ ｉ ｈ ｕ ａ ，Ｌｉ Ｎａ ，Ｔｏ ｎ ｇ Ｙｏ ｎ ｇ ｊ ｕ ａ ｎ ，Ｘｉ ａ ｏ Ｊ ｕ ａ ｎ 。 ．（ １ ． Ｄｅ —
张 国英 ， 杨 朵 ， 高娜 娜 ， 唐 子华 李
，
娜 ， 仝 永 娟 ， 肖 娟。 △
（ １ ．首 都 医科大 学 附属北 京世 纪坛 医 院 中心 实验 室 ， 北 京 １ ０ ０ ０ ３ ８ ； ２ ．湖北 文 理学 院附属 襄 阳市 中心 医 院神 经 内科 ， 襄阳 ４ ４ １ ０ ２ １ ）
Ｃｈｉ ｎ ａ； ２ ． Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏｆ Ｎｅ ｕ ｒ ｏｌ ｏ ｇｙ， Ｘｉ ａ ｎ ｇｙ ａ ｎ ｇ Ｃｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｌ Ｈ ｏｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｈ ｕｂ ｅ ｉ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ａｒ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ Ｓｃ ｉ ｅ ｎｃ ｅ，

合集下载

2021探讨Sirt3对人脐静脉内皮细胞衰老的影响机制范文3

2021探讨Sirt3对人脐静脉内皮细胞衰老的影响机制范文3

2021探讨Sirt3对人脐静脉内皮细胞衰老的影响机制范文 内皮细胞衰老引起的内皮细胞功能减退是心脑血管疾病随年龄增加的主要因素之一[1-2].氧化应激是导致细胞衰老的主要原因之一。

随着年龄的增加，内皮细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生增多、清除减少，导致其在内皮细胞内积聚，并最终导致内皮细胞衰老、损伤及功能失调[3]. Sirtuins家族是一类依赖烟碱胺腺嘌呤二核苷酸（ NAD）的组蛋白去乙酰化酶，Sirt3 是 Sirtuins 家族的成员[4].研究表明，Sirt3 可通过去乙酰化相关蛋白，抑制线粒体内 ROS 的蓄积[5].提示 Sirt3 可通过抑制血管内皮细胞线粒体内 ROS 的蓄积，抑制血管内皮细胞的衰老过程。

本研究通过 Sirt3-siRNA抑制 Sirt3 蛋白的表达，观察人脐静脉内皮细胞（ hu-man umbilical vein endothelialcells,HUVECs ）β-gal阳性染色率、细胞衰老相关蛋白 P16 及 P21 的表达、ROS 蓄积水平，旨在探讨 Sirt3 对 HUVECs 衰老的影响及其可能的机制。

1材料与方法 1.1 材料 1.1. 1 实验细胞 HUVECs,购自美国 ATCC 公司。

1.1. 2 主要试剂 ECM 培养基购自美国 Sciencell公司；胰蛋白酶、DCFH-DA 均购自美国 Sigma 公司； Sirt3-siRNA 序列由上海吉玛生物制药有限公司合成；脂质体 LipofectamineTM2000 购自美国 Inven-trogen 公司； Opti-MEM 购自美国 Gibco 公司；β-半乳糖苷酶染色试剂盒、免疫印迹试剂盒和 BCA 蛋白定量试剂盒均购自上海碧云天生物科技有限公司；兔来源 Sirt3 单克隆抗体、小鼠来源 P16 单克隆抗体、兔来源 P21 单克隆抗体均购自美国 Santa CruzBiotechnology 公司；兔来源β-actin单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔 IgG、辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠 IgG 均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

小干扰RNA沉默MSTl基因减轻TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

小干扰RNA沉默MSTl基因减轻TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

方 法 ：用不 同浓 度 的 Ｔ Ｆａ ～ ０ ｇ Ｅ 诱 导 内皮 细胞 凋 亡 ， ２ 通过 Ｔ Ｎ Ｌ 观察 内皮 细 胞 凋亡 率 ，Ｗｅｔ ｎ Ｎ — ０ １０ｒ／ ） （ ｉｍ ４ ｈ后 Ｕ Ｅ 法 ｓ ｒ ｅ 印 迹 分 析 Ｔ Ｆａ ＭＳ １ 性 的 影 响 ； 随后 将 构 建 的 ＭＳ １ 干 扰 Ｒ Ａ ｓ ａ ｔｆ ｅｃ Ｎ Ｎ 对 Ｔ 活 Ｔ 小 Ｎ （ ｌｉｅ ｅ ｎｅ Ａ，ｓ Ｎ ） 脂 质 体 ｍ ｌｎ ｒｒ Ｒ ｉ Ａ在 Ｒ Ｌ ｏ ｅ ｍ ｎ ０ ０的介 导 下 转 染 原 代 Ｈ Ｖ Ｃ ｉ ｆ ｔ ｉ ２０ ｐ ｅａ ｅ Ｕ Ｅ ，转 染 后 ２ 加 入 Ｔ Ｆａ１ ｇ Ｌ 诱 导 Ｈ Ｖ Ｃ凋 亡 ，２ 后 通 过 ４ｈ Ｎ — ０ｎ／ ） （ ｍ ＵＥ ４ｈ
默内皮细胞中 Ｍ Ｔ 基 因的表达 （＜ ． ） Ｓ １ ｉＮ Ｓ１ Ｐ ０ ５；Ｍ Ｔ Ｒ Ａ能明显减少 Ｔ Ｆａ ０ ｓ Ｎ — 诱导的内皮细胞凋亡 （ ０ ５，抑制 Ｔ Ｆａ ｐ ．） ＜０ Ｎ — 诱导的 Ｍ Ｔ 裂解活化 ，同时 ｃｓａ ． 的活性也相应减少。结论 ：Ｍ Ｔ ｉＮ Ｓ１ ａ ｓ３ ｐｅ Ｓ １ Ｒ Ａ通过抑制 ｃ ｐｓ ３ ｓ ａ ａ ． 的级联放大效应减 ｓ ｅ
能导致内皮细胞凋亡显著增多 ｆ＜ ． １，并且呈剂量依赖性 ；随着 Ｔ Ｆ 浓度增加 ，Ｍ Ｔ 的活化增多 ，Ｍ Ｔ 激酶 Ｐ ０ ０） ０ Ｎ一 Ｓ１ Ｓ１
活 性相 应增 加 ；Ｍ Ｔ Ｒ Ａ对 内皮 细胞 中 ＭＳ Ｉ 因表 达 的抑制 呈剂 量依 赖性 ，１０ ｍ ｌ Ｔ ｉＮ Ｓ １ｉＮ ｓ Ｔ 基 ０ ｏＬＭＳ １ Ｒ Ａ能 特异性 沉 ｎ ／ ｓ
Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｕ ｉａ ｅ ｆ ｃ ｆ ｍｍａａ ｅ ｌ ２ 一 ｅ ｉａｅ１ ＭＳ １ ｇｎ ｎｔｍｏ ｊｃｉ ： ｏｅ ｃ ｔ ｔ ｅｔｏ ｖ ｌ ｄ ｅ ｈ ｅ ｓ ｍａ ｌｎｓ ｒｅ ０ ｉ ｎｓ （ Ｔ ） ｅ ｅ ｉ ｔｉ ｌ ｋ ｋ ｏ ｕ ｒ
人血管内皮生长因子mRNA靶向siRNA表达载体的构建和表达

人血管内皮生长因子mRNA靶向siRNA表达载体的构建和表达

人血管内皮生长因子mRNA靶向siRNA表达载体的构建和表达丁培杰;杨书钦;曹明瑞;臧文巧;陈宗德;赵国强【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2007(042)002【摘要】目的:构建人血管内皮生长因子(VEGF)mRNA靶向siRNA表达载体,观察其表达情况.方法:设计人VEGF靶向的发夹样siRNA,依据设计,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneo-GFP载体,转化扩增后得到重组载体pSUPERneo-GFP-siVEGF,进行序列测定.用脂质体转染法将重组载体转染食管癌细胞株Eca109,采用RT-PCR检测转染细胞VEGF mRNA的表达水平. 结果:经过酶切鉴定与测序,pSUPERneo-GFP-siVEGF构建成功.稳定转染该重组体的Eca109细胞VEGF mRNA表达水平明显降低.结论:成功构建了针对VEGF mRNA的siRNA载体, 转染细胞后可显著抑制VEGF mRNA的表达.【总页数】3页(P231-233)【作者】丁培杰;杨书钦;曹明瑞;臧文巧;陈宗德;赵国强【作者单位】漯河医学高等专科学校微生物学与免疫学教研室,漯河,446200;河南省煤田地质局-队医院,新郑,451150;郑州大学第一附属医院妇产科,郑州,450052;郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,郑州,450001【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体的构建及鉴定 [J], 邢志军;赵建武;王岩;高忠礼2.靶向LIMK1的siRNA 真核表达载体(pSUPER-LIMK1)的构建、鉴定及在人成骨肉瘤MG63细胞中的表达 [J], 邢志军;王岩;高忠礼3.构建TGF-βⅡR靶向siRNA真核表达载体并转染人T细胞的研究 [J], 陈悦;吴织芬;杨连甲;杨洁4.靶向人血管内皮生长因子-C基因的shRNA真核表达载体的构建与鉴定 [J], 谢晓斌;陈小卫;龙捷;张雅洁5.靶向人类心脏发育候选基因hole的siRNA真核表达载体的构建和鉴定 [J], 周军媚;姚峰;谢华平;叶湘漓;王跃群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞RAMP1表达的影响

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞RAMP1表达的影响

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞RAMP1表达的影响许俊;刘彦梅;唐江琼;郭锋;陈根;陈临溪;秦旭平【期刊名称】《中国药理通讯》【年(卷),期】2012(029)003【摘要】目的：血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）受体和降钙素基因相关肽（CGRP）受体同属于G蛋白藕联受体家族。

前期研究发现，CGRP能保护ANGII对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的损伤作用。

本实验观察血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）降钙素基因相关肽受体修饰蛋白-1（RAMP1）含量的影响。

进一步探讨ERKl／2信号蛋白在介导血管紧张素Ⅱ刺激RAMP1变化中的作用。

方法：用血管紧张素Ⅱ刺激HUVEC，MTT法和流式细胞仪观察HUVEC增殖和凋【总页数】1页(P48-48)【作者】许俊;刘彦梅;唐江琼;郭锋;陈根;陈临溪;秦旭平【作者单位】南华大学药物药理研究所,衡阳;421001【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞RAMP1表达和分布的影响 [J], 许俊;唐江琼;刘彦梅;郭锋;罗平;陈临溪;秦旭平2.miR-21抑制剂对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞增殖及eNOS表达的影响[J], 莫国君;陈伟;罗雪兰;杨鹏;欧和生3.siRNA干扰内源性TM9SF1基因对人脐静脉内皮细胞炎症因子及血管紧张素转化酶1表达的影响 [J], 张国英;杨朵;高娜娜;唐子华;李娜;仝永娟;肖娟4.血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响 [J], 杨慧宇;杨志明;边云飞;张娜娜;梁斌;肖传实5.血管紧张素(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞表达E选择素和单核细胞趋化蛋白1的影响 [J], 张娜娜;杨志明;梁斌;杨慧宇;康玉明;肖传实因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。