过氧化氢的标定方法

过氧化氢的测定方法三、过氧化氢酶的活性----紫外吸收法[原理] H202在240nm波长下有强吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240）随反应时间而降低。

根据测量吸光的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。

[仪器与用具] 紫外分光光度计；离心机；研钵；容量瓶250ml1个；刻度吸管0.5ml2支；2ml1支；10ml试管3支；恒温水浴锅。

[试剂] 0.2mol?L-1pH7．8磷酸缓冲液(内含1％聚乙烯吡咯烷酮)；0．1mol?L-1H202(用0．1mol?L-1高锰酸钾标定)。

[方法]1．酶液提取称取新鲜小麦叶片或其他植物组织0．5g，置研钵中，加入2-3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。

混合均匀，将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000r.min-1下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液，5℃下保存备用。

2．测定取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表42-2顺序加入试剂。

25℃预热后,逐管加入0.3ml0.1mol的H2O2，每加完1管立即记时，并迅速倒入石英比色杯，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按式42-3计算酶活性。

3．结果计算以1min内A240减少0．1的酶量为1个酶活单位(u)。

过氧化氢酶的活性（u.g-1min-1）=式中 Aso--加入煮死酶液的对照管吸光值；As1,As2-样品管吸光值；Vt--粗酶提取液总体积(ml);V1--测定用粗酶液体积(ml);FW--样品鲜重(g); 0．1-A20每下降0．1为1个酶活单位(u);t-加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。

注意:凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰。

【思考题】1、影响过氧化氢酶活性测定的因素有哪些?2、过氧化氢酶与哪些生化过程有关?参考文献【1】Mukherjee S P,Choudhuri M A.Determination of glycoalte oxidase activety H2O2 content and catalase activity.Physiol Plant.1983(58):167-170【2】蒋明义，郭绍刚，渗透胁迫下稻苗铁催化的膜脂过氧化作用.植物生理学报.1996.22(1):6-12【3】林植芳，李双顺等.衰老叶片和叶绿体中H2O2的积累与膜脂过氧化的关系，植物生理学报.1998,14(1):16-22【4】邹琦.植物生理生化实验指导.北京：中国农业出版社，1995【5】【美】吉尔鲍特GG.缪辉南，陈石根等译.酶法分析手册.上海：上海科学技术出版社，1982实验材料：小白菜注意事项：1、三角瓶、容量瓶等务必要清洗干净。

过氧化氢的标定方法----滴定法（ KMnO4）一、目的：检测原料硫酸的浓度二、标定的标准操作规程：《中华人民共和国药典》2010 年版一部。

三、适用范围：适用于本公司原料硫酸标定与复标工作。

四、职责：质量检验主任、滴定液配制人、复标人、检验员对本标准的实施负责五、试剂的配制1）滴定剂（ ~0.02M KMnO4）称取约1.7 克高锰酸钾于烧杯中，加入500ml 蒸馏水，烧开沸腾10-20 分钟冷却后倒入棕色试剂瓶。

静置2 天后过滤，保存在棕色试剂瓶中。

2）3mol/L的H2SO4溶液：量取160ml98%硫酸缓慢加入840ml 蒸馏水中，冷却。

3）称取1.5-1.7 g Na2C2O4 （精确到1 毫克）到100ml 容量瓶中，加水溶解摇匀，用水稀释至刻度。

六、高锰酸钾的标定用移液管移取10ml Na2C2O4溶液和3M H2SO4 溶液10ml 于滴定容器中，用水稀释到60ml，加热到75-85℃后用KMnO4 溶液开始滴定。

确定端点（无色至粉红色）。

重复3 次。

C 滴定剂的摩尔浓度。

m Na2C2O4的质量gMt Na2C2O4的相对分子质量： 134V 消耗的滴定剂的体积e 摩尔当量（ = 2.5 ）。

七、滴定步骤称取2-2.5 g H2O2样品( 精确到1 毫克) 到100ml 容量瓶中，加水溶解摇匀，用水稀释至刻度。

用移液管移取5ml H2O2溶液和3M H2SO4溶液10ml 于滴定容器中，用水稀释到60毫升，用KMnO4 溶液开始滴定。

确定端点（无色至粉红色）。

注意：制剂后必须立即进行滴定。

测试重复每个样本，重复两次。

计算AS 过氧化氢样品的含量 %（m/m）。

V 消耗的滴定剂的体积mlC 滴定剂的浓度Mw H2O2相对分子质量： 34.01ms 称取的样品的质量 g 。

e 摩尔当量（ = 2.5 ）。

100 转换为 %。

双氧水浓度滴定
27.5%~35%的过氧化氢试样的称取：用10ml~25ml 的滴瓶以减量法称取0.16g 试样，精确到0.0002g ，置于已加有100ml 硫酸溶液的250ml 锥形瓶中。

测定：用高锰酸钾标准滴定溶液滴定呈粉红色，并在30s 内不消失即为终点。

过氧化氢（H 2O 2）的质量分数w 1计。

%100m
10VcM 3
1⨯⨯=-ω 式中： V 为滴定中消耗的高锰酸钾标液的体积的数值ml ；
c 为高锰酸钾标液浓度的准确数值mol/L ；
M 为过氧化氢(1/2H 2O 2)的摩尔质量数值(M=17.01)g/mol ；
m 为试样的质量的数值g ；
■高锰酸钾标准滴定溶液[c(1/5KMnO4)=0.1mol/L]
配置：3.3g 高锰酸钾，加1000ml 水，煮沸15min ，加塞静置2d 以上，垂熔漏斗过滤，密封避光保存。

标定：准确移取约0.2g 在110℃干燥恒重的基准草酸钠。

加入50ml 新煮沸过的冷水、10ml 硫酸，搅拌溶解，迅速加入约25ml 高锰酸钾溶液，待褪色后，加热至75~80℃，继续用高锰酸钾溶液滴定至呈微红，保持0.5min 不褪色。

在滴定终了时，溶液温度应不低于55℃，同时做空白。

高锰酸钾标准滴定溶液的浓度：()0670
0V V m c 21.⨯-= 式中： c 为高锰酸钾标液实际浓度mol/L ；
m 为基准草酸钠的质量g ；
V 1为高锰酸钾溶液的用量ml ；
V 2为试剂空白试验中高锰酸钾标液用量ml ；。

高锰酸钾法测定过氧化氢过氧化氢含量的测定一、教学要求：1、了解KMnO4溶液的配制方法及保存条件；2、掌握用Na2C2O4标定KMnO4溶液的原理和条件；3、学习高锰酸钾法测定过氧化氢的原理和方法。

二、预习内容1、KMnO4溶液的配制方法及标定原理；2、高锰酸钾法测定过氧化氢的原理和方法。

三、基本操作四、实验原理1、KMnO4溶液的配制及标定由于高锰酸钾试剂中常含有MnO2等杂质，蒸馏水中常含有微量还原性物质，能与KMnO4作用析出MnO2，因此不能用直接法配制其准确浓度的溶液。

配制时：称取稍多于理论量的KMnO4固体，溶解在规定体积的蒸馏水中，并加热煮沸约1h，放置7～10d后，用微孔玻璃砂芯漏斗过滤，除去析出的沉淀。

将过滤的KMnO4溶液贮藏于棕色瓶中，放置暗处，以待标定。

标定KMnO4的基准物质很多，有H2C2O4·2H2O，Na2C2O4，(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O，A2O3，纯铁丝等。

其中最常用的是Na2C2O4，因为它易提纯稳定，不含结晶水，在105～110℃烘干2h，放入干燥器中冷却后，即可使用。

在H2SO4介质中，MnO4-与C2O42-的反应：＋＋2MnO4-＋5C2O42-＋16H＝2Mn2＋10CO2＋8H2O为了使上述反应能快速定量地进行，应注意以下条件：(1)温度在室温下，上述反应的速度缓慢，因此常需将溶液加热至75～85℃时进行滴定。

滴定完毕时溶液的温度也不应低于60℃。

而且滴定时溶液的温度也不宜太高，超过90℃，部分H2C2O4会发生分解：H2C2O4→CO2+CO+H2O(2)酸度溶液应保持足够的酸度。

酸度过低，KMnO4易分解为MnO2;酸度过高，会促使H2C2O4的分解。

(3)滴定速度由于上述反应是一个自动催化反应，随着Mn2+的产生，反应速率逐渐加快。

特别是滴定开始时，加入第一滴KMnO4时，溶液褪色很慢(溶液中仅存在极少量的Mn2+)，所以开始滴定时，应逐滴缓慢加入，在KMnO4红色没有褪去之前，不急于加入第二滴。

过氧化氢含量的测定取适量过氧化氢，硫酸酸化，加入适当过量的碘化钾，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定至黄色很浅，加入可溶性淀粉，至蓝色褪去为终点，标定硫代硫酸钠可使用重铬酸钾或碘酸钾，加入过量碘化钾，再重复上述操作。

实验原理H₂O₂于其氧化还原性,广泛应用于漂白、消毒、杀菌医药等工业，因此常需要测定它的含量。

H₂O₂分子中含有一个过氧键-O-O-，既可在一定条件下作为氧化剂，又可在一定条件下作为还原剂。

在稀硫酸介质中,在室温条件下KMnO₄可将其定量氧化，因此可用高锰酸钾法测定过氧化氢含量，其反应式为：滴定在酸性溶液中进行,反应时锰的氧化数由+7变到+2。

开始时反应速度慢,滴入的KMnO₄溶液褪色缓慢，待有Mn²⁺生成后,由于Mn²⁺的催化作用,反应速度加快,故能顺利滴定,当滴定至溶液中有稍过量的滴定剂MnO₄—(2*10-6 mol/L)时,溶液呈现微红色,显示终点。

根据KMnO₄溶液的浓度和滴定消耗的体积,即可计算H₂O₂的含量。

试剂及仪器试剂：Na₂C₂O₄基准物质、0.02 mol/L 的KMnO₄溶液、3 mol/L 的H₂SO₄溶液、双氧水样品（约30%H₂O₂水溶液）等。

仪器：分析天平、称量瓶、锥形瓶、酸式滴定管、容量瓶、移液管、洗瓶等。

实验步骤KMnO₄溶液（0.02 mol/L）的配制称取KMnO₄固体约1.6克溶于水500ml水中，盖上表面皿，加热至沸并保持微沸1小时，冷却后用微孔玻璃漏斗(3号或4号)过滤。

滤液贮存于具塞棕色瓶中，室温下静置2-3天后过滤备用。

KMnO₄溶液的标定准确称取0.15-0.20gNa₂C₂O₄三份，分别置于250ml锥型瓶中，加水50ml使其溶解，加入10mL 3 mol/L H2SO4 溶液，在水浴上加热到75-85℃(即开始冒蒸气时温度)，趁热用待定的KMnO₄溶液滴定，开始时滴定速度要慢，待溶液中产生了Mn²⁺后，滴定速度可适当加快，但仍须逐滴加入，加至溶液呈现微红色并持续分钟内不褪色即为终点。

实验B-8 过氧化氢含量的测定实验目的:1、了解高锰酸钾标准溶液配制方法。

2、采用Na2C2O4作基准物标定高锰酸钾的标准溶液。

3、了解高锰酸钾法测定过氧化氢的原理、方法。

4、测定过氧化氢的含量。

实验原理:1. 高锰酸钾为强氧化剂，在酸性溶液中，KMnO4时地将草酸氧化。

此反应随温度升高而加快。

其反应初期要有Mn2+作催化剂，才能使反应速度达到实际应用的程度。

滴定时，利用MnO4本身的颜色变化指示确定终点。

2. H2O2分子中有一个过氧键—O—O—，在酸性溶液它是一个强氧化剂。

但遇KMnO4，表现为还原剂。

测定过氧化氢的含量时，在稀释硫酸溶液中，在室温条件下用高锰酸钾法测定，其反应式为：5H2O2+2MnO4+6H+=2Mn2++5O2+8H2O开始时反应速度慢，滴入第一滴溶液易褪色，待Mn2+生成后，由于Mn2+的催化作用，加快了反应速度，故能顺利地滴定到呈现稳定微红色即为终点。

稍过量的滴定剂本身的紫红色（10-5mol·l-1）即显示终点。

H 2O2在反应过程中，最后产物是O2，半反应式为H2O2===2H++O2+2e-（2220.682O H OE V）实验试剂:Na2C2O4基准物质，于105℃干燥后2h后备用。

3mol·l-1 H2SO40.02mol·l-1KMnO4标准溶液30％左右H2O2（液体试样）实验仪器:烧杯 1000ml 1只棕色细口瓶 1000ml 1只表面玻璃 1块台秤（公用） 100g 4台称量瓶 1只洗瓶 1只 烧杯 400ml 3只 酸式滴定管 50ml 1支 量筒 50ml 1只10ml 1只磁芯漏斗，过滤瓶 1套 滴瓶 50ml 1只 容量瓶 250ml 1只 移液管 25ml 1支 锥形瓶 250ml 3只实验步骤:1、高锰酸钾标准溶液的配制在台秤上称出预先计算好的配制0.02mol ·l -1KMnO 4标准溶液600ml 所需的固体KMnO 4重量。

实验四高锰酸钾标定及过氧化氢含量测定
一实验目的：
1．掌握高锰酸钾法测定过氧化氢的原理；
2．学习高锰酸钾标准溶液的配制和标定；
3．掌握滴定终点的判断。

二、试剂及器皿
0.020mol/L KMnO4标准溶液；H2SO4溶液2mol/L；草酸钠基准物质；H2O2试样，市售质量分数约为30%的H2O2水溶液。

烧杯…
三、实验步骤
1.0.020mol/L KMnO4标准溶液的标定
用减量法称取0.15-0.2克草酸钠（Na2C2O4）基准物质三份，分别置于250ml 锥形瓶中，加入20ml蒸馏水溶解，加入2mol/L10ml H2SO4 ，加热到70-85度，用KMnO4标准溶液滴定到溶液呈微红色，半分钟不褪即为终点。

平行三次。

注意滴定开始一定等前一滴溶液褪色后再加入第二滴，滴定速度要慢。

滴定温度不低于70度。

根据消耗KMnO4的体积和草酸钠的质量计算KMnO4标准溶液的准确浓度。

2.过氧化氢含量的测定
用移液管移取H2O2试样溶液10.00ml，置于250ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀备用。

用移液管移取稀释过的H2O2 25.00ml于250ml锥形瓶中，加入20ml蒸馏水，再加入2mol/L H2SO4 10ml，用KMnO4标准溶液滴定到溶液呈微红色，半分钟不褪即为终点。

平行测定三次，计算试样中H2O2的质量浓度(g/L)和相对平均偏差。

四、实验记录与数据处理
五讨论：标定KMnO4溶液应注意些什么？。