细菌内毒素干扰试验记录鲎试剂灵敏度复核记录

正文规范鲎试剂灵敏度复核的操作过程和要求，确保鲎试剂灵敏度复核结果的可靠性。

适用于质监处药理室对鲎试剂灵敏度的复核。

质监处药理室分析人员负责本规程的实施和完成相关记录。

USP版附录85；CP版附录Ⅺ E 。

细菌内毒素检查法：本法系利用从鲎的变形细胞中提取的试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。

细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。

鲎试剂：是鲎变形细胞的溶出物经提取而成。

鲎试剂灵敏度：在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度，用EU/ml表示。

细菌内毒素检查用水(BET水)：系指与灵敏度为0.03EU/ml 或更高灵敏度的鲎试剂在37 1 C 条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。

细菌内毒素标准品：USP细菌内毒素参考标准品(RSE)或已标定的细菌内毒素工作标准品(CSE)。

反应终点浓度：是指系列递减的内毒素浓度中最后一个呈现阳性结果的浓度。

一、试剂、材料与仪器设备试剂：鲎试剂批号、灵敏度、规格、生产商。

细菌内毒素检查用水(BET水) 批号、规格、生产商。

细菌内毒素标准品批号、效价、生产商。

材料及仪器设备：电热恒温水箱型号、设备编号。

电热鼓风干燥箱型号、设备编号。

漩涡混合器型号。

无热原试管规格：1075mm。

正文无热原玻璃瓶规格：25ml。

无热原玻璃吸管规格：1ml、2ml、5ml、10ml。

试管架、无热原封口膜、洗耳球、酒精棉球、砂轮片。

二、试验准备试验所用的容器、用具都必须经过处理，250C以上干烤至少1小时，以去除外源性内毒素。

试验操作过程应避免微生物的污染。

三、内毒素溶液配制细菌内毒素标准品系列溶液配制取RSE或CSE 1瓶，按照使用说明书加入规定量的细菌内毒素检查用水使溶，并用漩涡混合器间歇混匀30分钟，然后用细菌内毒素检查用水进一步稀释至2.0、、 0.5、 0.25四个浓度的内毒素标准溶液，每一步稀释应混匀至少30秒钟。

细菌内毒素检查记录（首页）总 页 分 页 检品编号： 检验日期： 检品名称：实验地点：一、 标准规定的细菌内毒素限度（L ）为： 二、 供试品溶液的制备： 1、 预试验确定的MVD 为 倍。

2、 取本品 ml ，加细菌内毒素检查用水 ml ，摇匀，精密量取 ml ，加细菌内 毒素检查用水 ml ，摇匀，即得。

三、 试验用细菌内毒素溶液的制备： 1、取一支细菌内毒素工作标准品，加入 ml 细菌内毒素检查用水 ml ，使溶解，得EU/ml 的试验用细菌内毒素溶液。

2、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 3、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 4、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 5、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 6、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (EU/ml ) 四、 供试品阳性对照溶液的制备：1、取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )2、 取 ml (EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )3、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )4、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )5、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )6、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )检验者： 校对者： 室负责人:细菌内毒素检查记录（附页）检品编号. 检验日期：总分页页检品名称: 实验地点：仪器设备: 恒温箱（型号)保温温度:保温时间: 自至加样量及试验结果:结论：本品按《中国药典》2005年版二部附录XI E检验依据检验，结果检验者: 校对者: 室负责人:。

鲎试剂干扰试验检查记录
1.0 干扰试验预试验
将内毒素检查阴性的供试品进行一系列倍数的稀释，但最大稀释倍数不得超过MVD= C*L/λ0.03(0.03EU/ml为现今我国市售鲎试剂的最高灵敏度)。

使用鲎试剂对每一稀释倍数进行检验。

每一稀释倍数下做2支供试品管和2支供试品阳性对照管（即用该浓度的供试品稀释液将内毒素标准品制成2λ浓度）。

另取2支加入细菌内毒素检查用水作为阴性对照，2支加入2λ浓度的内毒素标准溶液作为阳性对照。

2.0 干扰试验
检验人：检验日期：复核人：复核日期：。

细菌内毒素检测方法验证方案起草人__________起草日期________审核人__________审核日期________批准人__________批准日期________西安力邦制药有限公司细菌内毒素检测方法验证方案目的范围责任人内容1.实验材料及用具2实验准备3.具体验证步骤3.1.鲎试剂灵敏度复核3.2..干扰实验33供试品细菌内毒素检查4. 验证结附: 表1.鲎试剂灵敏度复核记录表2.干扰试验记录表3.细菌内毒素检查记录细菌内毒素检测方法验证方案目的：为确保盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。

范围：盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法责任人：细菌内毒素检验员、QC主管内容：1.实验材料及用具1.1.电子天平12电热干燥箱13恒温水浴箱14水银温度计1.5.旋涡混合器16 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）1.7.细菌内毒素工作标准品（由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品）1.8.细菌内毒素检查用水1.9.实验用具：移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75%酒精棉、剪刀、砂轮。

2实验准备2.1.玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内，放置入烤箱。

2.2.除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后，将烤箱调至250C，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少1小时。

达到规定时间后，关断电源，待烤箱温度自然降至室温。

在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用；如果玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下可在两周内使用，否则须再次干烤除去可能存在的外源性内毒素。

3.具体验证步骤3.1.鲎试剂灵敏度复核3.1.1.实验操作3.1.1.1.细菌内毒素标准溶液的制备取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。

鲎试剂灵敏度复核SOP1.目的为规范鲎试剂标示灵敏度复核的操作，确保鲎试剂试验的准确性，特制定此操作规程。

2.范围本标准操作规程适用于新批号鲎试剂使用前对标示灵敏度的复核以及试验条件发生任何可能影响检验结果的改变时，对鲎试剂标示灵敏度的复核。

3.定义无4.职责4.1QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。

4.2QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。

4.3质量总监负责批准本规程。

4.4QA负责本规程执行的监督。

5.引用标准《中华人民共和国药典》2020年版二部6.材料见8.程序。

7.流程图无8.程序8.1试剂：细菌内毒素工作标准品、鲎试剂溶解水、待复核灵敏度的鲎试剂。

8.2仪器与设备：恒温水浴箱、烤箱、小试管、中管、半中管。

8.3操作步骤8.3.1试验前准备试验用吸管、小管等玻璃器皿应在试验前1～2天内包好，经200℃干烤2小时除内毒素备用。

8.3.2鲎试剂灵敏度复核根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在漩涡混合器上混匀30秒钟；取分装有0.1ml鲎试剂溶液的10mm×100mm试管18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一个内毒素浓度平行做4管；另外2管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照；将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃的恒温器中，保温60分钟±2分钟。

8.4结果判定8.4.1将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。

保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。

8.4.2当最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性，阴性对照管为阴性，试验方为有效。