SMP-ZL10013细菌内毒素检查用试剂管理规程

细菌内毒素检查操作程序1 概述：本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。

供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。

当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。

凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/mL的灭菌注射用水。

2 凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理检测的方法。

2.1 材料准备2.1.1 0.1ml/支规格及灵敏度的鲎试剂，细菌内毒素检查用水以及细菌内毒素国家标准品或工作标准品。

2.1.2 恒温器、旋涡混合器、试管架、计时器、剪刀、封口胶布、砂轮片、酒精棉球、酒精灯、灭菌的1ml玻璃注射器、烘箱。

2.2 实验操作2.2.1 接通恒温器电源，将温度调节至37℃±1℃。

2.2.2供试品稀释2.2.2.1 当供试品需要控制的内毒素限值大于鲎试剂灵敏度时，需要对供试品进行稀释，计算公式如下：MVD＝L/λMVD：供试品的最大有效稀释倍数L：供试品需控制的内毒素限值（EU/mL）λ：鲎试剂灵敏度值（EU/mL）2.2.2.2[举例]某供试品需要控制的内毒素限值为5EU/ml，使用灵敏度λ＝0.25EU/mL 的鲎试剂作细菌内毒素检查.MVD＝5EU/ml / 0.25EU/mL＝20倍。

即供试品需作1:20稀释后再作检查。

若检查结果为阳性，表明供试品内毒素含量≥5EU/ml，超过限值；若检查结果为阴性，表现供试品内毒素含量＜5EU/ml，低于限值。

2.3 检查操作2.3.1供试品溶液制备：取0.2g糖粉，加入2ml检查用水稀释，混匀，备用。

2.3.2 取0.1ml/支规格的鲎试剂8支，折断（或割断）安瓿颈，其中2支作为供试品管，2支作为阴性对照管，2支作为阳性对照管。

2支供试品阳性管。

2.3.3 阴性对照管加入0.2ml水，其余各管加入0.1ml水复溶；供试品管各加入0.1ml 供试品溶液，阳性对照管加入0.1ml2.0λ浓度的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml供试品阳性对照溶液[用被测供试品溶液将同一支细菌内毒素工作标准品制成2.0λ浓度的同毒素溶液。

细菌内毒素检查SOP（动态浊度法）1．目的为规范细菌内毒素含量测定的操作，特制定本SOP。

2．范围本SOP适用于细菌内毒素含量测定的操作。

3．定义3.1.动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。

3.2.细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。

3.3.细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。

3.4.细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015 EU/ml（用于凝胶法）或0.005 EU/ml （用于光度测定法）且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。

4．职责4.1.QC负责本规程的起草、修订、培训及执行。

4.2.QA、QC组长、质量管理部经理负责本规程的审核。

4.3.质量负责人/质量受权人负责本规程的批准。

4.4.QA负责本规程执行的监督。

5．引用标准《中华人民共和国药典》2020年版三部。

6．材料6.1.仪器设备细菌内毒素测定仪、漩涡混合器、干烤箱6.2.试剂及溶液6.2.1.鲎试剂6.2.2.细菌内毒素工作标准品：国家标准品或经过国家标准品标定的工作标准品。

6.2.3.细菌内毒素检查用水：内毒素含量应小于0.005EU/ml。

6.3.使用的器具移液器、无热原稀释管和反应管、无热原枪头。

7．流程图无8．程序8.1.原理细菌内毒素能激活鲎试剂(TAL)中的酶系统，使凝固酶原变成凝固酶，进而凝固酶再激活其中的凝固蛋白原变成凝固蛋白，呈现凝胶反应，动态浊度法是检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，计算内毒素浓度与反应时间关系的双对数标准曲线，利用标准曲线对供试品的内毒素含量进行定量测定。

8.2.试验前准备8.2.1.采样管用硅胶塞塞口，经180℃干烤2小时，除内毒素备用。

细菌内毒素检查标准操作规程1 简述1.1 本规范适用于中国药典2005年版附录中细菌内毒素检查法一凝胶法和光度测定法。

后者包括浊度法和显色基质法。

供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。

当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。

1.2 供试品细菌毒素限值的确定。

（一）药典中有规定的，按供试品各论中规定限值；（二）尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。

K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg/h表示。

其中注射剂，K=5EU/kg/h；放射性药品注射剂，K=2.5EU/kg/h；鞘内用注射剂，K=0.2EU/kg/h。

M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kg/h、ml/kg/h、U/kg/h表示。

药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1小时的按1小时计。

按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用实际情况做必要调整，但需说明理由。

1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MV D）按下式计算：MV D=C·L/λL为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。

当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml；当L的单位以EU/mg或EU/U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml或U/ml。

如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MV D取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C: λ/L。

λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。

1.4 在使用新一批号的鲎试剂前，必须进行鲎试剂灵敏度复核实验。

1.5 药典中已有规定的品种或有其他内毒素检验标准的品种，可直接进行内毒素检查，如在检验中出现干扰的情况需再进行干扰实验的验证；其他未建立内毒素检查的品种需先进行干扰实验，确定不干扰浓度后再进行内毒素检查。

GMP管理文件一、引用标准：中华人民共和国S药典（2005年版）一部。

二、目的：本标准规定了细菌内毒素检查法标准操作规程。

三、适用范围：适用于细菌内素毒素的检查。

四、责任者：质检人员。

五、正文：1、简述本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素，以供试吕中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显基质法。

供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。

当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。

细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。

细菌内毒素国家标准品系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。

细菌内毒素工作标准系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。

凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。

光度测定法用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。

试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。

常用的方法是在250℃干烤至少60分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。

若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。

试验操作过程应防止微生物的污染。

供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。

一般要求供试品溶液的PH值在6.0～8.0的范围内。

对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，何使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲液调节PH值。

酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。

缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。

最大有效稀释倍数（MVD）的确定最大有效稀释倍数是指在试验中供试品被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。

细菌内毒素检查仪安全操作及保养规程细菌内毒素检查仪是一种测定样品中是否存在内毒素的仪器。

在使用该仪器时，需要严格遵守操作规程，以确保实验安全和数据准确性。

本文将介绍细菌内毒素检查仪的安全操作和保养规程。

操作规程前期准备在操作细菌内毒素检查仪之前，必须进行以下准备：1.确定实验室内符合要求的工作环境。

2.按照厂家提供的操作手册检查仪器的完整性和性能是否正常。

3.预热仪器至稳定状态，通常需要30分钟左右。

样品操作1.打开仪器，等待其进入空闲状态。

2.将标准样品和待测样品稀释至一定浓度，并加入到试剂盘中。

3.将试剂盘放入仪器中，并按照操作手册的要求启动检测程序。

4.在仪器完成检测后，从试剂盘中取出样品，并关闭仪器。

清洗操作1.在取出试剂盘后，立即将试剂盘中的残留试剂倒掉。

2.对试剂盘进行物理清洗。

使用化学溶剂前请先了解溶剂的物理性质，注意防止划伤、断裂和溅泼等情况的发生。

3.重新装载试剂盘，并进行仪器的预热步骤。

技术要求1.操作者必须经过相关培训，了解细菌内毒素检查仪的操作原理和方法。

2.操作者必须佩戴适当的防护装备，如实验手套、护目镜等。

3.操作者必须在出现故障或异常状况时立即停止检测并联系维修人员。

保养规程以细菌内毒素检查仪为例，保养规程分为日常保养和定期保养两部分。

日常保养日常保养是指在每天使用仪器之前和之后的清洁和检查。

具体操作如下：1.清洁仪器表面，用柔软的布擦拭干净，不要使用含有毒性的化学试剂进行清洁。

2.清洁试剂盘，用芳香性清洁剂清洗并擦干，不能用水清洁，避免产生水渍或氧化。

3.检查试剂盘、样品载架和其他仪器部件是否完好无损，如损坏应及时更换。

定期保养定期保养是指细菌内毒素检查仪在长时间使用或维护保养期间需要进行的操作。

具体操作如下：1.仪器的芯片和电子部件可能存在老化、腐蚀、锈蚀等情况，因此定期对仪器进行内部清晰和检修。

2.定期对仪器进行校准，可在正常操作前进行，以保证检测准确性。

3.定期检查仪器的电源线和接线是否存在磨损、剥皮、断裂或腐蚀等情况，避免电源线或接线出现不良现象，如如有出现及时更换电源线或接线。

内毒素检测仪安全操作及保养规程内毒素检测仪是一种用于检测细菌内毒素的仪器，广泛应用于生物制品、药品、医疗器械等领域。

使用内毒素检测仪需要注意安全操作和保养。

安全操作规程1. 仪器使用前的准备在使用内毒素检测仪之前，必须了解所使用的仪器的性能、原理、操作方法、控制范围、技术参数和安全使用规定。

检查设备是否完好无损，严格按照操作规程进行操作。

同时，需要了解使用环境的要求和安全注意事项，保证实验室的安全设施和消防设备等是完备的。

2. 个人防护使用内毒素检测仪必须穿戴适当的防护用品：穿戴工作服，戴手套、面罩、护目镜和口罩等防护用品，保证实验室风险最小化。

3. 操作规范在使用内毒素检测仪的过程中，必须按照内毒素检测仪的操作规程进行操作，先仔细阅读操作手册，按照仪器操作指南，缜密把握每一步操作要点。

在操作期间，禁止单独操作，需由实验室主管或指导教师指导。

在操作服从规程的情况下，不得随意更改控制器的设定、调整或停止试验。

如有问题或不理解，该立即向主管或指导教师寻求帮助和指导。

4. 废弃物的处理内毒素检测仪的废弃物必须按照国家和地方规定的相关要求集中处理。

该进行分类管理，分类投放。

废弃物应该妥善安置，以免对环境和他人的安全造成损害。

保养规程1. 对仪器及其附件进行日常保养检查内毒素检测仪是否干净，内毒素检测仪使用完毕后应当密封，防止有异物进入。

同样的，内毒素检测仪切勿拆卸，以避免软件程序得到损害或影响仪器的一定程度的精度。

2. 每次使用后的处理和保养使用后对样品架和加样嘴和试剂架进行清洗。

再次使用前要进行检验，确保其清洁干净，并用携带的细毛刷清洁样品孔旁边的缝隙，保证清洁度。

摆放时避免碰撞、摔落或加剧长期运输或存放出现的磨损过程。

同时要求各个部件、仪器本体应做到干燥通风、远离环境湿润、与其他物品保持一定的距离。

3. 经常性的维护保养使用一定时间后，内毒素检测仪的感光元件、磁盘、光路、光学元件、扫描仪、采样头等零部件需要进行次要的清理和保养。

内毒素检查法标准操作规程编号：版本：编制：日期：审定：日期：批准：日期：生效日期：管理部门：发放部门：生产部 质管部 工程部 研发部 PMC 采购部 仓库 营销中心 人事行政中心 财务部一、目的：本标准准规定了细菌内毒素检查法的操作规程。

二、依据：不适用三、范围：适应于细菌内毒素的检查四、职责：品质科五、内容：1. 定义：1.1 细菌内毒素检查法：本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。

1.2 细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌精制得到的内毒素，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。

1.3 细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准进行标定，确定其重量相当效价，每1ng工作标准品效价应不小于2EU，不大于50EU。

细菌内毒素工作标准品用于试验中鲎试剂灵敏度复核干扰试验及设置的各种对照。

1.4 细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。

2. 实验设备：电热干燥箱（50~300±1）℃、电热恒温水温箱。

实验用具：注射器(精度0.02ml)、针头、试管架、白胶布、砂轮、75%酒精棉球、金属直镊、注射器盒、时钟。

试剂：鲎试剂（其标示值用λ表示）、内毒素工作标准品、内毒素检查用水。

3. 用具除热原：试验中所用的试管、注射器、针头、金属直镊等冲洗干净，置电热干燥箱中（注射器、针头、金属直镊等放入注射器盒中封好，再放入干燥箱中），经250℃加热30分钟，除去热原。

4. 检查法：4.1 打开洁净工作台的风机及照明开关，并用75%酒精棉球擦拭台面，打开恒温水温箱的开关，使水温恒定在（37±1）℃。

4.2 用75%酒精棉球擦手消毒。

4.3 内毒素阳性对照溶液的制备：4.3.1. 取内毒素工作标准品1支，用75%酒精棉球消毒瓶颈，用砂轮割开瓶颈。

SMP-QC--细菌内毒素标准品与检测试剂标准管理规程————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：1.0 目的1.1建立细菌内毒素标准品与检验试剂的管理标准操作规程。

2.0 范围2.1适用于公司细菌内毒素标准品与检测试剂的采购、接收、保存、使用、销毁、去热原物品的存放、鲎试剂灵敏度复核及工作标准品效价的标定。

3.0 职责3.1质量控制（QC）部对本操作规程实施负责。

4.0 定义4.1细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。

4.2 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准物质标定其效价，用于试验中灵敏度的复核、干扰试验及各种阳性对照。

4.3 细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品应使用由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品。

5.0 规程5.1细菌内毒素标准品与检测试剂的采购5.1.1细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品按一年的使用量做计划。

5.1.2鲎试剂、缓冲液、细菌内毒素检查用水、无热原吸头、无热原安瓿等按半年的使用量做计划，从可靠的供应商处购买，如湛江安度斯生物有限公司、湛江博康海洋生物有限公司。

5.2细菌内毒素标准品与检测试剂的接收5.2.1细菌内毒素标准品与检测试剂购回后，由生测组组长协同采购管理人员验收。

5.2.2 验收项目包括：运输条件、内包装、名称、数量、规格、有效期、生产厂家及外观检查等是否复核请购要求或相应规定，如购买的是细菌内毒素工作标准品，则必须有厂家提供的内毒素工作标准品效价分析证明书，验收不合格的试剂或标准品直接由采购退货处理或按相关标准操作规程销毁处理。

5.2.3试剂登记项目包括：试剂名称、批号、数量、规格、有效期、生产厂家、接收时间等。

5.3细菌内毒素标准品与检测试剂的保存5.3.1登记过的试剂才能进行保存。

目的：规范细菌内毒素检验操作程序。

范围：适用于细菌内毒素检查操作。

责任：品质部组织制定，中心化验室负责实施。

内容1准备工作1.1实验设备及用具1。

1.1刻度吸管、称量瓶、镊子、安瓿瓶（2ml、5ml）、药匙、250℃烘烤1小时。

1。

1.2干燥箱、恒温水浴锅、漩涡混合器、精密天平。

1.1.3剪刀、砂轮片、医用胶布、洗耳球、试管架、脱脂棉球、水银温度计、试管1.2内毒素标准品与实验试剂1。

2。

1鲎试剂：在使用前应进行灵敏度测定，原则上购进一个批号测定一次。

1.2.2细菌内毒素检查用水（内毒素含量＜0.015Eu/mL灭菌注射用水）.1.2.3细菌内毒素国家标准品和工作标准品。

1.2。

4 75%乙醇、铬酸洗液.1。

3实验用具的消毒处理：凡是参与实验样品或试剂接触的器具，在实验前必须经除细菌内毒素处理，将洗净的器具经纯化水冲洗后，在250℃干热灭菌至少60分钟。

1。

4恒温水浴箱内水浴温度调节到37±1℃。

2鲎试剂灵敏度复核2.1根据鲎试剂灵敏度的标示值(如：λ=0。

25 EU/ml），细菌内毒素工作标准品加入1ml 细菌内毒素检查用水溶解，在漩涡混合器上混匀15分钟.2.2将工作标准品制备成2λ、λ、0。

5λ、0.25λ四个浓度(0.5 EU/ml、0。

25 EU/ml、例：工作标准品为160 EU/ml 时30秒。

2。

3取18支0。

25 EU/ml 鲎试剂，每支中加入0。

1mlBET 水，然后分别加入0。

1ml2。

2中制备好的4个浓度的标准液,按浓度从高到低依次加入，每个浓度加4支，；最后2支加入0。

1mlBET 水作阴性对照。

2。

4将上述试管用医用胶布封口，垂直放入37℃±1℃水浴锅中，保温60±2分钟.放入水浴前把水搅动几下，以使水温均匀。

再次检查温度是否在所要求的范围，注意保温和取放过程应避免受到振动造成的假阴性结果。

2.5保温结束后将试管轻轻取出，缓缓转到180°，若关内形成凝胶，不变形、不从管壁滑落者为阳性;未形成凝胶或形成凝胶变形从壁滑落者为阴性。

细菌内毒素检查SOP1.适用范围本标准适用于细菌内毒素的检查。

2.职责QC负责人监督检验员按SOP检查检验员严格该SOP检查3.内容3.1.原理用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定，内毒素的量用内毒素的单位(EU)来表示。

3.2.实验材料及用具3.2.1.电热干燥箱温度应能达到250℃。

3.2.2. 恒温水浴箱（37±1℃）。

3.2.3.温度计，精度在1℃以下。

3.2.4. 旋涡混合器。

3.2.5. 鲎试剂应具有国家主管部门批准文号。

3.2.6. 细菌内毒素工作标准品，应使用中国药品生物制品检定所统一发放的标准品。

3.2.7. 细菌内毒素检查用水（含内毒素小于0.015EU的灭菌注射用水）。

3.3.准备工作3.3.1.试验所用器皿，250℃干烘至少≥60分钟。

3.3.2.鲎试剂灵敏度复核，按《中国药典》2005版三部287页进行。

3.3.3.供试品干扰试验，按《中国药典》2005版三部287页进行。

3.4.操作方法3.4.1. 试验准备将试验所用器皿用洗涤剂和自来水洗净除去水分后置洗液中浸泡4小时，取出将洗液滤干，用自来水将残余洗液洗净，在用新鲜蒸馏水冲洗干燥后，用锡箔纸密闭玻璃器皿口，放置适宜的密闭金属容器中，置烤箱中在250℃干烤至少1小时，容器在不打开包装的情况下可在一周内使用，否则须再加热除去热源。

3.4.2.内毒素标准溶液的制备3.4.2.1. 取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后开启，防止玻屑落入瓶内。

3.4.2.2. 按使用说明书用移液管加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严。

置旋涡混合器上混合15分钟，然后制备成所需浓度的细菌内毒素标准品溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。

3.4.3. 供试品溶液的制备3.4.3.1 供试品最大有效稀释倍数的计算：MVD=λLC⨯L为供试品的细菌内毒素限值；λ为使用鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml）；C为供试品的浓度，当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml。